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【doc】醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期)醋制延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用的对比研究霾萑彝皇蜃中医医院(8300o0)赵翡翠赵晓琴李永和摘要目的:考察不同醋制方法对延胡索中延胡索乙素含量及镇痛作用所产生的影响.方法:采用HPLC法测定延胡索醋制品中延胡索乙素的含量,采用小鼠扭体法和热板法对比各醋制品镇痛作用.结果:醋制延胡索中延胡索乙素的含量高于生品,其中以醋烘品为最高;醋制延胡索的镇痛作用强于生品,:采用其中以醋烘品为优.结论醋烘法进行延胡索加工炮制可控,可行,有效,为延胡索加工炮制的规范化提供了新的可以借鉴的方法.关键词醋制廷胡索;延胡索乙素;镇痛;炮制延胡索为罂粟科紫堇属植物延胡索(CorydalisyanhusuoW.T.Wang)的干燥块茎,味辛,微苦,性温.归肝脾经,功能行气血,调月经,止疼痛,用治气血瘀滞诸痛证.延胡索有多种炮制方法,如醋炒,醋煮,醋蒸,酒炒,盐炒等.醋,味酸,苦,性温,具有散瘀止血,理气止痛作用,中医认为,醋能引药人肝,增强药物疏肝散瘀,止痛的功效,醋制能加强延胡索疏肝止痛的作用.现代研究表明延胡索主要含生物碱类成份,其中延胡索总生物碱,延胡索甲素,乙素,丑素均有镇痛作用,尤以延胡索乙素镇痛作用最强【1】.但延胡索乙素为叔胺型,亲脂型生物碱,游离时难溶于水,经醋制后,其生物碱与醋酸结合成易溶于水的醋酸盐,煎煮时易于溶出,从而更好地发挥药效,故临床上多以延胡索醋制品人药. 现延胡索多用醋炒,醋煮两种炮制方法,但工艺中不易于控制炮制温度和药材含水量,也不便于规范饮片炮制质量,尽管有关延胡索的炮制条件和含量变化的探讨,文献报道较多,但如何规范炮制 4讨论4.1国内糖尿病研究有应用STZ一次性剂量 5065mg/kg,数天后可产生持续性高血糖,但与糖尿病实际发病有一定差距[51.本实验用高脂饮食结合小剂量STZ注射的方法复制出糖尿病动物模型, 该模型具有中度高血糖,高血脂的特点,其发病过程及特征与2型糖尿病患者的代谢特点和临床过程比较相似,且造模方法简便易行,成功率高,重复性好,是研究2型糖尿病发病机制,相关并发症及药物学评价的理想模型.4.2本实验中,三黄消渴片低,高剂量组均能明显降低糖尿病大鼠血糖,而且随用药时间的延长,降糖作用增强.低剂量组降糖效果优于高剂量组,表明其降糖作用没有剂量依赖性.这些结果为我~f31t$ 床运用三黄消渴片治疗糖尿病提供了实验依据,至于其降糖作用的机制则有待进一步研究. 4.3在整个观察过程中,模型空白对照组出现典型的多饮,多食,多尿和明显消瘦,毛竖无光泽,跄卧拱背.阳性药物对照组也有类似改变,但程度较模型组轻.给药20天后服用三黄消渴片低,高剂量组大鼠的毛发,体重,精神状况,血糖值比阳性对照药物组和模型空白对照组相比均有明显改善. 4.4三黄消渴片低剂最组大鼠在喂药30天内全部存活,存活率100%.三黄消渴片高剂量组大鼠有3只死亡,存活率57.1%.模型空白对照组有4只死亡,存活率20%.阳性对照药物有4只死亡,存活率20%. 本研究结果表明,三黄消渴片具有一定的中医理论基础,且低剂量组在降低糖尿病高脂血症大鼠血糖的同时,对其消渴症状,体质,精神状态均有明显改善.表明三黄消渴片疗效肯定,可作为临床糖尿病治疗的辅助用药,充分发挥中医药标本兼治, 扶正祛邪的优势.】【1【2】【3】【4]【5】参考文献:E海科学技术出版社,1989:.83-102 苗述楷,蔡惠文.糖尿病并发症防治学【M】.北京:中国医药科技出版社,2000.陈奇.中药药理研究方法学【M].人民卫生出版社,1993. 徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学【M】.人民卫生出版社,1982.粱海荣,唐焕文,罗皓,链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠肾病模型的建立.应用预防医学,2006,12(3):133-135. (收稿日期:2007-03—14)新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期)35 方法,改善目前各种市售的炮制品质量差异大的状况,还有待进一步验证.