冻干人用狂犬病疫苗人二倍体细胞的研制

人用狂犬病疫苗的历史和现状一、人用狂犬病疫苗的历史和现状1882年，法国人路易巴斯德先生首次成功发明了人用狂犬病疫苗，之后经历了早期的动物神经组织疫苗、禽胚疫苗、细胞培养的粗制疫苗，发展到目前技术日趋完善的原代地鼠肾细胞、鸡胚细胞、人二倍体细胞和Vero细胞培养的纯化疫苗。

早期的神经组织疫苗免疫效果不佳（全程免疫后仍有1‰的死亡病例），且疫苗接种后局部和全身反应严重，由于疫苗中含有动物脑组织的髓磷脂成分，接种后可能引起神经性麻痹反应（变态反应性脑脊髓炎）。

WHO于1984年建议停止生产和使用神经组织疫苗，目前各国已陆续停止使用。

20世纪60年代起，采用细胞和组织胚胎培养技术生产的狂犬病疫苗（CCEEVs）取得了长足发展。

由于采用了细胞培养和纯化技术，CCEEVs避免了产品中残留动物脑组织、细胞蛋白残留等引起的不良反应，提高了疫苗效价和免疫后抗体水平，减少了注射针次，最大限度降低了免疫失败病例。

现已证明，CCEEVs可安全有效地预防狂犬病。

目前广泛使用的有Vero细胞纯化疫苗、人二倍体细胞疫苗、纯化鸡胚细胞疫苗和原代地鼠肾细胞疫苗等。

人二倍体细胞疫苗（HDCV）为美国Wistar研究所首创，随后法国Merieux研究所1974年获得生产许可，经多中心临床人体观察，该疫苗接种后不良反应发生率低、症状轻，免疫效果好。

但是人二倍体细胞增殖慢，病毒产量低，疫苗成本高，价格贵，尚不能得到广泛应用。

纯化Vero细胞狂犬病疫苗由法国Merieux研究所于1985年获得生产许可，人体观察不良反应轻、效果好，与人二倍体细胞疫苗有着同样的安全性和效力。

而且由于培养的狂犬病病毒滴度高、疫苗产量大、价格低，在世界范围得到了广泛的应用。

纯化鸡胚细胞疫苗和原代地鼠肾细胞疫苗根据不同厂家的临床观察，其不良反应较轻微，免疫效果、安全性和有效性均较好。

现代生物技术的发展为新型疫苗的研究提供了更多可能性，比如重组疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗等。

人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗是两种常见的疫苗类型，它们都是用于预防狂犬病的疫苗，但它们的制备过程和安全性可能存在一些差异。

本文将对这两种疫苗的安全性进行对比分析，帮助读者更好地了解这两种疫苗的特点和适用范围。

人二倍体细胞狂犬疫苗是一种由人类细胞培养制备的疫苗，它们来源于人的胚胎组织或细胞株。

这种疫苗制备的过程较为复杂，需要经过多道程序，从细胞培养、病毒复制、收获和纯化等环节，确保最终的疫苗产品符合国家标准和生产安全规定。

而Vero细胞纯化狂犬疫苗则是利用Vero细胞培养，通过细胞培养、病毒复制、收获和纯化等步骤，生产出的疫苗产品。

在安全性方面，这两种疫苗都有着严格的生产工艺和质量控制要求，保证生产过程中的卫生和纯度全面符合相关法规和标准要求。

但是在实际应用中，人二倍体细胞狂犬疫苗和Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性会有所不同。

人二倍体细胞疫苗制备的过程可能会存在与细胞培养相关的潜在风险，如细胞变异、病毒污染等。

而Vero细胞纯化疫苗则通过纯化过程将可能存在的杂质去除，减少了潜在的风险。

从制备过程来看，Vero细胞纯化狂犬疫苗在安全性上可能更有优势。

人二倍体细胞疫苗和Vero细胞纯化疫苗的生产工艺、疫苗成分和疫苗质量也会对其安全性产生影响。

人二倍体细胞疫苗可能含有人类组织或细胞株的成分，存在一定的传染风险；而Vero细胞纯化疫苗则是通过Vero细胞培养制备，不含有人类组织或细胞株成分，安全系数更高。

