丹参预处理对大鼠视网膜缺血再灌注的保护作用及Bcl-2、Caspase-3表达的影响-杨先梅

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丹参抗脑缺血再灌注损伤的作用

丹参抗脑缺血再灌注损伤的作用张景秋;赵喜庆;吉训明;石文建;汪萍;刘志强;董得宏【摘要】目的证实中药丹参通过作用于脑保护多个环节抗脑缺血再灌注损伤的作用. 方法雄性Wistar大鼠25只,随机分为对照组、脑缺血再灌注组、尼莫通组及中药组.采用改良Zea Longa线栓法建立可再通脑缺血模型.各组大鼠分别于相同时间注入上述药物或0.9%氯化钠溶液;于脑缺血3 h和48 h分别行神经功能评分;存活48 h后,测定脑血流; TTC染色,计算梗死体积.测定线粒体超氧化物歧化酶(SOD)活性. 结果神经功能、脑血流和脑梗死体积方面,丹参组有明显改善(P＜0.05或＜0.01).在3治疗组中,丹参组大鼠缺血区脑组织线粒体中SOD活性最高(P＜0.01). 结论中药丹参具有通过多途径抗脑缺血再灌注损伤的作用.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2010(032)024【总页数】3页(P3501-3503)【关键词】脑缺血再灌注损伤;中药;神经保护;大鼠【作者】张景秋;赵喜庆;吉训明;石文建;汪萍;刘志强;董得宏【作者单位】063000,河北省唐山市中医院神经内科;河北省唐山市人民医院神经外科;首都医科大学附属北京宣武医院介入中心;河北省唐山市人民医院神经外科;河北省唐山市人民医院神经外科;河北省唐山市人民医院神经外科;河北省唐山市人民医院神经外科【正文语种】中文【中图分类】R743脑缺血再灌注损伤是指脑组织缺血一定时间后再恢复血液灌注，脑组织细胞损伤反而进一步加重。

我国传统中医药宝库中有着丰富的抗脑缺血再灌注损伤作用的药物，许多药物的疗效已被实验所证实，它们不仅针对多个环节起，起到抗脑缺血再灌注损伤作用，且对不同环节各有侧重。

丹参是临床最常见的治疗脑梗死的药物，值得我们深入研究其机制。

1 材料与方法1.1 实验分组本实验选用体重280～320 g雄性Wistar大鼠，共25只。

大鼠随机分为:手术对照组5只，脑缺血再灌注组6只，尼莫通(德国拜尔公司生产，剂量0.06ml/100g，溶于1.5ml 0.9%氯化钠溶液中)组7只和丹参(北京第四制药厂，1mg/100g)组7只。