而据文献报道【21醋烘法具有易控制烘制温度和药材含水量,操作简单易行, 便于规范炮制品质量等优点,故本实验参照《中国药典》一部2005版延胡索药材项下测定醋烘法与醋炒法和醋煮法中延胡索乙素的含量,并进行小鼠镇痛作用的对比,对采用醋烘法炮制延胡索进行初步探索,以便为今后规范醋延胡索的炮制工艺和质量标准奠定基础.l仪器与试药Waters2695高效液相色谱仪(美国waters公QTM5超纯水仪(MilliporeCorporation, 司);Direct—Bedford,MA,U.S.A.);延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所,批号110726—200409),延胡索药材(新疆参茸药业有限公司,批号20060101),小白鼠:昆明种,体重l8—22g,由新疆医科大学动物中心提供(动物合格证号:医动字16—001).所用试剂均为分析纯.2方法与结果2.1延胡索炮制品的制延胡索生品:取延胡索药材捣碎成粗颗粒状, 颗粒度为过一号筛.醋炒延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋拌匀,闷润至醋被吸尽后,置炒制容器内,用文火加热炒干,取出放凉.醋煮延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋与适量清水(以平药面为宜),置煮制容器内,用文火加热煮至透心.醋液被吸尽时,取出晾干. 醋烘延胡索:取延胡索粗颗粒,加入30%米醋拌匀,至醋吸尽后,置烘箱中于8O?烘干,取出放凉. 2.2各炮制品中延胡索乙素含量测定2.2.1色谱条件色谱柱:4.6mmxl50mmVP—ODS C.柱,粒度5lxm;流动相:甲醇一O.1%磷酸(用三乙胺调pH至6.0)(55:45),流速:1.0ml?min;检测波长:280nm;柱温:35?,进样量:lOIxL. 2.2.2对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量,加甲醇制成每lmL含461xg的溶液,作为对照品溶液.2.2.3供试品溶液制备取延胡索各炮制品粉末 (过三号筛)lg,精密称定,置平底烧瓶中,精密加入浓氨试液一甲醇(1:20)50mL,称定重量,冷浸lh后加热回流lh,放冷,再称定重量,用浓氨试液一甲醇(1: 20)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25mL,蒸干,残渣加甲醇溶解,定量转移至5mL容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,滤过,即得. 2.2.4线性关系的考察精密吸取延胡索乙素对照品溶液5,lO,l5,2O,25,30lxL在上述色谱条件下重复进样3次,测定峰面积,以峰面积平均值和浓度进行线性回归,得线性方程为:Y=998.03X+248.8,r=0.9997.延胡索乙素在0.234—1.403lxg之间具有良好的线性关系.2.2.5各炮制品中延胡索乙素的含量测定精密吸取各炮制品的供试品溶液201xL注入色谱柱,按外标峰面积法计算延胡索乙素的含量,结果见表1. 表1延胡索乙素含量测定结果2.3小鼠镇痛实验2.3.1样品液的制备嘲称取延胡索生品及炮制品各25g,分别置于1000mL烧杯中,用400mL和,每次保持微沸20min,用脱 250mL水分别煎煮2次脂棉过滤,合并滤液,浓缩至100mL,备用. 2.3.2扭体法圈取体重18~22g小鼠(雌雄各半)l00 只,随机分成5组,分别灌胃给予生理盐水及上述样品液,每只0.6mL,剂量分别为7.5g生药每kg体重.40min后,各鼠腹腔注射O.7%醋酸0.2mL,观察并记录15min内各鼠产生扭体反应(小鼠腹部受化学刺激后出现伸展后肢,腹部收缩,扭曲身体;腹部内凹呈蜂腰状,躯干与后肢伸张,臀部高起)的次数,由表 2可见,各样品组与生理盐水组比较小鼠扭体次数差异均有统计学意义(JP.O1),醋品镇痛作用均强于生品(JP.O1),其中以醋烘延胡索作用为强. 表2延胡索小鼠的镇痛作用(扭体法)与生理盐水组比较,?P<O.Ol;与生品组比较,AP<O.O12.3.3热板法昀取体重18~22g小鼠(雌性),调节恒温水浴水温在(55~0.5)?,将500mL烧杯放入其36新疆中医药2007年第25卷第2期(总第108期) 与给药前比较,'O.01;与生理盐水组比较,AP>0.05,AP<0.01;与生品组比较,?O.01中,使烧杯底部接触水面.小白鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时,就发生舔后足的特殊反应.从接触热板到舔后足所需要的时间作为痛阈值,以此为观察指标.每次取雌性小白鼠1只,放人烧杯内.