临床使用中对这两种疫苗的不良反应进行监测和统计分析也是很重要的。

通过对患者接种后的不良反应进行监测和分析，可以更好地评估疫苗的安全性和适用性。

有研究显示，人二倍体细胞疫苗在部分接种者中可能会出现不良反应，如发热、局部反应等；而Vero细胞纯化疫苗在临床使用中的不良反应相对较少。

人二倍体细胞狂犬疫苗和Vero细胞纯化狂犬疫苗在安全性上存在一定的差异。

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2013.07.03C N 103182081 A (21)申请号 201110458972.1(22)申请日 2011.12.30A61K 39/295(2006.01)A61K 39/205(2006.01)A61P 31/14(2006.01)A61K 39/08(2006.01)(71)申请人上海泽润生物科技有限公司地址201203 上海市浦东新区张江高科技园区爱迪生路333号(72)发明人沈琼 张高峡(54)发明名称一种人用狂犬疫苗的制备(57)摘要本发明提供了一种人用狂犬疫苗，所述的疫苗含有狂犬病全病毒颗粒经裂解后的外膜片段及破伤风类毒素；外膜片段包括刺突和基质蛋白。

其中，人用狂犬疫苗每剂量含有病毒蛋白10-100μg ，破伤风类毒素的用量为2Lf/剂-10Lf/剂，磷酸铝佐剂0.5mg/剂。

本发明的人用狂犬病疫苗，相比现有的病毒纯化原液含有的杂蛋白大大减少，具有更高的免疫原性和效力，使用更加安全。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书3页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页(10)申请公布号CN 103182081 A*CN103182081A*1/1页1.一种疫苗组合物，包括蛋白疫苗和磷酸铝佐剂，其特征在于所述蛋白疫苗包含5-100μg/剂的人狂犬病毒蛋白和2Lf-10Lf/剂的破伤风类毒素。

2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于所述磷酸铝佐剂的含量不超过1.25mg/剂。

3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于所述磷酸铝佐剂的含量为0.5mg/剂。

权 利 要 求 书CN 103182081 A一种人用狂犬疫苗的制备技术领域[0001] 本发明涉及医疗预防领域，具体来说，涉及一种人用的狂犬疫苗。

背景技术[0002] 狂犬病是由狂犬病毒感染所致的急性传染病，是一种人畜共患急性传染病。

狂犬疫苗副作用终身，狂犬疫苗副作用很大吗？
我国自2004 年开始研制人二倍体细胞狂犬病疫苗，2014 年，我国首家拥有自主知识产权的冻干人用狂犬病疫苗上市。

狂犬疫苗可分为两种 :一为暴露后(咬伤、抓伤后)预防，二为暴露前(无咬伤，抓伤)预防。

接种狂犬疫苗也是有副作用的，下面一起来了解下吧。

狂犬疫苗副作用1、打狂犬病疫苗的副作用一般很小，有极少数人在注射后有轻微局部及全身反应，比如：少数有注射部位疼痛、红肿、硬结、搔痒甚至水肿、淋巴结肿等，不过大多数可以自行缓解，比较偶尔见到的是出现荨麻疹。

这些副作用的产生有可能是因为个人体质问题，也有可能是因为接种的疫苗纯度不够高，有杂质存在。

2、少数人接种狂犬病疫苗后可出现预防接种反应。

部分受种者除体温上升外，可能伴有头痛、眩晕、恶寒、乏力和周身不适等，一般持续1-2天。

个别受种者可发生恶心、呕吐、腹泻等胃肠道症状，一般以接种当天多见，很少有持续2-3天的。

3、也有少数人会在打完疫苗后出现发烧情况，不过大多是低烧，只有极少一些人会高热不退或伴有其他并发症。

如果是出现高热和并发症的，要及时送院治疗并密切观察病情。

接种疫苗后的一些副作用，是由疫苗本身所固有的特性引起的，对机体只会造成一次性生理功能障碍的反应，发生轻度不良反应的朋友只要加强观察，一般不需任何处理，必要时适当休息，多喝开水，注意保暖。

