叶绿素的提取和分离实验 ppt
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叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取:称取5 g的绿叶,剪碎,放入研钵中→加入少量二氧化硅、碳酸钙和10 mL无水乙醇→研磨→过滤→收集到试管内并塞严试管口。
准备过滤纸条:将过滤纸条剪成略小于试管长度和直径的过滤纸条,将滤纸条的一端剪去两角,在距离剪角一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
画滤细线:用毛细管吸取少量滤液,并沿铅笔线均匀划出一条细线,待滤液干后再画1~2次。
叶绿素分离:在试管中倒入适量层析液。
得到滤纸上的四种颜色、不同宽度的色素带。
叶绿素提取注意事项:
准备滤纸时,要将滤纸的一端剪去两角,这样可使色素扩散到滤纸上,以便于观察实验结果。
过滤时不用滤纸过滤而用单层尼龙布过滤是因为滤纸对色素具有吸附作用,若用其过滤,会导致收集到的滤液色素含量少,使实验效果不明显或失败。
实验二-叶绿素的提取与分离实验二叶绿素的提取和分离一、实验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素,并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。
二、实验原理要求同学们先查询资料,了解叶绿素相关知识,实验课上老师讲解。
三、实验材料、器具研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4四、实验步骤1、叶绿素的提取在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以.如果是冷冻的,解冻后包在纸中轻压吸左水分)。
加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液,适当研磨。
将提取液用滴管转移至分液漏斗中,加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质,分去H2O层,再用蒸馏水洗涤两次。
将有机层转入干燥的小锥形瓶中,加2g无水Na2SO4,通风处理。
处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅,可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
2、点样用一根内径1mm的毛细管,吸取适量提取液,轻轻地点在距薄板一端1cm处,平行点两点,两点相距1cm左右。
若一次点样不够,可待样品溶剂挥发后.再在原处点第二次,但点样斑点直径不得越过2mm。
3、展开先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3:1的比例进行混合作为展开剂,再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中,密闭层析缸。
待展开剂上升到距薄层板另一端约1cm时,取出平放,用铅笔或小针划前沿线位置,在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。
毛细管点样薄层色谱展开4、观察层析板并记录实验结果。
薄层层析时Rf值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括扩散最快的是什么,扩散最慢的是什么最宽的色素带是什么,最窄的色素带是什么哪两个色素带距离相距最远,哪两个最近等等各种色素在层析液中的溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快,反之则慢。
最快:胡萝卜素次之:叶黄素次之:叶绿素A最慢:叶绿素B颜色分别为:橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色,最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近实验十四、植物色素的提取和薄层色谱分析一、实验目的:1、了解薄层色谱的基本原理和应用。
实验十二菠菜叶中叶绿素的提取和分离实验十二菠菜叶中叶绿素的提取和分离(07-05-26) 一实验目的1(掌握从菠菜叶中提取叶绿素的方法;2(了解薄层层析的原理,掌握薄层层析的一般操作和定性鉴定方法二实验原理1(叶绿素提取高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a (CHONMg)、叶绿素b(CHONMg)、β—胡萝卜素(CH)和叶黄素(CHO)等4种。
562叶绿素a和叶绿素b为吡咯衍生物与金属镁的配合物,胡萝卜素是一种橙色天然色素,属于四萜类,为一长链共轭多烯,有α、β、γ三种异构体,其中,β异构体含量最多。
叶黄素为一种黄色色素,与叶绿素同存在于植物体中,是胡萝卜素的羟基衍生物,较易溶于乙醇,在乙醚中溶解度较小。
根据它们的化学特性,可将它们从植物叶片中提取出来,并通过萃取、沉淀和色谱方法将它们分离开来。
RR=H; 叶黄素 R= OH 2(薄层色谱薄层层析是快速分离和定性分析微量物质的一种极为重要的实验技术,具有设备简单、操作方便而快速的特点。
它是将固定相支持物均匀地铺在玻片上制成薄层板,将样品溶液点加在起点处,置于层析容器中用合适的溶剂展开而达到分离的目的。
用此法分离时几乎不受温度的影响,可采用腐蚀性显色剂,而且可在高温下显色,特别适用于挥发性小或在较高温度下易发生反应的物质,同时也常用来跟踪有机反应或监测有机反应完成的程度。
薄层层析按分离机制不同可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等,最常用的为吸附薄层层析,在此主要讨论。
吸附层析中样品在薄层板上经过连续、反复的被吸附刑吸附及展开剂解吸附过程,由于不同的物质被吸附剂吸附的能力及被展开剂解吸附的能力不同,放在薄层上以不同速度移动而得以分离。
通常用比移值(Rf)表示物质移动的相对距离:色斑最高浓度中心至原点中心的距离,R f展开剂前沿至原点中心的距离1CH2RCH3CH3NNMg R=CH; 叶绿素a;3NNCHCH33R=CHO; 叶绿素b;HHOCOOCHO3OCH3CH3CH3 CH3 Rf值计算示意图叶绿素:吡咯衍生物和镁的配合物,是植物进行光1(起点线; 2. 展开剂前沿合作用必需的催化剂,易溶于石油醚等非a. 色斑最高浓度中心至原点中心的距离极性溶剂中。