葛根素对大鼠肝缺血再灌注后Caspase-3和Bcl-2表达的影响

ｅｅｔｎｍｉｒｓｏｅＲｅｕｔＵｎｖｒａｅａｉｅｌａｏｔｓｓｆｕｄａｔｒｒｐｒｓｏ．ｅｅｐｅｓｏｆＣｓａｅ３ｉｃｅｓｄｓｇｌｃｒｃｏｃｐ．ｓｌｏｓ：ｉｅｓｈｐｔｃｌｐｐｏｉｗａｏｎｆｅｅｆｉｎＴｘｒｓｉｎｏａｐｓ－ｎｒａｅｉ — ｌｃｓｅｕｈｎｆａｔ，ａｄｔｅｅｐｅｓｏｆｌ２ｗｓｌｗｒａｈａｔｒｒｐｒｕｉｎｒｔｒｅｏｍａｅｅｔ６ｎｏｔｕｄｔｎｒａｅｕｔｉｃｎｌｎｈｘｒｓｉｎｏ一ａｏｅｔ３ｆｅｅｆｓｏ，ｅｕｎｄｔｎｒｌｌｖｌａｈａｄｃｎｉｅｏｉｃｅｓｎｉｉｙＢｃｅｏｎｌ
论：根素可上调Ｂｌ２的表达，制Ｃｓａｅ３的表达，少肝细胞凋亡，肝脏缺血再灌注损伤有保护作用。葛ｃ一抑ａｐｓ一减对
关键词肝脏；血再灌注损伤；缺葛根素；胞凋亡；ａｐｓ一；ｃ２细Ｃｓａｅ３Ｂｌ一
中图分类号
Ｑ５２５
文献标识码
Ａ
ＥｆｅｔｏｕｒｒｎｏｈｐｅｓｏｆＣａｐｓ－ｎ２ｉｔＳＨｅａｉｓｈｍｉｆｃｆＰｅａｉｎｔｅＥｘｒｓｉｎｏｓａｅ３ａｄＢｃ－ｎＲａ ’ ｐｔｃＩｃｅｃ
４ｈ８．Ｗｈｎｔｅｔｄｗｔｕｒｒｎｈｒｓｍｕｈｌｓｐｐｏｉ，ｈｘｒｓｉｎｏａｐｓ－ｅｒａｅｂｉｕｌｎｈｏｉｖｅｒａｅｉｐｅａｉ，ｔｅｅｗａｃｅｓａｏｔｓｓｔｅｅｐｅｓｆＣｓａｅ３ｄｃｅｓｄｏｖｏｓｙａｄｔｅｐｓｉｅｈｏｔ

异搏定对大鼠缺血再灌注损伤后视网膜内caspase-3表达的影响

均为４．２％。结论：定可以下调再灌注后视网膜内ｃｓａ一的水平。而减少网细胞凋亡的发生。３异搏ａｓ３．ｅｐ从视膜关键词再灌注损伤视网膜异博定ｅｚ￣ｅ３细胞凋亡ａｐｓ－ｔ
在大鼠视网膜缺血再灌注过程中，出现细胞凋会亡，而使视网膜的功能严重受损。以表现为再灌从可注后闪光视网膜电图ｉｂｔ波幅的下降［－，。同时该病理过程同样见于眼科的一些疾病中。如视网膜中央动脉阻塞等，严重影响患者视力的恢复，理论上再灌注损伤会引起视网膜细胞内Ｃ２ａ超负荷。＋异搏定作为一种钙离子拈抗剂，以抑制细胞内ｃ２可ａ超负荷，＋可能保护再灌注后的视网膜组织。本研究就是在大鼠视网膜缺血再灌注损伤的模型上，研究异搏定对再灌注后视网膜有无保护作用。
１２ ± ．９２９ ± ．３１６ ± ．３０２ ± ．３异博定对ｅｓａ．的平均抑制率为３．／对照组细胞凋亡平．３００、．４０７、．９０９、．７Ｏ１。０１０４６１８０ａｐｓ３ｅ３Ｏ；６ｏ
均发生率分别为（，± ．）（．士．）（８２．）（４ ± ．）（２１Ｏ１％、７１Ｏ２％、１．±１％、３．２１％、２．．）（６３Ｏ４％，８４７６±０９％、１．± ．）而异博定组分别为（．± ．）（．－．）（１ ±１）（９６２１％、１．±１３％、７ ± ．）异搏定对细胞凋亡的保护率平１０３％、３Ｉ４％、１．．％、１．± ．）（２３＿５９－０９１）（．０５％，１０年第２０７３卷第ｌ期

丁苯酞注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl－2和 Bax蛋白表达的影响

丁苯酞注射液对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl－2和 Bax蛋白表达的影响白艳娟【期刊名称】《辽宁医学院学报》【年(卷),期】2016(037)004【摘要】目的：观察丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的保护作用。

方法选取雄性SD大鼠50只，随机分为假手术组（10只）、缺血再灌注组（20只）、丁苯酞注射液组（20只）。

制备SD大鼠右侧大脑中动脉脑缺血再灌注模型，缺血2 h，再灌注22 h，丁苯酞注射液组于缺血1 h后予丁苯酞注射液腹腔注射，假手术组和缺血再灌注组予等体积生理盐水。