如果副作用反应强烈或者是导致并发症疾病的发生，则需要及时到院检查治疗。

冻干人用狂犬病疫苗二倍体原理狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的急性传染病，对人类和动物都具有较高的致死率。

为了预防和控制狂犬病的传播，研发了冻干人用狂犬病疫苗。

这种疫苗的制备过程中采用了二倍体原理，下面我们来详细了解一下。

二倍体是指细胞在某一特定时期，其染色体数量是正常状态下的两倍。

在冻干人用狂犬病疫苗的制备过程中，二倍体原理是指使用狂犬病病毒株在细胞培养基中感染细胞，经过一系列操作，使病毒在细胞内复制，最终使细胞内含有较高浓度的病毒。

制备病毒种苗。

病毒种苗是狂犬病病毒的一种弱毒株，它不会引起狂犬病的严重症状，但具有免疫原性。

病毒种苗通过体内或体外传代培养，经过多次传代，使病毒逐渐适应培养环境，增加复制效率和病毒产量。

培养细胞。

在制备冻干人用狂犬病疫苗过程中，常用的细胞包括Vero细胞和鸡胚纤维细胞。

这些细胞具有较好的病毒感染和复制能力，适合用于制备疫苗。

然后，感染细胞。

将培养好的细胞与病毒种苗接种于细胞培养基中，让病毒感染细胞。

感染后，病毒会进入细胞内，利用细胞的生物合成机制复制自身。

接着，复制病毒。

经过一段时间的培养，病毒会在细胞内不断复制，形成大量的病毒颗粒。

这些病毒颗粒会释放到细胞外，继续感染其他细胞。

收集病毒。

当细胞内病毒产量达到一定水平时，可以通过离心等方法将病毒从细胞培养基中分离出来。

收集到的病毒溶液经过一系列的处理，包括杀灭病毒、纯化和浓缩等步骤，最终得到冻干狂犬病疫苗。

冻干狂犬病疫苗的制备过程中，二倍体原理的应用使病毒在细胞内得以复制，并在一定时间内达到高浓度。

这样可以提高疫苗的效力和产量，保证疫苗的质量。

冻干狂犬病疫苗经过冷冻干燥处理后，具有较长的保存期限，方便运输和使用。

冻干人用狂犬病疫苗的制备过程中，二倍体原理的应用不仅提高了疫苗的效力和产量，还保证了疫苗的稳定性和质量。

这对于预防和控制狂犬病的传播具有重要意义。

随着科技的进步，疫苗制备技术也在不断改进，相信未来会有更多的创新和突破，提高疫苗的效果和安全性，为人类健康保驾护航。

冻干人用狂犬病疫苗（人二倍体细胞）Donggan Renyong Kuangquanbing Yimiao (Ren Erbeiti Xibao) Rabies Vaccine (Human diploid cell) for Human Use, Freeze-dried本品系用狂犬病病毒固定毒接种于人二倍体细胞，经培养、收获、浓缩、纯化、灭活病毒后，加入适宜稳定剂冻干制成。

用于预防狂犬病。

1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2 制造2.1 生产用细胞生产用细胞为人二倍体细胞（MRC-5株或其他经批准的细胞株）。

2.1.1 细胞管理及检定应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。

各级细胞库细胞代次应不超过批准的限定代次。

2.1.2 细胞制备复苏一定数量的工作细胞库细胞，加入适宜的培养液，在适宜温度下培养，扩增至一定数量，用于接种病毒的细胞为一个细胞批。

每批原液的生产细胞应来自复苏扩增后的同一细胞批。

2.2 毒种2.2.1 名称及来源生产用毒种为狂犬病病毒固定毒Pitman-Moore株或经批准的其他人二倍体细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。

2.2.2 种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。

各种子批代次应不超过批准的限定代次。

2.2.3 种子批毒种的检定主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行 2.2.3.1～2.2.3.4项检定。

2.2.3.1 鉴别试验采用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。

将毒种做10倍系列稀释，取适宜稀释度病毒液分别与狂犬病病毒特异性免疫血清（试验组）和阴性血清（对照组）等量混合，试验组与对照组的每个稀释度分别接种11～13g小鼠6只，每只脑内接种0.03ml，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。

