不同季节对苜蓿青贮饲料中霉菌毒素含量的影响_孙国君

春季 （ 5 月） 610. 40 ± 15. 03bcAB 277. 64 ± 29. 68cAB 24. 14 ± 0. 43bB
夏季 （ 7 月） 690. 13 ± 15. 76cB 295. 09 ± 19. 05cB 28. 05 ± 0. 95cB
注： 同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（ P ＜ 0. 05） ，肩标不同大写字母表示差异极显著（ P ＜ 0. 01） ，肩标相同字母或无肩标表示差异不显著 （ P ＞ 0. 05） 。
3 讨论与结论
3.1 不同季节苜蓿青贮饲料中的霉菌数量 大多数霉菌属于需氧型微生物，开窖后由于氧
气进入青贮饲料，霉菌由抑制转为活跃状态。试验 结果表明，从秋季到冬季、春季和夏季，在开窖后 的青贮饲料中均可检测出霉菌，且霉菌数量随季节 不同而发生变化，以夏季最高，春季和秋季次之， 冬季最低。闫贵龙等（ 2010） ［4］认为，这种不同季节 造成微生物含量的差别不是源于青贮饲料内部的改 变所致，而是青贮饲料表面受到影响的结果，夏季 对青贮窖中全株玉米青贮的霉菌和酵母菌生长繁殖 有明显的促进作用。随着温度的逐步升高，微生物 生长速度加快。当饲料含水量超过 12% ，温度 10 ℃ ～ 35 ℃ ，相对湿度超过 75% 时，就易引起霉菌繁殖。 低温虽然对霉菌有抑制作用，但不能完全根除霉菌 生长（ Nahm 等，1991） ［5］。新疆石河子垦区夏季平均 温度一般在 15 ℃ ～ 30 ℃ ，且青贮饲料中含水量较 高，适合霉菌生长； 冬季平均温度 － 14 ℃ ～ － 5 ℃， 抑制了霉菌生长，因而青贮饲料中霉菌数量夏季最 高，冬季最低。
青贮饲料是奶牛的主要饲料来源，其饲用安全 问题日益受到人们的关注。2007 年，澳大利亚对玉
米青贮样本的分析结果表明，92. 5% 的玉米青贮受 到呕吐毒素污染，最大含量为 5 815 μg / kg，81. 3% 的玉米 青 贮 受 到 玉 米 赤 霉 烯 酮 污 染， 最 高 含 量 为 1 043 μg / kg （ 王 晶 晶 等，2013 ） 。 ［12］ 王 金 勇 等 （ 2014） ［13］调查发现，我国青贮饲料玉米赤霉烯酮 和呕吐毒素的污染率达 43% 和 100% ，平均值分别 为 59 和 445 μg / kg。迄今为止，对青贮饲料中霉菌 毒素允许量尚未做具体规定，各种霉菌毒素产生的 条件，及消除青贮饲料霉菌毒素的技术措施仍在探 索。目前，一般 建 议 在 青 贮 饲 料 制 作 和 使 用 过 程 中，可从控 制 青 贮 饲 料 水 分 和 日 取 用 量、 切 短 压 实、保持物料表面清洁、取用后密封及表面喷洒丙 酸等方面着手，以尽量降低霉菌毒素的含量。
黄曲霉毒素以夏季最高，达 28. 05 μg / kg，其 次为春季和冬季，秋季最低，为 10. 62 μg / kg。夏 季比冬季和秋季分别高 50. 73% 和 62. 14% ，差异极 显著（ P ＜ 0. 01） 。春季与夏季、冬季和秋季差异显 著（ P ＜ 0. 05） ，冬季与秋季差异不显著（ P ＞ 0. 05） 。
样品处理与分析方法参照张慧杰（ 2011） ［3］的研 究，PDA（ 马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 琼脂培养基培 养，霉菌计数采用平板计数法。 1.4 霉菌毒素含量测定
采用 ELISA 法检测黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮 和呕吐毒素含量，试剂盒购自北京普华仕科技发展 有限公司，按试剂盒提供的方法进行测定。 1.5 数据统计分析
玉米赤霉烯酮含量以夏季最高，达 295. 09 μg / kg， 其次为春季和冬季，秋季最低，为 187. 75 μg / kg。 夏季比秋季高 36. 38% 差异极显著（ P ＜ 0. 01 ） ，比 冬季高 28. 31% ，差异显著 （ P ＜ 0. 05 ） 。夏季与春 季差异不显著（ P ＞ 0. 05） ，春季与秋季和冬季差异 显著 （ P ＜ 0. 05 ） ，秋 季 与 冬 季 差 异 不 显 著 （ P ＞ 0. 05） 。
