叶绿素的提取和分离实验 PPT

试验二叶绿素的提取与分别试验二叶绿素的提取与分别试验二叶绿素的提取与分别一、试验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层色谱上取样，使叶绿素呈现不同的颜色。

2、试验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关学问，试验课上教师讲解。

三、试验材料和仪器研钵、托盘天平、分液漏斗、枯燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和nacl 溶液、无水 na2so4 四、试验步骤 1、叶绿素的提取将几片〔约 5 克〕菠菜叶放入容器中〔颖或冷冻均可。

假设是冷冻的，解冻后用纸包裹，轻轻按压以吸取左侧水分〕。

参与 10ml 石油醚和丙酮的 2:1 混合物，并适当研磨。

用滴管将萃取物转移到分别漏斗中，参与 10ml 饱和NaCl 溶液〔防止形成乳液〕以去除水溶性物质，分别H2O 层，然后用蒸馏水冲洗两次。

将有机层转移到一个小的枯燥锥形烧瓶中，参与2G 无水Na2SO4 并通风。

将处理过的液体倒入另一个锥形瓶中〔假设溶液颜色太浅，可以在通风柜中蒸发并适当浓缩〕。

2.采样点用一根内径 1mm 的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm在两个平行点上，两个点相距约 1 厘米。

假设第一次取样缺乏，可在样品溶剂挥发后进展其次次取样，但取样点直径不得超过 2mm。

3.开放先在小烧杯中放入开放剂[用石油醚和丙酮按 3：1 的比例进展混合作为开放剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。

点样端接触开放剂但样点不能浸没于开放剂中，密闭层析缸。

待开放剂上升到距薄层板另一端约 1cm 时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。

毛细管取样薄层色谱开放4.观看色谱板并记录试验结果。

薄层层析时rf 值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括什么是最快的集中，什么是最慢的集中，什么是最宽的色素带，什么是最窄的色素带，哪两个色素带最远，哪两个最近，等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上集中的快，反之则慢。

叶绿素的提取、分离一、实验目的1.掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。

2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。

二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。

故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。

2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。

滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。

把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。

结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。

毛细管点样薄层色谱展开三、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等剪纸形状滤液基线95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。

（2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。

分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。

实验二-叶绿素的提取与分离实验二叶绿素的提取和分离一、实验目的从富含叶绿素的菠菜叶片中提取叶绿素，并在薄层层析板上点样使叶绿素显示不同颜色。

二、实验原理要求同学们先查询资料，了解叶绿素相关知识，实验课上老师讲解。

三、实验材料、器具研钵、托盘天平、分液漏斗、干燥锥形瓶、毛细管、薄层层析板、饱和NaCl溶液、无水Na2SO4四、实验步骤1、叶绿素的提取在中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以．如果是冷冻的，解冻后包在纸中轻压吸左水分)。

加入10mL2:1石油醚和丙酮混合液，适当研磨。

将提取液用滴管转移至分液漏斗中，加入10mL饱和NaCl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质，分去H2O层，再用蒸馏水洗涤两次。

将有机层转入干燥的小锥形瓶中，加2g无水Na2SO4，通风处理。

处理后的液体倾至另一锥形瓶中(如溶液颜色太浅，可在通风柜中适当蒸发浓缩)。

2、点样用一根内径1mm的毛细管，吸取适量提取液，轻轻地点在距薄板一端1cm处，平行点两点，两点相距1cm左右。

若一次点样不够，可待样品溶剂挥发后．再在原处点第二次，但点样斑点直径不得越过2mm。

3、展开先在小烧杯中放入展开剂[用石油醚和丙酮按3：1的比例进行混合作为展开剂，再将薄层板斜靠于层析缸内壁。

点样端接触展开剂但样点不能浸没于展开剂中，密闭层析缸。

待展开剂上升到距薄层板另一端约1cm时，取出平放，用铅笔或小针划前沿线位置，在空气中晾干或用电吹风吹干薄层。

毛细管点样薄层色谱展开4、观察层析板并记录实验结果。

薄层层析时Rf值表示的是原点到层析斑点中心的距离与原点的到展层溶剂的前沿距离包括扩散最快的是什么，扩散最慢的是什么最宽的色素带是什么，最窄的色素带是什么哪两个色素带距离相距最远，哪两个最近等等各种色素在层析液中的溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散的快，反之则慢。

最快：胡萝卜素次之：叶黄素次之：叶绿素A最慢：叶绿素B颜色分别为：橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色，最宽的是叶绿素A最窄的是胡萝卜素胡萝卜素和叶绿素B最远叶绿素A和叶绿素B最近实验十四、植物色素的提取和薄层色谱分析一、实验目的：1、了解薄层色谱的基本原理和应用。

实验名称：叶绿素的提取和分离一、实验目的（1）掌握叶绿素提取的方法。

（2）了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作方法。

（3）了解叶绿体中所含色素种类及其在滤纸层析上的分布情况。

二、实验器材95％乙醇、CaCO3、醋酸铜结晶、浓盐酸、汽油，量筒，滤纸，大培养皿，小培养皿，长滴管，剪刀。

三、实验过程（1）提取色素将深绿色的植物叶剪碎放入研钵中。

放入少量的SiO2 和CaCO3再加入3滴管无水乙醇后迅速、充分研磨至糊状。

将糊状研磨物倒入放有尼龙布的漏斗中，用研钵锤挤压，将滤液收集到小玻璃瓶中，并盖上瓶盖。

（2）制备滤纸条将干燥的定性滤纸剪成稍小于试管长与直径的滤纸条，将一端减去两角，并在距这一端1厘米处用铅笔画一条细线。

（3）画滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀划出一条细线。

干燥后，重复一两次。

（4）色素分离取适量层析液倒入烧杯中，将滤纸条轻插入层析液中（滤液细线不能触及层析液，以防止色素溶解于层析液中而无法分离）,用培养皿盖住（防止层析液挥发）。

（5）观察与记录四、实验现象五、实验结论绿叶中有一种细胞器叫叶绿体，植物通过叶绿体进行光合作用，把光能、二氧化碳、水转化成化学能。

叶绿素分布在叶绿体的类囊体薄膜上。

叶绿素 a、叶绿素 b、胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。

这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取经过色素分离后，叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶绿素占总量3/4。

叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。

类胡萝卜素占总量1/4。