记录自放人烧杯至出现舔后足所需时间(S),作为该鼠的痛阈值.凡30s内不出现舔后足者,弃之不用.依次测量各小鼠的痛阈值.取预选合格的小鼠100 只,随机分为5组,每组20只,重新测痛阈值1次. 将两次痛阈的平均值作为该鼠给药前的痛阈值.各鼠分别灌胃给予生理盐水及上述样品液,每只 0.6mL,剂量分别为7.5g生药每kg体重,给药后的 30,60min测定各鼠痛域值.若小白鼠在热板上 60min无痛觉反应,应即取出,按60min结果计人表内,计算用药后痛域提高的百分率(结果见表3),可见各样品组镇痛作用均强于给药前和生理盐水组,醋品镇痛作用均强于生品(P<O.01),其中以醋烘法作用为强.痛阈提高百分率=(用药后平均痛阈值一用药前平均痛阈值)佣药前平均痛阈值X 1oo%3讨论中药饮片是在中医药理论指导下,根据辨证用药及调剂,制剂的需要,对中药材进行加工炮制的成品.炮制工艺包含着深厚的中医药理论与丰富的经验技艺,是中医药的特色,也是具有民族特色的独特制药技术,必须继承其中的精髓,勇于创新,使其应用科学化,规范化,正是基于此,本实验对比延胡索生品及其不同醋制品中延胡索乙素的含量变化,并进行了小鼠镇痛实验,结果表明:延胡索经醋炒,醋煮,醋烘后均能提高延胡索乙素的含量,从而证明了醋品的止痛作用增强的原因,同时醋烘品相对于醋炒品,醋煮品延胡索乙素含量稍高,可能是烘制温度较低,对延胡索乙素破坏较少的原因【7】. 扭体法和热板法两种镇痛实验表明,延胡索具有镇痛作用(P<O.01),且醋制延胡索的镇痛作用明显优于延胡索生品(P<O.01),醋烘法优于醋炒法和醋煮法,可得出采用醋烘法进行延胡索加工炮制从操作工艺上是可以控制的,从有效成份含量的测定来看是可行的,从药理实验结果来看是有效的,从而为延胡索加工炮制的规范化提供了新的可以借鉴的方法.参考文献[1]沙世炎,徐礼桑,严敏如,等.中草药有效成份分析法(上册).北京:人民卫生出版社,1985:53.[2]窦志英,孙巍.不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响.天津中医药大学,2006,25(3):186-187. [3]张化,张学兰.延胡索炮制现代研究.山东中医药大学,2001,25(2):l43一l44.[4]龚千峰.中药炮制学[M】.北京:中国中医药出版社,2003:201. [5]杨中林.中药炮制学实验与指导【M】.北京:中国中医药出版社, 20o3:84.[6]苗明三.实验动物和动物实验技术【M】.北京:中国中医药出版社.1997:130-145,187—190.[7]马民.元胡炮制的现代研究.时珍国医国药,2005,16(5):709. (收稿日期:2006-11-28)。
中药延胡索的炮制工艺和药理作用【摘要】目的：探究中药延胡索的炮制工艺和药理作用。
方法：采用正交实验法，以延胡索乙素、去氢紫堇碱的含量为考察指标，对破碎度、辅料用量、拌润时间、炒制温度(或加水量)等影响因素进行研究。
结果：延胡索乙素含量为指标，考察了延胡索药材通过不同炮制方法炮制后对其有效成分含量的影响，结果表明与延胡索生品比较，延胡索药材通过醋炙后能增加延胡索有效成分延胡索乙素的含量。
结论：延胡索产地加工及醋制的最佳工艺条件是延胡索趁鲜切片4mm，加醋量40％，在50℃下干燥。
【关键词】延胡索；炮制工艺；药理作用Processing technology and pharmacological action of Rhizoma Corydalis[Abstract] Objective: To explore the processing technology and pharmacological action of Rhizoma Corydalis.Methods: Orthogonal experiment was used to study the influence factors such as degree of crushing, amount of excipients, mixing time, frying temperature (or adding water) and the content of corynetin and dehydrogenated coryneine.Results: The content of Rhizoma Corydalis b was used as the index. The effect of different processing methods on the content of rhizoma Corydalis was investigated. The results showed that the processed rhizoma Corydalis with vinegar could increase the content of rhizoma Corydalis B.Conclusion: The optimum conditions for processing and vinegar production of Corydalis corydalis were 4mm fresh slices, 40% vinegar and drying at 50℃.