当前位置：文档之家 › 第三章 酶促反应动力学 (A)

第三章 酶促反应动力学 (A)

  • 格式：ppt
  • 大小：258.50 KB
  • 文档页数：35

下载文档原格式

  / 35

合集下载

酶促反应动力学PPT课件

酶促反应动力学PPT课件

第五节
激活剂对酶反应的 影响
1. 激活剂(activator)
• 激活剂：凡是能提高酶活性的物质。其 中大部分是无机离子或简单有机化合物。
• 金属离子有K+、Na+、Ca2+、Mg2+等离 子，如Mg2+是多数激酶及合成酶的激 活剂，
• 无机阴离子如：Cl—、Br—、I—等都可作 为激活剂。如Cl—是唾液淀粉酶的激活剂
五、Km和Vmax值的测定
• (3) Hanes— Woolf作图法
• 将前式两边均 乘以[S]得：以 [s]/ v～[s]作图， 得一直线，横 轴的截距为 -Km，斜率为 1/ Vmax
第二节 酶的抑制作用
抑制与失活之间的关系
• 失活作用(inactivation) :使酶蛋白变性 而引起酶活力丧失的作用 ,变性剂对酶 的变性作用无选择性.
0.058
• Km值氢随酶测定的底物、反应的温度、pH及离子强度
而改变。各种酶的K苯m值甲相酰差酪很氨大酰，胺大多数酶2的.5Km
胰值凝介乳于蛋10白-6~酶10-1mol/甲L之酰间酪。氨酰胺
12.0
乙酰酪氨酰胺
32.0
三、Km值的意义
• 3. Km值可以判断酶的专一性和天然底物 有的酶可作用于几种底物，因此就有几个 Km值，其中Km值最小的底物称为该酶的 最适底物也就是天然底物。
•
i =1-a
• (4) 抑制百分数; i %=(1-a) x 100%
• 通常所谓抑制率是指抑制分数或抑制百分数。
二、抑制作用的类型
v • 根据抑制作用是否可逆:
• 1．不可逆的抑制作用: 抑 制剂与酶的必需基团以共价 键结合而引起酶活力丧失， 不能用透析、超滤等物理方 法除去抑制剂而使酶复活的 作用.

第三章 酶促反应动力学(简)-1

第三章 酶促反应动力学(简)-1

-Km
Km Vmax
[S]
21
上述方法的共同点，是要从动力学实验 中获取不同[s]值的v值，而v值不能由实验 直接取得。实验中能直接得到的是不同时 间t时的浓度[s]值(或[p]值)。 − d [s] 为此需要根据速率的定义式 v =
dt
在[s]与t的关系曲线上求取相应各点切线 的斜率,才能确定不同时间的反应速率。 这种求取动力学参数的方法又称之为微分 法。
产物抑制解离常数。
具体推导过程参阅【例题】3－6。
30
三、有抑制剂的酶促反应动力学
由于某种物质的存在而使酶反应速率减 慢，这种物质称为抑制剂。抑制可由抑制 剂和酶之间的作用引起，也可由抑制剂和 底物之间的作用而引起。这里只讨论由抑 制剂与酶作用而引起的抑制现象。 根据抑制的机理不同，可分为竞争性抑制、 非竞争性抑制和反竞争性抑制等。
80 Rate of Reaction(v)
1903年，Henri用蔗糖 酶水解蔗糖的实验
60
40
20
0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 C n tratio o S b o cen n f u strate(u o ) m l/L
8
1.米氏方程
对酶反应过程的机理，得到大量实验结 果支持的是活性中间复合物学说。该学 说认为酶反应至少包括两步，首先是底 物S和酶E相结合形成中间复合物[ES]， 然后该复合物分解成产物P，并释放出E。 对单一底物参与的简单酶催化反应
26
2.底物抑制动力学
有些酶反应，在底物浓度增加时，反应 速率反而会下降，这种由底物浓度增大而 引起反应速率下降的作用称为底物抑制作 用。此时的反应机理式为
k +1 k +2 ⎯⎯→ ES ⎯⎯→ P + E E + S← ⎯⎯ k −1 k +3 ⎯⎯→ SES ES + S ← ⎯⎯ k −3

