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血清脂蛋白(a)免疫透射比浊测定
万柏珍;庄一义;汪俊军
【期刊名称】《医学研究生学报》
【年(卷),期】1995(0)1
【摘要】无
【总页数】1页(P15)
【作者】万柏珍;庄一义;汪俊军
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R392.7
【相关文献】
1.免疫透射比浊测定技术的进展和分析特性 [J], 彭凤
2.免疫透射比浊测定脑脊液免疫球蛋白 [J], 吕礼应
3.颗粒增强免疫透射比浊测定血中Cyst C全自动分析法的建立与评价 [J], 贾宁人;吴家明;芮志莲;李康;王宁皎;蒋维
4.单克隆抗体免疫透射比浊法测定血清脂蛋白(a) [J], 陈会枝;赖泽仁;李兴武
5.自配试剂免疫透射比浊比率法测定血清CIC [J], 潘宝龙; 张秀琴; 雷家林; 潘丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法的原理胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法是两种常用的免疫学检测方法，它们在医学领域中起着重要的作用。
胶乳免疫比浊法主要利用抗原与特定抗体结合后，使得溶液浑浊度增加的特性，通过比浊度的变化来判断样品中是否含有特定抗体或抗原。
而荧光免疫层析法则是利用特定荧光标记的抗体与抗原结合后，在荧光检测器上显示荧光信号的原理。
这两种方法在实际应用中各有优劣之处，本文将对这两种方法的原理、应用和发展进行探讨。
首先，胶乳免疫比浊法是一种比较传统的免疫学检测方法，其原理比较简单，操作相对容易。
在这种方法中，首先需要将待检测的抗原与特异性抗体混合，形成抗原-抗体复合物。
当复合物形成后，会导致溶液的浑浊度增加，通过光学方法检测溶液的浊度变化，从而判断样品中是否含有特定的抗体或抗原。
这种方法具有灵敏度高、速度快和成本低的特点，被广泛应用于临床、生物学和环境监测等领域。
然而，胶乳免疫比浊法也存在一些局限性，例如其灵敏度有一定的限制，只能检测较高浓度的抗原或抗体。
另外，由于比浊法是通过测定溶液的浑浊度来判断样品中的抗原或抗体，对于复杂样品的检测可能存在干扰。
因此，在一些需要更高灵敏度和特异性的应用场景下，研究人员开始寻找更加先进的免疫检测方法，其中荧光免疫层析法便是一种备受关注的新型技术。
荧光免疫层析法是一种结合了免疫学和荧光技术的先进检测方法，其原理是利用特定荧光标记的抗体与抗原结合后，在荧光检测器上显示荧光信号。
荧光免疫层析法具有灵敏度高、特异性好、多样性强等优势，被广泛用于生物医学、食品安全和环境监测等领域。
相比于胶乳免疫比浊法，荧光免疫层析法具有更高的灵敏度和特异性，能够检测到低浓度的抗原或抗体，并且可以应用于更加复杂的样品中。
荧光免疫层析法的应用范围也在不断扩大，不仅可以用于传统的生物学检测领域，还可以应用于分子诊断、药物研究和生化反应动力学等领域。
在医学诊断领域，荧光免疫层析法已经成为一种常用的检测方法，可以用于检测各种疾病的标志物，如癌症标志物、感染性疾病的诊断等。
乳胶增强免疫散射比浊法检测血清淀粉样蛋白A的应用评价姜剑巍;杨宇;应春妹【摘要】目的：建立乳胶增强散射免疫比浊法检测血清淀粉样蛋白A（SAA）的即时检验（POCT）方法，并对该法的精密度、线性、准确度等进行评价。
方法建立乳胶增强免疫比浊法测定SAA的POCT方法，并根据美国临床实验室标准化协会（CLSI ）相关文件对建立的 POCT方法进行方法学评价。
结果本法的分析灵敏度为3．52 mg／L；批内变异系数（CV）＜8％、日间CV＜10％；抗干扰性较强，血红蛋白≤4．0 g／L、胆红素≤400μmol／L、类风湿因子≤1621 U／L、甘油三酯≤10 mmol／L 对测定无影响；与进口 N Latex SAA 试剂相关性良好（Y＝1．0521X＋0．0015，r＝0．9983）；线性范围为5～200 mg／L。
结论本法具有简单、快速（3 min内完成检测）的特点，各项分析指标均符合要求，可用于临床患者血清标本的检测。
