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液质联用方法优化
1. 色谱条件优化：
- 选择合适的色谱柱：根据待分析物的性质，选择合适的色谱柱，以实现良好的分离效果。
- 优化流动相：选择适当的流动相组成、流速和梯度条件，以提高分离效率和峰形。
- 调整柱温：根据分析物的稳定性和分离要求，调整柱温以改善分离效果。
2. 质谱条件优化：
- 选择合适的离子源：根据分析物的性质，选择合适的离子源（如 ESI、APCI 等）。
- 优化质谱参数：调整质谱仪的参数，如喷雾电压、碰撞能量、离子传输毛细管温度等，以提高灵敏度和选择性。
- 选择合适的检测模式：根据分析需求，选择合适的检测模式，如全扫描、选择离子监测（SIM）或多反应监测（MRM）。
3. 样品处理和前处理：
- 优化样品制备方法：选择适当的样品提取和净化方法，以减少基质干扰和提高分析准确性。
- 内标物的选择：使用合适的内标物可以提高定量分析的准确性和可靠性。
4. 方法验证和质量控制：
- 进行方法学验证：包括线性、准确度、精密度、检出限和定量限等指标的评估。
- 建立质量控制程序：定期进行质量控制检查，确保分析结果的准确性和稳定性。
通过综合考虑以上因素，并根据具体的分析需求和目标，对液质联用方法进行优化，可以获得高质量的分析结果。
同时，持续的优化和改进是确保方法性能和适应性的关键。
液相色谱-串联质谱法检测血浆紫杉醇性能评价王扣琼;潘柏申;邵文琦;彭颖斐;黄斐;陈方俊;吴炯;王蓓丽;张春燕;郭玮【摘要】ObjectiveTo establish a liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)for the quantitative determination of plasma paclitaxel,and to evaluate its performance.Methods Plasma paclitaxel was determined quantitatively by LC-MS/MS. High performance liquid chromatography was used. The flow speed was 0.3 mL/min. Multiple reaction monitoring(MRM) was used for quantitative determination. Theion pairs of paclitaxel and PTX-D5 were 876.4>308.2 and881.5>313.2,respectively. According to U.S. Food and Drug Administration(FDA) guideline about bioanalytical method validation,the general analytical performance validation was performed forlinearity,detection limit,precision and accuracy.ResultsThe linearity was 10-1 000 ng/mL. The detection limit was 10 ng/mL. Within-run and between-run coefficients of variation(CV) were≤4.2% and≤8.9%,respectively. The accuracy was 88.7%-104.0%.Conclusions The performance of established LC-MS/MS meets evaluation standards,and the assay is accurate and precise for the determination of paclitaxel.%目的：建立液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）定量检测血浆紫杉醇的方法，并进行基本分析性能验证。
高效液相色谱 -质谱联用技术在药物分析中的应用摘要：近些年，诞生了诸多新型的药物分析方式，比如说高效液相色谱-质谱联用技术，其在药物分析中的应用比较广泛，其先进性极高。
为此，文章阐明了高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用的研究背景，深入分析了高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的具体应用，希望能为相关同行业者提供有价值的参考。
