蛇毒类凝血酶研究进展

毒蛇咬伤致弥散性血管内凝血（DIC）的发病机制和诊治弥散性血管内凝血(Disseminated Intravascular Coagulation，简称DIC)是毒蛇咬伤常见的一种合并症，发生率高达24. 3%。

毒蛇咬伤引起的DIC主要是急性DIC。

目前已知我国的五步蛇、蝰蛇、眼镜王蛇、眼镜蛇、蝮蛇、竹叶青、烙铁头等毒蛇咬伤可引起DIC，其中以五步蛇、蝰蛇咬伤的D1C发生率最高，分别为该种蛇伤的81. 08%和63. 65%。

近年研究表明，蝰蛇咬伤的DIC与传统的DIC 不同，被认为是一种特殊类型的DIC;五步蛇咬伤引起的DIC大多数属类DIC。

一、发病机制蛇伤DIC的发病机制主要是凝血机制的紊乱。

毒蛇咬伤后血管内促凝物质的出现使血液凝血系统被激活，血管内弥散性微血栓形成继发凝血因子和血小板大量被消耗，以及纤溶系统被激活，纤维蛋白溶解亢进，引起出血、微循环障碍等一系列获得性出血综合征。

(一）蛇毒促凝物质毒蛇咬伤后，体内可出现两种促凝物质，一种是蛇毒直接促凝物质，另一种是蛇毒间接促凝物质。

1.蛇毒直接促凝物质(1)蛇毒类凝血酶样物:早在19世纪后期,就有报道蝮亚科蛇毒中含有类凝血酶的证据，到现在已从蝮亚科响尾蛇属、蝮属、矛头蝮属及烙铁头属二十多种蛇毒中找到类凝血酶，其中有近十余种蛇毒类凝血酶已被分离纯化，近年来又在蝰亚科沙蝰科加蓬咝蝰蛇毒发现了类凝血酶。

从我国的五步蛇、蝮蛇(长白山白眉蝮蛇、蛇岛蝮蛇、江浙蝮蛇）、竹叶青、烙铁头蛇毒中也分离出类凝血酶。

蛇毒类凝血酶目前研究得很深入，由于它对血液系统的特殊作用而倍受重视。

这种蛇毒酶直接作用于纤维蛋白原，使血液或纯化的纤维蛋白原在试管中凝结，因为它催化纤维蛋白原分子中特定部位Arg—Gly肽键的裂解，释出血纤肽而转化为纤维蛋白，其作用与血浆凝血酶十分相似，由此而得名。

蛇毒类凝血酶和血浆凝血酶都是分子量30 000左右的糖蛋白，都可被二异丙基氟磷酯(DFP)所抑制，因而属Ser蛋白酶。

作用；（３）诱导 细 胞 凋 亡。 目 前 在 尖 吻 蝮 蛇 毒 中 也 发 现 有 抗 癌 成 分 。段 涛 等 从 ［２０］ 广 西 尖 吻 蝮 蛇 毒 中 分 离 出 一 细 胞 毒 素
Ｉ３－Ｈ３，对体外 培 养 的 人 肺 癌 细 胞 株 （Ａ５４９）、人 胃 癌 细 胞 株 （ＢＧＣ）和人鼻咽癌细胞株（ＫＢ）有 较 强 抑 制 和 杀 伤 作 用。 章 良等 从 ［２１］ 皖南尖吻蝮 蛇 毒 中 分 离 出 两 种 抗 癌 成 分 ＡＣＴＸ－６ 和 ＡＣＴＸ－８，对 人 肺 癌 细 胞 株 （Ａ５４９）最 敏 感，且 热 稳 定 性 较 好 。雷 丹 青 等 从 ［２２］ 尖 吻 蝮 蛇 毒 中 分 离 出 一 种 小 分 子 多 肽 Ｋ 组分，具有抑制鸡 胚 尿 囊 膜 血 管 生 成 的 作 用，有 可 能 成 为 抗 肿 瘤 血 管 增 生 的 活 性 多 肽 。李 映 新 等 研 ［２３］ 究 该 Ｋ 组 分 对 体
溶 酶 ，为 纤 溶 酶 的 临 床 应 用 提 供 了 技 术 支 持 。 周 先 丽 通 ［１８］ 过实验证明，尖吻蝮蛇毒类凝血酶和 纤 溶 酶 均 具 有 明 显 的 溶 栓作用，但是溶栓 的 强 弱 有 别，纤 溶 酶 的 直 接 作 用 强 于 类 凝
毒中分离出２个促凝血成分，并对 动 物 创 伤 性 出 血 具 有 较 好 血酶，因此类凝血酶是一缓慢溶栓 剂，使 血 管 再 通 为 渐 进 性，
［７］ 李王娜，许云 禄．蛇 毒 中 的 抗 血 栓 物 质 ［Ｊ］．海 峡 药 学，２００６，１８ （４）：１４－１６．
［８］ Ａｔｏｄａ Ｈ．Ｍｏｒｉｔａ Ｔ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｂｌｏｏｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ⅸ／ｆａｃｔｏｒ Ⅹ－ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｃｏａｇａｌａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｖｅｎｏｍ ｏｆ Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｆｌａｖｏｖｉｒｉｄｌｓ（ｈａｂｕ ｓｎａｋｅ）：ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃ－ ｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ ＢＬｏｃｈｅｍ，１９８９，１０６（５）：８０８－８１３．

