退变腰椎间盘组织中p-JNK的表达变化及意义

华中科技大学硕士学位论文AMPK在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及其意义姓名：***申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外）指导教师：***20090401华中 科 技 大 学 硕士 学位 论 文中文摘要AMPK在退变腰椎间盘髓核组织中的表达及其意义硕士研究生：聂克导师：杨述华教授华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科目的：检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)及其相关分子在正常与退变腰椎间盘髓核中的表达情况，并探讨AMPK在椎间盘退变中的作用。

方法：取6例正常和10例腰椎间盘突出症患者的髓核组织，Western Blot检测线粒体能量代谢相关蛋白质AMPK的含量和磷酸化状态，免疫组化检测细胞衰老相关基因P16ink4а和细胞增殖相关基因mTOR的表达。

结果：退变髓核组织中AMPK和磷酸化AMPK蛋白表达量较正常对照组均有所增加，二者比较均有统计学意义（p<0.01）。

免疫组织化学显示，正常对照组和退变髓核组织p16INK4а染色阳性细胞率分别为12.1%和53.1%，两者比较具有统计学意义（p<0.01）。

正常对照组髓核组织和退变髓核组织中，mTOR染色阳性细胞率分别为55%和22.7%，两者比较具有统计学意义（p<0.01）。

结论：能量代谢障碍是椎间盘退变的重要机制，椎间盘细胞可能通过AMPK含量和磷酸化状态的改变而调控细胞的增殖和衰老。

关键词椎间盘；腺苷酸活化蛋白激酶；P16ink4а；mTOR华中 科 技 大 学 硕士 学位 论 文AbstractExpression and significance of AMPK in Nucleus Pulposus in Degenetive Disc DiseaseMaster candidate:Nie KeTutor: Prof. Y ang ShuhuaDepartment of orthopaedics, Union Hospital, Tongji Medical College of Huazhong Science and Technology UniversityWuhan, Hubei, 430022,P.R.ChinaObjective:To demonstrate the roles of AMP activated protein kinase(AMPK) in the progression of degenerative disc disease(DDD).Methods:Nucleus pulposus were collected from 6 cases of normal people and 10 cases of DDD. Western blot was performed to measure AMPK content and phosphorylation level. Immunohistochemistry was applied to detect the expressions of P16ink4а and mTOR. Results：The expression of AMPK and phaspherize AMPK in degenetative nucleus pulposus was increased significantly compare with those in normal tissue(p<0.01). Immunohistochemistry results showed that the possitive rate of p16INK4а expression in normal and degenerative nucleus pulposus was 12.1% and 53.1% (p<0.01).And the possitive rate of mTOR expression in normal and degenerative nucleus pulposus was 55% and 22.7%.华中 科 技 大 学 硕士 学位 论 文Conclusion :Disturbance of energy metabolism is involved in the progression of degeneration of intervertebral disc. AMPK might play a important role in regulation the proliferation and insenecence of intervertebral disc cell,via regulating the expression and phosphorylation status.Key Words:Intervertebral disc; AMP-activated protein kinase；P16ink4а；mTOR独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。

人正常和退变腰椎间盘中TIMP_1的表达及其意义孔杰;马斌;胡有谷;陈伯华【期刊名称】《青岛大学医学院学报》【年(卷),期】2008(44)4【摘要】目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRNA在正常与退变椎间盘中表达的差别及意义。

方法利用荧光定量PCR技术检测TIMP1mRNA在正常椎间盘(9个)与退变椎间盘(30个)组织的含量,结合年龄、病程、病理类型进行分析。

结果TIMP1在正常椎间盘组织表达量为0.900±0.289,退变椎间盘中TIMP1mRNA表达量为0.340±0.241,两者差异有显著性(t=5.841,P<0.05)。