关键词：高效液相色谱-质谱联用技术；药物分析；具体应用前言：色谱法的一个重要分支是高效液相色谱技术，其在具体运用中流动相为液体，相较于单独的任何一种色谱检测技术，高效液相色谱技术的优势在准确、快速。
目前，质谱分析方法也与其进行了高效结合，即高效液相色谱-质谱联用技术，也就是此次研究的主要方式，该种技术被广泛应用于有机化学领域中，为药物分析工作奠定了坚实可靠的基础。
1研究背景药物分析是将药物应用到临床实践过程中的必要环节，因此一种有效地药物分析方法是十分重要的。
色谱技术的主要作用是分离分析复杂的化合物，而质谱法则能够在一次分析中体现出较为完整的结构信息。
高效液相色谱—质谱联用是分离化学检验的一次突破，其将色谱技术和质谱技术检测的优点进行了充分的结合，能够应对药物分析的检测需要。
高效液相色谱技术是以经典液相色谱技术为基础，同时融入了气相色谱技术而发展起来的一项检测技术。
其在应用过程中，能够快速的完成分析过程，同时在最大程度上保持检验的质量。
质谱分析方法的主要作用是对离子荷质比的测量，给结构定性提供较为全面的信息。
液相色谱—质谱联用是有机质谱仪的重要种类，具有很高的灵敏度，促进色谱和质谱的匹配程度，更大程度上提高离子化效率。
二者联用，能够最大程度上发挥出互补优势，给药物分析工作带来极大的便利。
2高效液相色谱-质谱联用技术在药物分析中的应用2.1在复杂成分筛选中的应用目前，仍有一些成分较为复杂的药物，其具体的成分组成、药效机制、活性成分和代谢途径仍未得到精准确定，使得这些药物的推广应用受到很大阻碍。
基于高效液相色谱-质谱联用技术的有机物分析方法优化与应用摘要：在当前的科学研究和应用实践中，有机物的分析和鉴定一直是一个备受关注的课题。
然而，传统的有机物分析方法存在着许多局限性，如分析速度慢、准确性低、选择性差等问题。
为了克服这些问题并提高有机物分析的效率和准确性，高效液相色谱-质谱联用技术应运而生。
为促进有机物分析方法的发展，本文就基于高效液相色谱-质谱联用技术的有机物分析方法优化与应用进行研究。
关键词：高效液相色谱-质谱联用技术；有机物分析方法；方法优化1.引言1.1 研究背景随着科学技术的不断进步和发展，有机物分析在环境监测、食品安全、药物研发等领域中扮演着重要的角色。
然而，传统的有机物分析方法存在分析速度慢、准确性不高、选择性差等问题，无法满足现代化和高效化的分析需求。
在这样的背景下，高效液相色谱-质谱联用技术应运而生，它结合了高效液相色谱的分离能力和质谱的检测灵敏度，能够实现复杂有机物的分离和结构鉴定。
这种联用技术不仅能提高分析效率和准确性，还能在结构识别、代谢研究、毒物学评价等方面发挥重要作用。
因此，研究高效液相色谱-质谱联用技术的优化和应用具有重要的科学意义和实际应用价值。
本研究将探索该技术在有机物分析中的潜力和应用前景，为有机物分析方法的改进和优化提供有益的参考和建议。
1.2 研究目的和意义本文的研究目的是通过优化和应用高效液相色谱-质谱联用技术，提升有机物分析方法的性能和可靠性，并探索其在实际应用中的潜在价值。
本文的研究意义在于提供一种更高效、准确、可靠的有机物分析方法，为科学研究、环境保护、食品安全监测和药物研发等领域提供技术支持。
此外，通过深入研究高效液相色谱-质谱联用技术的应用前景，有助于推动该技术在实际应用中的推广，从而促进科学技术的发展和创新。
2.高效液相色谱-质谱联用技术的概述2.1 高效液相色谱技术的原理和特点高效液相色谱（HPLC）是一种基于液相分离原理的分析技术，具有高分离效率、高灵敏度和高选择性的特点。
高效液相色谱法测定样品中紫杉醇的含量
莫蓓莘;尤力群
【期刊名称】《华东师范大学学报：自然科学版》
【年(卷),期】1998(000)004
【摘要】建立了反相高效液相色谱法测定样品中紫杉醇含量的方法。
色谱柱采用中国科学院大连化学物理研究所生产的YWQC18柱（4．6X250mm，5μm），流动相为乙腈：水：三氟乙酸（40：60：0．1），检测波长227um，紫杉醇浓度在40μg／ml～1400μg／ml内呈解性关系。
回收率98．2～99．3％，变异系数0．75～3．39％。
【总页数】3页(P95-97)
【作者】莫蓓莘;尤力群
【作者单位】深圳农业科学研究中心;华东师范大学学报编辑部
【正文语种】中文
【中图分类】R979.1
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定红豆杉中紫杉醇及多烯紫杉醇的含量 [J], 周斌;周美;王道平;杨小生;王俊杰
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4.超高效液相色谱-串联质谱法测定保健酒中紫杉醇的含量 [J], 杨晓聪;刘正才;吕