蛇毒类凝血酶“苏灵”的医药学地位和市场推广初步方略一、凝血酶的医药学地位正常的止血步骤可分为两个阶段。

首先是初步止血，指在微血管和小血管破裂后立即发生的止血。

包括血管的反应性收缩，血小板在VWF存在下粘附于血管内皮下暴露的胶原组织，形成白色血栓；第二步止血是凝血机制参与，以凝血酶形成为中心，以纤维蛋白形成而告终的过程，最后产物是牢固的红色血栓堵住了伤口达到止血目的。

近年来凝血系统的研究获得了较快进展。

虽然凝血过程反应仍以瀑布学说为骨架，即一个凝血因子以另一个凝血因子为底物的连锁反应。

但近年来对这方面添补了许多内容。

现在是以多成份酶复合物为单位来研究凝血反应，通过阐明凝血蛋白酶及其辅因子的结构和功能，更新了许多概念。

经典的内源与外源凝血活化途径之间的内在关系不断发现，已不能将凝血机制简单地理解为内源和外源两个系统。

凝血酶是凝血瀑布中心反应的产物，在凝血酶原酶催化下，凝血酶原转变成凝血酶。

一旦生成后其作用广泛①使纤维蛋白原转变成纤维蛋白；②反馈激活因子Ⅴ、Ⅷ；③刺激血小板促凝活性；④加速放大瀑布反应等。

凝血酶使纤维蛋白原转变成纤维蛋白是凝血反应的最后阶段。

纤维蛋白是止血栓最主要的结构网架。

分三步合成。

①首先是纤维蛋白单体的形成，纤维蛋白原释放纤维蛋白肽A 和肽B后转变成纤维蛋白单体；②纤维蛋白单体的集合及间质结构形成；③交联纤维蛋白凝块的形成。

上述第二步产物是可溶性纤维蛋白凝块，再在因子ⅩⅢ作用下加钙离子后其γ链发生交联反应，共价键形成，就成为坚固的交联纤维蛋白凝块。

二、苏灵的医药学地位康辰公司在对蛇毒类凝血酶成分的长期研究中，从我国特有的尖吻蝮蛇毒中分离和纯化出一种高纯度血凝酶，商品名为“苏灵”。

苏灵是康辰公司独立研制并具有自主知识产权的全新结构的血凝酶类药物，是我国第一个采用先进分离纯化技术提取的单一组分血凝酶。

经Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期共计682例的临床研究结果显示：苏灵在外科手术中具有良好的止血效果，且无激活内源性凝血系统所致的潜在不良反应。

其中m/z 23523.6质谱峰为纤溶酶的[M+H]+ 峰，m/z 11752.9和m/z 47125.1分别为纤 溶酶双电荷峰及二聚体峰。 此外，还测到该酶一系列多聚体的存在。 测定的纤溶酶的精确分子量为29485.0士 15Da。



纤溶酶分子中的6个Cys残基均以二硫键的 形式存在，按序列相似的原则，推测： 纤溶酶的二级结构中含有4%一螺旋， 39.5%的β一结构，分子内缺少天冬酰胺连 接的糖化位点。 借助序列分析的方法，推断分子内部有一 个结合锌离子的活性中心，即所谓的“催 化性”锌结合位点，它位于一螺旋上，锌 原子的丧失几乎可导致分子螺旋结构的完 全消失，进一步证明了这一点。

蛇毒纤溶酶除降解纤维蛋白原和纤维蛋白很好的底物
专一性，这一特性使蛇毒纤溶酶具有较好
的安全性。蛇毒纤溶酶的另一特性是其热
稳定性较高。

从蝮蛇蛇毒中纯化的纤溶酶，在pH4一U范
围内95℃加热20分钟，对其活性没有很大
影响闷，这种对底物的专一性和对热的稳
2.分子结构


蛇毒纤溶酶是一组分子结构非常复杂的酶 类。按酶学特性可大致分为两大类:一类为 单链的锌金属蛋白酶;另一类为单链或双链 结构的丝氨酸蛋白酶。 与血纤溶酶不同，蛇毒纤溶酶不存在无活 性的酶原形式，因此不需要活化剂的活化。 分子量自22000至58000不等。


从江浙蝮蛇蛇毒中提取的纤溶酶属于锌金 属蛋白酶，具有纤溶活性，无出血毒活性。 是一条由203个氨基酸残基组成的多肽链。 用LDI一1700激光解吸电离飞行时间质谱仪 (从激光波长337nm，脉冲宽度3ns，真空度 1.3X10-3Pa，加速电压30kV，吸引电压 9.3kV，检测器电压一4.75kV，质谱信号单 次扫描累加50次，正离子谱测定见附图。