酶促反应动力学ppt课件

酶促反应动力学ppt课件
注：反应分子数和反应级数对简单反应时一致的，但比如水解反应，应为二级，通常可 以当做一级处理。
各级反应的速率特征 一级反应：半衰期与速率常数成反比，与反应物的初浓度无关。 二级反应：半衰期与速率常数和反应物的初浓度成反比。 零级反应：半衰期与速率常数成正比，与反应物的初始浓度成正比。
底物浓度对酶促反应速率的影响
关，而与其浓度无关。一种酶有几种底物就有几个Km值 ，其中Km值最小的底物一般称为该酶的
最适底物或天然底物。
在K2 K-1 时， Km = Ks，此时Km 代表ES的真实解离常，即 Km值表示酶与底物之间的亲 和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低； Km值小表示亲和程度大，酶的催化活性高。
中间络合物学说
（ Henri的蔗糖酶水解蔗糖试验）
酶促反应： ①当底物浓度低时, 大部分酶没有与底物 结合，即酶未被饱和，这时反应速度取决
于底物浓度，即与底物浓度成正比，表现
为一级反应特征；
②随着底物浓度的增高，ES生成逐渐增
多，这时反应速度取决于【ES】，反应
速度也随之增高，但反应不再成正比例
酶浓度固定，反应速率与底物 浓度的关系
活酶原）。
激活剂对酶的作用具有选择性，有时离子之间可以相互替代，但有些离子之间就具有拮抗作用，
另外，激活剂的浓度也对其效应有影响，一定浓度时起激活作用，超过这个浓度又起抑制作用。
在机体内有许多调节酶活力的方式，其中抑制剂和激活剂的调节属于最快速的方式。
影响机制：1）酸、碱可使酶变性或改变构象失活；2）影响酶活性基团的解离；3）影响底物的
解离，4）影响ES的解离。
注：虽然大部分酶的pH—酶活曲线是钟形，但也有半钟形甚至直线形。
激活剂对酶反应的影响

酶动力学课件

酶动力学课件

①．动力学参数的意义
Km 酶促反应速度为最大反应速度 最大反应速度（ 酶促反应速度为最大反应速度（Vmax)的一 半时 的一 底物浓度。 的底物浓度。 单位是mol/l。 单位是 。 A. Km值是酶的特 值是酶的特 征性常数。 征性常数。与酶 的浓度无关， 的浓度无关，不 同的酶， 同的酶，其Km 值不同
Lineweaver-Burk 双倒数作图法
实 例
Neurospora crassa 的D-丝氨酸脱水酶催化反应： 丝氨酸脱水酶催化反应： 丝氨酸脱水酶催化反应 CH2OH · CHNH2 · COOH → CH3CO · COOH+NH3 在实验中测定酶的饱和曲线得到下列数据： 在实验中测定酶的饱和曲线得到下列数据： [s] ×10 -5（M） 0.20 0.40 0.85 1.25 1.70 2.00 8.00 v 20分钟生成丙酮酸（µM） 分钟生成丙酮酸（ ） 分钟生成丙酮酸 0.150 0.200 0.275 0.315 0.340 0.350 0.360
（二）底物浓度对酶反应速度的影响
1 中间络合物学说
Henri和Wurtz提出 和 提出
中间产物的证据
中间复合物的直接观察 光谱改变 酶的物理性质改变 分离结晶 酶和底物的共沉降
V Vmax
[S] 当底物浓度较低时 反应速度与底物浓度成正比； 反应速度与底物浓度成正比；反 应为一级反应。 应为一级反应。
快速平衡假说与稳态平衡假说的实 质区别
项目
快速平衡学说
稳态学说
酶和底物生成不稳定复合物[ES]，酶催化反应是经该中间复合物完 成的，即： k+1 k+2 E+S [ES] E+P
k-1
假设 [ES]在反应开始后与 E 及 S 迅速 达到动态平衡 [ES]的生成速率与其解离速率相 等，其浓度不随时间而变化

酶促反应动力学(有方程推导过程)

酶促反应动力学(有方程推导过程)