佳乐;林永辉;王丹红;姚闽娜
5.反相高效液相色谱法测定紫杉醇固体分散体中紫杉醇的含量(英文) [J], 刘祥瑞;吴科春;张春晖;张烜;张强
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基于高效液相色谱串联质谱的临床诊断试剂开发中的质谱方法优化策略摘要：高效液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）已成为临床诊断试剂开发中的重要分析技术。
本文介绍了LC-MS/MS在临床诊断试剂开发中的应用，重点讨论了质谱方法优化策略，包括离子源参数优化、质谱仪参数优化、样品前处理优化等方面。
通过优化质谱方法，可以提高分析灵敏度、准确性和重现性，为临床诊断试剂开发提供更加可靠的分析结果。
关键词：高效液相色谱串联质谱；临床诊断试剂；质谱方法优化；离子源参数。
引言：随着现代医学的发展，临床诊断试剂的研发和应用越来越受到关注。
临床诊断试剂是指用于诊断、预测、监测和治疗疾病的试剂，包括生物标志物、药物代谢产物、毒物等。
为了提高临床诊断试剂的准确性和灵敏度，需要使用高分辨率、高灵敏度的分析技术进行分析。
液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）作为一种高效、高灵敏度的分析技术，已经成为临床诊断试剂开发中的重要工具。
高效液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）已成为临床诊断试剂开发中的重要分析技术。
它具有高灵敏度、高选择性、高通量等优点，可以用于分析各种生物分子，如蛋白质、代谢产物、药物等。
在临床诊断试剂开发中，LC-MS/MS可以用于药物代谢动力学研究、生物标志物筛选、毒物检测等方面。
然而，LC-MS/MS在临床诊断试剂开发中的应用也面临着一些挑战，如样品复杂性、分析灵敏度等问题。
因此，优化质谱方法是提高LC-MS/MS在临床诊断试剂开发中应用的关键。
一、质谱方法优化策略（一）离子源参数优化离子源是LC-MS/MS中的关键部件，它直接影响到分析的灵敏度和选择性。
离子源参数的优化包括离子源温度、离子源气体流量、离子源电压等方面。
离子源温度的优化可以提高离子化效率和信号强度，但过高的温度会导致样品分解和离子源污染。
离子源气体流量的优化可以影响离子化效率和离子源的清洁程度。
离子源电压的优化可以影响离子化效率和离子源的清洁程度。
专利名称：一种测定多西他赛或紫杉醇的高效液相色谱-三重四级杆质谱联用方法
专利类型：发明专利
发明人：孙艳,王漪璇,毋丹,钱隽,欧阳年
申请号：CN201610005307.X
申请日：20160105
公开号：CN105424843A
公开日：
20160323
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种测定多西他赛或紫杉醇的方法。
更具体而言，涉及一种基于高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术定量分析多西他赛或紫杉醇的方法，其中，所述方法包括在高效液相色谱仪中使用包含甲酸铵或甲酸的流动相的步骤，以及在ESI(-)或APCI(-)电离模式下采用MRM模式测定多西他赛或紫杉醇的加甲酸根准分子离子峰和子离子峰的步骤。
申请人：复旦大学附属肿瘤医院
地址：200032 上海市徐汇区东安路270号
国籍：CN
代理机构：北京金信知识产权代理有限公司
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紫杉醇与多西他赛的比较一、来源:紫杉醇：来源于太平洋紫杉树皮的无色或微黄色粘稠液体（具有毁坏性）多西他赛：来源于欧洲紫杉针叶的黄至棕黄色粘稠液体（具有可再生性）二、结构特征相同点：都是紫杉类特征结构，4、5位均含O四环结构。
不同点：多西他赛相应部位为烷氧基而紫杉醇相应部位为苯甲酰苯基多西他赛相应部位为羟基而紫杉醇相应部位为乙酰基多西他赛取代基团空间位阻小极性基团亲水性强，因此多西他赛与微管蛋白的亲和力是紫杉醇的2倍三、剂型紫杉醇：30mg(5ml)/瓶和100mg(16.7ml)／瓶。
每毫升无菌注射剂溶液中含有6mg 紫杉醇，527mg经纯化的聚氧乙基代蓖麻油（Cremophor EL）和49.7% USP规格无水乙醇。