［12 ］
尾聚合而凝固， 所以这类酶被称为类血凝酶 （ thrombin尖吻蝮蛇血凝酶系尖吻蝮蛇蛇毒中发现一种新的 具有止血作用的活性组分分离纯化而来， 是迄今为止 我国上市产品中唯一完成全部氨基酸测序的单一组分 的蛇毒血凝酶类药物
［6 ］
1 岁以内先天性心 研究显示，
脏病患儿的凝血纤溶系统功能处于正常低限， 认为先 天性心脏病患儿凝血功能储备较差， 因此手术止血成 为手术成功的一个关键步骤， 合理应用止血药成为有 效的治疗手段。章征兵等
［11 ］
， 有精氨酸酯酶活性， 能直接作用于纤维蛋白原释
［5 ］
尖吻蝮蛇血凝酶在妇科手术中应用的安全性及
放血纤肽 A（ FpA） 或 B （ FpB ） like enzymes， TLEs） 。
， 导致纤维蛋白单体首
有效性研究结论相一致。 先天性心脏病患儿凝血状况与健康儿之间存在明 Haizinger 等 显的差异，
［3 ］ 纤维肽 B 肽形成维蛋白原（ ar2 ） 而凝血 。纤维肽 A、
是 a 及 链的 N端的一段 16 个和 14 个氨基酸组成的 凝血酶 或 类 血 凝 酶 的 作 用 就 是 切 除 这 两 个 肽 小肽，
Antropol， 2007 ， 31 （ 1 ） ： 285289．
参考文献：
［4 ］
单体（ aBr） 2 ， 并以非共价交联的形式聚合成易溶的纤 维蛋白多聚体， 从而发挥止血作用。 与其他传统同类 HCA 只含单一类凝血酶成分 制剂不同的是，
［7 ］
， 不含
而目前临常用的蛇毒类血凝酶制 凝血因子 Xa（ FXa） ， 剂都未能分离去除 FXa。 FXa 在凝血酶的产生及形成 过程中起决定性的作用， 它是凝血瀑布效应的放大器， 过度放大有诱发血栓形成的危险。HCA 不含凝血因子 Xa， 从其凝血机制上减少了在用药过程中发生血栓不 良反应的几率。 HCA 用于凝血的另一个优势在于 HCA 在不激活 FX Ⅲ ） 的情况下， 凝血因子 XⅢ（ coagulation factorX Ⅲ， 在血管内作用产生较高浓度的可溶性纤维蛋白， 从而 使伤口部位加速止血但不会进一步使纤维蛋白聚体再 交联形成不溶性纤维蛋白络合物， 因而在正常的血管 内不会造成血栓形成。因此可以说是一个优良的体内 外止血药物。 3 尖吻蝮蛇血凝酶的止血效果 韦军民等

生物技术世界 ２０１２年第１期 总第５０期4１ 血凝酶的发现及其发展进程：1936年科学家从柳叶蝰蛇蛇毒中提取、精制了一种可缩短凝血时间的酶，取名为Coagulase ，翻译为血凝酶或巴曲酶，在人体内有类似凝血酶的效果，因此又称类凝血酶。

而正式被批准销售并在临床研究中被公认在止血方面有长效、安全、快速特点的是瑞士素高药厂从巴西矛头蝮蛇毒中提取的多肽单链类血凝酶止血剂，我国研发的酶类止血酶包括已上市的来源于长白山白眉蝮蛇的注射用白眉蝮蛇毒血凝酶(商品名:邦亭)，与尖吻蝮蛇血凝酶（HCA)。

２ 血凝酶的主要组分及其作用：主要对巴西矛头蝮毒液提取的血凝酶和中国白眉蝮蛇血凝酶进行分析，前者由巴曲酶和Ⅹ因子激活剂(FAX)，其中的巴曲酶是相对分子量为39000～43000的单链糖蛋白，FAX 相对分子量为79000±5000，含量只有0.5%，而后者由3种组分构成，相对分子量分别为54000士5000，34000±5000和15000士3000，并且相对百分含量为7.0%～12.0%，76.0%～82.0%，7.0%～12.0%，是蛇毒血凝酶研究进展和在临床应用安全性评价潘梦 王凯英（西南交通大学生命科学与工程学院 四川 成都 ６１１７５６）摘要：主要通过介绍在各临床领域血凝酶的最新使用进展，，并在相关药理和组成略作介绍和对其主要安全性进行评价，以展示蛇毒血凝酶在创伤和内部出血方面的成效，并在生物信息学和基因克隆方面稍做陈述和展望。

关键词：血凝酶　临床应用　安全性　巴曲酶作者简介：潘梦垚；　性别：男；　出生年月：１９９０年０８月；籍贯：浙江新昌；学历：本科　；　职称：无；　研究方向：生物工程。

王凯英；性别：女；出生年月：１９９０年０７月；籍贯：浙江余杭；学历：本科；职称：无；研究方向：生物信息学。

由类凝血酶和类凝血激酶组成[1]。

作用机理：(1)血凝酶能促使纤维蛋白原(Fg)A α链上的Arg16-Gly17链处降解，释放出纤维蛋白肽A （FPA ），产生不稳定可溶性纤维蛋白Ⅰ单体(FIm);（2）并在酶持续作用下，FIm 聚合成纤维蛋白Ⅰ多聚体(FIp)，后者能促使血管破损处血小板聚集，加快血小板止血栓形成；（3）在血管破损处的生理性止血过程中形成凝血酶的作用下，FIm 迅速降解，释放出FPB ，从而生成F Ⅱm ，后者在凝血因子ⅩⅢa 和Ca 2+作用下交联形成难溶性的纤维蛋白丝，并成网，网罗血浆血细胞覆盖并加固接而形成血小板止血栓，起到止血作用。