中和指数应不低于500。

2.2.3.2 病毒滴定将毒种做10倍系列稀释，每个稀释度脑内接种体重为11～13g小鼠至少6只，每只脑内接种0.03ml，逐日观察，3天内死亡者不计（动物死亡数量应不得超过试验动物总数的20%），观察14天。

人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准分析一、人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准狂犬病病毒RNA编码核蛋白（N）、M1、M2、病毒包膜糖蛋白（G）和L五种蛋白，其中G蛋白是狂犬病病毒最主要的抗原，可有效刺激特异性辅助性T细胞和细胞毒性T细胞（CTL）增生，并诱导机体产生特异性抗体。

G蛋白特异性抗体是狂犬病疫苗最重要的保护性抗体，免疫效果主要依赖其抗原表位、结构、蛋白折叠及糖基化等。

N蛋白也是一种有效的保护性抗原，能够刺激B细胞和Th细胞诱导产生细胞和体液免疫。

磷蛋白（P）可诱导CTL，但保护作用较弱。

机体在接种狂犬病疫苗约7天左右产生IgM抗体，在约14天后产生IgG抗体并迅速升高。

IgM和IgG抗体均具有中和病毒的能力，有些中和抗体能进入感染狂犬病病毒的神经细胞内抑制病毒复制。

CTL的高峰出现在免疫后12天，可清除中枢神经系统内的狂犬病病毒，Th细胞可增强抗核蛋白和糖蛋白抗体，也能增加保护效果。

但Suss的研究认为细胞免疫在狂犬病中的作用不明。

由于狂犬病病毒核蛋白序列高度保守，氨基酸同源性达78%至93%，故病毒之间在核壳体水平上存在着广泛的抗原交叉反应。

狂犬病病毒的主要抗原部位为G蛋白外功能区，当其氨基酸同源性>74%时，病毒之间能够交叉中和，为同一遗传谱系内的病毒；膜外区的氨基酸同源性<62%时，则无交叉中和反应。

目前疫苗株均属于遗传谱系I，对遗传谱系II中的病毒感染不具保护作用。

现已经有十余个种类或基因型的狂犬病病毒属病毒被描述为狂犬病的病原体。

目前为止，遗传谱系I的狂犬病病毒是引起人狂犬病的最常见的病毒型别，也是至今应用于狂犬病疫苗生产的唯一病毒种类。

故现有疫苗可能无法为遗传谱系I外的其他血清型病毒感染提供保护。

因此，用于疫苗的病毒种类必须慎重选择。

生产用毒种应是在实验室细胞培养适应和减毒，并具有稳定生物学特性的固定毒株，其历史和来源应确证清楚，并经过全面的特征性检定，符合国家相关文件的要求。

人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析狂犬病是一种由狂犬病病毒引起的严重传染病，病毒侵入人体后会造成中枢神经系统病变，最终导致患者死亡。

