胶乳增强免疫比浊法测定肌钙蛋白Ⅰ

随着医学科学研究的进展， 原心肌损伤后以酶活性测定 的心肌酶谱因敏感性和特异性都相对较差， 在心肌诊断中已 不在应用和逐步停用［１］ 。应用以蛋白质量浓度的 ｃＴｎＩ 定量检 测， 是替代心肌酶谱的良好推荐指标。
川 至 生 物 工 程 有 限 公 司 引 进 加 拿 大 ｓｐｅｃｔｒａｌ 公 司 技 术 （ＦＤＡ 批准）生产的 ｃＴｎＩ 试剂盒。使用特异性抗体结合于胶乳 颗 粒 表 面 ， 标 本 与 胶 乳 颗 粒 在 缓 冲 液 中 混 合 ， 标 本 中 的 ｃＴｎＩ 胶乳颗粒表面结合， 使相邻的胶乳颗粒彼此相联。在波长 ６００ ｎｍ 附近测量溶液浊度增加， 其 增 加 的 程 度 与 标 本 中 的 ｃＴｎＩ 含量相关。 １ 材料和方法 １．１ 仪 器 ＯＬＹＭＰＵＳ ＡＵ６４０ 全 自 动 生 化 分 析 仪 ； ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ ＰＬＵＳ 自动生化分析仪。 １．２ ｃＴｎＩ 试 剂 盒 评 价 试 剂 由 川 至 生 物 工 程 有 限 公 司 提 供 。 ｃＴｎＩ 试剂主要成分： （１）胶乳试剂含结合特异性抗体的胶乳颗 粒 。 （２）反 应 缓 冲 液 含 增 敏 剂 和 表 面 活 性 剂 。 １．３ 测 定 样 本 （１）定 值 质 控 血 清（高 值 、低 值）由 川 至 生 物 工 程 有 限 公 司 提 供 。 （２）校 准 品 （不 同 浓 度 ）由 川 至 生 物 工 程 有 限 公司提供。（３）１４９ 例非相关人员血清标本和 １２７ 例已确诊心 肌梗死患者血清标本。 １．４ 方法 １．４．１ 操作方法 严格按照试剂盒设定参数设置和操作。 １．４．２ 评 价 方 法 按 照 ＮＣＣＬＳ 评 价 方 案 ， 对 试 剂 盒 的 精 密 度、线性、灵敏度 、回 收 试 验 、稳 定 性 、抗 干 扰 等 进 行 了 方 法 学 评价及临床评价。
２ 结果 ２．１ 精 密 度 试 验 取 高 低 值 质 控 血 清 ， 平 均 测 定 ２０ 次 ， 批 内 变 异 百 分 率 ， 质 控 １：Ｘ＝５．３ ＣＶ＝４．０％ ， 质 控 ２：Ｘ＝１６．７，ＣＶ＝１． ４％。对其连续测定 ２０ ｄ， 计算批间变异百分率。质控 １： ＣＶ＝４． ７％， 质控 ２ ：ＣＶ＝２．０％。 ２．２ 线 性 高 浓 度 ｃＴｎＩ 系 列 稀 释 ５ 个 浓 度 ， ５０ ｎｇ／ｍｌ、２５ ｎｇ／ｍｌ、１２．５ ｎｇ／ｍｌ、６．２５ ｎｇ／ｍｌ、３．１２ ｎｇ／ｍｌ， ５ 次重复测定， 采用 速 率 法 多 点 较 准 ， 多 参 数 曲 线 方 程（ ｌｏｇｉｔ／ｌｏｇ）拟 合 ， 线 性 范 围 达 ２５ ｎｇ／ｍｌ， （图 １）表明在测定范围内有良好线性。
表 １ 不同分布下的诊断界值
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２．８．３ 不 同 诊 断 界 值 的 临 床 诊 断 效 率 ５０ 例 确 诊 ＡＭＩ 病 人 和 １４９ 例对照标本（见表 ２）
表 ２ 不同诊断界值的临床诊断效率
２．８．４ ＲＯＣ 曲线（图 ２）。 ３ 讨论
近 １０ ａ 来临床实践证实， ｃＴｎＩ 是目前临床特异性和敏 感性最好的心肌损伤标志物， 已成为心肌组织损伤最重要的 诊断依据［１］ 。由于 ｃＴｎＩ 的测定方法有金标法， 但不能定量分 析， 放 射 免 疫 方 法 操 作 复 杂 ， ＥＬＩＳＡ 方 法 速 度 慢 ， 化 学 发 光 和 酶联荧光分析法价格昂贵， 需有专门仪器［３］ 。胶乳增强免疫比 浊法操作简单， 适用于绝大多数医院的自动生化分析仪使用，