2.专一性不可逆抑制
此属抑制剂专一地作用于酶的活性中心或其必需 基团，进行共价结合，从而抑制酶的活性。有机 磷杀虫剂能专一作用于胆碱酯酶活性中心的丝氨酸 残基，使其磷酰化而不可逆抑制酶的活性。当胆碱 酯酶被有机磷杀虫剂抑制后，乙酰胆碱不能及时分 解成乙酸和胆碱，引起乙酰胆碱的积累，使一些以 乙酰胆碱为传导介质的神经系统处于过度兴奋状态， 引起神经中毒症状。解磷定等药物可与有机磷杀虫 剂结合，使酶和有机磷杀虫剂分离而复活。
1. 温度影响反应体系中的活化分子数：温度增加，活 化分子数增加，反应速度增加。
2. 温度影响酶的活性：过高的温度使酶变性失活，反 应速度下降。
最适温度不是酶的特征常数，因为一种酶的最适温 度不是一成不变的，它要受到酶的纯度、底物、激活剂、 抑制剂、酶反应时间等因素的影响。因此，酶的最适温 度与其它反应条件有关。
〔I〕 + Ki
）＋〔S〕
竞争性抑制剂双倒数曲线，如下图所示：
1
vi
＝Km（ Vmax
1
+
〔KI〕i ）〔S1〕+
1 Vmax
有竞争性抑制剂存在的 曲线与无抑制剂的曲线相 交于纵坐标I/Vmax处，但 横坐标的截距，因竞争性 抑制存在变小，说明该抑 制作用，并不影响酶促反 应的最大速度Vmax，而使 Km值变大。
在底物浓度很低时，反应速度随底物浓度的增 加而急骤加快，两者呈正比关系，表现为一级反 应。随着底物浓度的升高，反应速度不再呈正比 例加快，反应速度增加的幅度不断下降。如果继 续加大底物浓度，反应速度不再增加，表现为零 级反应。此时，无论底物浓度增加多大，反应速 度也不再增加，说明酶已被底物所饱和。所有的 酶都有饱和现象，只是达到饱和时所需底物浓度 各不相同而已。

酶催化反应动力学

酶催化反应动力学
• 酶所表现的最适温度是上述两种影响综合作用的 结果。
在较低的温度范围内， 酶催化反应速率会随着 温度的升高而加快，超 过某一温度，即酶被加 热到生理允许温度以上 时，酶的反应速率反而 随着温度的升高而下降。
这是由于温度升高，虽然可加速酶的催化反应速率， 同时也加快了酶的热失活速率。
• 只有在某一温度条件下， 酶促化学反应速度达到 最大值，通常把这个温 度称为酶促化学反应的 最适温度(optimum temperature)。
• 计算一定反应速度下的底物浓度:如某一反应要求 的反应速度达到最大反应速度的99%，则[S]=99Km
• 了解酶的底物在体内具有的浓度水平：一般地， 体内酶的天然底物[S]体内≈Km，如果[S]体内<< Km，那么V<< Vmax，细胞中的酶处于“浪费” 状态，反之，[S]体内 >> Km，那么V≈Vmax，底 物浓度失去生理意义，也不符合实际状态。
酶与其他催化剂比较具有显著的特性
A.高效性
• 酶的催化作用可使反应速度提高107 -1013倍。 极少量酶就可催化大量反应物发生转变。
• 例如： 2H2O2
2H2O + O2
• 用Fe+催化， 1mol铁离子可催化10-5mol双氧
水分解。在相同条件下，1mol过氧化氢酶却
可催化5×105mol的双氧水分解。
v/nmol • L-1• min-1
6.2510-6
15.0
7.5010-5
56.25
1.00 10-4
60.0
1.00 10-3
74.9
1.00 10-2
75.0
1）计算Km和Vmax
2）当[S]= 5.010-5 mol/L 时，酶催化反应的速 率是多少？

