酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是
无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈
代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝
色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而
对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或
还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝
土曲霉菌落
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青霉
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感谢您的阅读收藏，谢谢！
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观察霉菌的形态有多种方法：直接制片观 察法，载玻片培养观察法和玻璃纸培养观 察法。
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三、器材
菌种：曲霉（Aspergillussp.），青霉 （Penicillium sp.），根霉（Rhizopus sp.）， 毛霉（Mucor sp．） 试剂与仪器：乳酸石炭酸棉蓝染色液，20 ％甘油，查氏培养基平板，马铃薯培养基； 显微镜，载玻片，盖玻片，解剖针，尖头 镊子等。
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五、实验报告
1、结果
绘图说明你 所观察到的酵母菌的形态特征。
2、思考题
吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母 菌死细胞数量有何影响？试分析其原因？
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实验 放线菌的形态观察
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实验目的：
❖学习丝状微生物制片和染色技术； ❖观察和掌握典型放线菌的形态结构特征
水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但
美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。

芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。

本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。

三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。

2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。

3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。

四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。

注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。

2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

实验程序 Ⅱ1
（测定微生物数量）
1. 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖 玻片。
2. 取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一 小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
3. 静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视 野中央。
4. 在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值， 然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就 得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌 液中的含菌数。
实验五
结束
酵母菌形态观察及死活细胞的观察； 微生物细胞大小和数量的测定
• 目的要求 • 实验材料 • 实验程序 • 思考题
目的要求
• 观察酵母形态，加深理解酵母的形态特征 • 美蓝染色鉴定酵母的死活 • 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微
镜下测定微生物大小的方法。 • 学习使用血球记数板测定微生物数量的方
法。
实验材料
• 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球 记数板、酵母菌悬液、盖玻片、美蓝、无 菌滴管、吸水纸、擦镜纸、香柏油、擦镜 油。
实验程序
• 5- 1 :测定微生物的大小 • 5- 2 :测定微生物数量 • 5- 3 :酵母的形态特和美蓝
染色鉴定酵母的死活
实验5-1:酵母的形态特和美蓝染 色鉴定酵母的死活
• 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物 台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
实验5-2:测定微生物数量
实验5-2实验程序 （测定微生物数量）
• 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血 球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计数板（二者原 理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
• 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺

第3组：3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基100ml： 蛋白胨3g，氯化钠1.5g，水100ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.5ml，每管加5ml，共15管,内装倒置 小管，121℃灭菌20min。
第4-5组：普通浓度乳糖蛋白胨发酵培养基700ml：P244 蛋白胨7g，氯化钠3.5g，水700ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1.2ml， 每管加7ml，共45管，内装倒置小管 每管加10ml，共35管，内装倒置小管，121℃灭菌20min。
实验七 酵母菌的形态观察 与死活细胞鉴别
目的要求
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式 2、学习区分酵母菌死活细胞的方法
实验原理
酵母菌是单细胞真核微生物， 其大小为常见细菌的几倍至几 十倍。大多数酵母采用出芽方 式进行繁殖。 美蓝是一种弱氧化剂，其氧化 态呈蓝色，还原态呈无色。用 美蓝对酵母细胞进行染色时， 由于新陈代谢，活细胞具有较 强的还原能力，可使美蓝由蓝 色的氧化型转变为无色的还原 型，染色后细胞呈无色。死细 胞或代谢能力弱的衰老细胞其 还原能力弱，染色后细胞呈蓝 色。
• 第8组：蛋白胨水培养基：250ml，p244 蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，水250ml，每管7ml， 121℃ 灭菌20min
实验材料
• 1. 培养2d的面包酵母斜面培养物 • 2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液
实验方法
美蓝染液水浸片法
1. 滴一滴吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作取酵母培 养物置于染液中，混合均匀。 2. 取盖玻片，将盖玻片一端与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并 盖在菌液上。 3. 3min后，镜检。观察酵母菌形态及出芽情况，并根据细胞 颜色区别死活细胞。 4. 30min后，再次观察。
• 第6组：固体淀粉培养基：600ml，P243 蛋白胨6g，氯化钠3g，牛肉膏3g，可溶性淀粉1.2g，水 600ml，琼脂10g， 121℃灭菌20min。 • 第7组：明胶培养基，500ml，P243 蛋白胨5g，氯化钠2.5g，牛肉膏1.5g，明胶80g，水500ml ，每管7ml， 121℃灭菌20min。