退变椎间盘中,不同年龄、病程及病理类型组间TIMP1mRNA的表达量差异无统计学意义。

结论TIMP1mRNA的含量下降在腰椎间盘退变过程中起着重要作用,但未见与年龄、病程及病理类型有明显的关系。

【总页数】3页(P312-313)【关键词】椎间盘;金属蛋白酶1组织抑制剂;人【作者】孔杰;马斌;胡有谷;陈伯华【作者单位】青岛大学医学院附属医院脊柱外科【正文语种】中文【中图分类】R681.5【相关文献】1.人退变腰椎间盘特异性表达microRNA的靶基因及JNK信号转导通路在椎间盘退变中的分子生物学机制 [J], 王明远;宋西正;李国栋2.Runx2在人退变腰椎间盘软骨终板中的表达及意义 [J], 胡舟扬;李新华;潘杰;杨明杰;赵卫东;李立钧3.磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶与转化生长因子β1在正常和腰椎间盘退变组织中的表达 [J], 原野;赵静;赵杰;李永民;王旭4.Sox9和Ⅱ型胶原蛋白在人腰椎间盘退变中的表达及意义 [J], 黄秀芳;原向伟5.人退变腰椎间盘差异性表达microRNA的筛选及JNK通路参与椎间盘退变的探讨 [J], 王涛;马信龙;张晓林;臧加成;马剑雄;韩超;王玉龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

TRPV1与pJNK在RTX致痛模型大鼠脊髓背角的表达变化及意义背景及目的:带状疱疹后神经痛(Postherpetic neuralgia,PHN)是一种令患者绝望的疾病,是罹患带状疱疹(Herpes zoster,HZ)后最常见的并发症,被普遍认为是一种神经病理性痛的综合症[1,30]。

在北美、欧洲及亚非地区,每年每千人中就有4至4.5个新增的HZ病例[5]。

在如此庞大基数的HZ患者中,10%至20%将发展成为PHN患者[30]。

其临床症状主要是在之前疱疹所波及的皮节区范围内发生的自发性疼痛、痛觉过敏和感觉迟钝等,大多数人的症状会持续3个月至1年,更有甚者可持续数年。

PHN患者的生活质量及工作受到严重的影响,症状较重者常导致抑郁甚或自杀倾向,为家庭和社会增添了沉重的经济、精神负担[25,30,35]。

目前主要是通过药物进行对症治疗,但各类药物均无法长期有效的改善症状,并且不可避免的带来了药物副作用[4,5,25,35,47,59]。

因此,要研发出更有效的治疗手段及药物,我们首先要搞清楚PHN的确切病因及其背后的发病机制。

PHN的主要发病原因可能是潜伏于患者颅神经节、背根神经节以及整个神经轴上的自主神经节内的带状疱疹病毒再次激活而产生的相应复杂的级联反应所导致的[1,5,8,10]。

有学者于1990年首次成功将带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)导入成年大鼠体内,且病毒能够长期潜伏感染于大鼠周围神经系统中。

并由此成功构建了PHN模型大鼠,该模型逐渐成熟并大为推广[30,42,87]。

然而,该模型的构建难度大,成功率低,常以失败结局,包括VZV培养条件苛刻,热痛阈异常状态诱导困难,局部组织炎症状态,局部皮损严重甚至是vzv扩散至中枢神经系统后导致的大鼠瘫痪等等[44,67,86]。

也许正是因为模型构建难以达标,因此phn发病机制的研究进展才缓慢不前。

学者hui-linpan等人于2003年意外发现树酯毒素(resiniferatoxin,rtx)作用于成年大鼠后能够使其产生机械痛阈及热痛阈的双相变化,这种痛阈的双相变化与phn患者的临床表现十分相似[68]。

兔退变腰椎间盘髓核细胞中衰老信号p16INK4apRb 表达的体外研究的开题报告一、研究背景及意义腰椎间盘是人体脊柱中最大的软骨结构，它的重要性不可忽视。

近年来，腰椎间盘退变已成为脊柱疾病的主要病因之一。

而其中最常见的一种形态是退变，导致椎间盘变窄和压缩神经根和脊髓。

目前，腰椎间盘退变的病理机制尚不完全清楚，但研究表明，髓核细胞的凋亡和衰老可能与其退变相关。

因此，探究髓核细胞中衰老信号的表达，有助于揭示其退变机制。

在老化过程中，细胞周期调控和DNA损伤修复下调，而p16INK4a 和Rb蛋白负责此过程中的抑制作用。

前者是泛素酶依赖性的CDK抑制剂，抑制CDK4/6的活性，而后者则是p16INK4a-CDK4/6分子复合物的受体。

同时，p16INK4a的表达在多种疾病中均有变化（如前列腺癌和阿尔茨海默病等），说明其在衰老和疾病中的作用十分重要。

因此，本研究将探究兔退变腰椎间盘髓核细胞中衰老信号p16INK4a和Rb的表达情况，为进一步揭示其退变机制提供参考。

二、研究目的本研究旨在探究兔退变腰椎间盘髓核细胞中衰老信号p16INK4a和Rb的表达情况，并评估其与细胞衰老的相关性，为进一步揭示腰椎间盘退变机制提供基础资料。

