第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。
第一节杂交瘤技术的基本原理一、杂交瘤技术（一）小鼠骨髓瘤细胞1.细胞株稳定，易于传代培养。
2.细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子。
3.该细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）或胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷株。
4.目前最常用的骨髓瘤细胞是NS-1和SP2/O细胞株。
（二）免疫脾细胞选用与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠，鼠龄8～12周，体重约20g，雌雄均可，但必须分笼。
免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，多用腹腔内或皮内多点注射法。
如微量抗原，可脾脏内直接注射进行免疫。
（三）细胞融合PEG（聚乙二醇）有助于细胞融合。
（四）杂交瘤细胞的选择性培养将经过融合的细胞置于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷的HAT培养基中。
1.脾细胞：在一般培养基中不能生长繁殖。
2.骨髓瘤细胞：采用的小鼠骨髓瘤细胞都是HGPRT或TK代谢缺陷型细胞，在HAT培养基中不能增殖。
3.杂交瘤细胞：骨髓瘤细胞与脾细胞融合，获得HGPRT，可以利用次黄嘌呤合成DNA，故可以存活。
二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存单个细胞培养又称克隆化。
细胞克隆化一般至少进行3～5次。
克隆化有以下几种方法：（一）有限稀释法操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。
（二）显微操作法直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。
（三）荧光激活细胞分选仪先进、高效、高纯度、昂贵。
（四）软琼脂平板法本法缺点是琼脂融化温度较难掌握，过高会导致细胞死亡，过低使细胞分布不均匀，操作较复杂，克隆出现率不稳定。
杂交瘤细胞应及时冻存，以保证细胞不会因污染或过多传代变异丢失染色体而丧失功能。
目前均采用液氮保存细胞。
（注意逐步降温、快速复温）第二节单克隆抗体的制备一、单克隆抗体的产生（一）动物体内诱生法目前McAb治疗用或体外诊断用的多采用该法。