【Key words 】Yanhusuo;Processing technology;Pharmacological effects延胡索，别名元胡、元胡索和玄胡索，罂粟科植物，是常用的活血、止痛、利气的药物，通常用于治疗胸胁、脘腹疼痛，痛经、瘀肿、跌扑肿痛等症状。
不同炮制方法对中药延胡索中有效成分含量的影响中药延胡索，又称白蔹、胡索，是一种常用的中药材，其根茎入药，具有活血化瘀、祛风痹、止痛等功效。
延胡索在传统中药学中有着广泛的应用，但其药材经过不同的炮制处理方法后，会对其中的有效成分产生一定的影响。
本文将就不同炮制方法对中药延胡索中有效成分含量的影响进行阐述。
1.炒制：炒制是目前常用的一种炮制方法，延胡索经过炒制后，其有效成分含量相对保持较稳定，能够维持一定的药效。
炒制可降低延胡索中的挥发性成分含量，减少其对人体的刺激性。
2.曝晒：曝晒是一种将延胡索暴晒在阳光下进行炮制的方法。
曝晒后，延胡索中的一些挥发性成分可能会被阳光直接照射而流失，导致有效成分含量下降。
此外，曝晒也会导致延胡索受到一定的颜色和气味变化。
3.浸泡：浸泡是将延胡索浸泡在水中或其他溶剂中进行炮制的方法。
浸泡能够促使延胡索中的有效成分溶解到溶剂中，最大限度地提取药材中的有效成分。
但是，浸泡时间过长或者浸泡温度过高都会导致溶剂中的有效成分含量减少，甚至部分成分被破坏。
4.熏制：熏制是将延胡索置于熏炉中进行炮制的方法。
熏制过程中，药材受到高温、烟熏等因素的作用，可以使延胡索中的有效成分相对稳定，并有一定的增加。
熏制后的延胡索在颜色和气味上也会有所变化。
综上所述，不同的炮制方法对中药延胡索中有效成分含量会产生一定的影响。
炒制能够稳定有效成分含量，减少刺激性；曝晒会导致有效成分含量下降，以及颜色和气味的变化；浸泡能够最大限度地提取有效成分，但过程中需掌握好时间和温度；熏制能够稳定有效成分的含量，并有一定程度的增加。
因此，根据药材的实际需要和药效要求选择合适的炮制方法对延胡索进行处理，从而达到最佳的药效效果。
同时，在炮制过程中需要严格控制炮制条件和掌握好时间，以确保有效成分的保留和药效的发挥。
不同醋制方法对延胡索中延胡索乙素和原阿片碱含量的影响宋平顺赵建邦（甘肃省药品检验所、甘肃省中药分析测试中心，兰州730000）丁永辉（甘肃省食品药品监督管理局）赵燕（陇南市药品检验所）摘要目的探讨延胡索不同醋制方法对其延胡索乙素、原阿片碱含量的影响，结合对市售品炮制品的测定，制定醋延胡索的质量标准。
方法色谱柱：大连依利特 (250mm×4.6mm,5μm)；流动相为甲醇-0.6%冰醋酸（含0.6%三乙胺）(20：80)；检测被长为280nm；流速1.0ml/min；柱温：室温。
结果延胡索乙素、原阿片碱分别在0.245～1.467µg、0.202～1.008µg范围呈良好的线性关系，平均回收率分别为104.01％、101.22％，RS D 分别为1.76％、1.45％(n=6)。
醋延胡索中延胡索乙素、原阿片碱的含量在相对稳定范围之内。
结论方法准确，灵敏度高，重复性好，适用于延胡索炮制品的质量控制。
制定醋延胡索中延胡索乙素、原阿片碱的含量是可行的。
关键词延胡索；醋制品；延胡索乙素；原阿片碱；高效液相色谱法Influence of different method of vinegar on the content of Tetrahydropalmatine and Opioid alkali in YanhusuoSong Pingshun Zhao Jianbang (Gansu Institute for Drug Control , analysis and testing of Gansu Province Traditional Chinese Medicine Centre, Lanzhou 730000) Ding Yonghui (Gansu Province Food and Drug Administration) Zhao Yan (Longnan