应用TTC染色观察脑梗死体积；免疫组织化学检测方法观察Bcl－2和Bax表达的变化。

结果与缺血再灌注组相比，丁苯酞注射液组神经功能缺损程度减轻，梗死灶体积减小， Bcl表达增多， Bax表达减少。

结论丁苯酞注射液对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡有保护作用。

%Objective To observe the neuroprotective effect of butylphthalide injection on cell apoptosis after cerebral ischemia reperfusion in rats.Methods Fifty male SD rats were selected and randomly divided into three groups, the sham operation group ( n=10), the ischemia reperfusion group (n=20) and the butylphthalide injection group(n=20).The model of cerebral ischemia reperfusion in the right middle cerebral artery of SD rats was prepared with ischemia 2h and reperfusion 22h.The butylphthalide injec-tion group was treated with butylphthalide intraperitoneal injection after one hour of ischemia.The sham operationgroup and the ische-mia reperfusion group were treated with the same volume of saline.The volume of cerebral infarction was observed by TTC staining and the expression of Bcl-2 and Bax were observed by immunohistochemistry.Results Compared with the ischemia reperfusion group, the degree of nervous functional defects and the infarct volume of the butylphthalide injection group was reduced, with the expression of Bcl increased and the expression of Bax reduced.Conclusion The butylphthalide injection proves to have protective effects on the ap-optosis of nerve cells of rats after cerebral ischemia reperfusion.【总页数】4页(P10-12,20)【作者】白艳娟【作者单位】锦州医科大学附属第一医院神经内科，辽宁锦州121000【正文语种】中文【中图分类】R743.32【相关文献】1.高血脂对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达的影响 [J], 高赛红;任占川;张小良;杨迎春2.针刺联合亚低温对脑缺血/再灌注损伤大鼠Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响 [J], 肖姮;阳仁达;田浩梅;林亚平;陈文;刘琴;杨茜芸;陈楚淘3.参附注射液对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响 [J], 于腊梅;杨丽娟;蒋淑君4.内质网应激预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax蛋白表达的影响 [J],闵鹤鸣;贾玉洁;程雪;包翠芬5.丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl-2蛋白表达影响的研究 [J], 萨丽波;李宇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