蛇毒血凝酶导致纤维蛋白原下降文献分析摘要：目的探究蛇毒血凝酶导致纤维蛋白原下降的临床特点，为临床安全用药提供依据。

方法检索Pubmed、中国知网及万方数据库的国内外文献，对蛇毒血凝酶导致纤维蛋白原下降的病例报道进行整理整理分析。

结果纳入目标文献16篇，患者28人。

经系统治疗均预后良好。

结论临床使用蛇毒血凝酶应重视纤维蛋白原下降，加强用药监护。

关键词：蛇毒血凝酶；低纤维蛋白原血症；不良反应Literature analysis of hypofibrinogenemia cased by hemocoagulase Abstract: Objective：To explore the clinical characteristics of fibrinogen decrease caused by snake venom hemagglutination enzyme, and to provide evidence for clinical safe drug use. Methods：The domestic and foreign literatures of Pubmed, CNKI and Wanfang database were searched, and the case reports of fibrinogen reduction caused by snake venom hemagglutination enzyme were sorted and analyzed. Results：Sixteen target literatures were included, with 28 patients. After systematic treatment, the prognosis was good. Conclusion： The clinical use of snake venom hemocoagulase should pay attention to the decrease of fibrinogen and strengthen the monitoring of drug use.Key words：Hemocoagulase；Hypofibrinogenemia；Adverse reaction;蛇毒血凝酶在临床中广泛用于创伤、出血性疾病及预防术后出血，不良反应发生率低。

蛇 毒类凝血酶 主要 存在 于蝮亚科 ，且不 同地 区的 蝮蛇类凝血酶有较大 区别 ，见表 １。
表 １ 不 同地 区同类 型凝血酶 的区别
蛇毒 来 源
类凝血酶名称 纤维蛋白释牧方式 分子量（１（Ｄ１
大部 分蛇 毒类凝 血酶 的分子量 在 ３０ｋＤ～４５ｋＤ之 间 ，少 数 较 大 ，如 美 洲 矛头 蝮 的 Ｂｏｔｒｏｍｂｉｎ分 子量 为 ７１ｋＤ。与凝血 酶的二硫键连接 的双链结构不 同 ，蛇毒 类凝 血酶 均 由一条 链组 成 。绝 大多数 蛇 毒类凝 血酶 肽 链 中都含有 １２个～１３个半胱氨酸残基 ，有六条二硫 键［４１。除了来 自黄绿 烙铁 头（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓ ｆ ｌａｖｏｖｉｒｉｄｉｓ） 的ｆ ｌａｖｏｘｏｂｉｎ和来 自角蝰 （Ｃｅｒａｓｔｅｓ ｖｉｐｅｒａ）的 Ｖｉｐｅｒａｂｉｎ 不含糖外 ，几乎 所有的蛇毒类凝血酶都是糖蛋 白，且多 呈 酸性 。与凝血酶 不同 ，蛇毒类凝 血酶寡糖链 多与天 冬酰胺连接 ，而不是 与丝 氨酸连接［５１。
维普资讯
综 述
蛇毒 类凝血酶 的研 究现状
陈小飞，马海泉 ，赵冠人（解放军总医院第二附属医院药剂科，北京，１０００９１）
摘要 在 ４０余种含有类凝血酶成 分的蛇毒 中，已有 １０余种蛇毒 类凝血 酶的全部或 部分氨 基酸序 列得到 明确 ，并有 ２０余种先
由于蛇毒资源 比较有限 ，提纯工艺相对 复杂 ，从 蛇 毒液 中提取天然蛇毒类凝 血酶不仅产量不大 ，而且纯 度 难 以保证 ，因此 ，以基 因工 程技术 生产类 凝血 酶成 为近期研究的重点㈣。１９９１年 ，Ｍａｅｄａ等人工合成 了矛 头蝮蛇（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ ａｔｒｏｘ Ｍｏｏｊｅｎｉ）类凝血酶 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ的 成熟蛋 白基 因 ，在大肠杆 菌 中表达 ，采 用含 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 基因的融合基 因表达质粒 ｐＢａｔ—ＳＳ４９，在 Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢＩＯ１— １６表达 出含 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ的融合 蛋 白，产 物以包涵体 的 形式存在 ，再经纯化 、酶切 、重折叠 ，可得到具有一定生 物 活性 的 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ，但活 性较 低 （６０％左右 ）…１。Ｙｏｕ ＷＫ等 用 ＰＣＲ将 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ的 ｃＤＮＡ扩增 产物转入 Ｐ． ｐａｓｔｏｒｉｓ表达载体 ｐＰＩＣ９，再经 Ｓａｉｌ限制酶消化后 ，转化 宿 主细胞 ＧＳ１ １５。经实 验证 明这种重 组 的 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ 在体外具有 比天然 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ更 高的生 物活性 。体 内 应用时缩短凝血时 间（ＣＴ）、出血 时间（ＢＴ）的作用也 比 天然 Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ略强ｌｌ２１。