%Objective To establish the analysis performance of serum amyloid A (SAA ) detected by latex-enhanced immunonephelometry method with point-of-care test (POCT),and to evaluateprecision,linearity,accuracy and so on.Methods According to relevant documents of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI),the methodological evaluation was performed.Results The sensitivity of this method was 3.52 mg/L.The within-run and inter-day coefficients of variation (CV) of this method were <8% and <10%,respectively,with strong anti-interference ability.When the level of hemoglobin was ≤4.0 g/L,the level of bilirubin was ≤400 μmol/L,the level of rheumatoid factor was ≤1 621 U/L,and the level of triglyceride was ≤10 mmol/L,there was no influence on the results.There was a good correlation with that of importedN Latex SAA assay (Y=1.052 1X+0.001 5,r=0.998 3). The detection linear range of this method was 5-200 mg/L.Conclusions The latex-enhanced immunonephelometry method for SAA is convenient,and it can be finished within 3 min.Its performance meets the requirements for in vitro diagnostic reagents,and it is suitable for the detection of serum samples in clinical use.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】4页(P49-52)【关键词】淀粉样蛋白A;血清;乳胶增强免疫比浊法;即时检验【作者】姜剑巍;杨宇;应春妹【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院检验科，上海200127;上海奥普生物医药有限公司，上海201203;复旦大学附属妇产科医院，上海200011【正文语种】中文【中图分类】R446.1Application evaluation of latex-enhanced immunonephelometry method to determine serum amyloid A JIANG Jianwei1， YANG Yu2， YING Chunmei3. (1.Department of Clinical Laboratory， Renji Hospital，Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 200127，China; 2.Shanghai Upper Bio-Tech Pharma Co.，Ltd.