微生物实验报告
酵母菌的形态观察
一、目的要求：
1、掌握普通光学显微镜的使用方法和注意事项
2、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别
3、学习鉴别死活酵母细胞的实验方法
二、器材和器皿：
1、酵母菌
2、生理盐水、美蓝染色液、
3、显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种针、擦镜纸
三、实验原理
酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
四、操作步骤：
（一）显微镜的主要构造：
普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。（二）显微镜的使用方法
1．低倍镜的使用方法
（1）取镜和放置：
显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2寸为宜，便于坐着操作。
（2）调节光源
（3）低倍镜观察
先将标本玻片置于载物台上，并将标本部位处于物镜的正下方，以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。
然后，两眼同时睁开，左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮，当在视野内出现物象后，改用细调节轮，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。然后认真观察标本各部位，确定并将需进一步要观察的部位移视野中央，准备用高倍镜观察。
（4）换片
观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时，需先将高倍物镜（或油镜）转回到低倍物镜，取出标本，按放片的方法换上新片，即可观察。千万不可在高倍物镜（或油镜）下换片，以防损坏镜头。
意
（五）美蓝浸片观察步骤
1.制片：
在载玻片上滴一小滴0.1%美蓝液，无菌操作用接种环取酵母少许，与美蓝液混合均匀，染色2-3min。
2.加盖玻片：
先将盖玻片一端与菌液接触，然后慢慢放下使其盖在菌液上。
3.镜检：
先低倍镜，后高倍镜，观察酵母细胞的形态、构造和出芽情况，并注意区分死细胞（蓝色）与活细胞（不着色）。
4.30min后再镜检。
五、实验现象
1.都是单个细胞
2.都是透明的
3.基本是活的
4.有细胞核
5. 用美兰染色后蓝色是死细胞，透明的是活细胞
六、思考题
1.美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。
答：吕氏碱性美蓝染液无毒性，在浓度不大的情况下，对酵母菌死细胞的数量影响几乎没有。在浓度高的情况下，会导致酵脱水死亡。作用时间短对死细胞数量影响不大，时间过长，会由于酵母细胞在脱离了最适培养条件的情况下逐渐死亡，而使得死细胞数量偏大。
2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?
答：酵母菌要比细菌大的多
酵母菌具有细胞核而细菌没有，细胞核有些细菌具有鞭毛，而酵母菌不具有鞭毛。
班级：环境14325班
姓名：黄鹏飞
时间：2015.11.3