为了预防狂犬病的发生，疫苗接种是一种非常有效的预防措施。

目前狂犬病疫苗的生产制备主要有两种方式，一种是使用人二倍体细胞进行培养和繁殖，另一种是使用Vero细胞进行纯化。

那么这两种疫苗在安全性方面是否存在差异呢？我们需要对两种疫苗进行深入的对比分析，以便更好地了解它们的优缺点。

我们需要了解一下人二倍体细胞与Vero细胞的基本情况。

人二倍体细胞是一种来自于人体组织的一类细胞，经过特定培养条件下能够进行繁殖，是疫苗生产中常用的细胞系之一。

而Vero细胞则是来源于非洲绿猴肾组织的一种细胞系，相对来说更容易得到纯化并且对病毒具有较高的敏感性。

接下来，我们将从安全性、免疫原性、生产工艺等方面对这两种疫苗进行对比分析。

从安全性方面来看，人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗在安全性上并没有太大的差异。

在制备过程中，人二倍体细胞疫苗和Vero细胞疫苗均需要经过多道灭活工艺，确保病毒活性完全被抑制。

从病毒污染的角度来看，两种疫苗都具有较高的安全性。

在临床应用中也没有发现两种疫苗在安全性上有较大的差异，都能够在一定程度上提供良好的保护效果。

在免疫原性方面，人二倍体细胞疫苗相对于Vero细胞疫苗可能具有一定的优势。

由于人二倍体细胞疫苗来源于人体组织，因此其对人体免疫系统更为友好，能够更好地激发人体免疫系统产生抗体。

而Vero细胞疫苗则来源于绿猴组织，可能在一定程度上会引起人体免疫系统的排斥反应。

从免疫原性角度来看，人二倍体细胞疫苗可能更适合人类接种使用。

而在生产工艺方面，Vero细胞疫苗相对更容易获得纯化。

由于Vero细胞具有较高的病毒感染率和病毒表达水平，因此在疫苗生产过程中更容易得到高纯度的成品疫苗。

而人二倍体细胞则可能在繁殖和提取纯化过程中存在一定的困难，需要更复杂的生产工艺步骤，从而增加了制备过程中的一些风险。

[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101352570A [43]公开日2009年1月28日[21]申请号200710129800.3[22]申请日2007.07.27[21]申请号200710129800.3[71]申请人崔栋地址102200北京市昌平科技园区超前路13号[72]发明人崔栋 [74]专利代理机构北京华科联合专利事务所代理人王为[51]Int.CI.A61K 39/205 (2006.01)A61P 31/14 (2006.01)C12N 5/08 (2006.01)C12N 7/02 (2006.01)权利要求书 1 页 说明书 6 页[54]发明名称二倍体细胞狂犬疫苗及纯化狂犬疫苗的制备方法[57]摘要本发明涉及一种二倍体细胞狂犬疫苗及纯化狂犬疫苗的制备方法，该方法使用无血清培养基培养人二倍体细胞狂犬纯化疫苗，可使过敏反应大大降低，同时有利于纯化。

200710129800.3权 利 要 求 书第1/1页1、一种人用二倍体细胞狂犬病纯化疫苗的制备方法，包括：(1)、人用二倍体细胞的复苏；(2)、人用二倍体细胞的培养扩增；(3)、在人用二倍体细胞上接种狂犬病毒毒种；(4)、收获病毒液；(5)、病毒液的灭活；(6)、澄清超滤；(7)、纯化；(8)、稀释分装步骤，其特征在于，其中步骤(2)所述人用二倍体细胞的培养扩增是在细胞反应罐中进行，培养方式为微载体培养、悬浮培养或细胞袋培养，采用无血清培养基作为培养液，培养条件为PH7.0-7.6，温度在37±0.5℃。

2、权利要求1的制备方法，其特征在于，所述无血清培养基是通用无血清培养基。

3、权利要求1的制备方法，其特征在于，所述无血清培养基含有抗生素庆大霉素和卡那霉素。

4、权利要求1的制备方法，其特征在于，其中培养条件P H为7.2。

200710129800.3说 明 书第1/6页二倍体细胞狂犬疫苗及纯化狂犬疫苗的制备方法技术领域：本发明涉及一种狂犬病纯化疫苗的制备方法，特别是在人用二倍体细胞上接种狂犬病毒毒种得到的狂犬病纯化疫苗的制备方法。

冻干人用狂犬病疫苗（Vero 细胞）Donggan Renyong Kuangquanbing Yimiao(Vero Xibao) Rabies Vaccine for Human Use（Vero cell）， Freeze-dried本品系用狂犬病病毒固定毒接种于Vero细胞，经培养、收获、浓缩、灭活病毒、纯化后，加入适宜稳定剂冻干后制成，用于预防狂犬病。

1 基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。

2 制造2.1 生产用细胞生产用细胞为Vero细胞。

2.1.1细胞管理及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。

各种子批代次应不超过批准的限定代次。

取自同批工作细胞库的1支或多支细胞管，经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。

2.1.2 细胞制备取工作细胞库中的1支或几支细胞管，细胞复苏、扩增至接种病毒的细胞为一批。

将复苏后的单层细胞用胰蛋白酶或其他适宜的消化液进行消化，分散成均匀的细胞，加入适宜的培养液混合均匀，置37℃培养成均匀单层细胞。

2.2毒种2.2.1名称及来源生产用毒种为狂犬病病毒固定毒CTN-1V、aGV株或其他经Vero细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。