复方丹参方预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

复方丹参方预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用高秀梅;张伯礼;商洪才;王怡;郭利平;张萌;史红;刘密新【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2003(007)012【摘要】目的观察复方丹参方预处理冠脉结所经典大鼠,验证其是否具有模拟或加强缺血预适应减少缺血再灌后折损伤后的作用.方法 180只大鼠采用 Stata统计软件随机分为 9组,每组各 20只.采用经典大鼠冠脉结扎,缺血 5 min,再灌 5 min,反复循环 3次缺血性预适应模型,以及缺血 30 min,再灌 2 h的单纯缺血再灌模型,以坏死区占缺血区的百分比、恶性心律失常的发生率、心肌酶、自由基为评价指标.结果再灌组,早、晚期假性预适应组坏死质量占缺血质量( IS/ AAR)分别高达 45%, 47%, 45%;心率失常的发生率也分别高达 76%, 56%, 73%;血清中 LDH含量也显著高于对照组, P< 0.01. 缺血预处理后,早期组 IS/AAR与早期假性预适应组相比降低了 17%,晚期组 IS/AAR与晚期假性预适应组相比仅降低 4%;早期缺血预处理组和晚期缺血预处理组心率失常发生率分别为 13%, 44%,显著低于再灌和早晚期假性预适应组, P< 0.01;缺血预处理之后 LDH释放也减少.复方丹参方预处理后,在再灌、 IPC基础上 IS/AAR进一步缩小约 10%～ 17%, LDH释放也减少, LDH含量以晚期药物+ IPC组最低,与晚期假性预适应组相比 P< 0.05,复方丹参方使再灌组心率失常发生率下降.另外复方丹参方预处理后,还可以使血清中 MDA下降, SOD 活性增强.结论复方丹参方可加强缺血性预适应的效应,但对早期缺血性预适应的效应不及缺血预处理,而晚期缺血性预适应效应不及复方丹参方预处理.【总页数】3页(P1754-1756)【作者】高秀梅;张伯礼;商洪才;王怡;郭利平;张萌;史红;刘密新【作者单位】天津中医学院中医药研究中心,天津市,300193;天津中医学院中医药研究中心,天津市,300193;天津中医学院中医药研究中心,天津市,300193;天津中医学院中医药研究中心,天津市,300193;天津中医学院中医药研究中心,天津市,300193;天津中医学院中医药研究中心,天津市,300193;天津中医学院中医药研究中心,天津市,300193;清华大学化学系,北京市,100084【正文语种】中文【中图分类】R54【相关文献】1.心肌缺血预处理联合后处理在大鼠心肌缺血-再灌注损伤过程中的保护作用 [J], 罗晨光;张顺业2.葛根素预处理与缺血预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 [J], 高翔;李涛;高全;李保罗;陆德琴3.药物预处理与缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究 [J], 张宝红4.丹参饮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究 [J], 任耀龙;钟伟;李莹超;杨磊;赵明君;郑刚;徐佳萌;杨聪;王艳琴;尤金枝;齐婧5.三参丹饮预处理对心肌缺血再灌注损伤模型大鼠心肌的保护作用初探 [J], 韩淑丽;齐玲;姜文月;李鹏东;唐明哲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

活血通脉汤及大黄对大鼠脑缺血再灌注损伤bcl-2、caspase-3表达的影响

成，是我们经过多年的临床实践，结合中医理论总结而成
的中药复方 … 。金方具有活血化瘀通脉，润肠通便，清热
大鼠随机分为５组：假手术组、模型组、活血通脉汤
组、大黄组、尼莫地平组，每组１６只；再随机分２个亚组
摘
要：目的：究活血通脉汤及大黄对大鼠脑缺血再灌注损伤过程中抗凋亡作用和机制。研方法：鼠分假手术组、大
模型组、大黄组、活血通脉汤组和尼莫地平组，线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型，以ＨＥ染色和免疫组化的方法观察大鼠大脑海马回Ｃ１区细胞形态以及ｂｌ２ａａｅ３白表达的细胞数目。结果：大黄组和活血通脉汤组显示海Ａｃ一、ｃｓｓ一蛋ｐ
化痰之功效。本实验观察活血通脉汤及方中大黄对脑缺血
１ｈ４，每亚组８只分别观察。每天灌胃１，连续５天，２、２ｈ次
再灌注损伤大鼠脑细胞凋亡蛋白ｂｌ２ａｐｓｃ一、ｃｓａｅ一３的影
响，探讨其对缺血性脑损伤的保护机制。
维普资讯
・
８・
湖北中医杂志 Fra bibliotek２００８年第３Ｏ卷第３期
活血通脉汤及大黄对大鼠脑缺血再灌注损伤ｂｌ２ａｐｓ一ｃ一、ｃｓａｅ３表达的影响
严志康。肖端，龚梅芳

丹参多酚酸盐抗脑缺血再灌注氧化损伤的作用及机制的开题报告

丹参多酚酸盐抗脑缺血再灌注氧化损伤的作用及机
制的开题报告
一、研究背景
脑缺血再灌注（CIR）是脑血管疾病常见的并发症，可导致脑组织氧化损伤、神经细胞死亡等严重后果。

丹参多酚酸盐是一种具有抗氧化、抗炎、促进血液循环等多种生物活性的天然药物成分，常被用于治疗心脑血管疾病。

现有研究表明，丹参多酚酸盐也具有一定的抗脑缺血再灌注氧化损伤作用，但其作用机制尚未明确。

二、研究目的
本研究旨在探究丹参多酚酸盐对脑缺血再灌注氧化损伤的抑制作用及其可能的作用机制，为丹参多酚酸盐在临床治疗脑缺血再灌注等脑血管疾病中的应用提供科学依据。