三、研究方法及步骤（1）制备退变腰椎间盘髓核细胞从10只2-3岁、体重1.5-2kg的新西兰种兔中摘出上行颈椎、胸椎和腰椎，去除肌肉和骨组织，切成6×6×6mm的小块，洗净后浸泡在注射用PBS中，并加入0.6%的胰酶（w/v）酶解2小时，然后取出髓核进行分离。

用差速离心法分离出纯化的髓核细胞，细胞密度不高于2×106/mL。

（2）确定不同时间点的培养细胞将髓核细胞均匀分配于6孔板，每孔2×105个细胞，加入基础培养液（DMEM+10% FBS）培养。

分别在不同时间点（3d、6d、9d、12d）收集培养细胞以评估其生长状态。

（3）荧光定量PCR检测mRNA水平在每个时间点，将培养细胞离线并提取总RNA，逆转录为cDNA，然后用荧光定量PCR检测p16INK4a和Rb mRNA的表达水平。

MMP-13在去势大鼠退变腰椎间盘组织中的表达及意义摘要】目的探讨MMP-13在去势大鼠退变腰椎间盘组织中的表达及临床意义。

方法 30只3月龄Sprague-Dawley (SD)大鼠，随机均分为3组，每组10只：基础对照组(BL组)；双侧卵巢切除（OVX）手术组；手术对照组（Sham组）；BL组在手术开始前处死，其余2组术后三个月处死，取L4-5腰椎及椎间盘进行HE常规染色及运用免疫组化检测椎间盘MMP-13的表达。

结果 OVX组与Sham组比较大鼠椎间盘中MMP-13表达明显升高（P<0.05）。

结论 MMP-13表达量的增加可能是椎间盘退变形成和发展中起重要作用。

【关键词】椎间盘退变腰椎免疫组化 MMP-13Role and change of mmp-13 during lumbar intervertebral disc degeneration in ovariectomized rats // ZHANG sheng-qiang,Li,Peng SunNa, Department of Orthopedics,the Tan Hai Hospitai of Tangshan, Hebei, 063200,China【Abstract】 [Objective] To investigated the effects of MMP-13on disc degenerationin the OVX rats．[Method] Thirty 3-month-old female Sprague-Dawley rats were randomized into three groups of ten animals each．The baseline control group (BL group)；Sham group；OVX group.in all rats killed 3 months of postsurgery.L4-5 lumbar spines and intervertebral disc sections wereStained with HEand immunostained with MMP-13. [Result] he immunostaine expression of MMP-13in the OVXgroup was higher than sham group and Sham group (P<0.05). [Conclusion] It implies that mmp-13 may play an important role in the development and progressionof the lumbar intervertebral disc degeneration.【Key words】intervertebral disc degeneration lumbervertebrae immunohistochemistry mmp-13椎间盘退行性疾患是脊柱常见病之一，其退变的确切机制至今仍不十分清楚，但研究证实：基质金属蛋白酶（Matrix Metall oproteinases,MMPS）的异常增高可能是椎间盘退行性变的重要原因[1]。

