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纯化线粒体呼吸控制率RCR定量检测试剂盒说明书

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活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
活体细胞线粒体跟踪试剂盒 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒
全血线粒体 DNA 萃取试剂盒 纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织基因组/线粒体 DNA 同步萃取试剂盒 动物血小板线粒体 DNA 萃取试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒 植物线粒体 DNA 萃取试剂盒 动物硬组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 非突触体脑组织线粒体分离试剂盒 植物线粒体粗提分离试剂盒 植物活性线粒体分离试剂盒 植物高质纯化线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒 真菌/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒 细胞 ATP 生物发光法定量检测试剂盒 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 动物血小板线粒体粗提分离试剂盒 动物血小板活性线粒体分离试剂盒 动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒 动物全血线粒体粗提分离试剂盒 动物全血活性线粒体分离试剂盒 动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 线粒体超氧化物歧化酶（Mn/Fe SOD）分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 细胞/组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 植物线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒
技术背景
线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。线粒体结构完 整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其 耗氧率大，为III态呼吸。ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。 呼 吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP） 的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容
GENMED 介质液（Reagent A） GENMED IV 态底物液（Reagent B） GENMED III 态底物液（Reagent C） 产品说明书
XX 毫升 XX 微升 XX 微升
1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，有效保证 6 月
用户自备
CLARK 氧电极仪：用于测定溶解氧浓度
产品编号 GMS10006.1 GMS10006.2 GMS10006.3 GMS10006.4.1 GMS10006.4.2 GMS10006.4.3 GMS10013.1 GMS10013.2 GMS10013.3 GMS10013.4 GMS10014.1 GMS10014.2 GMS10014.3 GMS10014.4 GMS10014.5 GMS10014.6 GMS10015 GMS10016.1 GMS10016.2 GMS10016.3 GMS10016.4 GMS10016.5 GMS10016.6 GMS10067.1 GMS10067.2 GMS10067.3 GMS10111.1 GMS10111.2 GMS10104.1 GMS10104.2 GMS10104.3 GMS10104.4
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS10097 v.A
GENMED 纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
GENMED 纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在 ADP 存在（III 态呼吸）与否（IV 态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen） 的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体生理功能和药物作用机 制等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
4
GMS30034.6 GMS50005 GMS50006 GMS50007
GMS50008 GMS50009
GMS50010
GMS50083
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
2

订购信息
编号 GMS10097 GMS10097A GMS10097B GMS10097C GMS10098
名称 GENMED 纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒 GENMED 介质液（Reagent A） GENMED IV 态底物液（Reagent B） GENMED III 态底物液（Reagent C） GENMED 纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂盒
开始 III 态呼吸（注意：参见注意事项 9） 9． 持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点 10．分别测算 III 态呼吸速率和 IV 态呼吸速率： 11．计算呼吸控制率：
注意事项
1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入 4． 线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用 GENMED 线
3
GMS10104.5 GMS10104.6 GMS10017.1 GMS10017.2 GMS10017.3 GMS10018 GMS10019.1 GMS10019.2 GMS10019.3 GMS10020.1 GMS10020.2 GMS20023.2 GMS20023.1 GMS20023.3 GMS20023.4 GMS20023.5 GMS20023.6 GMS20023.7 GMS20023.8 GMS10047 GMS10048.1 GMS10048.2 GMS10048.3 GMS10049.1 GMS10049.2 GMS10049.3 GMS10050 GMS10059 GMS10062.1 GMS10062.2 GMS10062.3 GMS10099.1 GMS10099.2 GMS10099.3 GMS50001 GMS50003.2 GMS50004 GMS30034.1 GMS30034.2 GMS30034.3 GMS30034.4 GMS30034.5
20 次 20 次 20/200 次 20/200 次 20/200 次 20 次 100 次 100 次 100 次 100 次 20 次 10/20 次 20 次 20 次 10/20 次 10/20 次 10/20 次 10/20 次 10/20 次 10 次 10 次 10 次 10 次 10 次 10 次 10 次 50 次 20 次 10 次 10 次 10 次 10 次 10 次 10 次 50 次 50 次 5次 20 次 20 次 20 次 20 次 20 次
实验步骤
实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到 25℃。然后进行下列操作。
1． 加入 XX 毫升 GENMED 介质液（Reagent A）到反应玻璃槽 2． 使用微型磁力子搅拌，充分混匀 3． 密封反应槽
1
4． 开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为 0.240 微摩尔分子氧/毫升（25℃） 5． 持续记录 XX 分钟后，注射加入 XX 微升待测的线粒体（总量 XX 毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加 XX
膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒
活体细胞线粒体损伤/氧化（NAO）荧光测定试剂盒 纯化线粒体损伤/氧化（NAO）荧光测定试剂盒
真菌/酵母细胞线粒体损伤/氧化（NAO）荧光测定试剂盒 纯化线粒体溶解试剂盒
％） 6． 持续记录 XX 分钟后，注射加入 XX 微升 GENMED IV 态底物液（Reagent B）――开始 IV 态呼吸（注意：
参见注意事项 9） 7． 持续记录 XX 分钟：出现氧浓度缓慢下降 8． 继续注射加入 XX 微升 GENMED III 态底物液（Reagent C）（注意：氧浓度在 XX 秒钟内开始下滑）――
线粒体外膜功能检测试剂盒 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 细胞/组织悬液细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒
纯化细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 真菌/酵母细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒
植物细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒 线粒体功能詹纳斯绿 B（JGB）染色试剂盒 细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 活体细胞氧化应激活性氧（ROS）染色试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）染色试剂盒 活体细胞氧化应激活性氧（ROS）比色法定量检测试剂盒 细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒 冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒 纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒 膜电位依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒 呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒
名称 动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒 动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒 动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒

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线粒体复合体Ⅳ试剂盒说明书

线粒体复合体Ⅳ试剂盒说明书

货号: QS3303 规格：25管/24样线粒体复合体Ⅳ试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧，生成水。

测定原理：还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；试剂二： 5mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；试剂四：液体10mL×2瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×2支，-20℃保存；试剂六：粉剂×2支，-20℃保存；样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：①准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

②将匀浆600g，4℃离心5min。

③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。

④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做）。

⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅳ酶活性测定。

测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（1）工作液的配制：临用前取试剂四、试剂五、试剂六各一支，将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（2）将工作液置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；（3）在1mL玻璃比色皿中加入80μL样本和800μL工作液，混匀，记录550nm处初始吸光值A1和 37℃反应30min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒

呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒

注意事项
1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 孵育时，须避免光照 4． 建议染色完成后，即刻进行荧光分析 5． 本公司提供膜电位依赖性活性氧检测试剂产品 6． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定荧光清晰
产品内容
缓冲液（Reagent A） 选择液（Reagent B） 补充液（Reagent C） 染色液（ Reagent D） 产品说明书
毫升 微升 毫升 微升 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，染色液（Reagent D），严格避免光照； 有：用于染色孵育 （共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷 氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等 细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二 氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是 取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全 自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧 化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。三氟甲氧基苯腙羧基氰化物（carbonyl cyanide 4-trifluoromethoxy henylhydrazone；FCCP）使线粒体膜化学离子梯度消失。
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书

GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书

次 50 次
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GMS10016.6 GMS10016.7 GMS10016.8 GMS10067.1 GMS10067.2 GMS10067.3 GMS10111.1 GMS10111.2 GMS10104.1 GMS10104.2
GMS10104.3
GMS10104.4
GMS10104.5
GMS10104.6
3． 移取
微升 GENMED 缓冲液（Reagent A）到新的 1 毫升比色杯
4． 加入
微升 GENMED 稀释液（Reagent C）
5． 放入分光光度仪，置零
6． 取出比色杯，加入
微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED
11．上下倾倒数次，混匀
12．放入分光光度仪，置零
13．取出比色杯，加入
微升含有 GENMED 反应液（Reagent B）和 GENMED 稳定液（Reagent D）的 GENMED
反应工作液
14．即刻上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
15．即刻放入分光光度仪检测，此为样品读数（0 秒读数－60 秒读数），通常活性读数差值为正数
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A
GMS10014.2 v.A
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
GENMED 纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过测定纯化的可溶性完整线粒体样品 中的细胞色素 C 氧化酶的活性，即采用比色法测定受到细胞色素 C 氧化酶催化的氧化反应的权威而经典的 技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体（动物、人体、植物、 昆虫等）细胞色素 C 氧化酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作简捷，性能稳定。
植物线粒体粗提分离试剂盒产品说明书(中文版)

植物线粒体粗提分离试剂盒产品说明书(中文版)

植物线粒体粗提分离试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物线粒体粗提分离试剂是一种旨在从植物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。

该技术经过精心研制、成功实验证明的。

适合于各种新鲜植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）、以及培养细胞的线粒体的制备。

其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。

产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度堪称国际同类产品最佳。

技术背景线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的最常用的手段之一。

从任何组织或细胞分离线粒体的技术方法基本上采用：第一，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。

产品内容清理液（Reagent A）毫升裂解液（Reagent B）毫升净化液（Reagent C）毫升强化液（Reagent D）毫升保存液（Reagent E）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月用户自备15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放50毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗的容器1.5毫升离心管：用于保存线粒体的容器4℃台式离心机：用于沉淀细胞4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞实验步骤一、植物组织线粒体分离（组织匀浆法）实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent C）冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，置入冰槽里备用。

然后进行下列操作。

1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次4．即刻用刀片切碎组织5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管6．加入预冷的xx毫升裂解工作液7．涡旋震荡5秒，充分混匀8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆帮匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项9）9．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管，放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为1500g 10．小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管（如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为3000g）——此步骤去除细胞壁、淀粉颗粒、细胞核和未溶解的细胞以及完整质体等残渣11．放进4℃超速离心机离心10分钟，速度为10000g12．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物13．（选择步骤）加入预冷的xx毫升保存液（Reagent E）14．（选择步骤）放进4℃超速离心机再次离心5分钟，速度为10000g15．（选择步骤）小心抽去上清液16．加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混匀17．即刻移入1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里二、植物组织线粒体分离（化学处理法）实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent C）冻融，然后移出xx毫升净化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升锥形离心管里，混匀后，标记为裂解工作液，置入冰槽里备用。