三、研究内容和方法
1. 建立小鼠脑缺血再灌注模型。

根据文献报道，采用线结扎法建立小鼠脑缺血再灌注模型。

2. 分组处理。

将建立缺血再灌注模型的小鼠随机分为3组（空白对照组、模型组、丹参多酚酸盐处理组），每组10只。

空白对照组接受相同剂量的生理盐水处理，模型组和丹参多酚酸盐处理组接受相同剂量的生理盐水或丹参多酚酸盐治疗，连续治疗7天。

3. 测定指标。

采用行为学测试法、光镜检查法、酶学方法、RT-qPCR以及免疫荧光等方法评价丹参多酚酸盐对脑缺血再灌注氧化损伤的作用，并探究其可能的作用机制。

四、研究意义
本研究的结果可以为丹参多酚酸盐在临床治疗脑缺血再灌注等脑血管疾病提供科学依据，同时为深入理解脑缺血再灌注氧化损伤发生机制和寻找脑缺血再灌注的新治疗策略提供理论基础。

香丹注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

注射液高、、中低剂量组分别腹腔注射香丹注射液２ｇ（ｇ・）４ｇ（ｇ・）８ｇ（ｇ・）假手术组和／ｋｄ、／ｋｄ、／ｋｄ，
模型组给予等容量生理盐水。连续腹腔注射１，次腹腔注射１ｈ后，醉，４ｄ末麻固定，拴法制备ＭＣＯ线Ａ
４讨论
４１本实验通过对提取丹参浸膏的醇浓度变化及ｐ．Ｈ值调
香丹注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
李斐孟运莲
研究香丹注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用，该药的临床应用提供实验依为
【摘要】目的
据。方法
将Ｗｉｅ大鼠５ｓｒｔ０只随机分为５组：假手术组、型组、模香丹注射液高、低剂量组，中香丹中、其
２１００年１月第４卷第１期
ＣｉＪＭｏｒｇＡｐ，ａ００Ｖ１Ｎ．ｈｎｄＤｐｌＪｎ２１，ｏ．ｏ１ａ４，
・
２・５
表４方差分析表
从表５中可以看出，．１＜Ｐ＜００，Ｐ＜００００．５按．５拒绝
节，得了提高丹参含量的初步成果，取对生产具有一定的指
导意义。
Ｈ，０认为丹参浸膏的五。
３结果
４２本实验证明了可以通过改变醇的浓度以提高丹参含量．的提取，在本次实验中ｐＨ值凋节范围内对提取含量的提高无效果，并取得相反效果，其他ｐＨ值对其影响有待考证。
参考文献