退变腰椎间盘组织中炎症因子IL-6、IL-10及MCP-1的表达变化及意义欧阳冰;苏建成;曾月东;包杰【期刊名称】《海南医学院学报》【年(卷),期】2014(020)003【摘要】目的:检测白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在椎间盘突出症患者退变椎间盘组织中的表达变化,并探讨其临床意义.方法:采用ELISA技术和RT-PCR技术检测在50例退变椎间盘组织(实验组)和20例正常椎间盘组织(对照组)中IL-6、IL-10及MCP-1的表达变化,并观察IL-6、IL-10及MCP-1的表达与椎间盘突出程度的关系.结果:IL-6、IL-10及MCP-1在椎间盘突出症患者退变椎间盘组织中表达水平明显增高,差异具有统计学意义(P＜0.05),且在后外层纤维环破裂型中的表达高于纤维环完整型,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:炎症因子IL-6、IL-10及MCP-1在椎间盘突出症患者退变椎间盘组织中表达增加,并与椎间盘突出的程度相关,可能在椎间盘突出症的病理生理过程中发挥重要作用.【总页数】3页(P381-383)【作者】欧阳冰;苏建成;曾月东;包杰【作者单位】深圳市第九人民医院脊柱外科,广东深圳518100;深圳市第九人民医院脊柱外科,广东深圳518100;深圳市第九人民医院脊柱外科,广东深圳518100;深圳市第九人民医院脊柱外科,广东深圳518100【正文语种】中文【中图分类】R681.5【相关文献】1.退变腰椎间盘组织中p-JNK的表达变化及意义 [J], 李洪涛;陈红芳2.退变腰椎间盘组织中MMP-3、IL-1、TNF-α的表达变化及意义 [J], 史锐3.椎间盘突出症患者退变腰椎间盘组织中IL-6、IL-8、TNF-α的表达变化及意义[J], 李灏4.牙周炎伴糖尿病病人龈沟液中炎症因子MCP-1、TNF-α、IL-6的水平及其临床意义 [J], 朱靖;刘桂荣;吕晔;赵婧;荆冉;徐晓娜;陈书兰;5.牙周炎伴糖尿病病人龈沟液中炎症因子MCP-1、\rTNF-α、IL-6的水平及其临床意义 [J], 朱靖;刘桂荣;吕晔;赵婧;荆冉;徐晓娜;陈书兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

腰椎间盘退变的免疫学研究腰椎间盘退变是一种常见的脊柱疾病，其主要特点是腰椎间盘组织的变性、退行性改变和失去正常结构和功能。

虽然腰椎间盘退变被认为是一种机械性疾病，但最近的研究发现，在该疾病的发生和发展过程中，免疫反应也起着重要的作用。

免疫学是研究机体对抗疾病和保持健康的一门学科。

在腰椎间盘退变中，免疫反应与退变过程的调控密切相关。

免疫细胞、炎性因子、细胞因子和细胞外基质分子在疾病的发展过程中起着重要的调节作用。

免疫细胞参与了腰椎间盘退变的发生和发展过程。

研究表明，炎性细胞（如巨噬细胞和炎性细胞）的数量在腰椎间盘退变的患者中明显增加。

这些炎性细胞会释放一系列炎症性因子，进而引发组织损伤和退变。

T细胞和B细胞的参与也与腰椎间盘退变的发生和发展密切相关。

研究发现，T细胞和B细胞在腰椎间盘退变的患者中也有增多的趋势，这些细胞通过合成和释放细胞因子参与了疾病的发展过程。

炎性因子在腰椎间盘退变中发挥重要作用。

炎性因子是一类由免疫细胞合成和分泌的细胞因子，包括肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素-1（IL-1）和白细胞介素-6（IL-6）等。

这些炎性因子被证实可以促进腰椎间盘退变的发生和发展。

研究发现，TNF-α和IL-1能够对细胞外基质的降解产生直接影响，并促进腰椎间盘组织的退变。

它们还可以引起疼痛和炎症反应，从而加重腰椎间盘退变的症状。

细胞因子和细胞外基质分子也是腰椎间盘退变中的重要组成部分。

细胞因子是一类由多种细胞合成和分泌的蛋白质，它们具有调节和调控细胞功能的作用。

研究表明，腰椎间盘退变过程中，细胞因子的表达水平发生明显变化，如BMP、TGF-β和IGF-1的表达减少，而MMP和ADAMTS的表达增加。

这些细胞因子的异常表达可以导致腰椎间盘组织的退变和损伤。

细胞外基质分子（如胶原蛋白和蛋白多糖等）也参与了腰椎间盘退变的发生过程，它们的降解和重建过程直接影响着腰椎间盘组织的稳定性和功能性。

腰椎间盘退变的机制【关键词】腰椎间盘退变腰椎间盘突出是骨科的常见病，疼痛是常见的症状，然而其产生退变的病理机制尚不清楚。

椎间盘的退变过程不仅仅表现为形态学上的变化，更伴随着腰椎间盘的组织学与生化性质的系统性改变，如椎间盘组织中蛋白多糖和水含量的降低、胶原类型的转换、各种降解酶活性的升高以及炎症递质的释放等。