图 １ ｃＴｎＩ 线性试验 ２．３ 回收试验 不含 ｃＴｎＩ 的血清中加入已知浓度的 ｃＴｎＩ 混 匀 ， ５ 次 重 复 测 定 ， 理 论 值 为 ４ ｎｇ／ｍｌ、９ ｎｇ／ｍｌ、２０ ｎｇ／ｍｌ， 实 测 为 ４．０ ｎｇ／ｍｌ、９．３ ｎｇ／ｍｌ、２０．８ ｎｇ／ｍｌ， 回 收 率 分 别 为 １００％ 、 １０３％、１０４％。 ２．４ 灵敏度 用 ０．００ ｎｇ／ｍｌ 的标准品重复测定 ２０ 次， 计算结 果为 Ｘ＝０．００６７，ＳＤ＝０．０１９， Ｘ＋２．５８ＳＤ＝０．１ ｎｇ／ｍｌ。 ２．５ 稳定性 ３７℃放置 ５ ｄ 后， 与 ４℃保存比较， ４℃吸光度为 ０．４６４３， ３７℃为 ０．４９４３， 相 对 误 差 ６．４６％， 测 定 值 变 化 ＜１０％， 试剂有良好稳定性。 ２．６ 抗干扰试验 在已知浓度的血清中， 加入下列物质： 人血 清 白 蛋 白 ３ ０００ ｍｇ／ｄｌ， 甘 油 三 酯 ２５ ｍｇ／ｄｌ， γ球 蛋 白 ５ ０００ ｍｇ／ｄｌ， 干扰 ＜１０％， 严重溶血和黄疸有负干扰。 ２．７ 抗凝剂及 ＶＣ 影响 在 １５ ｎｇ／ｍｌ 的血清中分别加入肝素 １２．５ Ｕ／ｍｌ、 枸 橼 酸 钠 ３．２ ｍｇ／ｍｌ、ＥＤＴＡ－Ｋ２３．２ ｍｇ／ｍｌ 和 ＶＣ５０
图 ２ ｃＴｎＩ ＲＯＣ 曲线 特别是对急诊能实现快速定量检测， 为 ＡＭＩ 的早期诊断提供 了重要的依据。本实验观察了川至公司开发的 ｃＴｎＩ 试剂盒， 结果显示其化学性能优良， 稳定性好， 临床评价效果满意。
临 床 应 用 ｃＴｎＩ 检 测 时 ， 确 定 ｃＴｎＩ 参 考 界 值 （第 ９９ 百 分 位值）十分重要［２］， 各实验室应根据条件确定各自的 ｃＴｎＩ 测定 方法的参考界值。国内外有关学术团体对疑为急性心肌损伤 时， 检测 ｃＴｎＩ 的标本采集时间的建议几近一致， ＜６０ ｍｉｎ 治疗 死亡率为 １％， ＞６ ｈ 治疗死亡率为 １０％～１２％［１］， 建议心肌 标 志物的检测从标 本 采 集 到 报 告 到 临 床 的 时 间 不 要 ＞１ ｈ， 本 方 法采血可用肝素或枸橼酸钠抗凝负压管， 以增快血液的分离 速度。 参考文献： ［１］ 王兰兰． 心肌标志物分类和临床应用［Ｊ］．国外医学生物化学与检
实用医技杂志 ２００７ 年 ７ 月第 １４ 卷第 ２１ 期（ 旬刊） ＪＰＭＴ ， Ｊｕｌｙ ． ２００７ ， Ｖｏｌ．１４ ， Ｎｏ ． ２１（Ｉｓｓｕｅｄ Ｅｖｅｒｙ Ｄａｙｓ）
ｍｇ／ｄｌ、１００ ｍｇ／ｄｌ 测 定 值 分 别 为 １４．３ ｎｇ／ｍｌ、１５．１ ｎｇ／ｍｌ、１３．２ ｎｇ／ｍｌ、１５．０ ｎｇ／ｍｌ 和 １５．２ ｎｇ／ｍｌ， 除 ＥＤＴＡ－Ｋ２ 负 干 扰 外 ， 其 余 均无影响。 ２．８ 临床评价 ２．８．１ 预期值 １４９ 例非相关人血清， 经本室测定 ９５％单侧分 布为 １．１ ｎｇ／ｍｌ， ９９％单侧分布为 １．７ ｎｇ／ｍｌ。 ２．８．２ 不同分布下的诊断界值（见表 １）。
验 学 分 册，２００４，２５：３８５－３８６． ［２］ 潘柏申 ． 心脏标志物的临床应用 ［ Ｊ ］． 中 华 检 验 杂 志， ２００５ ， ２８ ： １２４－１２６． ［３］ 王忠诚，沈钧乐，王 强，等．心肌肌钙蛋白 Ｉ 的检测方法及临床应
用 进 展［Ｊ］．国 外 医 学 生 物 化 学 与 检 验 学 分 册，２００４，２５：３０３－３０５． （收 稿 日 期：２００７－０５－２６）