，Shanghai 201201, China; 3.Obstetrics and Gynecology Hospital of Fudan University, Shanghai200011, China )Key words: Amyloid A；Serum；Latex-enhanced immunonephelometry method；Point-of-care test血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein ，SAA)是一种急性时相反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，相对分子质量约为12 000。
一种胶乳增强免疫比浊试剂、稳定方法及应用与流程1胶乳增强免疫比浊试剂的介绍胶乳增强免疫比浊试剂是一种常用于免疫学实验中的试剂，它可以被用来检测特定抗原或抗体的存在，尤其是在生物医学和生命科学领域中应用广泛。
该试剂由胶体金、珠光体、荧光素、光散射物等成分组成，能够通过增强散射和吸收等光学效应，从而提高检测的灵敏度和可信度，并且还能够保证试剂稳定性和可重复性。
2胶乳增强免疫比浊试剂的稳定方法为了保证胶乳增强免疫比浊试剂的稳定性，通常采用以下方法：2.1抑制氧化反应某些成分在氧化反应的作用下会失去活性，因此可采用添加还原剂来抑制氧化反应。
通常使用亚硫酸钠、硫代硫酸钠等还原剂，可以有效地抑制氧化反应。
2.2控制温度和光照温度和光照会对试剂的稳定性产生影响，因此需要控制环境温度和光照强度。
通常把试剂置于暗处或遮光袋中，避免直接照射光线。
2.3添加保护剂添加保护剂能够保护试剂免受外界环境的影响，一些常用的保护剂有甘露醇、丙二醇、山梨醇等。
这些保护剂能够减轻试剂在储存和运输过程中受到的压力，从而延长试剂的使用寿命。
3胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程包括以下几个步骤：3.1试剂前处理使用前，需要将胶乳增强免疫比浊试剂离心，将沉淀物均匀悬浮于试剂中。
3.2样品处理制备样品液，通常需要对样品进行稀释、加热、离心等操作，以获得更加准确的测量结果。
3.3加试剂将胶乳增强免疫比浊试剂加入样品中，混合均匀后进行孵育。
3.4测量结果测量反应产物的比浊度、荧光强度等参数，并进行数据分析和结果判定。
4胶乳增强免疫比浊试剂的应用胶乳增强免疫比浊试剂的应用范围非常广泛，通常用于以下方面：4.1检测抗体和抗原胶乳增强免疫比浊试剂可以用于检测特定抗体或抗原的存在，常常被应用于医学诊断、生物工程等领域。
4.2生化分析胶乳增强免疫比浊试剂能够用于测定肽、多肽、蛋白质、脂质等生化物质的存在和浓度。
4.3分子识别胶乳增强免疫比浊试剂可以用于基因测序和DNA分析等领域，为了识别特定的分子，可以在试剂中加入标记物质并进行检测。
DOI：10.19368/ki.2096-1782.2024.02.083血清淀粉酶、脂肪酶及C-反应蛋白在急性胰腺炎患者中的应用价值刘瑜甘肃省天水市第一人民医院医学检验科，甘肃天水741000[摘要]目的探讨血清淀粉酶、脂肪酶及C-反应蛋白联合检验对诊断急性胰腺炎的临床价值。
方法选取2020年4月—2022年5月甘肃省天水市第一人民医院收治的50例急性胰腺炎患者为研究组，包括30例轻型急性胰腺炎患者及20例重型急性胰腺炎患者；同时选择50例非急性胰腺炎急腹症患者作为A1组，50例健康体检人员作为A2组；对所有研究对象均展开血清淀粉酶水平检测、脂肪酶水平检测以及C反应蛋白检测，比较3组的血清淀粉酶水平、脂肪酶水平以及C反应蛋白检测结果，比较轻型、重型急性胰腺炎患者指标测定结果，并进行相关性分析。
结果研究组血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平及C反应蛋白水平均高于A2组和A1组，差异有统计学意义（P均<0.05）；重型急性胰腺炎患者血清淀粉酶水平为（768.49±43.22）U/L、血清脂肪酶水平为（1 694.88±300.15）mg/L、C反应蛋白水平为（137.49±13.35）mg/L，高于轻型急性胰腺炎患者的（591.85±48.22）U/L、（1 232.49±300.13）mg/L、（26.25±4.13）mg/L，差异有统计学意义（t=19.288、7.702、56.288，P 均<0.05）。