关键词 苜蓿青贮饲料； 黄曲霉毒素； 玉米赤霉烯酮； 呕吐毒素； 季节
中图分类号： S 816813 （ 2016） 09 － 0043 － 04
DOI 编号： 10. 13557 / j. cnki. issn1002 － 2813. 2016. 09. 011
表 1 不同季节对苜蓿青贮饲料霉菌毒素含量的影响
μg / kg
霉菌毒素 呕吐毒素 玉米赤霉烯酮 黄曲霉毒素
秋季 （ 10 月） 402. 12 ± 17. 22aA 187. 75 ± 9. 56aA 10. 62 ± 0. 90aA
冬季 （ 12 月） 527. 15 ± 8. 75bA 211. 56 ± 16. 41abAB 13. 82 ± 1. 11aA
饲料检测
不同季节对苜蓿青贮饲料中 霉菌毒素含量的影响
孙国君 何玉龙 王展鹏 石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000
摘 要 为了解不同季节对苜蓿青贮饲料中霉菌毒素含量的影响，试验分别在秋季、冬季、春季和夏 季，测定开窖后苜蓿青贮饲料中呕吐毒素（ DON） 、玉米赤霉烯酮（ ZEN） 和黄曲霉毒素（ AFT） 的含量。结果 表明： 在秋季、冬 季、春 季 和 夏 季，苜 蓿 青 贮 饲 料 中 呕 吐 毒 素 含 量 分 别 为 402. 12、527. 15、610. 40 和 690. 13 μg / kg； 玉米赤霉烯酮含量分别为 187. 75、211. 56、277. 64 和 295. 09 μg / kg； 黄曲霉毒素含量分别为 10. 62、13. 82、24. 14 和 28. 05 μg / kg。苜蓿青贮饲料中 3 种霉菌毒素的含量，均以秋季最低，夏季最高，差 异极显著（ P ＜ 0. 01） 。
不同季节苜蓿青贮饲料中各霉菌毒素含量变化 情况见表 1，苜蓿青贮饲料中呕吐毒素含量以夏季 最高，达 690. 13 μg / kg，其次为春季和冬季，秋季 最低，为 402. 12 μg / kg。夏季比冬季和秋季分别高 23. 62% 和 41. 73% ，差异极显著（ P ＜ 0. 01） 。春季 与夏季和冬季差异不显著（ P ＞ 0. 05） ，与秋季差异 显著（ P ＜ 0. 05） ，冬季与秋季差异显著（ P ＜ 0. 05） 。
采用 Excel 软 件 对 试 验 数 据 进 行 整 理，采 用 SPSS11. 5 进行单因子方差分析和多重比较。
2 结果与分析
2.1 不同季节对苜蓿青贮饲料霉菌数量的影响 试验结果表明，在开窖后不同季节，苜蓿青贮
饲料中的霉菌菌落数不同。从秋季到冬季、春季和 夏季，青贮饲料中霉菌数分别为 6. 28 × 103、5. 67 × 102 、1. 88 × 103 和 3. 52 × 105 CFU / gFM，冬季最低， 夏季最高，两季节差异极显著（ P ＜ 0. 01） 。 2.2 不同季节对苜蓿青贮饲料霉菌毒素含量的影响
收稿日期： 2015 － 11 － 03 基金项目： 石河子大学重大科技攻关项目（ gxjs － 2012 － zdgg05 －
03） 第一作者： 孙国君，博士，教授，研究方向为动物营养与饲料
科学。
研究表明，青贮饲料中霉菌毒素的产生不仅取决于 含氧量、pH 及水分含量，而且还与温度有关。温 度对霉菌的繁殖和产毒均有重要影响，大多数霉菌繁 殖最适宜的温度是25 ℃ ～ 30 ℃，在 0 ℃以下不能产毒 （ 劳文艳等，2011） ［1］。不同季节外界气温不同，目前 在青贮饲料开窖后，关于季节对苜蓿青贮饲料中霉 菌毒素含量的影响研究较少，因此，试验以苜蓿青 贮饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素含 量为检测指标，分析开窖后不同季节苜蓿青贮饲料 中霉菌毒素的变化规律，从而为生产中苜蓿青贮饲 料的合理储存和使用提供参考。
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饲料检测
1.2 样品采集与处理 开窖后，分别于 2013 年 10 月（ 秋季） ，2013 年