蛇毒降纤酶的研究进展陈艳坤【摘要】@@ 自Konig和Klobusitz在1936年第一次从矛头蝮蛇蛇毒中提取部分纯化的类凝血酶开始,目前发现30余种蛇毒酶类,包括类凝血酶、纤溶酶、水解蛋白酶、精氨酸酶、磷酸二脂酶等[1].其中研究最深入、临床应用最广泛的则是类凝血酶(thrombin-like enzyme,TLE),并由中国卫生部命名为降纤酶(defibrase)[2].其一部分已作为生化药品(如安克洛酶、巴曲酶、东菱克栓酶等)上市并应用于临床.【期刊名称】《西南国防医药》【年(卷),期】2012(022)002【总页数】3页(P223-225)【关键词】降纤酶;蛇毒;类凝血酶;药理机制;临床应用【作者】陈艳坤【作者单位】650032,昆明,成都军区昆明总医院神经内科;昆明医学院研究生部【正文语种】中文【中图分类】Q556;R543自Konig和Klobusitz在1936年第一次从矛头蝮蛇蛇毒中提取部分纯化的类凝血酶开始，目前发现30余种蛇毒酶类，包括类凝血酶、纤溶酶、水解蛋白酶、精氨酸酶、磷酸二脂酶等〔1〕。

其中研究最深入、临床应用最广泛的则是类凝血酶(thrombin-like enzyme,TLE)，并由中国卫生部命名为降纤酶(defibrase)〔2〕。

其一部分已作为生化药品(如安克洛酶、巴曲酶、东菱克栓酶等)上市并应用于临床。

1 降纤酶的药理机制及主要作用1.1 抑制梗死灶周围小血管内血栓形成或溶解微血管内血栓，建立有效侧支循环TLE在人体内不激活凝血因子Ⅻ，而是先裂解血纤维蛋白原α链N端16肽(FPA)，让血纤蛋白首尾相连，进而使β链N端14肽(FPB)裂解，使血纤维蛋白分子间以肽键的形式侧向聚合交联，最后形成不可溶的血纤维蛋白〔3〕。

而这种纤维蛋白易被天然网状内皮系统或被正常纤溶系统清除，因而导致胞浆中纤维蛋白原浓度显著下降〔4〕。

根据水解纤维蛋白原释放FPA和FPB的速度，蛇毒类凝血酶(SVTLEs)分为3种：FPA型、FPB型和FPAB型〔5〕。

尖吻蝮蛇类凝血酶的研究现状作者：欧光武,李威来源：《中国医药导报》2010年第12期[摘要] 尖吻蝮蛇类凝血酶是我国正在研究的一种新止血药,其结构与以往的类凝血酶完全不同。

目前的研究表明,该凝血酶具有良好的止血效果及广阔的临床应用前景。

[关键词] 尖吻蝮蛇;蛇毒类凝血酶;研究现状[中图分类号] R996.3[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)04(c)-009-03Reseach status of hemocoagulase acutusOU Guangwu, LI Wei(Department of General Surgery, the First Affiliated Hospital of Shantou University of Medical College, Shantou515041, China)[Abstract] Hemocoagulase acutus is a new drug, which is being researched in China. Its molecular structure is different with the other thrombin like enzyme. The current research shows that the hemocoagulase acutus has a good hemostatic role and a good future in the clinical application.[Key words] Hemocoagulase acutus; Snake venom thrombin like enzyme; Reseach status蛇毒类凝血酶(thrombin like enzyme,TLE)是蛇毒中与血浆凝血酶性质相似的一类酶的总称,通常具有精氨酸酯酶活性。

Strait Phaaiycentical Jo/aal Vol30No.1220202012,15(15)：1676-127534〕Zhang H,Li Y,Lin TY,et al.Na/omicelle formulation mo/iUes the phaeiaco/ivetic profiles and cardioc toxicity of dauuoruUiciy4〕NadomePmine,2010,9(12)：15625203〔6〕Zhac Y,Zhang T,Duav S,et al.CD44-tro/ic polymeuc na/ocarrier for breast ca/cer targeted/pamycin chemotherapy〔J〕.Nauomedici/e: Nadotechdoloey,Biology and MePici/e,2014,16(6-：1245D430.〔6〕刘建平•新型药物递送系统的产业化道路〔〕•药学进展,2016, 40(6-：28565434〕张俊峰•肿瘤穿膜肽结合的多柔比星热敏感脂质体提高肝脏肿瘤射频消融疗效4-3国际医学放射学杂志,401525(65)：94733〔9〕曾小丽.pH敏感的小分子前药协同输送体系的构建及体内外抗肿瘤活性研究〔D〕安徽大学,4612332〕Lu X,Wang QQ,Xu FJ,et al.A cationic pro/ee/therapeptic geue nanoompoeaooeihetyneeyntinieeaimeniooiumoet4J〕0Bnomaieenaot，2015,34：2849655234(-Yang T,Xu L,Li B,et al.Antitumor ackvity of a folate recepter-taree-Rd immugoolo/ulin G-0oxoaUiciy conjueate〔J〕•lot J Na/omed, 2056,14：2525-2515330-李静,王彦明，钟武，等.抗体药物偶联物阿多曲妥珠单抗依酯研究进展4-3国际药学研究杂志,401223(64)：2057693413〕PainoY，AmniayY，OhanaP，eiao0Taeyeinnyoopeyyoaiedonpotomao mitomycin C pronee tothe folate/cepter of ca/cer cells,intracellular activation and edkavceP cyRRxicity〔J〕.J Control Release,2016, 225：5665335-刘红，谢艳5长艳•低氧、低氧放射敏化脂质体作为阿霉素载体促进胶质瘤协同化疗的研究4〕.生物材料,4057545:152-1033 [42]Quader S,Lix X,Cdeu Y,et al.cRGD peptiye-hstaCeP epieUiciy-loaSed polyme/c micelles for effective Rrgeted therapy against brain tumors3-■J Control Release,2056,(258)：56663[56]Maitl C,PaUdo S,Kayal S,et al.RePep-responsive corecross-Cndedblock copolymer micelles for overcoming multidae resisR/ce in cave-er cells4-.ACS Appl Mater Interfaces,2015(12)：531873363〔15〕晓甜•肿瘤微环境响应型聚乙二醇聚合物胶束的制备及抗肿瘤作用研究〔D〕.江南大学S OIO j〔19〕王毅，罗毅，赵青，等.一种基于聚酰胺-胺树状大分子的酶响应纳米凝胶载体用于药物传递[J-.ACS应用软件接口,2012(5)：1959929906340-丁伟，李勇，侯伟，等•载博莱霉素A6阴离子脂质体原位凝胶作为新型抗肿瘤药物传递系统[J-.药物递送,4012243-：564.〔25〕杨敏，刘勇，侯伟，等.丝裂霉素碳处理的人诱导多能干细胞作为靶向光热治疗胃癌的金纳米棒的安全递送系统J-.纳米级, 205759)：3347463[24-Meng H,Mol WX,Zhang H,et al.Co/elivee of as optimal drug/siR­NA combination using meso/orous silica nauo/aUicles R overcome dee resista/ce in breast ca/cer in vitro and in vive〔J〕ACS Nave, 2015,(6-：994-12653〔23〕Shen YY,Gae ZG,RapopoU N.Recent aPvadces in the agpUcatR/s of ultrasonic mic/Pugbles os geue er dee vecWu〔J〕Acta Phaun Sin, 2069(44)：9957663〔24〕赵应征，鲁翠涛.超声微泡介导的基因递送系统应用进展J-.药学学报,2007504)：146-1553尖吻蝮蛇血凝酶临床应用合理性研究张富东〕，朱敏凤2,陈曦〕，胡利群5（1.乐山职业技术学院，四川乐山612606；.乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山614606；.乐山职业技术学院附属医院，四川乐山612606）摘要：目的调查本院尖吻蝮蛇血凝酶临床应用情况，为临床合理用药提供依据。