二、基本原理 基本原理
1、酵母菌形态观察和死活细胞鉴别
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖 少数以裂殖 见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以芽殖、少数以裂殖进 芽殖、 裂殖进 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子。 子囊孢子。 行无性繁殖；有性繁殖则通过结合产生子囊孢子 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型 氧化型呈蓝色， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时， 无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代 谢作用，细胞内具有较强的还原能力， 谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞 型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无 活细胞是 色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和淡 死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色和 或代谢作用微弱的衰老细胞则分别呈蓝色 蓝色。 蓝色。
四、操作步骤
在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液 子挑取少许菌丝， 子挑取少许菌丝，浸于染液中 散开 盖上盖玻片 用镊 用解剖针将菌丝分 用高倍
低倍镜观察
镜观察菌丝局部
操作要点： 操作要点： • 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态。 • 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 尽可能将菌丝分开，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 • 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。 挑取菌丝前镊子和解剖针要在酒精灯上灼烧灭菌。
实验三 酵母菌的形态观察及死、 酵母菌的形态观察及死、活细胞 的鉴别和霉菌的形态观察 的鉴别和霉菌的形态观察

细菌形态观察简单染色法
一、目的要求:
1、显微镜下观察细菌个体的形态。
2、学习环境中微生物的检查方法，并加 深对微生物分布广泛性的认识。
二、基本原理:
形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近 年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养 基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
死活细胞鉴定原理
美蓝是一种无毒性的染料。 美蓝有氧化型和还原型两种状态。 氧化型为蓝色，还原型无色。 酵母活细胞由于体内的新陈代谢作用，细胞内
具有较强的还原能力，能使美蓝由氧化型变为 还原型。 酵母死细胞或者代谢作用微弱的细胞，还原能 力弱，不能使美蓝由氧化型转变为还原型。
实验步骤
在载玻片中央加一滴0.1％美蓝染色液，染色 液过多会溢出，过少会在盖玻片下出现大量气 泡。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色。 细菌在中性、碱性或弱酸性溶液环境中通 常带负电荷，碱性染料（解离时分子的染 色部分带正电荷）如美兰、结晶紫等易与 细菌结合使其着色。
操作方法
1、涂片—枯草芽孢杆菌 2、干燥：室温自然干燥 3、固定：有菌膜的一面向上，通过火焰2－3次，
细 胞质凝固
4、染色：滴加染液(美蓝或者番红或者结晶 紫）染色时间为两分钟
细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质 地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的 细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。
细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个 体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、 鉴别染色、特殊染色。
简单染色法原理:
吸取少量酵母菌液，稀释后滴半滴在载玻片的 美篮染色液中，混合均匀；

微生物实验思考题参考答案及知识要点一．酵母菌形态观察及死活细胞鉴别1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响?是分析其原因。

美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。

美蓝浓度高了，代谢不太活跃的活细胞也会被染色，从而使观察到的死细胞较多，活细胞较少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。

二. 细菌的简单染色和革兰氏染色1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么？你是如何操作的？革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。

如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。

脱色时间的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。

2. 固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。

固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。

3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？能。

在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。

最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。

4. 涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上；b 增加其对染料的亲和力。

固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过3次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。

三. 霉菌、放线菌的形态观察1. 镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而断裂成球状或杆状小体。

酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。

2.学习鉴别死活细胞的实验方法。

二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。

2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。

（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。

2、盖片时斜着放不易产生气泡。

1。

血球计数法结果
通过血球计数板对酵母菌进行计数，我们得到了每毫升菌 液中酵母菌的数量。结果显示，菌液中酵母菌的数量在合 理范围内，计数结果准确可靠。
对实验过程的反思与总结
实验操作方面
在实验过程中，我们需要注意无菌操作 ，避免杂菌污染。同时，需要准确配制 试剂，保证实验结果的准确性。
VS
实验设计方面
在实验设计时，需要考虑实验的可行性和 可重复性。本实验中，血球计数法的操作 较为简便，且结果准确可靠，是一种有效 的计数方法。
死活细胞鉴定结果分析
死活细胞鉴定结果
通过染色法和荧光染色法，我们成功地对酵母菌的死活细胞进行了鉴定。活细胞能够吸 收染料并发出荧光，而死细胞则不能。在显微镜下观察，活细胞呈现明显的荧光，而死
细胞则无荧光。
分析
死活细胞鉴定结果表明，大部分酵母菌为活细胞，仅有少量酵母菌为死细胞。这说明在 实验过程中，酵母菌的生长条件较为适宜，且培养基的营养成分能够满足酵母菌生长的
实验七酵母菌的形 态观察、死活细胞 鉴定及血球计数法
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 结论
01
CATALOGUE
实验目的
掌握酵母菌的形态观察方法
了解酵母菌的形态特征
通过显微镜观察，了解酵母菌的单细 胞形态，包括其形状、大小、细胞壁 、细胞膜等结构特点。
学习染色法
THANKS
感谢观看
酵母菌是单细胞真菌，通常呈卵圆形或圆柱形，具有细胞壁、细胞膜、细胞质和 细胞核等基本结构。通过显微镜观察酵母菌的形态，可以了解其生长状态和繁殖 方式。
酵母菌在生长过程中，会经历由单倍体到二倍体的过程，通过观察其形态变化， 可以了解其生长周期和繁殖特点。

五、实验报告
1、绘图说明你所观察的酵母菌的形态特征 填表： 2、填表：
各中格中菌数 1 2 3 4 5 二次平均值 菌数/mlAຫໍສະໝຸດ B 5二、实验原理
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物， 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 细菌大几倍甚至十几倍。大多酵母菌以出芽方式进行无性繁殖， 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 有的分裂繁殖，有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。 过美蓝染液水浸片来观察酵母菌的形态和出芽生殖方式。
菌种： 1、菌种：酿酒酵母 仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜， 2、仪器或其他用品：血细胞计数板，显微镜，盖玻 片，载玻片等 0.1%美蓝染色液等 3、0.1%美蓝染色液等
四、实验内容： 实验内容：
1、美蓝浸片观察 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液， 在载玻片中央加一滴0.1%的美蓝染色液，然后用 0.1%的美蓝染色液 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 接种环取少量酵母菌于染液中，混合均匀； 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触， 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。 后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上。将玻片放置 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 约三分钟后，用显微镜观察酵母的形态和出芽情况， 并判断细胞的死活。 并判断细胞的死活。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片， 物计数方法。该计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半， 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为几个大方格， 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1 中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如图1，计数室的 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而 刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格， 25个中方格 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16 16个小方格 16个 每个中方格又分成16个小方格，另一种是一个大方格分成16个 中方格，而每个中方格又分成25个小方格， 25个小方格 中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规 格的计数板，每一个大方格中的小方格400 400个 格的计数板，每一个大方格中的小方格400个，每一个大方格 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm 盖上盖玻片后， 边长为1毫米，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后， 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米， 0.1毫米 盖玻片与载玻片之间的高度为0.1毫米，所以计数室的容积为 万分之一毫升）。 0.1mm3（万分之一毫升）。

酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。

二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。

繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。

用它采对酵母细胞进行染色。

活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。

而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。

四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。

然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。

(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。

盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。

(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。

先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。

2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。

二、基本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。

实验四酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术,显微镜直接计数法生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节一实验目的1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 .3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。