第三章 酶催化反应动力学


32
33
二、影响酶催化作用的因素
34
2.1 底物浓度的影响
底物浓度是决定酶催化反应速度的主要因素。在其他条件不变的情况下， 酶催化反应速度与底物浓度的关系如图。
35
2.2 酶浓度的影响
在底物浓度足够高的条件下，酶催化反应速度与酶浓度 成正比，它们之间的关系可以用下式表示：
36
2.3 温度对反应速度的影响
When [S] << KM, the enzyme is largely unbound and [E]≈[E]T
27
S+E
kcat/KM
E+P
When [S] << KM, kcat/KM is the rate constant for the interaction of E and S. kcat/KM can be used as a measure of catalytic efficiency.
24
25
（3）. Kcat/Km
Kcat:反映的是一种酶被底物饱和时的 酶性质。在低[S]下， Kcat则失去了意义。 当[s]<<km， Kcat/Km是一个比较酶催 化效率较好的一个动力学参数。
26
（3）酶的催化效率:kcat/KM 评价
kcat/KM通常被看做酶的效率，Kcat越大或是Km越小，都使得Kcat/Km越 大 在生理条件下，大多数的酶不被底物所饱和，且底物浓度与Km相比要小 的多 。
酶工程与蛋白质工程
第三章 酶催化反应动力学
1
本节主要内容
一、酶催化反应动力学 二、影响酶催化作用的因素 三、酶活测定
2
动力学研究的主要目的

酶促反应动力学 酶促反应动力学

实验四实验四 酶促反应动力学酶促反应动力学————pH pH pH、、温度温度、、激活剂激活剂、、抑制剂对酶促反应速度的影响抑制剂对酶促反应速度的影响目的目的：：1.了解pH、温度、激活剂和抑制剂对酶活力的影响。

2．学习测定酶最适pH 的方法。

(一) pH 对酶活力的影响对酶活力的影响1.1.实验原理实验原理实验原理对环境酸碱度敏感是酶的特点之一。

对每一种酶来说，只能在一定pH 范围内才表现其活力，否则酶即失活。

另外，在这个有限pH 范围内，酶的活力也随着环境pH 的改变有所不同。

酶通常在某一pH 时，才表现最大活力。

酶表现最大活力时的pH 称为酶的最适pH。

一般酶的最适pH 在4～8之间。

淀粉遇碘呈蓝色。

糊精按其分子大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。

最简单的糊精和麦芽糖遇碘不呈色。

在不同条件下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可由水解混合物是遇碘呈现的颜色来判断。

本实验观察pH 对唾液淀粉酶活力的影响，唾液淀粉酶的最适pH 约为6.8。

2实验器材实验器材恒温水浴锅、试管、试管架、锥形瓶（50ml 或100ml）、吸量管（1、2、5、10ml）、秒表、白瓷板、pH 试纸、稀释50倍的新鲜唾液（在漏斗内塞入少量脱脂棉，下接洁净试管，嗽口后含一小口蒸馏水，半分钟后收集过滤唾液。

取滤液2ml 放入锥形瓶内，加蒸馏水稀释至100ml，充分混匀）。

3实验试剂实验试剂（1）新配制的溶于0.3%NaCl 的0.5%淀粉溶液称取可溶性淀粉0.5g，先用少量0.3%NaCl 溶液加热调成糊状，再用热的0.3%NaCl 溶液稀释至100ml。

（2）0.2mol/L Na 2HPO 4溶液称取Na 2HPO 4·7H 2O 53.65g(或Na 2HPO 4·12H 2O 71.7g),溶于少量蒸馏水中,移入1000ml 容量瓶,加蒸馏水稀释到刻度。