Institute for Drug Control)Abstract Objective：To different method of vinegar on the contentof Tetrahydropalmatine, opioid alkali in Yanhusuo, connected with the processed products on the market for the determination and make the quality standards of Yanhusuo, which is made by vinegar. Mtheod:column: Dalian according to Gbadolite (250 mm × 4.6mm, 5 μ m); mobile phase of methanol -0.6% acetic acid (with 0.6 percent triethylamine) (20:80); detection was the head of 280 nm; flow rate of 1.0 ml / min; column: room temperature.Results:The tetrahydropalmatine, former Argentine protopine in 0.245 ~ 1.467 μ g, 0.202 ~ 1.008 μ g of a good linear relationship, with an average recovery rate was 104.01%, 101.22%, RSD were 1.76%, 1.45% (n = 6 ).Conclusion: method is accurate, sensitive, reproducible, Corydalis apply to processed products quality control. Key words yanhusuo; vinegar products;-tetrahydropalmatine; former Argentine protopine HPLC.延胡索是我国传统药物之一，《中国药典》2005年版收载为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T．Wang的干燥块茎，具有活血、利气、止痛的功效[1]。
不同炮制方法对延胡索中有效成分含量的影响来源：中国论文下载中心 [ 11-05-04 16:59:00 ] 编辑：studa20作者：曹柳,窦志英,王萍,田永亮【摘要】目的比较不同炮制方法对延胡索中3种有效成分含量的影响。
方法将鲜延胡索、水煮延胡索和市售的延胡索药材分别经醋煮、醋炙和酒炙后,分别采用水超声法和甲醇热回流法进行提取,采用反相高效液相色谱法测定3种有效成分的含量。
色谱柱为AgilentTC-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH 5.3) 为28∶72,流速：1 mL/min,柱温：35 ℃,检测波长：280 nm。
结果延胡索经炮制后水提液中生物碱含量均有所提高,醇提液中生物碱含量也有上升的趋势；延胡索鲜品直接经醋炙、醋煮、酒炙处理后,去氢紫堇碱含量较高,延胡索在产地水煮后延胡索乙素含量较高。
结论本研究建立了同时检测延胡索中3种有效成分的检测方法,该方法简便、可靠、重复性好。
根据临床需要,延胡索炮制工艺可采用鲜品水煮后再炮制或产地加工和炮制一体化的两种操作方式。
【关键词】延胡索；原阿片碱；去氢紫堇碱；延胡索乙素；高效液相色谱法；炮制Abstract：Objective To explore the effect of different processes on the contents of active ingredients in Rhizoma Corydalis. Methods Processes of vinegar-boiling, vinegar-frying and alcohol-frying were used to fresh corydalis, boiled corydalis and purchased corydalis. Then the method of extraction by ultrasound with water and by reflux with methanol were used to extract the sample. The contents of Protopine, Tetrahydropalmatine