二实验原理美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。

用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。

因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。

微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。

用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把 10 mm长度刻成 100等分。

测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。

由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。

校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。

一、实验目的1. 观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。

2. 学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。

二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，其细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。

酵母菌主要通过出芽生殖进行繁殖，即在母细胞的一端形成芽体，芽体逐渐长大并与母细胞分离，形成新的个体。

美蓝是一种无毒性的染料，其氧化型呈蓝色，还原型无色。

活细胞具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，活细胞无色，而死细胞或代谢缓慢的老细胞则呈蓝色或淡蓝色。

三、实验器材1. 酿酒酵母或卡尔酵母（Saccharomyces calsbergensis）2. 0.1%吕氏碱性美蓝染液3. 革兰氏染色用的碘液4. 显微镜5. 载玻片6. 盖玻片7. 接种针8. 烧杯9. 火柴四、实验步骤1. 准备酵母菌培养物：取少量酿酒酵母，接种于土豆平板培养基上，28-30℃培养3-5天。

2. 制备美蓝浸片：a. 在载玻片中央滴一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液。

b. 用接种针挑取少量酵母菌，均匀涂布在染液上。

c. 盖上盖玻片，轻压使酵母菌与染液充分接触。

3. 制备水浸片：a. 在载玻片中央滴一滴无菌水。

b. 用接种针挑取少量酵母菌，均匀涂布在水中。

c. 盖上盖玻片，轻压使酵母菌与水充分接触。

4. 显微镜观察：a. 将美蓝浸片和水浸片置于显微镜下观察。

b. 观察酵母菌的细胞形态、大小、细胞核、芽体等特征。

c. 比较美蓝浸片和水浸片中酵母菌的形态差异。

5. 死活细胞鉴别：a. 观察美蓝浸片中酵母菌的染色情况。

b. 活细胞呈无色，死细胞或代谢缓慢的老细胞呈蓝色或淡蓝色。

五、实验结果1. 酵母菌细胞形态：a. 酵母菌细胞呈椭圆形、圆形或卵圆形，大小不一。

b. 细胞核位于细胞中央，呈圆形或椭圆形，核膜清晰。

c. 细胞质均匀，无色或淡蓝色。

2. 出芽生殖方式：a. 观察到酵母菌细胞一端形成芽体，芽体逐渐长大。

b. 芽体与母细胞分离，形成新的个体。

四、操作步骤
1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，无 滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央 吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央， 菌操作用接种环由酵母菌培养斜面上挑取少许菌体置于染液 混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） ；（不要过于剧烈 中，混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） 2、用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢 用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触， 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） ；（不要产生气泡 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） 3、将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形 将制片放置3min后 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 4、染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变 染色30min后再次观察 后再次观察， 化； 5、用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验 吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 建议做，用等量生理盐水稀释染液即可） （建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）
酵母出芽
三、器材
1、菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿； 的培养斜面或平皿； 菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿 2、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 显微镜，接种环，滴管等。 显微镜，接种环，滴管等。
酵母菌细胞的形态观察、 酵母菌细胞的形态观察、 死活细胞的鉴别
一、目的和要求
1、观察酵母菌细胞的形态结构； 观察酵母菌细胞的形态结构； 2、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色原理和 方法； 方法；

一、实验目的1. 了解酵母菌的基本形态结构；2. 掌握观察酵母菌的方法；3. 学习酵母菌的死活细胞鉴定技术。

二、实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，其细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、液泡等。

酵母菌主要通过出芽生殖进行繁殖，即细胞一端产生芽，芽逐渐长大并与母细胞分离，形成新的个体。

本实验通过显微镜观察酵母菌的形态结构，并利用美蓝染色液对酵母菌进行死活细胞鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：酿酒酵母培养物、美蓝染色液、乳酸石炭酸棉蓝染色液、载玻片、盖玻片、滴管、接种针、无菌水、显微镜等；2. 实验仪器：显微镜、恒温培养箱、酒精灯、接种环、烧杯等。