（3）0.1mol/L 柠檬酸溶液称取含一个水分子的柠檬酸21.01g，溶于少量蒸馏水中，移入1000ml 容量瓶，加蒸馏水至刻度。

酶促动力学.ppt


加入非竞争性抑制剂后，Km 不变，而Vmax减小。
非竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：
加入非竞争性抑制剂后，Km 不变，而Vmax减小。
非竞争性抑制剂与酶活性中心以外的基团结合。这类抑制作用不会因提高底物浓度而减弱
（3）反竞争性抑制
酶只有与底物结合后才与抑制剂结合，形成的三元中间产物不能进一步分解为产物。
中间产物学说的关键在于中间产物的形成。酶和底物可以通过共价键、氢键、离子键和和配位键等结合形成中间产物。中间产物的稳定性较低，易于分解成产物并使酶重新游离出来。
二、底物浓度对酶反应速度的影响
2 中间络合物学说
※1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式(Michaelis equation)。后来又有人进行了修正.
三、酶的抑制作用
（一）抑制作用与抑制剂
什么是酶的抑制作用和失活作用？ 失活作用：酶变性；酶活性丧失（无选择性）。 抑制作用：酶的必需基团的化学性质改变,但并不引起酶蛋白变性的作用,而降低酶活性甚至使酶完全丧失活性的作用 引起作用的物质称为抑制剂（I）（选择性）。 研究抑制作用的意义？
特点
⑴ 竞争性抑制剂往往是酶的底物结构类似物； ⑵ 抑制剂与酶的结合部位与底物与酶的结合部位相同—— 酶的活性中心 ⑶ 抑制作用可以被高浓度的底物减低以致消除； ⑷ (表观）Km值增大，Vm值不变
竞争性抑制作用的Lineweaver–Burk图 ：
1/Vmax

(表观）Km值增大，Vm值不变
363
（Eisenthal和Cornish-Bowden法）
（5）直接线性作图法
363

第3章 第3节酶促反应动力学

嗜热蛋白与常温菌蛋白大小，亚基结构，活性中 心等都极为相似，但是维持空间构象的力不相同 例如比嗜常温蛋白约多14个盐桥即可获得热稳定 性
李新梅 湖南大学生物学院
李新梅 湖南大学生物学院
V-T曲线为钟形曲线


在达到最适温度之前，温度 升高，活化分子数增加，反 应速度加快 – 温度系数（Q10） • 温度每提高10℃其反应 速度与原来的反应速度 之比 • 对于许多酶来说，Q10 多为1-2之间。 超过最适温度时, 温度升高， 酶的最适温度不是一 酶逐步变性，V降低 最适温度还与反应时间有关， 个固定不变的常数。 反应时间短，最适温度高， 李新梅 反应时间长，最适温度低湖南大学生物学院
A、随酶浓度的增加而增加 B、随酶浓度的增加而减小 C、随底物浓度的增加而增大 D、是酶的特征常数 A、饱和底物浓度时的速度 B、在一定酶浓度下，最大速度的一半 C、饱和底物浓度的一半 D、速度达最大速度一半时的底物浓度
李新梅 湖南大学生物学院
斜率=Km/Vmax
lineweaker-Burk方程
k2
发生在 很短的 时间内
S: substance P: product E: enzyme
李新梅 湖南大学生物学院
由米氏方程可以看出： （1）[S]很小时，[S]《Km，则V=（Vmax/Km）[S] 一级反应； （2）[S]很大时，[S] 》Km，则V=Vmax，零级反应； （3）[S]处于Km附近时，混和级反应。
湖南大学生物学院

猎豹最多只能跑3分钟
肌糖原分解产生乳酸除了生成ATP，还有大量热 量阐述，时间太长会因身体过热而死

奔跑后的猎豹体能状况孱弱，需要数十分钟 复原
乳酸经肝脏重新生成糖原
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