( 1. 大连理工大学 生物工程系 辽宁 大连 116012; 2. 中国科学院化工冶金研究所 生物化学工程国家重点实验室 3. 瑞典乌普萨拉大学 生物医学研究中心 乌普萨拉 75 123 )
北京
100080;
摘要: 根据同源性设计引物 通过 RT-PCR 方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总 RNA 中合成扩增出
第2期
杨 青等, 大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因克隆与表达研究
157
1. 2 RT-PCR 合成扩增 cDN A 取 1 pL 新鲜制备的总 RNA 在 65 下保温
1O min, 然后立即转移至 冰 上. cDNA 的 合 成 以 及 扩 增 采 用 RT-PCR kit( 5/ -f ull RACE Core Set, Takara, 日本) . 具体操作根据试剂盒生产商 的建议完成. 基于同源性[5~ 6], 设计合成用于扩增 反应的 PCR 引物序列是
O引 言
毒蛇的毒液也许是迄今为止所发现的脊椎动 物中最高度浓缩的分泌产物 而蛋白水解酶是蛇 毒 中最重要的成分. 从生物化学上讲 蛇毒蛋白 水解酶可被划分为两大类: 丝氨酸蛋白水解酶和 金属蛋白水解酶{1]. 类 凝 血 酶 属 于 丝 氨 酸 蛋 白 水 解酶 它的特点是能将纤维蛋白原转化为纤维蛋 白凝胶. 由于此纤维蛋白凝胶是非交联的并极易 为纤维溶解酶所降解 类凝血酶在临床上可以用 于改善血液的流动性 从而达到治疗和防治血栓 的目 的{2~ 3]. 目 前 已 有 20 余 种 不 同 种 蛇 的 类 凝 血酶被分离出来并进行了性质的鉴定 其中有 8 种 类 凝 血 酶 的 氨 基 酸 全 序 列 已 见 报 道 {4] .
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内镜下应用蛇毒血凝酶对消化性溃疡出血的治疗效果分析发布时间：2022-07-27T03:11:32.924Z 来源：《医师在线》2022年4月7期作者：吕娅丽[导读]吕娅丽（甘肃省平凉市泾川县人民医院；甘肃泾川744300）【摘要】目的：研究分析消化性溃疡出血在内镜下给药蛇毒血凝酶治疗的临床功效。

方法：2020年10月31日至2021年10月1日，收治消化性溃疡出血者60例，组别划分使用单双号方式，两组均使用消化内镜进行治疗，参比组给药盐酸肾上腺素注射液，研究组给药蛇毒血凝酶，分析疗效。

结果：疾病症状缓解时间、住院时间，止血有效率及转手术率、再出血率等，参比组、研究组比较，以后者治疗后较良好（P＜0.05）。

结论：消化性溃疡出血治疗中，蛇毒血凝酶的使用可产生良好止血效果，给药后能够有效避免再出血情况发生，功效极佳。

【关键词】内镜；蛇毒血凝酶；消化性溃疡出血；治疗效果消化性溃疡出血在患有消化性溃疡患者中具有较高发病率，发病时患者可出现不同程度腹痛、反酸、呕血等症状，随病情发展，疾病症状反应将逐渐加剧，同时随之失血量增多，进而诱发乏力、心慌等情况，严重时将威胁患者生命，因此在临床总具有一定死亡率[1]。