2.2.2种子批的建立应符合“生物制品生产和检定用菌毒种管理规程”规定。

各种子批传代应不超过批准的限定代次。

狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代次数应不超过35代，aGV株在Vero细胞上传代，至工作种子批传代次数应不超过15代。

2.2.3种子批的检定主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.4项检定。

2.2.3.1鉴别试验用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。

将毒种作10倍系列稀释，取适宜稀释度病毒液与等量抗狂犬病病毒特异性免疫血清混合，同时设立正常血清对照组，试验组与对照组的每个稀释度分别接种11-13g小鼠6只，每只脑内接种0.03ml，观察14天，中和指数应不低于500。

人二倍体细胞狂犬疫苗与Vero细胞纯化狂犬疫苗的安全性对比分析狂犬疫苗是预防狂犬病的重要措施之一，而狂犬病是一种严重的病毒感染疾病，主要通过动物的咬伤传播给人类。

目前在市场上存在着两种不同来源的狂犬疫苗，分别是人二倍体细胞狂犬疫苗和Vero细胞纯化狂犬疫苗。

这两种疫苗都是为了预防狂犬病而制备的，但由于其生产原料和制备工艺的差异，其安全性也可能存在一定的差异。

对这两种疫苗的安全性进行对比分析，对于选用合适的疫苗具有重要的指导意义。

我们需要了解一下人二倍体细胞狂犬疫苗和Vero细胞纯化狂犬疫苗的制备原料和生产工艺。

人二倍体细胞狂犬疫苗是使用人二倍体细胞作为宿主细胞，通过病毒接种与传代培养得到的疫苗。

而Vero细胞纯化狂犬疫苗则是使用Vero细胞进行培养，通过病毒感染和纯化得到的疫苗。

从生产原料和工艺上来看，人二倍体细胞疫苗与Vero细胞疫苗存在较大的差异。

我们可以从临床研究和实际使用中收集和比较这两种疫苗的安全性数据。

在过去的临床研究中，人二倍体细胞疫苗和Vero细胞疫苗都已经得到了长期的应用和测试，其安全性也已经得到了充分的验证。

人二倍体细胞疫苗在长期临床使用中未发现严重的不良反应，表明其安全性较高。

而Vero细胞疫苗在临床使用中也未发现明显的不良反应，所以其安全性也是比较可靠的。

我们还可以从临床实际使用中收集一些数据，比如接种后的不良反应发生率、严重程度等。

通过这些数据的比较分析，我们也可以得到关于这两种疫苗安全性的更加直观的认识。

据统计，人二倍体细胞疫苗的接种后不良反应发生率较低，而Vero细胞疫苗的不良反应发生率也在可控范围之内。

这些数据都反映了这两种疫苗的较高安全性水平。

从以上的分析可以看出，人二倍体细胞疫苗和Vero细胞疫苗在安全性方面都具有较高的水平，临床使用中未发现明显的不良反应和安全隐患。

我们还需要注意到，每种疫苗都有其特定的适应人群和禁忌症，因此在接种前一定要向医生咨询，并按照医嘱进行疫苗接种。

人用狂犬病疫苗免疫程序的演变一、人用狂犬病疫苗免疫程序的演变人类最早由路易巴斯德应用感染狂犬病病毒的干燥兔脊髓悬液的减毒活病毒尝试预防狂犬病，连续注射13针而获得成功。

之后研发的灭活神经组织疫苗需连续接种14-21针。

随着细胞培养疫苗的出现，疫苗的免疫原性有了较大提高，通过实验不同免疫针次和间隔时间进行抗体应答比较，对于效价高于2．5IU/剂的细胞培养疫苗可采用简化的接种程序，欧洲率先采用0、3、7、14、28、90天注射的6针接种程序。

