大多数荧光定模量板PCRD实N验的AC量T值越在1多8-30，之间荧。 光达到 荧rea光lm定阈a量steP值rCmRix的参数循解析环-- C数T值越少，即Ct值越小。
-引物和扩增产物二级结构的预测
乙1v肝标病准人品血ii+液9Lv中稀oHg释B模缓V的冲板绝液对，起定得量标始准浓品iii度与Ct值呈线 性关系。 已知在50%的乳腺肿瘤样本中, ERBB2表达异常, 因此可以作为一个检测标准
Sample
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绝对定量分析几要素
✓ 一个目的基因 ——即需要确定其量值的核酸序列。 ✓ 一组标准样本 ——用来生成标准曲线。可以是含有目的基因的质粒、
PCR产物、基因组DNA等。 ✓ 重复反应孔 –——建议每个样本使用三个或更多重复反应，以确保统计
显著性。 ✓ 标记方法的选择——SYBR Green法或探针法均可。 ✓ 实验结果显示——扩增曲线；标准曲线；融解曲线（探针法不需要）。
SYBR Green I 染料法——优缺点
优点
缺点
使用方便，不必设计复杂 探针
具有价格优势
无模板特异性 对引物特异性要求较高 不能进行多重定量 灵敏度相对较低
Taqman探针法——原理
5′端标记有报告基团(Reporter, R) ，如FAM、VIC等
3′端标记有荧光淬灭基团 (Quencher, Q) 探针完整，R发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光 Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针
乙肝病人血液中HBV的绝对定量
PBMioeTr1－-FLAinMegdeenteecstieornie- sERBB2 双SY标BR准法曲实线验法流—程—及结注果意分事析项 样延本伸的 时采间集：、产处物理长和度制决备定；