［ 关键词］ 胶乳增强免疫比浊法；肌钙蛋白 Ｉ； 使用 ［中图分类号］ Ｒ４４６．６２ ［文献标识码］ Ｂ ［文章编号］ １６７１－５０９８（２００７）２１－２８３６－０２
在心肌细胞损伤早期， 游离于胞浆内的肌钙蛋白 Ｉ（ｃＴｎＩ） 快速释放 ， 血 清 ／ 血 浆 中 水 平 ４ ｈ～６ ｈ 升 高 ， ８ ｈ～１４ ｈ 达 高 峰， ７ ｄ～１４ ｄ 后降到正常 。 由 于 ｃＴｎＩ 升 高 具 有 诊 断 特 异 性 ， 且窗口期宽， 是回顾性检测的最佳指标。心肌梗死（ＡＭＩ）的早 期、快速诊断可为患者的治疗赢得宝贵的时间以挽救生命。 ｃＴｎＩ 被 美 国 心 脏 病 协 会（ＡＣＣ）和 欧 洲 心 脏 病 协 会（ＥＳＣ）一 致 评价是诊断 ＡＭＩ 的高特异性和高敏感性的确诊性标志物。
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实用医技杂志 ２００７ 年 ７ 月第 １４ 卷第 ２１ 期（ 旬刊） ＪＰＭＴ ， Ｊｕｌｙ ． ２００７ ， Ｖｏｌ．１４ ， Ｎｏ ． ２１（Ｉｓｓｕｅｄ Ｅｖｅｒｙ Ｄａｙｓ）
胶乳增强免疫比浊法测定肌钙蛋白Ⅰ
宋丽芳，张理华
（太钢总医院，山西 太原 ０３００００）
［摘 要］ 目的：通过对肌钙蛋白 Ｉ（ｃＴｎＩ）试剂盒的化学性能测定， 评价了 ｃＴｎＩ 测定方法的可靠性。方法： 用胶乳增 强免疫比浊的方法， 在 ＯＬＹＭＰＵＳ 和 ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ 全自动生化分析仪上对 ｃＴｎＩ 的精密度、线性、稳定性、回收试验、 灵敏度、抗干扰性等指标进行评价， 并进行了临床评价。结果： 本方法性能评价表明， ｃＴｎＩ 批内变异系数分别为 ４．０％ 和 １．４％， 批间变异系数分别为 ４．７％和 ２．０％。线性良好， γ２ １．００００， 回收 １００％～１０４％， 灵敏度 ０．１ ｎｇ／ｍｌ， ３７℃稳定性放 置 ５ ｄ 后与 ４℃比较， 相对误差 ＜１０％， 人血清白蛋白、甘油三酯、γ球蛋白均干扰 ＜１０％， 严重溶血和黄疸造成负干扰， 抗凝剂 ＥＤＴＡ－Ｋ２ 有负干扰， 其余抗凝剂及 ＶＣ 无干扰。临床评价预期值 １４９ 例非相关人样本测定， ９９％单侧 １．７ ｎｇ／ｍｌ， 敏 感 性 ８６％， 特 异 性 ９９％， 临 床 符 合 率 ９６％。 临 床 评 价 预 期 值 １００ 例 非 相 关 人 血 清 测 定 ， ９５％单 侧 ５７ ｎｇ／ｍｌ， 敏 感 性 ９６．１％， 特异性 ９３．０％， 临床符合率 ９４．７％。结论： 本方法所测结果准确可靠， 且操作简便、快速， 直接在自动生化分析仪 上使用， 值得推广。
Ｈｓ－ＣＲＰ 检测在脑梗死诊断中的应用
武惠萍 （长治市人民医院，山西 长治 ０４ 反应蛋白（ ｈｓ－ＣＲＰ） 检测对脑梗死的诊断价值。方法： 对 ６０ 例脑梗死患者和 ２５ 例健 康对照者进行血清 ｈｓ－ＣＲＰ 的测定、分析， 比较两组中 ｈｓ－ＣＲＰ 的差别， 分析 ｈｓ－ＣＲＰ 在诊断脑梗死疾病中应用价值。结 果：脑梗死患者血清 ｈｓ－ＣＲＰ 浓度显著高于对照组（ Ｐ＜０．０１） 。结论：应用 ｈｓ－ＣＲＰ 检测有助于脑梗死的早期诊断。
（ ｈｓ－ＣＲＰ） 作为慢性 炎 症 的 一 种 重 要 的 ， 较 新 的 标 志 物 引 起 人 们的关注， 并已得到实验室的证实， 本研究通过实验分析 ｈｓ－ＣＲＰ 与 ＣＩ 的 内 在 联 系 ， 对 ＣＩ 患 者 与 健 康 对 照 者 的 血 清 ｈｓ－ＣＲＰ 指标进行分析，以探讨 ｈｓ－ＣＲＰ 的临床应用价值。 １ 材料和方法