随着急性胰腺炎病情的严重，患者的血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平以及C反应蛋白水平呈现出显著提升（r=0.128、0.139、0.137，P均<0.05）。
结论临床对急性胰腺炎患者在开展早期诊断工作期间，合理展开血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平以及C反应蛋白水平检测工作，可为疾病顺利诊断提供一定依据，发现随着急性胰腺炎病情的严重，患者的血清淀粉酶水平、血清脂肪酶水平以及C反应蛋白水平呈现出显著提升对于疾病的有效治疗可以奠定基础。
胶乳免疫比浊法和免疫学法
首先，让我们来谈谈胶乳免疫比浊法。
胶乳免疫比浊法是一种常用的免疫学检测方法，它利用胶乳颗粒作为载体，将抗原或抗体与胶乳颗粒偶联，形成胶乳免疫复合物。
当抗原与抗体结合时，会形成较大的颗粒团簇，从而导致溶液的浊度增加。
通过测量溶液的浊度变化，可以间接地定量检测抗原或抗体的存在量。
这种方法操作简便，灵敏度高，被广泛用于临床诊断和科研实验中。
其次，让我们来谈谈免疫学法。
免疫学法是一种通过检测免疫反应来识别和测定抗原或抗体的方法。
免疫学法包括很多种技术，比如ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫印迹、免疫荧光等。
这些方法都是基于免疫反应原理，通过抗原与抗体的特异性结合来进行检测。
免疫学法可以用于检测感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤标志物等，具有高度的特异性和灵敏度。
总的来说，胶乳免疫比浊法和免疫学法都是用于检测抗原和抗体的实验方法，它们在原理和应用上有所不同，但都在医学诊断和科研领域发挥着重要作用。
希望这些信息能够帮助你更好地理解这两种方法。
医学体外诊断试剂---产品临床意义1.D-二聚体测定试剂盒（D-Dimer）2.纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒（FDP）13.抗凝血酶III测定试剂盒（AT-III）4.纤维蛋白溶酶原测定试剂盒（S-PLG）5.凝血酶原时间测定试剂盒（PT）6.活化部分凝血活酶时间测定试剂盒（APTT）37.凝血酶时间测定试剂盒（TT）8.纤维蛋白原测定试剂盒（FIB）9.a2纤溶酶抑制物测定试剂盒（S-APL）10.铜兰蛋白（CP）11.总胆汁酸（TBA ）12.前白蛋白（PA）13.腺苷脱氨酶（ADA ）14.5 ‘ -核苷酸酶（5 ‘-NT）15.胆碱酯酶（CHE ）16.a-L岩藻糖苷酶（AFU）17.甘胆酸（CG ）18.亮氨酸氨基肽酶（LAP）19.总胆红素（TBIL）20.直接胆红素（DBIL）21.丙氨酸氨基转移酶（ALT）22.天门冬氨酸氨基转移酶（AST）23.天冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶（ASTm ）124.碱性磷酸酶（ALP）25.Y -谷氨酰氨基转移酶（GGT ）26.总蛋白（TP）27.白蛋白（ALB）28.胱抑素 C （Cysc）29.视黄醇结合蛋白（RBP ）30.0 2微球蛋白（0 2MG ）31.a1微球蛋白测定试剂盒（a1-MG ）32.N-乙酰-0-D-M基葡萄糖苷酶（NAG ）33.肌酐（CR ）34.尿酸（UA）35.尿素氮（BUN ）36.尿总蛋白（UTP ）37.尿微量白蛋白（MALB）38.纤维蛋白（原）降解产物（FDP ）39.同型半胱氨酸（HCY）40.游离脂肪酸（NEFA）41.血管紧张素转化酶（ACE ）42.超敏C反应蛋白（HS-CRP）43.甘油三酯（TG ）44.总胆固醇（TCH）45.高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）46.