这一系列的变化构成了盘源性腰痛和相应神经根病变的物质基础［1～3］。

1 退变椎间盘组织中的致炎物质及作用1.1 组胺、5-羟色胺和前列腺素组胺和5-羟色胺是最重要的炎症递质，是局部组织在炎症反应的标志物。

它们是炎症早期阶段引起微血管扩张和细静脉通透性增加的主要递质，两者又都是致痛物质。

5-羟色胺在脊髓损伤的继发性反应中起着重要作用，引起血管收缩、血小板聚集，从而影响局部脊髓血流，导致脊髓中央出血性坏死；同时可引起自由基的形成，脂质过氧化增加。

彭宝淦等［4］在动物实验研究中指出：退变椎间盘中血管活性胺类含量明显高于正常对照组，说明退变腰椎间盘中存在炎症反应。

Saal等［5］通过培养正常鼠椎间盘髓核细胞发现，正常髓核细胞有基础性炎症性细胞因子的分泌，但当与脂多糖共同培养时，这些因子大量分泌。

Kang等［6］的研究发现，退变椎间盘细胞比正常椎间盘细胞在体外培养时能产生更多的化学因子。

这些研究说明椎间盘退变本身具有启动和促进炎症反应的作用。

1.2 磷脂酶A2(phospholipase，PLA2)PLA2是炎症部位细胞膜产生前列腺素和白三烯的限速酶。

PLA2是局部炎症的启动物质，它可在炎症部位使细胞膜水解花生四烯酸，产生前列腺素E(脂肪环氧化产物)和白三烯(5-脂肪氧化酶产物)等一系列具有强烈致炎和致痛作用的花生四烯酸代谢产物。

PLA2是人体内重要的炎症递质和致痛物质，具有神经毒性作用，因此它是局部组织炎症的特殊标记物。

Rannou等［7］采用荧光酶解物法检测PLA2的活性，证实IL-β能抑制椎间盘组织中蛋白多糖的聚集，促进纤维环产生PLA2，并引起II型PLA2的剂量依赖式分泌。

腰椎间盘退变的免疫学研究腰椎间盘退变是一种常见的慢性脊柱疾病，其主要特点是腰椎间盘的硬化和退变，导致脊柱变形和椎间隙狭窄，严重影响患者的生活质量和工作能力。

免疫学在腰椎间盘退变的研究中起着重要作用，本文将对腰椎间盘退变的免疫学研究进行探讨。

腰椎间盘退变的免疫学研究主要包括以下几个方面：炎症反应、免疫细胞和细胞因子以及自身免疫。

炎症反应在腰椎间盘退变的发生发展过程中起着重要作用。

退变的腰椎间盘组织会释放炎症介质，引起周围的炎症反应。

炎症细胞如单核细胞、淋巴细胞和巨噬细胞会被激活，并释放炎性细胞因子，如白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子- α（TNF-α）等。

这些炎性因子会诱导炎症介导的腰椎间盘组织细胞凋亡，导致腰椎间盘退变进一步加重。

免疫细胞和细胞因子在腰椎间盘退变中发挥重要作用。

免疫细胞如单核细胞和淋巴细胞是腰椎间盘退变过程中产生炎症反应的关键细胞。

炎性细胞因子如IL-1β、TNF-α等不仅参与了腰椎间盘退变的发生过程，还与腰椎间盘的疼痛相关。

细胞因子也在腰椎间盘退变中发挥重要作用。

研究发现，纤维连接蛋白（fibronectin）、基质金属蛋白酶（MMP）和组织因子等细胞因子在腰椎间盘退变中表达增加，导致腰椎间盘退变的进展。

自身免疫也参与了腰椎间盘退变的发生和发展。

研究发现，自身免疫反应的异常活化和组织损伤在腰椎间盘退变中发挥了重要作用。

免疫细胞和细胞因子的异常增加会引起自身免疫反应的异常激活，导致腰椎间盘组织的破坏和退变。

自身免疫反应也与腰椎间盘疼痛相关，并可能在退变的腰椎间盘组织的修复和再生中发挥作用。

腰椎间盘退变的免疫学研究表明，炎症反应、免疫细胞和细胞因子以及自身免疫均参与了腰椎间盘退变的发生和发展。

理解这些免疫学机制对于预防和治疗腰椎间盘退变具有重要意义。

未来的研究应进一步探讨腰椎间盘退变的免疫学机制，并寻找创新的治疗策略。