丙酮酸乙酯对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响

ｉｃｅａｒｐｒｓｎｉｒｔｓｈｍｉ／ｅｅｆｉａ．ｕｏｎ
ＨＵｉｗｅ，０ｉ —ｏｇ，Ｚｈ — ｉ铡ＪａｌｎＺＨＡＮＧｉｌｎＫａ —ｕ
（ｎｏｓｉｌ７ＵｉＨｏｔ，１ｎｐａ０
ＭｅｉｌｏｌｅＨｕｚｏｇＵｎｖｒｉｆＳｉｃｎｅｈｏｇ，ｄｃｌｇ，ａｈｉｅｓｙｏｃｅｅａｄＴｃｎｌｙａＣｅｎｔｎｏ
体大鼠ＩＲ损伤过程中的心肌细胞凋亡，机制可能为下调Ｂｘｃｓａｅ３达，调Ｂｌ２达。／其ａ、ａｐｓ一表上ｃ－表
Ｅｆｅｔｆｅｈｒｖｅｏｏａｒｉｆｃｓｏｔｙｌｐｙｕａｔｎｍｙｃｄａｌｅｘｐｅｓｏｎｏｌ２，ｒｓｉｆＢｃ一ＢａｘａｄＣａｓａｓ一ｒｎｎｐｅ３ｄｕｉｇ
（）Ｂｌ、ａｃｓａｅ３蛋白表达。ＡＩ及ｅ一Ｂｘ和ａｐｓ一２结果ＩＲ组Ａ／Ｉ和Ｂｌ、ａ、ａｐｓ一表达水平均明显高于对照组；ｅ２Ｂｘｃｓａｅ３一与ＩＲ组相比，Ｐ组ＡＩＢｘｃｓａｅ３表达水平明显降低，Ｂｌ／Ｅ和ａ、ａｐｓ一而ｃ一２表达水平明显升高。结论［关键词］丙酮酸乙酯；细胞凋亡；ｅ一；Ｂｘｃｓａｅ３Ｂｌ２ａ￣ａｐｓ一［中图分类号］Ｒ３２１２．［文献标识码］Ａ［文章编号］１０—６Ｘ（０７０ —０１００２２６２０）８０２—３ＥＰ可抑制离

丹参酮ⅡA预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究

丹参酮ⅡA预处理对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究马春香;孙媛;陈晓斌;张蕾【摘要】目的:观察丹参酮ⅡA(T anⅡA)预处理对心肌缺血再灌注损伤后线粒体通透性的影响.方法:使用SD大鼠,在T anⅡA预处理5 d后进行心肌缺血/再灌注损伤造模并检测心肌梗死面积、肌钙蛋白表达,使用酶联免疫吸附法观察线粒体通透性转换孔(M PT P)开放性以及细胞色素C释放情况.结果:TanⅡA预处理能够减轻心肌梗死面积、减少肌钙蛋白表达;抑制MPTP开放以及细胞色素C释放.结论:TanⅡA预处理能够通过抑制MPTP、减少心肌细胞凋亡发挥心肌保护作用.【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2017(046)010【总页数】2页(P1358-1359)【关键词】心肌缺血;心肌再灌注损伤;丹参酮ⅡA;缺血预处理,心肌【作者】马春香;孙媛;陈晓斌;张蕾【作者单位】陕西省人民医院西安710068;西安急救中心西安710018;陕西省人民医院西安710068;陕西省人民医院西安710068;陕西省中医医院西安710003【正文语种】中文【中图分类】R541.4丹参酮是丹参的有效成分，其中丹参酮ⅡA(TanⅡA)含量最高。

TanⅡA被广泛用于心脑血管疾病的治疗；但是其作用机制尚未完全阐明[1]。

线粒体是细胞能量主要来源，其功能损伤导致线粒体通透性转换孔(MPTP)开放，引起线粒体膜电位异常、呼吸链中断、ATP生成障碍并引起细胞凋亡，从而最终导致缺血再灌注损伤；也是预处理等许多心肌保护措施的重要作用靶点[2]。

因此本实验通过构建大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型，从MPTP开放角度探讨丹参酮ⅡA预处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护机制。

1 材料①实验动物：健康雄性SD大鼠，清洁级，共48只；周龄8～12周，重量180～220 g，由西安交通大学动物中心提供。

随机分为三组：假手术组(S组)、缺血再灌注(I/R组)、TanⅡA治疗组(A组)，每组16只。

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33第17卷第8期 2015 年 8 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 17 No. 8 Aug .，2015视网膜属于神经组织，其血供来自于视网膜中央动脉，该动脉属于终动脉，所以，视网膜在缺血环境中极易受到损伤。

RIRI 是临床常见的眼科疾病之一，常见的原因如视网膜中央动脉阻塞、高眼压以及眼外伤等，而有效挽救视网膜缺血的措施是早期恢复血供，然而临床发现，缺血后血液再灌注反而加重视觉功能的损害，甚至是造成不可逆性损伤。