双倒数法(Linewear Burk): 对米氏方程两侧取倒数，得 ,以 作图，得一直线，直线斜率为 距可计算出Km和rmax。 ，截距为 ,根据直线斜率和截
1／r
1／r 1 rmax
斜率－Km/rmax K
－1／Km
图2－2 双倒数法求解Km和rmax
1 ／ CS
2.2.2.2 抑制剂对酶促反应速率的影响 失活作用 抑制作用 竞争性抑制 非竞争性抑制
根据以上假设，可建立如下方程组
解之，得
令 则
米氏方程
r
rmax
rmax/2
Km
CS
图2－1 酶浓度一定时底物浓度对反应速率的影 响
对米氏方程的讨论： 当CS<<Km时， 当CS>>Km时， 当CS＝Km时， 底物浓度。
，属一级反应。 ，属零级反应。 。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的
解之， 解之，得
式 中:
竞争性抑制
非竞争性抑制
令 可变形为: 可变形为:
令 可变形为: 可变形为:
竞争性抑制
非竞争性抑制
1／ r
CI CI = 0
1／ r
CI
CI = 0
1 ／ rmax
1 ／ rmax’ 1／rmax
-1 ／ -1 ／ Km Km’
1 ／ CS
-1／Km
1 ／ CS
产物抑制：酶促反应中，有时随产物浓度提高，产物与酶形成复合物，阻碍了底 物与酶的结合，从而降低了酶促反应的速度。
经典酶学研究中，酶活力的测定是在反应的初始短时间内进行的，并 经典酶学研究中， 酶活力的测定是在反应的初始短时间内进行的， 且酶浓度、底物浓度较低，且为水溶液， 且酶浓度、底物浓度较低，且为水溶液，酶学研究的目的是探讨酶促反应 的机制。 的机制。 工业上，为保证酶促反应高效率完成， 工业上 ，为保证酶促反应高效率完成，常需要使用高浓度的酶制剂和 底物，且反应要持续较长时间，反应体系多为非均相体系， 底物，且反应要持续较长时间，反应体系多为非均相体系，有时反应是在 有机溶剂中进行。 有机溶剂中进行。
第二章 酶促反应动力学
2.1 酶促反应动力学的特点
2.1.1 酶的基本概念 2.1.2 酶的稳定性及应用特点 酶是以活力、而不是以质量购销的。 酶是以活力、而不是以质量购销的。 酶有不同的质量等级：工业用酶、食品用酶、医药用酶。 酶有不同的质量等级：工业用酶、食品用酶、医药用酶。酶的实际应用中 应注意，没有必要使用比工艺条件所需纯度更高的酶。 应注意，没有必要使用比工艺条件所需纯度更高的酶。
反应机理：
快速平衡法推导动力学方程:
解之,得
式中:
稳态法推导动力学方程:
解之,得
式中:
可见,产物抵制属于竞争性抵制
底物抑制：对于某些酶促反应，当底物浓度较高时，反应速率呈下降趋势， 称为底物抑制。
r
CS
CS
底物抑制反应机理：
快速平衡法推导动学方程：
解之,得
式中:
对连锁的酶促反应， 对连锁的酶促反应，
2.2.2 单底物酶促反应动力学 2.2.2.1 米氏方程 根据酶－底物中间复合物假说，对单底物酶促反应 示为：
，其反应机制可表
快速平衡法推导动力学方程： 快速平衡法推导动力学方程： 几点假设： （1）CS>>CE，中间复合物ES的形成不会降低CS。 （2）不考虑这个可逆反应。 （3） 为快速平衡， 为整个反应的限速阶段，因此ES分解成 产物不足以破坏这个平衡。
2.2 均相酶促反应动力学 2.2.1 酶促反应动力学基础 可采用化学反应动力学方法建立酶促反应动力学方程。 可采用化学反应动力学方法建立酶促反应动力学方程。 对酶促反应 ，有：
式中， 式中， k：酶促反应速率常数； ：酶促反应速率常数； r：酶促反应速率； ：酶促反应速率； rA：以底物 的消耗速率表示的酶促反应速率； 的消耗速率表示的酶促反应速率； ：以底物A的消耗速率表示的酶促反应速率 rP：以产物 的生成速率表示的酶促反应速率。 的生成速率表示的酶促反应速率。 ：以产物P的生成速率表示的酶促反应速率
竞争性抑制
非竞争性抑制
SSII来自EE竞争性抑制反应机理：
快速平衡法推导动力学方程： 快速平衡法推导动力学方程：
解之， 解之，得
，
式中: 式中:
采用稳态法推导动力学方程：
解之，得
式中: 式中:
非竞争性抑制反应机理
快速平衡法推导动力学方程
解之， 解之，得
式 中:
稳态法推导动力学方程： 稳态法推导动力学方程：
根据假设建立动力学方 程
解之，得
令 则
稳态法推导动力学方程： 稳态法推导动力学方程： 几点假设： 几点假设： 的形成不会降低CS。 （1）CS>>CE，中间复合物 的形成不会降低 。 ） ，中间复合物ES的形成不会降低 （2）不考虑这个可逆反应。 ）不考虑这个可逆反应。 中间复合物ES一经分解 （3）CS>>CE中间复合物 一经分解，产生的游离酶立即与底物结合，使中间 ） 中间复合物 一经分解，产生的游离酶立即与底物结合， 复合物ES浓度保持衡定 浓度保持衡定， 复合物 浓度保持衡定，即 。