多西他赛：多西他赛®浓缩液：80mg/2ml （多西他赛溶于吐温80）溶剂：6ml乙醇水溶液(13% w/w)多西他赛®浓缩液：20mg/0.5ml（多西他赛溶于吐温80）溶剂：1.5ml乙醇水溶液(13% w/w)紫杉醇：稳定性及水溶性差，由于使用聚氧乙基代蓖麻油，与某些静脉输入设备不相容，易导致过敏反应四、作用机理：五、药代动力学多西他赛：六、体外细胞毒作用的比较a 使细胞存活率减少50%所需要的药物浓度b 液体基质中培养c 琼脂中移生培养多西他赛在体外的细胞毒作用是紫杉醇的1.3—12倍七、耐药性比较⏹紫杉醇：多药耐药细胞株会导致对紫杉醇获得性耐药⏹多西他赛：对紫杉醇耐药的细胞株不会自发地产生对多西他赛的交叉耐药性八、临床适应症多西他赛FDA及EU批准适应症⏹1995年FDA批准多西他赛单药用于MBC二线治疗⏹1999年FDA批准多西他赛单药用于NSCLC(使用铂类后)⏹2000年FDA批准多西他赛/阿霉素用于MBC一线治疗⏹2003年FDA批准多西他赛/顺铂用于NSCLC一线治疗⏹2004年FDA批准多西他赛用于激素抵抗的前列腺癌治疗⏹2004年FDA和欧盟批准多西他赛联合蒽环类用于淋巴结阳性的可手术乳腺癌辅助化疗⏹2005年欧洲批准多西他赛＋曲妥珠单抗一线治疗HER2阳性的转移性乳腺癌⏹2006年FDA批准多西他赛联合顺铂和氟脲嘧啶用于晚期胃癌的治疗⏹2006年FDA批准多西他赛联合顺铂和氟脲嘧啶用于头颈部鳞状细胞癌的治疗九、预防性用药⏹紫杉醇：采用地塞米松20mg口服，通常在用紫杉醇之前12及6小时给予，苯海拉明（或其同类药）50mg在紫杉醇之前30至60分钟静注，以及在注射紫杉醇之前30－60分钟给予静脉注射西米替丁（300mg）或雷尼替丁（50mg）⏹多西他赛：3周方案：⏹3天激素预处理：在多西他赛用药前一天开始使用地塞米松8mg (口服)，每日二次，连用三天⏹标准美国方案：在多西他赛用药前一天开始使用地塞米松8mg (口服)，每日二次共服5次每周方案：⏹在多西他赛用药前12小时给予首剂地塞米松8mg，然后每隔12小时给予一次，共3次多西他赛的预处理要求及方法较紫杉醇简单十、血液学不良反应比较⏹紫杉醇：1.剂量和疗程依赖性；剂量越大,毒性越大，注射时间越长,毒性越大2.24小时的毒性比3小时大3.中性粒细胞计数平均最低点第11天,第15-21天可恢复⏹多西他赛：1.在没有常规接受G-CSF的病人中，中性粒细胞减少是最常见的血液学不良反应2.在多西他赛用药后平均8天，中性粒细胞计数降到最低点(400/mm3)3.可逆的及非蓄积性的4.很少并发感染及发热对于中性粒细胞的下降，可以采取G-CSF预防性用药十一、非血液学不良反应紫杉醇•过敏反应•心血管毒性•神经毒性•关节痛/肌肉痛•胃肠道反应•脱发•指甲改变•皮肤病变•水肿多西他赛•过敏反应•皮肤及皮下组织异常•体液潴留•胃肠道不适•神经系统异常•心脏异常•肝胆系统异常•脱发•眼部异常过敏反应，神经毒性是紫杉醇的最常见的不良反应体液潴留和脱发是泰索帝常见的不良反应十二、临床差异转移性或局部晚期乳腺癌的化疗比较泰索帝或紫杉醇治疗MBC的III期临床试验⏹泰索帝治疗组的缓解率高于紫杉醇-在可评价人群中达到明显统计学意义(37.4% vs 26.4% p=0.02)⏹泰索帝治疗组3/4度血液学和非血液学不良反应的发生率较高⏹泰索帝治疗组的到疾病进展时间(TTP)明显优于紫杉醇组(5.7 mos vs 3.6 mos p<0.0001)⏹泰索帝治疗组的总生存明显优于紫杉醇组(15.4 mos vs 12.7 mos p=0.03)⏹这个研究结果与其它II期和III期临床试验的结果相一致HER2阳性晚期乳腺癌的治化疗⏹对于处于进展期HER 2+脏器转移的患者，泰索帝和赫赛汀®联合治疗与泰索帝®单药治疗作为一线方案相比：⏹生存期延长> 8 个月⏹TTP几乎增倍⏹有效期持续时间超过2倍⏹耐受性良好⏹使用方便国外新批准适应症⏹2004年8月23日FDA批准TAC辅助治疗淋巴结阳性乳腺癌⏹2005年1月11日欧盟批准泰索帝治疗乳腺癌两项新适应症, 包括⏹1）TAC方案用于淋巴结阳性的可手术乳腺癌患者的辅助化疗。
液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用液相色谱质谱联用技术（LC-MS）已经成为分析化学领域中的一项重要工具。
它不仅可以用于生化分析和环境检测, 还在药物分析中表现出很强的优势。
本文将重点介绍液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用。
一、液相色谱质谱联用技术的原理及优势液相色谱质谱联用技术是将液相色谱（LC）和质谱（MS）两种技术结合起来, 使得样品经过某种分离后直接进入质谱分析器, 从而达到高灵敏度, 高选择性和高分辨率的目的。
液相色谱的选择性和分离能力可以使样品中各种成分被分离出来, 而质谱则以其高灵敏度和特异性, 鉴别每一个分离出来的成分, 确保每种物质都得到准确的定量和定性分析。