在医疗科技不断发展的今天，消化内镜技术的应用，显著降低了消化性溃疡出血治疗创伤性，经由患者咽喉部置入消化内镜，即可对病症处做有效处置，从而达到止血目的。

现今临床中可用于消化性溃疡出血的止血药物类型多样，蛇毒血凝酶药物成分提取自巴西矛头蝮蛇毒液，相比其他止血药物，止血时效性及有效率均较高，应用蛇毒血凝酶对消化性溃疡出血患者实施治疗，经由消化内镜方式进行给药，药物成分直接作用于患处，于短时间内发挥其止血功效，促进患者病情缓解的同时，降低其失血量，可见良好治疗效果[2]。

为明确蛇毒血凝酶临床用药效果，研究自2020年10月31日至2021年10月1日选定60例消化性溃疡出血者，探究内镜下给药蛇毒血凝酶对该疾病治疗功效，现报告如下。

·循证药学·3种蛇毒血凝酶类药物用于腹部手术止血有效性和安全性的网状Meta 分析Δ郑子恢 1＊，潘慧杰 2，赵紫楠 1，胡欣 1，金鹏飞 1 #[1.北京医院药学部/国家老年医学中心/中国医学科学院老年医学研究院/北京市药物临床风险与个体化应用评价重点实验室（北京医院），北京　100730；2.北京医院检验科/国家老年医学中心/中国医学科学院老年医学研究院，北京　100730]中图分类号 R 973+.2；R 982 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）21-2631-07DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.21.11摘要 目的 系统评价3种蛇毒血凝酶类药物用于腹部手术止血的效果及安全性，为临床用药提供循证依据。

方法 计算机检索Embase 、Cochrane Library 、PubMed 、中国生物医学文献数据库、中国知网及万方数据库，收集3种蛇毒血凝酶类药物（蛇毒血凝酶注射液、注射用矛头蝮蛇血凝酶、注射用尖吻蝮蛇血凝酶）在腹部手术的随机对照试验（RCT ），检索时限均为建库至2023年8月。

按纳入排除标准对文献进行筛选、质量评价及数据提取，使用Cochrane 5.1手册进行文献质量评价。

采用Stata 15.1软件绘制风险偏倚图及网状图，应用R 3.6.2软件以及马尔科夫链-蒙特卡洛方法进行贝叶斯网状Meta 分析。

结果 共纳入11项研究，合计1 401例患者，试验组852例、对照组549例。

在腹部手术止血效果方面，蛇毒血凝酶注射液明显优于注射用尖吻蝮蛇血凝酶[MD ＝－2.45，95%CI （－4.39，－0.24），P ＜0.05]，减少术中出血量概率排序为蛇毒血凝酶注射液＞注射用矛头蝮蛇血凝酶＞注射用尖吻蝮蛇血凝酶；在安全性方面，3种蛇毒血凝酶类药物与安慰剂相比差异均无统计学意义（P ＞0.05）。

结论 蛇毒血凝酶注射液在腹部手术中止血效果明显优于注射用尖吻蝮蛇血凝酶，3种蛇毒血凝酶类药物安全性均良好。

北京大学科技成果——海蛇降纤酶成果简介血栓形成是外科手术的常见并发症，也是现代介入性血管成形术后发生再阻塞的重要因素以及多种心脑血管疾病的致病、致死原因。

生理性血栓形成是止血的一种手段，而病理性血栓形成则可导致相关的脏器发生功能障碍。

目前心、脑部位的血栓性疾病己成为致残率与致死率最高的疾病之一，严重威胁到人类的健康。

据中国高血压联盟公布资料，我国高血压病人近1亿人，脑血管病患者450万人，每年新发生150万人，其中70%是缺血性脑血管病。

心肌梗死、心绞痛患者也有数百万人，还有大量的脑、心血管供血不足患者，四肢动、静脉血栓，眼底及内听动脉血管闭塞病人也需要抗凝和活血化瘀治疗。

蛇毒类凝血酶在体内具有较强的溶栓效果，它具有精氨酸脂酶活性，能够直接作用于纤维蛋白原，水解释放血纤肽2，导致纤维蛋白的单体首尾聚合而凝固，被称为类凝血酶。

但它在体内不激活凝血因子I，由它水解生成的纤维蛋白凝块不产生侧链交联，对纤溶酶的消化高度敏感，易被天然网状内皮系统或正常的纤溶作用所清除，因此导致胞浆中纤维蛋白原浓度显著下降，表现降纤、抗凝的效果。