低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）47.载脂蛋白 AI（ApoAI）48.载脂蛋白B（ApoB）49.载脂蛋白E（ ApoE）50.脂蛋白（a）（LP（a））51.肌红蛋白（Mb）52.肌钙蛋白I（cTn I）53.肌酸激酶同工酶（CKMB ）54.肌酸激酶（CK）55.乳酸脱氢酶（LDH）56.a-羟丁酸脱氢酶（HBDH ）57.葡萄糖（GLU ）58.糖化血清蛋白（GSP ）59.糖化血红蛋白（HBAIC）60.糖化白蛋白（GA ）61.0-羟丁酸（0-DH）62.乳酸（Lac）63.丙酮酸（PYR）64.a-淀粉酶（a-AMY ）65.脂肪酶（LIP）66.钙离子（Ca）67.镁离子（Mg ）68.无机磷（P）69.二氧化碳（Co2 ）70.钾离子（K）71.钠离子（Na ）72.氯离子（CI）73.锌离子（Zn）74.铁离子（Fe）75.抗链球菌溶血素O（ASO ）76.类风湿因子（RF）77.C-反应蛋白（CRP）78.铁蛋白（Ferr）79.转铁蛋白（Tf）80.免疫球蛋白G （IgG）81.补体C3（C3）82.B 因子（BF）83.al-酸性糖蛋白（a 1-AG ）84.al-抗胰蛋白酶（a1-AT）85.尿a2巨球蛋白（Ua2-MG ）86,唾液酸（SIA）87.超氧化物歧化酶（SOD ）尿液蛋白临床意义体外诊断试剂产品临床意义1.D-二聚体测定试剂盒（D-Dimer）方法学：乳胶增强免疫比浊法参考值：血浆：01.0mg/L线性范围：0.520mg/LD-二聚体是在血液凝固与纤溶系统中，由于凝固第十三因子的作用，安定的交联纤维蛋白被纤溶酶分解的FDP的一种，血液中存在YY/DXD、YD/DY、DD/E、DD复合体等各种分子类的D-二聚体。
双粒径胶乳免疫比浊法在测定D-二聚体中的应用方清【摘要】目的改进胶乳免疫试剂的分析灵敏度和线性范围,并验证在用胶乳免疫比浊法测定D-二聚体(DD)的方法中,采用双粒径胶乳致敏DD单克隆抗体比用单一粒径胶乳具有更好的灵敏度和线性范围.方法制备2种平均粒径不同的羧基化胶乳微粒(49和150 nm),并采用化学交联法偶联抗DD单克隆抗体,将2种粒径的致敏胶乳按不同比例混合,测定其分析灵敏度和线性范围,并与市售进口试剂进行比对.结果当49和150 nm致敏胶乳按4:1的比例混合时,其测定的校准曲线线性最好,线性范围达到61.88 μg/mL,分析灵敏度达到0.03,与进口试剂检测结果具有良好的相关性.结论双粒径致敏胶乳制备的DD免疫比浊法试剂比市售的传统DD胶乳诊断试剂的性能有了一定的提高,该试剂具有良好的临床应用前景.【期刊名称】《检验医学》【年(卷),期】2016(031)009【总页数】6页(P801-806)【关键词】D-二聚体;免疫比浊法;双粒径胶乳;灵敏度;线性范围;全自动血凝仪【作者】方清【作者单位】上海市医疗器械检测所,上海201318【正文语种】中文【中图分类】R446.1D-二聚体（D-dimer，DD）是交联纤维蛋白特异的降解产物，它的生成或增高反映了凝血或纤溶系统的激活，可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一，广泛应用于血栓性疾病有关的临床诊断中［1］。
近年来，随着方法学的不断进步，DD检测的方法也越来越多，但利用的核心原理均是免疫检测，如酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）［2］、胶乳凝集法［3］、胶乳免疫比浊法［4］、胶体金免疫渗透法［5］，其中胶乳免疫比浊法是近年逐渐在全自动血凝仪上开始使用的方法，因其使用方便、操作简单、定量准确、检测快速等优点逐渐在各大中型医院中推广使用。
目前市售的检测DD的胶乳免疫试剂，主要是用单一粒径胶乳和抗体偶联，这往往存在着分析灵敏度低和线性范围窄的缺点。
血清脂肪酶的检测原理血清脂肪酶的检测方法有多种，其中较为常用的是酶动力学法和免疫学法。
酶动力学法是利用血清中的脂肪酶对特定底物的催化作用进行测定，常用的底物有甘油三酯和磷脂。