四、实验步骤1. 制备酵母菌悬液：取适量酿酒酵母培养物，用无菌水稀释至适当浓度，制成酵母菌悬液；2. 观察酵母菌形态结构：在载玻片上滴一滴无菌水，用接种针挑取少量酵母菌悬液滴于载玻片中央，盖上盖玻片，用低倍显微镜观察酵母菌的形态结构；3. 死活细胞鉴定：在另一块载玻片上滴一滴美蓝染色液，加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3-5分钟后盖上盖玻片，用显微镜观察酵母菌的死活细胞；4. 观察酵母菌繁殖方式：将酵母菌悬液接种于土豆平板培养基上，置于恒温培养箱中培养，观察酵母菌的繁殖方式。

五、实验结果与分析1. 酵母菌形态结构：酵母菌细胞呈圆形、椭圆形或卵圆形，细胞壁较厚，细胞质透明，细胞核明显，液泡较大；2. 死活细胞鉴定：活细胞呈无色，死细胞或衰老细胞呈蓝色或淡蓝色；3. 酵母菌繁殖方式：酵母菌主要通过出芽生殖进行繁殖，即在细胞一端产生芽，芽逐渐长大并与母细胞分离，形成新的个体。

六、实验结论通过本次实验，我们了解了酵母菌的基本形态结构，掌握了观察酵母菌的方法，学会了酵母菌的死活细胞鉴定技术。

实验结果表明，酵母菌是一种单细胞真菌，其细胞结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、液泡等，主要通过出芽生殖进行繁殖。

七、实验心得1. 观察酵母菌时，应选择合适的显微镜倍数，以便清晰观察细胞结构；2. 死活细胞鉴定时，应严格控制染色时间，避免影响实验结果；3. 观察酵母菌繁殖方式时，应选择合适的培养基和培养条件，以便观察酵母菌的生长和繁殖情况。

2、死活酵母细胞的染色鉴别
取美兰染色液一滴，滴在载玻片中央，再加一滴酵母菌悬 液，混合均匀，染色3～5min后加盖玻片镜检。未被染色 的是活细胞，被染成蓝色的是死细胞。
五、高倍镜下所观察到的酵母菌的形态
五、高倍镜下所观察到的酵母菌的形态
取一洁净的载玻片用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液将其滴于载波片中央然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀盖上盖玻片小心将其一端与菌液接触然后缓慢放下避免产生气泡
酵母菌形态观察及死、活细胞的鉴别
班级：食检112 组员：孙中涛0102111217 徐洲0102111218 刘彩云 0102111219 孙洋0102111220 戚望平 0102111221
三、实验器材
• 菌种：酵母菌标准片、酵母菌菌悬液 1 • 染色液或试剂：革兰氏染色用碘液，0.1％吕氏 碱性美兰染色液 • 仪器和其他：显微镜、载玻片，盖玻片、镊子
四、方法与步骤
1、
酵母细胞的形态观察
（1）酵母菌水-碘液浸片的制作：取一洁净的载玻片，用滴 管取一小滴革兰氏染色用碘液，将其滴于载波片中央，然 后滴加酵母菌悬液放入其中混匀，盖上盖玻片，小心将其 一端与菌液接触，然后缓慢放下，避免产生气泡。 （2）镜检:先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。用同样的方 法观察其他酵母菌标本片。观察是注意酵母菌细胞的形状 和出芽情况。
一、实验目的
（1）进一步熟练掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了
解酵母菌的形态结构。 （2）掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方案。
二、实验原理
酵母菌是单细胞的真核微生物，细胞核体和细胞质有 明显分化，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状 、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性 繁殖有芽殖、裂殖；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢 子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞 与母细胞并不分离，就不会形成藕节状的假菌丝。