随着研究数据的积累发现第6针疫苗的接种并不能显著提高抗体水平，所以改为根据受种者机体的具体情况决定是否接种第6针，一般情况下仅需要接种5针。

之后，5针法被WHO推荐且目前仍在全球广泛应用。

1984年，前南斯拉夫的Zagreb公共卫生研究院针对不同种类狂犬病疫苗进行不同间隔接种的免疫程序及优化接种程序的探索研究，结果显示，于0天左右上臂三角肌各接种1剂，7、21天再分别接种1剂的免疫程序所产生的中和抗体时间较早，且水平也较高，此免疫程序被称为2-1-1程序。

1992年WHO在狂犬病专家委员会第八次会议中正式推荐应用。

美国免疫实施顾问委员会（ACIP）于2009年在综合已发表文献的基础上，建议健康成年人在规范处置的情况下，可采取原5针免疫程序减少最后1针的方法，即在0、3、7、14天注射的简易4针法免疫程序。

目前，WHO推荐的暴露后免疫肌内注射程序包括5针法（Essen 法）、2-1-1程序（Zagreb法）以及ACIP推荐的简易4针法。

推荐的暴露前免疫肌内注射方案为3剂疫苗，分别在0、7和21或28天接种。

我国批准上市的狂犬病疫苗的暴露后免疫程序包括5针法和2-1-1程序两种，各疫苗的免疫程序以国家食品药品监督管理总局批准的疫苗使用说明书为准。

二、狂犬疫苗出口市场广阔在一些发展中国家，人们对狂犬病疫苗接种的认识相对较低，导致狂犬病疫苗接种率较低，例如孟加拉国、埃及和印度等。

冻干人用狂犬病疫苗目前，全球有25亿人生活在可能感染狂犬病病毒的环境中，每年至少有5万人因染病而死亡，其中99%的病例发生在发展中国家，亚洲约占发病总数的56%，而非洲约占44%0全球狂犬病发病率在上升，据WHO估计，每年有1000万人接受狂犬病疫苗注射。

接种疫苗是预防狂犬病唯一有效的方式。

每年国内狂犬病疫苗需求旺盛，但目前国内狂犬病疫苗生产企业较少，进口品种单一。

狂犬疫苗的刚性需求量仍然较大，而国内企业产品生产量逐渐降低，导致狂犬病疫苗市场缺口加大。

冻干人用狂犬病疫苗也被称为人二倍体细胞，英文简称HDCV，中文名为海德希维。

此产品符合《中华人民共和国药典三部》要求，被WHO誉为“金标准”狂犬病疫苗，产品质量和技术处于世界领先，亚洲独家水平。

技术优点首次在国内利用人二倍体细胞生产狂犬病疫苗。

据权威调查表明，目前将人二倍体细胞用于生产狂犬病疫苗研究的国家尚只有英国、法国等发达国家，而我国还在大量使用原代地鼠肾细胞培养疫苗( PHKCV)、鸡胚疫苗，及最近几年我国研制成功的以Vero细胞为基质的狂犬病疫苗。

这三种疫苗均采用动物细胞制备，有引入异源致病因子的风险，副反应大，中和抗体产生的时间较晚，对狂犬病的预防和控制不利。

而HDCV疫苗采用人二倍体细胞生产狂犬病疫苗，克服了副作用大、免疫性较低、有致瘤和致敏可能因素的不足，效果十分明显。

此疫苗创新了狂犬病疫苗的技术、工艺及产品结构，在性能指标与产品安全性上较之目前国内的狂犬病疫苗产品，具有较大的优势。

工艺优势细胞工厂规模化生产，传统生产工艺采用转瓶、鸡胚操作等方式生产，产量一直处于较低的水平；此疫苗采用细胞工厂培养，大幅度的提高了病毒产量和收率，线性放大生产规模数十倍，大大的降低了生产成本；无需添加抗生素，传统生产工艺在使用转瓶生产时，需要添加抗生素保证生产质量，本疫苗采用细胞工r无需添加抗生素，提高了产品的安全性；灭活工艺，过去狂犬病疫苗生产采用甲醛灭活，其残留对人体产生副作用。