血清中的脂肪酶能够水解底物中的酯键，产生游离脂肪酸和甘油等产物。
通过测定产物的浓度变化，可以间接地反映血清脂肪酶的活性水平。
免疫学法是利用抗体与血清脂肪酶结合的特异性来测定血清中脂肪酶的含量。
免疫学法一般分为免疫酶标记法和免疫比浊法。
免疫酶标记法是将脂肪酶抗体与酶标记结合，形成免疫复合物，然后通过检测酶标记物的酶活性，间接测定脂肪酶的含量。
免疫比浊法则是将脂肪酶抗体与胶体金等颗粒结合，形成可见光散射的复合物，通过测定散射光的强度，间接测定脂肪酶的含量。
血清脂肪酶的检测可以应用于多个领域。
在临床医学中，血清脂肪酶的检测可以用于评估患者的脂肪代谢情况，对于肥胖、高脂血症和代谢综合征等疾病的诊断和治疗具有重要意义。
此外，血清脂肪酶的检测还可以用于评估心血管疾病的风险。
研究表明，血清脂肪酶水平与心血管疾病的发生和发展密切相关，因此，通过检测血清脂肪酶的含量，可以帮助医生及时发现和干预心血管疾病。
除了临床医学，血清脂肪酶的检测在科研领域也有广泛的应用。
科研人员可以通过检测血清脂肪酶的活性和含量，探索脂肪代谢的调节机制，研究脂肪酶在疾病发生和发展中的作用。
此外，血清脂肪酶的检测还可以用于评估新药的疗效和副作用。
许多药物对脂肪代谢有一定的影响，通过检测血清脂肪酶的变化，可以评价药物对脂肪代谢的影响程度，从而指导药物的使用和调整。
血清脂肪酶的检测在实验室中的操作相对简单，但仍需注意一些问题。
首先，采集血清样本时需要避免污染和血液凝固，以保证检测结果的准确性。
其次，不同的检测方法对样本的处理和条件要求不同，操作时应严格按照说明书进行，以避免误差的产生。
此外，不同人群的血清脂肪酶水平存在差异，因此，在解读检测结果时需要参考相应的参考范围。
血清脂肪酶的检测是评估脂肪代谢情况的重要手段，具有广泛的临床应用价值。
胶乳增强免疫比浊法检测血清脂蛋白脂肪酶的研究Tetsuo Machida等日本群马大学医学研究院临床医学实验部摘要背景脂蛋白脂肪酶（LPL）通过催化甘油三酯的水解在富含甘油三酯的脂蛋白代谢中起关键作用。
血清脂蛋白脂肪酶的含量测定有利于脂类代谢紊乱的诊断，但目前在临床上没有快速测定LPL的方法。
方法使用胶乳颗粒固定化的LPL单克隆抗体，我们探索了一种快速灵敏的胶乳增强免疫比浊法（LTIA）测定LPL的方法。
实验使用生化分析仪器日立7700P进行检测，同时进行了ELISA平行实验来评价实验数据的可靠性。
结果通过稀释实验得到0.5-800ng/ml的校准曲线。
批内变异系数被控制在2.2-2.5%。
含有潜在干扰物质胆红素F和C以及血红素、甘油三酯、类风湿因子的样本未观察到干扰性。
LTIA与ELISA的结果具有很好的相关性（n=40，r=0.967，y=0.99x-1.86）。
肝素处理前的血清LPL正常参考范围值为50-77 ng/ml，肝素处理后血浆LPL正常参考范围值为354-410 ng/ml。
结论本文LTIA法既可用于测定肝素处理前的血清LPL值，也可用于测定肝素处理后血浆LPL值。
本方法与ELISA相比更为方便快捷，非常适合用于临床常规检查。
1前言LPL在脂类与脂蛋白的转运和代谢中发挥关键性作用[1，2]，此酶负责乳糜内甘油三酯（TG）和极低密度脂蛋白(VLDL)的水解，分别形成乳糜和极低密度脂蛋白的残渣。
血浆中LPL的常规检测方法是在静脉注射肝素后进行ELISA实验测定其活性和浓度。
据报道在肝素处理前血清LPL具有比较高的浓度（大约30-100ng/ml），但LPL活性无法检测到，表明大部分循环LPL没有催化活性，只是其受体的配体[3,6]。
肝素处理后血浆LPL的浓度与活性的测定已被用于临床LPL缺失的诊断[2]，但通常不能用于脂类代谢紊乱或心血管疾病风险性的诊断。
这是因为肝素的注射使LPL从血管内皮细胞分离出来，因此检测结果不能直接反映循环LPL的生理或病理浓度。
Brunzell等[7]和Ikeda等[8]等此前报道了运用特异性单克隆抗体的LPL-ELISA检测人血浆LPL的方法，在检测前需要给病人静脉注射肝素。
从检测时间和操作步骤角度考虑，ELISA法不适合在临床实验室进行大规模的常规检查。