12 月（ 冬季） ，2014 年 5 月（ 春季） 及 2014 年 7 月 （ 夏季） 取样，采样方法参照刘景喜等 （ 2012 ） ［2］提 出的方法，在青贮窖垂直切面，选 5 点取样，测定 霉菌数量和霉菌毒素含量。 1.3 霉菌数量测定
1 材料与方法
1.1 青贮饲料的制作
试验在新疆生产建设兵团第八师 144 团奶牛场 进行。青 贮 原 料 为 第 二 茬 刈 割 的 初 花 期 紫 花 苜 蓿 （ 2013 年 7 月） ，采用窖式青贮。将苜蓿原料切短 至 2 ～ 3 cm，添加 10% 玉米粉。压实及塑料布密封， 填土封窖。青贮期 60 d，2013 年 9 月下旬开窖。
霉菌毒素是由霉菌产生的有毒有害的次生代谢 产物，饲料中的霉菌毒素有 300 余种。目前据国内 外资料报道，在青贮饲料中检测到的霉菌毒素主要 有黄曲霉毒素（ AFT） 、玉米赤霉烯酮（ ZEN） 、呕吐 毒素（ DON） 、T － 2 毒素、赫曲霉毒素和烟曲霉毒 素等。这些霉菌毒素通常在有氧情况下产生，制作 青贮饲料时原料未填压实，及青贮饲料在开窖接触 空气后，好氧性霉菌繁殖，从而使饲料受到霉菌毒 素污染。一般认为对奶牛生产造成不利影响的主要 霉菌毒素 有 黄 曲 霉 毒 素 和 不 同 种 类 的 镰 刀 菌 毒 素 （ 玉米赤霉烯酮和呕吐毒素等） ，奶牛采食含有霉菌 毒素的饲料，可降低奶牛采食量，营养物质的消化 率和吸收率降低，造成营养不良和免疫抑制，繁殖 性能低下，甚至 可 转 移 到 牛 奶 中， 影 响 人 类 健 康。
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饲料检测
3.2 不同季节苜蓿青贮饲料中霉菌毒素含量 闫峻（ 2009） ［6］研究表明，在开窖后 50 ～ 290 d
的贮存期中，玉米青贮饲料中的黄曲霉毒素 B1 和 玉米赤霉烯酮含量呈上升趋势。与其结果一致，试 验发现，从秋季到冬季、春季和夏季，青贮饲料中 呕吐毒素、玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素含量逐渐增 加，均以秋季最低，夏季最高。温度对霉菌的生长 和产毒的影响较为复杂，饲料贮藏过程中霉菌生长 与产生霉菌毒素的最适环境条件有所不同。呕吐霉 素和玉米赤霉烯酮主要是由镰刀菌属的菌株，如禾 谷镰刀菌等产生，禾谷镰刀菌要求基质含水量大， 在 20 ℃ ～ 30 ℃培养，产毒性较强（ 匡开源等，1987） ［7］。 另据报道，青贮饲料中的玉米赤霉烯酮和一些单端 孢霉烯族毒素似乎不受厌氧和酸性条件影响（ Acosta 等，2011） ［8］，这表明青贮条件下玉米赤霉烯酮和呕 吐霉素（ 单端孢霉烯族毒素） 不易被降解，因此，在 青贮初期产生的呕吐霉素和玉米赤霉烯酮可持续存 在。青贮饲料开 窖 后， 原 来 受 抑 制 的 霉 菌 被 激 活， 并产生毒素，加之新疆石河子地区夏季高温，因而 随开窖时间的延长，霉菌毒素含量逐渐增加，且以 夏季最高。黄曲霉毒素由黄曲霉和寄生曲霉产生， 是一类化学结构类似的化合物。黄曲霉毒素产生的 最适水分是 10% ～ 13% ，产毒温度为 25 ℃ ～ 32 ℃， 因而夏季饲料中易产生黄曲霉毒素。从水分上看， 青贮饲料中不适宜黄曲霉菌生长，但国内外学者在 青贮饲料中均检测到了黄曲霉毒素。有报道在干草 和青贮中黄曲霉毒素质量浓度可高达 5 mg / kg（ 潘雪 男等，2006） ［9］； 韩立英等（ 2010） ［10］研究发现，青贮料 打开后第 10 天的黄曲霉毒素含量为 6. 8 μg / kg，显著 高于打开当天黄曲霉毒素含量（ 0. 32 μg / kg） ； 高登宏 等（ 2008） 在 ［11］ 北京及天津大型奶牛场的青贮饲料 中，也检测出了黄曲霉毒素（ 9 ～ 11 μg / kg） ，因此， 对青贮饲料开窖后黄曲霉毒素产生的条件仍需深入 研究。由于条件所限，试验仅检测了不同季节苜蓿 青贮饲料中呕吐霉素、玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素 含量，对于其他霉菌毒素含量随季节的变化情况， 有待今后进行调查分析。