and Dehydrocorydaline in corydalis was determined by RP-HPLC. Agilent TC-C18 (25 mm×4.6 mm, 5 μm) column was used at35 ℃, with acetonitrile-0.1% phosphonic acid (pH 5.3 with triethylamine) (28∶72) as mobile phase. The flow rate was 1 mL/min and detection wavelength was set at 280 nm. Results In the sample extracted by water, the contents of active ingredients in processed products were higher than in corydalis. And in the sample extracted by methanol, it also has the tendency that the contents of active ingredients in processed products were higher than in corydalis. The content of Dehydrocorydaline in fresh corydalis which was processed by vinegar-boiling, vinegar-frying and alcohol- frying was high. The content of Tetrahydropalmatine in purchased corydalis which was processed by water-boiling at production place was high. Conclusion The method of determining active ingredients in Rhizoma Corydalis was established. It was convenient and the result was accurate. The process technology that fresh corydalis was boiled by water and then processed or fresh corydalis was processed in production place can be used.Key words：Corydalis；Protopine；Dehydrocorydaline；Tetrahydropalmatine；HPLC；process延胡索为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎,具有活血、利气、止痛功效,临床用于治疗胸胁、脘腹疼痛、经闭痛经、产后瘀阻、跌扑肿痛等症[1],主产于浙江。
延胡索中主要有效成分为生物碱,生物碱在药材中多数以结合态的生物碱盐存在,少数碱性极弱的以游离态形式存在。
延胡索的药理作用表现为镇痛、催眠、降低冠脉阻力及增加血流量等,另外亦对心血管系统有较好的药理活性。
延胡索多炮制后入药,主要炮制方法为醋煮、醋炙和酒炙。
本试验采用水超声提取法和甲醇加热回流提取法分别提取总生物碱盐和总生物碱,通过高效液相色谱法比较了不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素、原阿片碱和去氢紫堇碱含量的影响,为优化延胡索炮制工艺和阐明炮制机理奠定基础。
1 仪器与试药烘箱DHG78-1(湖北省黄石市医疗器械厂)；日本岛津HPLC系统(SCL-10AVP HPLC Pump；SPD-ML0AVP二级管阵列检测器)；自动进样系统；超声波清洗器AS20500AT(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。
甲醇、乙腈为色谱纯(天津市协和昊鹏色谱科技有限公司)；其余试剂均为分析纯；水为超纯水。
延胡索乙素(批号0726-200409,中国药品生物制品检定所)；去氢紫堇碱(批号043-27611,日本和光纯药工业株式会社)；原阿片碱(批号0853-200201,中国药品生物制品检定所)。
鲜延胡索药材产自浙江东阳；市售延胡索购于天津中新药业集团股份有限公司药材分公司,产自浙江。