因此，仍需要一种可靠、快速的自动化检测LPL的方法，且具有高灵敏度和校准稳定性，尤其是在肝素处理前血清LPL浓度的测定可能具有临床参考价值的情况下。
在过去数十年间Shirai及其同事以LPL-ELISA法检测了肝素处理前血清LPL的浓度，揭示了肝素处理前血清LPL浓度在心血管疾病和糖尿病中的临床意义[9-16]。
我们近期通过比对研究发现肝素处理前血清中LPL的浓度与肝素处理后的血浆中LPL的浓度可以替换[17]。
肝素处理前血清中LPL浓度的测定可以使用自动分析仪检测，不需要提前为病人注射肝素，在高甘油三酯病人的临床诊断方面的应用更具有可操作性。
由于肝素处理前血清中LPL的浓度足以用胶乳检测系统测定，我们使用胶乳颗粒固定化的LPL单克隆抗体，研究出了一种快速灵敏的胶乳增强免疫比浊法（LTIA）测定LPL的方法。
我们所使用的全自动生化分析仪是日立7700P。
我们以本方法和已商业化的ELISA试剂[18]对肝素注射（或未注射的）正常志愿者进行了检测，并将两种方法的检测结果做了相应比较。
2材料与方法2.1试剂聚苯乙烯胶乳颗粒购买自日本腾仓公司，胎牛血清白蛋白购买自Sigma公司。
干扰性试剂血红素、甘油三酯、类风湿因子和胆红素F、C购买自日本希森美康公司。
所有化学药品或试剂均是最高纯度级别。
2.2血液样品制备本研究选择了美国戴维斯加州大学相对比较健康的年轻志愿者（部分为超重或偏胖）进行检测。
男性19人，女性21人。
白种人25个，亚洲人5个，西班牙人4个，非裔美国人3个，其他人员3个。
平均年龄24岁，体质指数24。
这些志愿者均在注射肝素（50U/kg）后进行了LPL活性检测[19]。
加州大学戴维斯评审委员会批准了实验程序以及已签订书面同意书参与研究的受试者。
在日本天使大学（位于日本札幌）征集了240个健康志愿者（男性170人，女性70人。
平均年龄26岁，平均体质指数21.6），他们均有书面知情同意书，得到了大学伦理委员会的批准。
制备的血清用于测定精密度、灵敏度、交叉反应、稀释、回收实验和正常参考范围。
2.3抗LPL抗体的制备在免疫生物学实验室制备了抗人类重组LPL的抗体。
在小鼠腹水中取得抗LPL的单克隆抗体后，通过蛋白G琼脂糖（GE 医疗保健公司）分离两种球蛋白抗体的片段（57A5和88B8），用0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液（pH2.5）洗脱, 再用PBS缓冲液透析。
通过检测光密度估计抗体溶液中的蛋白浓度。
2.4胶乳颗粒固定的抗体试剂的制备参考他人的胶乳标记免疫检测试验[19]对试剂进行了优化。
聚苯乙烯胶乳珠子的直径和用于固定的抗体的量作了调整。
我们此前的研究证实胶乳颗粒的体积对于检测范围有重大影响，固定化抗体的使用量与检测的灵敏度相关。
为适合血清中LPL的范围，我们使用了0.3μm的胶乳颗粒。
聚苯乙烯胶乳珠子（100mg，平均直接0.2μm）悬浮在1ml 0.01mol/l HEPES缓冲液（pH7.0）中。
9ml抗体溶液（0.5mg/ml）与1ml 10%（重量/体积比）聚苯乙烯胶乳珠子悬浮液抚育在0.01mol/l HEPES缓冲液（pH7.0）中37℃1小时，然后以3:2的体积比在胶乳颗粒悬浮液中加入含有0.5%BSA的0.01mol/l的HEPES缓冲液。
1小时以后，洗固定了抗体的胶乳珠子两次并离心，然后用10ml 0.01mol/l的HEPES缓冲液（pH7.0）重悬，重悬后的抗体胶乳珠子放在4℃储存。
2.5校准品的制备用于室内LPL测定的校准品是在免疫生物学实验室（日本滕冈市）用仓鼠细胞（CHO）产生的重组LPL，溶解在Tris-HCL缓冲液（pH8.0）中。
为了评价我们的校准品，从积水医疗公司购买具有已知浓度的校准品作为对照。
2.6检测程序样品的加样与检测均由自动生化分析仪日立7700P（日立仪器工程公司）全自动完成。
检测程序很简单，4μl血清样品和160μl试剂1（0.01mol/l HEPES缓冲液, pH7.0）首先加入到比色皿中，37℃抚育5min，然后加入54μl试剂2（抗体固定化的胶乳珠子悬浮在0.01 mol/l HEPES缓冲液, pH7.0），启动免疫比浊反应。