(10)申请公布号 CN 102093983 A(43)申请公布日 2011.06.15C N 102093983 A*CN102093983A*(21)申请号 201010253554.4(22)申请日 2010.08.13CGMCC NO.3989 2010.07.16C12N 7/00(2006.01)C12R 1/93(2006.01)(71)申请人浙江普康生物技术股份有限公司地址310053 浙江省杭州市滨江区浦沿街道滨康路587号(72)发明人毛子安 黄海鹰 姜立民 李永学陈秋红 林晓波 高磊 严宵周康凤(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司 33200代理人韩介梅(54)发明名称人二倍体细胞狂犬病疫苗毒种及其制备方法(57)摘要本发明涉及生物技术领域，特别是利用人二倍体细胞(KMB17)生产用于预防人类狂犬病的疫苗毒种及其制备方法。

本发明是将狂犬病固定毒CTN-1V 5株连续在人二倍体细胞(KMB17)中传代，并以终末稀释法筛选出滴度较高的病毒，从而获得适应于人二倍体细胞(KMB17)并具有良好免疫原性和传代稳定性的狂犬病毒株，培育出可在人二倍体细胞(KMB17)高效增殖的狂犬病疫苗毒种(CTN-DK 株)。

用该毒种生产人二倍体细胞(KMB17)狂犬病疫苗可以有效避免当前国内使用的疫苗中异种DNA 残留引起的风险，将进一步提高我国狂犬病疫苗的安全性和实用性，具有重大的社会效益和经济效益。

(83)生物保藏信息(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 6 页1.一种人二倍体细胞狂犬病疫苗毒种，其特征在于将狂犬病固定毒CTN-1V株连续5在人二倍体细胞(KMB17)中传代，以终末稀释法筛选出滴度较高的病毒，再经连续传代，获得适应于人二倍体细胞(KMB17)并具有良好免疫原性和传代稳定性的狂犬病毒株，培育出在人二倍体细胞(KMB17)高效增殖的狂犬病疫苗毒种(CTN-DK株)，该狂犬病疫苗毒种(CTN-DK株)，其保藏号为CGMCC No.3989。

(10)申请公布号 (43)申请公布日 2015.02.18C N 104353068A (21)申请号 201410660560.X(22)申请日 2014.11.18A61K 39/205(2006.01)A61P 31/14(2006.01)C12N 7/00(2006.01)(71)申请人成都康华生物制品有限公司地址610100 四川省成都市国家经济技术开发区北京路182号(72)发明人侯文礼 周蓉(74)专利代理机构成都正华专利代理事务所(普通合伙) 51229代理人李林合(54)发明名称一种利用人二倍体细胞大规模生产狂犬疫苗的方法(57)摘要本发明公开了利用人二倍体细胞大规模生产狂犬疫苗的方法，包括以下步骤：将复苏后的人二倍体细胞在生物反应器内培养扩增，然后在人二倍体细胞上接种上狂犬病毒；将狂犬病毒培育，收获病毒液后加入终浓度为0.1％的甲醛溶液灭火24h ，然后进行纯化分离；加入佐剂吸附和疫苗保护剂；其中，疫苗保护剂为包括人血白蛋白2％、半胱氨酸0.5％、果糖3％、谷氨酸钠0.2％和乙酰磺胺酸钾1％。

本发明的制备方法，可以增强疫苗的稳定性，保存时间长，效价降低慢。

(51)Int.Cl.权利要求书1页 说明书3页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书3页(10)申请公布号CN 104353068 A1.一种利用人二倍体细胞大规模生产狂犬疫苗的方法，包括以下步骤：将复苏后的人二倍体细胞在生物反应器内培养扩增，然后在人二倍体细胞上接种上狂犬病毒；将狂犬病毒培育，收获病毒液后加入终浓度为0.1％的甲醛溶液灭火24h，然后进行纯化分离；所述纯化过程为：灭活病毒制成粗疫苗，澄清过滤、超滤纯化，然后进行阴离子交换和柱层析纯化，再加入佐剂吸附和疫苗保护剂；冻干分装；其中，所述疫苗保护剂为包括人血白蛋白2％、半胱氨酸0.5％、果糖3％、谷氨酸钠0.2％和乙酰磺胺酸钾1％。