液相色谱质谱联用技术优势显著, 其主要表现在以下三个方面:1.更高的分离能力和选择性, 增强样品分离和分析的准确性和可靠性。
2.具有高度的灵敏性和特异性, 能提高分析的探测下限和峰面积, 使得样品中的低浓度成分也能准确地被检测到。
3.可以进行组分结构的确定和鉴定, 通过分子离子的质量谱图,可确定组分的分子结构和可能的化学反应路径。
二、液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用已经得到广泛的发展和应用。
主要表现在以下几个方面:1.药物代谢研究液相色谱质谱联用技术被广泛应用于药物代谢研究中。
通过监测药物的代谢产物, 可以研究药物在体内的代谢途径, 剖析药物的药效, 药物代谢动力学参数和评价药物对人体生理的影响。
2.药物成分分析液相色谱质谱联用技术可以实现药物中各种成分的分离和分析, 确保药物的安全和质量。
通过确定药物中的各种成分, 可以评价药物的性质和作用机理, 为药物的研发和质量监测提供有力的技术支持。
3.毒物分析液相色谱质谱联用技术也可以用于毒物分析。
通过对毒物样品进行分离和质谱分析, 可以鉴定毒物类别和浓度, 及时采取措施, 保护公众健康安全。
4.药物残留检测液相色谱质谱联用技术可以用于药物残留检测。
收稿日期:2007207217基金项目:辽宁省科技计划项目(2007102071)作者简介:高坤(19802),女(汉族),辽宁丹东人,博士研究生,E 2m ail kun gao1@ ;何仲贵(19652),男(汉族),宁夏盐池人,教授,博士,主要从事药物新剂型与新技术研究,T el .024*********,E 2m ail hezhonggui @ 。
文章编号:100622858(2008)0620462205高效液相色谱2质谱联用法测定大鼠血浆中多西他赛的含量高 坤,陈凤菊,孙 进,何仲贵(沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016)摘要:目的建立大鼠血浆中多西他赛含量的测定方法,为药物动力学研究提供方法学基础。
方法采用高效液相色谱2质谱联用法(HPLC 2MS )。
采用Diamonsil C 18色谱柱(416mm ×200mm ,5μm ),乙腈2质量分数为012%的甲酸水溶液(体积比66∶34)为流动相,流速为110mL ・min -1,柱温为25℃,进样量为20μL 。
质谱选择电喷雾电离源(ESI ),选择离子监测(SRM )检测多西他赛母离子[M +H ]+m/z 809,内标格列吡嗪子离子m/z 321。
结果本法的线性范围为25～4000μg ・L -1;最低定量限为1215μg ・L -1;低、中、高质量浓度质控供试品的日内RSD 均在4109%～6196%内,日间RSD 均在5134%～14129%内,准确度相对误差(E R )均在-0129%～-3142%内,提取回收率均在85%以上。
结论本法操作简便,灵敏度高,分析速度快,适用于大鼠血浆中多西他赛的含量测定。
关键词:多西他赛;高效液相色谱2质谱联用法;含量测定中图分类号:R 917 文献标志码:A 多西他赛(docetaxel )是由浆果紫杉针叶提取物经半合成所得的紫杉类化合物[1],其通过加强细胞微管蛋白聚合及抑制微管解聚作用,促进稳定的非功能性微管束形成,从而破坏肿瘤细胞的有丝分裂,对乳腺癌、非小细胞肺癌、头颈癌及卵巢癌等多种实体瘤具有较好的抑制活性[2-3]。
液相色谱-质谱联用分析紫杉醇和多西他赛中流动相体系的优化钱隽;郁韵秋【摘要】Objective To investigate and compare the ionization behaviors of paclitaxel and docetaxel by exposing to various additives in two sampling ways: direct infusion or by liquid chromatograph into mass spectrometer. Methods The working solutions of paclitaxel and docetaxel,mixed with different additives, were led into the electrospray ionization source, via a syringe pump or via the liquid chromatographic system,for detection and collection of mass spectra or