5min后，根据在800nm主波长两个读数点（加入试剂2前、加入试剂2反应5min）之间的吸光度变化计算出LPL的浓度。
通过对6个校准品的反应检测获得了校准曲线并以此来计算血清中LPL的浓度。
使用LPL-ELISA试剂盒（积水医疗，东京）做了ELISA检测。
2.7统计学分析所有分析均由Dr. SPSS II软件包（SPSS公司）完成。
提供的数据是平均值、25%和75%的值，而不是平均值和标准差。
因为LPL的浓度不是正常分布的。
计算了LTIA和ELISA之间的皮尔森相关系数。
计算了LPL与甘油三酯(TG)、高密度胆固醇(HDL-C)、低密度胆固醇(LDL-C)、脂蛋白残粒胆固醇（RLP-C）、小而密低密度脂蛋白胆固醇(sd LDL-C)和载脂蛋白C III之间的单变量分析。
LPL与上述脂类参数的相关性通过斯皮尔曼（Spearman）相关系数进行评价。
P＜0.05认为具有统计学显著意义。
图1. LTIA的线性。
在生化分析仪日立7700P上检测了LPL的线性。
肝素处理前的血清（图1A）和肝素处理后血浆（图1B）LPL浓度的检测分别各用了一组校准品。
3.结果3.1线性以6个浓度梯度的重组LPL（0, 50, 100, 200, 400和800ng/ml）来拟合校准曲线。
用生理盐水稀释（最高达10倍）样本，每个稀释样本重复检测三次，评价其线性。
检测范围在0-200ng/ml和0-800ng/ml，与理论值的偏差未超过5%，说明平行性和线性良好（图1A和B）。
结果表明在低值（150 ng/ml）和高值（800ng/ml）范围均有比较好的线性。
表1批内精密度（对低值、中值和高值分别分析）为了评价LTIA的精密度，我们进行了重复实验（表1）。
收集的3组血浆等分到1.5ml的塑料管中-70℃冷冻保存。
校准后在一天内分析了三个样品10次。
如表1所示，32ng/ml的批内变异系数是5.5%，100 ng/ml 的批内变异系数是2.4%，280 ng/ml的批内变异系数是2.2%。
图2.以零校准加2.6 10次重复检测值的平均吸光度来估计检测限度（LPL concentration: LPL浓度；Dilution：稀释梯度；Theoretical value：理论值; average: 平均值）3.3低值检测限度图2显示，浓度估计值与10个重复结果的平均值基本一致。
本检测的最低限度是10.7ng/ml。
3.4污染我们在检测较高浓度的样本（400ng/ml）后检测生理盐水，在日立7700P未发现可检测到的LPL污染。
3.5血浆中LPL的稳定性新鲜的样本与4℃保存2天的样本或反复冻融的样本之间不存在显著差异，表明LPL具有很好的稳定性（详情未提供）。
这些检测结果与ELISA法[18]的检测结果一致。
3.6干扰性通过在血清样本中加入可能的干扰性物质并检测吸光度的变化来评价抗干扰能力（图3）。
我们研究了血红蛋白、甘油三酯（TG）、类风湿因子()和游离胆红素F、C对于LPL检测的影响。
高达200mg/L胆红素F、C未影响检测准确度。
5g/l的血红蛋白、1500FTU的甘油三酯和500IU/ml的类风湿因子也未影响检测准确度。
LPL回收实验偏差是初始浓度的10%以内（数据未提供）。
结果表明所添加的这些干扰性物质未对LPL的准确检测造成干扰。
图3. 干扰性测试。
（Unconjugated bilirubin非结合胆红素；conjugated bilirubin结合胆红素；Turbidity浊度；Hemoglobin血红素；Rheumatoid Factor类风湿因子）。
3.7 LTIA与ELISA的相关性为了对比LITIA与ELISA的结果，对肝素处理前的血清和肝素处理后的血浆都用两个不同范围的校准品进行了分析。
如图4A所示，回归统计计算方程（n=40）为y（LTIA）=0.845x(ELISA)+4.433，r =0.965。
如图4B所示，即使在相对比较高值的血浆中，LPL值在0-600ng/ml(n=40),相关性回归方程为y（LTIA）=0.871x(ELISA)+10.114，r =0.942。