造成视网膜缺血再灌注损伤的机制比较复杂，是多种因素综合反应的结果，主要包括氧自由基的损伤、细胞内钙超载等，这些因素均可以导致节细胞凋亡。

因此，积极防治视网膜节细胞的凋亡，并掌握其作用机制成为临床治疗视网膜缺血再灌注损伤的重点。

丹参作为传统活血化瘀中药，具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗氧化和抗凋亡等作用，被广泛用于治疗心脑血管疾病。

从理论推测，丹参对视网膜缺血再灌注损伤具有一定的防治作用，但其作用机制尚不明确。

本实验通过观察丹参对RIRI 后神经丹参预处理对大鼠视网膜缺血再灌注的保护作用及Bcl-2、Caspase-3表达的影响杨先梅1，程辉2，郭英2（1.菏泽家政职业学院，山东菏泽 274300；2.齐鲁医药学院，山东淄博 255213）摘要：目的：探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI）过程中，丹参对RIRI的保护作用以及对Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响。

方法：随机选取66只Wistar 大鼠，分为正常对照组、缺血再灌注组、丹参预处理组，通过对前房加压制作RIRI 模型。

后两组各分为6、12、24、48、72 h 5个亚组，HE 染色观察视网膜组织学变化，SABC 法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的变化。

结果：Bcl-2、Caspase-3蛋白在正常组表达较弱。

缺血再灌注组和丹参预处理组6 h 开始表达，24 h 显著增强，48 h 下降，72 h 表达减弱，变化趋势基本一致。

但是，两组比较，丹参预处理组在不同时间点Bcl-2蛋白的表达均明显强于缺血再灌注组，Caspase-3蛋白表达明显减弱，差异具有统计学意义（P <0.01）。

结论：丹参预处理对RIRI 可以通过减少神经节细胞的凋亡起到保护作用，其作用机制可能是调节Bcl-2 、Caspase-3蛋白表达来实现。

关键词：丹参；视网膜缺血再灌注损伤；Bcl-2；Caspase-3中图分类号：R774.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 08- 0033- 04收稿日期：2014-12-17基金项目：山东省万杰医学院校级课题（X13ZK16）作者简介：杨先梅（1970-），女，山东菏泽人，副教授，学士，研究方向：病理学。

通讯作者：程辉（1980-），男，山东淄博人，讲师，硕士，研究方向：神经解剖学。

Protective Effect and Bcl-2 Caspase-3 Expression of SalviaPretreatment on Retinal Ischemia-reperfusion YANG Xianmei 1，CHENG Hui 2，GUO Ying 2（1.Heze Housekeeping Institute，Heze 274300，Shandong，China；2.Qilu Medical University，Zibo 255213，Shandong，China）Abstract：Objective ：To study the protective effect and Bcl-2，caspase-3expression of Salviapretreatment on retinal ischemia-reperfusion. Methods ：Sixty six Wistar rats were randomly divided into normal control group，ischemia-reperfusion group and salvia pretreatment group. The model of retinal ischemia-reperfusion injury was constructed by increasing the intraocular pressure. The ischemia-reperfusion and salvia pretreatment group were divided into 6 h，12 h，24 h，48 h，72 h five subgroups according to the different reperfusion time. Observe the structural changes in retina by HE staining. The immunohistochemitry were used to measure changes of Bcl-2 and caspase-3 protein levels in retinal. Result ：The positive expression of Bcl-2 and caspase-3 protein was weak in normal group. At the ischemia-reperfusion and salvia pretreatment groups，the expression of Bcl-2 and caspase-3 protein began to increase at 6 hours after reperfusion，the expression reached the peak at 24 hours after reperfusion，and after 48 hours the expression began to decrease. There were had the same trend between the ischemia-reperfusion group and salvia pretreatment group. However，the salvia pretreatment group compared with ischemia-reperfusion group，Bcl-2 expression was significantly stronger and caspase-3 expression was significantly reduced. There was significant difference between two groups（P <0.01）. Conclusion ：Salvia pretreatment can protect the retina by reducing RGCs apoptosis on RIRI. The mechanism may be to achieve by regulating the expression of Bcl-2 and Caspase-3 protein.Key words：salvia；RIRI；Bcl-2；Caspase-3DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.08.01134 辽宁中医药大学学报 17卷节细胞凋亡的影响，明确丹参对RIRI的保护作用；测定Bcl-2、Caspase-3蛋白表达，探讨可能的作用机制。