chromatograms of the analytes. The influence of additives, with various sorts, concentrations and pH,in solutions or mobile phases on the ionization efficiency of paclitaxel and docetaxel were studied. Results Similar patterns of mass spectra intensity variations were observed between these two sampling methods, in that the highest ionization efficiency and strongest signal intensity were obtained when the analytes were exposed to the additive as 1 mmol/L ammonium formate (pH = 6. 5) in both methods. Conclusions Direct infusion of samples into mass spectrometer is an efficient,simple and reliable way to optimize the mobile phase composition in the development of liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for quantitation of paclitaxel and docetaxel. Based on these observations, a sensitive andrnreproducible LOMS/MS method for the determination of paclitaxel in human plasma was successfullyrnestablished and validated.%目的分别通过质谱的两种进样方式——直接进样和色谱进样,考察并比较两种进样方式、不同添加剂条件下紫杉醇和多西他赛的离子化规律.方法将含有不同添加剂的紫杉醇和多西他赛混合溶液分别通过针泵或液相系统导入电喷雾电离源进行质谱检测,获取待测化合物的质谱图或色谱图.研究溶液或流动相中添加剂的种类、浓度、pH值对紫杉醇和多西他赛离子化效率的影响.结果两种进样方式所呈现的待测化合物质谱响应的变化情况一致,均以1 mmol/L甲酸铵溶液(pH 6.5)为添加剂所展现的离子化效率最高、响应强度最大.结论在建立紫杉醇或多西他赛的液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)定量方法时,采用质谱直接进样方式对流动相中的水相组成进行优化的方法是高效、便捷和可靠的.在此基础上建立的人血浆中紫杉醇浓度的LC-MS/MS分析方法,经方法学验证表明灵敏度高、结果重现性好.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2012(039)006【总页数】6页(P605-610)【关键词】紫杉醇;多西他赛;液相色谱-质谱联用;直接进样;添加剂;离子化【作者】钱隽;郁韵秋【作者单位】复旦大学药学院药物分析教研室上海201203;复旦大学附属肿瘤医院化疗科上海200032;复旦大学药学院药物分析教研室上海201203【正文语种】中文【中图分类】R927.2;O657.6液相色谱－质谱联用（LC－MS或LC－MS／MS）技术是基于色谱的高分离能力及质谱的高灵敏度和专属性的分离检测技术，已经成为生物、制药领域的必备分析手段之一。
在用电喷雾离子化（electrospray ionization，ESI）质谱进行分析时，液相色谱流动相的组成已证明是影响化合物离子化的重要因素。
其中，流动相中添加剂的化学性质、浓度以及添加剂控制的溶液pH值对分析物的响应值都有明显影响［1－2］。
紫杉醇（paclitaxel）和多西他赛（docetaxel）是临床上常用的紫杉烷类抗癌药物。
两者具有相似的理化性质，极性都较弱，在ESI源中不易形成带电荷离子。
LC－MS／MS技术用于分析紫杉醇和多西他赛的灵敏度较差，在分析方法开发时必须在流动相中使用添加剂来提高质谱响应［3－4］。
如紫杉醇，尽管文献中都采用ESI源正离子模式，但就流动相的水相组分而言，有选择0．1%甲酸［5－7］、0．1%乙酸［8］、10mmol／L 甲酸铵［9］、2mmol／L 乙酸铵［10］等。