经本校中药鉴定教研室马琳教授鉴定为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的块茎。
2 方法与结果2.1 样品的制备醋煮延胡索：取延胡索适量,加入20%的醋,加适量水没过药面,浸润4 h,煮干[2]。
醋炙延胡索：取延胡索适量,加入20%的醋,加适量水没过药面,浸润4 h,文火炒干[3]。
酒炙延胡索：取延胡索适量,加入10%的酒,加适量水没过药面,浸润4 h,文火炒干。
鲜延胡索：将新鲜的延胡索经过晾晒后(含水量约为20%),除去泥土,洗净,按照上述各炮制方法进行炮制。
水煮延胡索：将新鲜的延胡索经过晾晒后(含水量约为20%),加水煮至内无白心,取出,干燥。
按照上述各炮制方法进行炮制。
市售延胡索：直接按照各炮制方法进行炮制。
2.2 延胡索乙素、去氢紫堇碱和原阿片碱的含量测定2.2.1 色谱条件与系统性试验色谱柱为Agilent TC-C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),美国安杰伦公司；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(三乙胺调pH 5.3)＝28∶72,流速为1 mL/min,柱温为35 ℃,检测波长为280 nm。
在此条件下,理论塔板数按延胡索乙素峰、去氢紫堇碱峰和原阿片碱峰计算均不低于3 000。
空白溶剂色谱图中在与延胡索乙素、去氢紫堇碱、原阿片碱色谱峰相应位置上无色谱峰,说明此系统条件无干扰。
色谱图见图1。
2.2.2 对照品溶液的制备精称去氢紫堇碱对照品6.63 mg、延胡索乙素对照品2.15 mg、原阿片碱对照品1.776 mg,分别置10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度。
再吸取去氢紫堇碱、延胡索乙素、原阿片碱对照品溶液5、1.7、2 mL于同一10 mL容量瓶中,加甲醇至刻度,配制去氢紫堇碱、延胡索乙素、原阿片碱浓度为0.331 5 mg/mL、0.036 55 mg/mL、0.035 52 mg/mL的混合对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备①水超声提取法：精称各样品粉末0.5 g,加水25 mL,称重,超声提取30 min后,再称重补足减失重量,过滤,共提取2次,合并滤液,定容到100 mL。
过0.45 μm滤膜,取续滤液,即得。
②甲醇回流提取法：参考文献[1],精确称取各样品粉末0.5 g,精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL,称定重量,冷浸1 h后加热回流1 h,放冷,再称定重量,用浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液补足减失重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25 mL,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 mL 容量瓶中并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液。
2.2.4 线性关系的考察精密吸取混合对照品储备液,以甲醇配置成不同浓度的混标溶液,分别吸取10 μL注入高效液相色谱仪,测定峰面积。
以峰面积为横坐标,进样量为纵坐标,绘制标准曲线。
测定水提液去氢紫堇碱的回归方程为：Y＝3×10-8X＋0.000 5,r＝0.999 9,线性范围为0.025 875～0.345 μg。
延胡索乙素的回归方程为：Y＝1×10-7X＋0.000 2,r＝0.999 9,线性范围为0.009 675～0.129 μg。
原阿片碱的回归方程为：Y＝1×10-7X＋0.000 3,r＝0.999 2,线性范围为0.010 656～0.142 08 μg。
醇提液去氢紫堇碱的回归方程为：Y＝4×10-8X－0.002 5,r＝0.999 3,线性范围为0.345～3.315 μg。
延胡索乙素的回归方程为：Y＝1×10-7X＋8×10-5,r＝0.999 9,线性范围为0.032 25～0.372 5 μg。
原阿片碱的回归方程为：Y＝1×10-7X－0.000 4,r＝0.999 2,线性范围为0.035 52～0.365 μg。
2.2.5 方法学考察2.2.5.1 精密度精密吸取供试品溶液,重复进样6次,测得去氢紫堇碱峰面积RSD＝0.04%,延胡索乙素峰面积RSD＝0.23%,原阿片碱峰面积RSD＝0.65%,表明精密度良好。