1 材料和方法1.1 材料实验用成年Wistar大鼠66只，雌雄不限，体重（220±30）g，随机分为正常对照组（6只）、缺血再灌注组（30只）和丹参预处理组（30只）。

正常对照组，不做任何处理；缺血再灌注组和丹参预处理组在造模前5 d分别给予腹腔注射生理盐水和丹参注射液0.2 mL，每天2次，直至处死。

造模成功后根据观察时间不同，分为6 h、12 h、24 h、48 h和72 h 5个亚组，每组6只。

10%胎牛血清、Rabbit Anti-Bcl-2、Caspase-3抗体、生物化素山羊抗兔抗体、DAB显色试剂盒均购自北京中杉生物公司，其他相关设备均由山东万杰医学院基础实验中心提供。

1.2 方法1.2.1 动物模型的建立视网膜缺血-再灌注模型是通过自制装置[1]升高前房压力来实现。

方法如下：首先腹腔注射戊巴比妥30 mg/kg麻醉大鼠。

待大鼠麻醉后，将大鼠固定好，眼睛滴加局麻药和散瞳剂。

然后，将输液器始端、血压计输气管和三通管相连，输液器尾端连接21G针头，将针头经角膜巩膜缘刺入前房，注意保护晶状体，将血压计数值调节到125 mmHg并保持60 min，根据连通器原理，此时水银计显示的压力与大鼠眼内压相等。

观察发现结膜苍白，直接检眼镜观察，视网膜中央动脉血液断流，此时可确定视网膜缺血。

去掉压力后，球结膜再次充血，检眼镜可见视网膜血供恢复。

整个过程注意无菌操作，术后预防眼部感染。

视网膜缺血再灌注组和丹参处理组，每个时间点取4只，脱臼处死后，用剪刀将大鼠眼周围软组织分离，用21G针头在角膜巩膜缘处刺一小孔，先放入FAA固定液中浸泡1 min，再快速放入体积分数10%中性甲醛固定液中固定24 h，流水冲洗1 h，梯度酒精脱水，在脱水至体积分数95%乙醇时去除角膜、虹膜和晶状体，然后继续脱水，将得到的视网膜制备石蜡切片。

1.2.2 HE染色常规脱蜡入水，蒸馏水冲洗，苏木素染色5~10 min，自来水充分冲洗15 min，70%盐酸乙醇分化10 s，1%氨水返蓝20 s，自来水冲洗15 min，蒸馏水冲洗，0.5%伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，光镜下观察视网膜组织结构变化。

1.2.3 SABC免疫组织化学法石蜡切片常规脱蜡入水，封闭内源性过氧化物酶：新鲜配制0.3％H2O2-甲醇，室温处理15 min，0.01 M PBS冲洗2 min×3次，抗原热修复：将切片放在盛满0.01 M枸橼酸盐缓冲液（PH=6.0）的小容器中，微波炉加热至即将沸腾时断电，间隔5~10 min后，反复2~3次。

自然冷却后用0.01 M PBS（pH 7.2~7.4）冲洗，2 min×3次，滴加5%BSA封闭液，室温孵育20 min，滴加稀释的一抗，4 ℃冰箱过夜，37 ℃温箱复温60 min，0.01 M PBS冲洗，2 min×3次，滴加生物素化的羊抗大鼠IgG抗体，37 ℃孵育60 min，DAB显色，苏木素轻度复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察。

大鼠缺血模型

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