由于各实验室仪器型号和配件的不同以及分析方法开发过程的技术差异，各实验室在建立紫杉醇的分析方法时仍需进行流动相条件的优化。
质谱仪的进样方式包括直接进样和色谱进样。
前者是指样品通过针泵而不经色谱分离，直接进入离子源电离后进行质谱分析。
对于绝大多数质谱仪器而言，从待测物离子产生到获得离子的响应信号仅仅需要毫秒级的时间。
但大多数实验室在建立及优化液相条件的过程中往往采用色谱进样，即样品在合适的流动相条件下经色谱柱分离后，由色谱流出液导入质谱。
每次流动相条件的改变，意味着对流动相的更换及脱气、色谱柱的平衡及冲洗等步骤，此过程需要数小时的时间。
本实验分别通过这两种进样方式，研究紫杉醇和多西他赛在含不同添加剂的溶液或流动相中的离子化规律，探索简化流动相优化过程的可行方法。
在此基础上，建立了人血浆中紫杉醇的LC－MS／MS分析方法并进行方法学验证及应用于临床样品测定。
材料和方法仪器 Shimadzu LC－20AD液相色谱系统包括二元梯度泵、真空在线脱气机、柱温箱和自动进样器（日本岛津公司）；API 3200Qtrap三重四极杆串联质谱仪（美国AB SCIEX公司），配置TurbolonSpray离子源、HARVARD pumpⅡ针泵及安装 Analyst 1．5软件的微处理机。
试剂紫杉醇对照品（纯度99．9%）和多西他赛标准品（纯度98．8%）均购于中国药品生物制品检定所；甲醇、叔丁基甲醚、甲酸、乙酸、甲酸铵和乙酸铵均为色谱纯（德国 Merck KGaA公司，64271 Darmstadt）；纯水由法国Millipore超纯水仪制备。
标准品溶液的配制精密称取紫杉醇和多西他赛各10mg，分别用甲醇溶解，配成各自浓度为400 μg／mL的标准储备液。
于纯水－甲醇（30∶70，v／v）溶剂中加入适量紫杉醇和多西他赛的标准储备液，配制成紫杉醇和多西他赛浓度均为20μg／mL的混合标准品溶液，供针泵直接注射进样。
同样，分别以含不同添加剂，如0．1%甲酸、0．1%乙酸、多种浓度乙酸铵、甲酸铵（浓度分别为0．05、0．2、1、5、20mmol／L）、1mmol／L 甲酸铵（pH 3．0、4．0、6．5、7．5）等的水溶液替代前述方法中的纯水，与甲醇以3∶7的比例混合（按此比例配制，以使样品中水－甲醇的配比与LC－MS／MS方式下流动相的配比相似）。
按照上述方法配制成紫杉醇和多西他赛浓度均为20μg／mL的混合标准品溶液－A，即得到含各种添加剂的直接注射进样溶液。
取适量紫杉醇和多西他赛的标准储备液，分别用50%的甲醇－水溶液稀释，配制成紫杉醇和多西他赛浓度均为40ng／mL的混合标准品溶液－B，供LC－MS／MS分析。
针泵直接进样的电喷雾质谱（ESI－MS／MS）分析将浓度为20μg／mL的紫杉醇和多西他赛混合溶液－A，通过针泵以10μL／min的流速导入ESI源。
通过全扫描确定化合物母离子，以多反应离子监测（multiple reaction monitoring，MRM）选择相对丰度较高且信号稳定的离子对。
对去簇电压（declusteringpotential，DP）、碰撞能量（collision energy，CE）、碰撞室入口电压（colliosion cell entrance potential，CEP）、碰撞室出口电压（colliosion cell exit potential，CXP）等参数进行优化。
确定最佳质谱参数为：ESI源，正离子模式；喷雾电压5 500V；离子源温度550℃；雾化气压力20 psi；辅助气压力60psi（1psi＝6．895kPa，下同）；气帘气压力10psi。
MRM监测离子对、去簇电压及碰撞电压等见表1。
通过针泵注入紫杉醇、多西他赛与各种添加剂的混合溶液，考察待测物在ESI源正离子模式下的响应情况。
表1 紫杉醇和多西他赛的质谱优化条件Tab 1 The optimaized MS／MS conditions for paclitaxel and docetaxelDP：Declustering potential；CE：Collision energy；CEP：Colliosion cell entrance potential；CXP：Colliosion cell exit potential．CompoundPaclitaxel DocetaxelLC－MS／MS分析浓度为40ng／mL的紫杉醇和多西他赛混合溶液－B，经液相系统的自动进样器导入。
液相分离条件为：Shimadzu Shim－pack XRODS色谱柱（3．0mm×75mm，2．2μm，日本岛津公司），柱温为40℃；流动相组成为甲醇－水体系（73∶27，v／v），流速为0．4mL／min，进样体积为10μL。