临床上，蛇毒类凝血酶已成为防治血栓栓塞性疾病的有效药物。

纤维蛋白原是决定血液粘度的重要因素之一，类凝血酶减低了血浆中纤维蛋白原水平，从而降低了全血粘度及血浆粘度，增强了血流速度。

同时与凝血酶相反，类凝血酶不诱导血小板凝聚和释放，它们与富含血小板的血浆所形成的凝块不收缩，使机体能维持正常的止血功能。

国外已有Ancrod和Batroxobin蛇毒抗凝剂，国内则有五步蛇毒祛纤酶、东北白眉腹蛇抗栓酶（清栓酶）、江浙蝮蛇抗栓酶等用于临床。

虽然上述药物的名称不同但主要成分是一致的均为类凝血酶。

这些抗凝剂因具有祛纤、降粘、溶栓、解聚等独特的性质，已用于临床治疗脑血栓形成、脉管炎、治疗冠心病、心肌梗死，也有人用于治疗癌痛综合症。

目前认为抗栓酶是治疗脉管炎、深静脉炎、静脉栓塞形成最为理想的有效药物。

蛇毒药理作用的探究方向蛇毒是从毒蛇头部毒腺分泌的有毒液体，是一种重要的天然动物毒素，其主要成分是蛋白质，具有广泛的生物学活性，现已被应用于溶栓、抗癌、止血、止痛等方面。

传统上蛇毒分为神经毒、血循毒与混合毒。

尖吻蝮是我国十大剧毒蛇之一，其毒液主要作用于血液系统，引起出血、肿胀与局部组织坏死。

已经发现尖吻蝮蛇毒多属丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶和磷脂酶Ａ２家族，部分蛋白质可能属于去整合素家族。

现就尖吻蝮蛇毒生理活性及药理应用等方面的研究进展综述如下。

１凝血作用研究表明，尖吻蝮蛇毒具有较好的凝血作用，我国研制的一类新药“苏灵”已应用于临床，该药是从我国特有的尖吻蝮蛇毒中分离的一种类凝血酶。

对尖吻蝮蛇毒类凝血酶的研究最早是１９６７年的ＣｈｅｎｇＨＣ和ＯｕｙａｎｇＣ等，他们于１９７１年和１９７２年相继分离出２个类凝血酶组分，并经动物实验表明均有不同水准抗凝作用。

何丽芬等从尖吻蝮蛇毒中分离出２个促凝血成分，并对动物创伤性出血具有较好的止血作用。

唐松山等经１２年的努力从尖吻蝮蛇毒中获得了５个新的类凝血酶，并对其实行了相关的研究。

刘敏涓等对从尖吻蝮蛇毒中分离的类凝血酶的凝血机制实行分析，证实该组分虽能迅速使人血浆凝固，但因为其不能激活因子，致使所形成的血块呈胶冻样。

因为该类凝血酶在正常血管内不完全发挥作用，而只促动出血部位血小板聚集作用，所以不引起正常血管内血栓，是一种安全有效的新型止血药，能够应用于临床。

２抗栓作用蛇毒中具有抗栓作用的有两类蛋白质，一类是能直接溶解纤维蛋白（原）的酶，称为纤维蛋白（原）溶酶（简称纤溶酶，ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅ，ＦＬＥ）。

它除了降解纤维蛋白和纤维蛋白原外，对人体内的纤溶酶原无激活作用，无水解其他凝血因子及血小板膜，具有明显的抗血栓作用。

另一类是通过抑制凝血酶原的激活来延缓凝血过程，不具有酶的活性。

这个类酶最早是由Ａｔｏｄａ等从日本黄绿烙铁头蛇毒中纯化得到，并对该抗凝血蛋白的抗凝机制加以探讨，证实是通过与凝血因子Ⅸ或凝血因子Ｘ在钙离子的作用下形成１∶１的复合物而达到延长凝血时间的；后来，Ｌｕ等从皖南尖吻蝮（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中分离出一种抗凝血因子ＡＣＦＩ。

［１ 顾 鹏毅， ５ 孙晋 民 ， 丽 芬 ， ． 经 生 长 因 子 凝 胶 抗 炎 抑 菌 作 詹 等 神
用初探． 实用 药 物 与 临 床 ，０ ８ １ （ ）３ ７３ ８ ２０ ， １６ ：４ —４ ．
［］ 郭 根燕， 玮， 全荣 ， ． ６ 张 李 等 蛇毒 神 经 生 长 因 子 研 究 新 进 展 ． 中
经性 皮 炎 、 湿疹 、 溢性 皮 炎 、 形 目光疹 次之 ， 脂 多 扁
Ｅ３ 刘 海 军 ， 晋 民 ， 秀 坤 ， ． 选 精 制 蛇 毒 酶 乳 膏 剂 制 备 工 ４ 孙 贾 等 优
艺 的 实验 分 析． 山鹾 医药 杂 志 ，０ ０ ３ （ ）８ ６８ ７ ２ １ ，９ ９ ：０ —０ ．
２ ５ ． 肤 病 与 性 病 ，０ ２ ２ （ ）３ ． １例 皮 ２ ０ ，４ １ ：５
平疣 、 常性 痤 疮 、 止 期银 屑 病 最 差 。显 效 时 间 寻 静
一
般 于 用 药 第 ３天 出现 。 该 药 治 疗 上 述 疾 病 疗 效
明显 ， 无毒 副 作 用 ， 发 率低 ， 复 且价 格 低 廉 ， 用方 使 便 ， 得 临床 应 用 。顾 鹏毅 等Ｅ 研 究蛇 毒 ＮＧＦ凝 值
胶 对 实验 动 物 皮 炎 的 治 疗 作 用 ， ＮＧＦ 凝 胶 对 红 斑
反应。
３ ２ 治疗 痤 疮 的 疗 效观 察 ： ． 刘庆 华 等口Ｊ ｏ选择 １ ０ ０
例额 面痤疮 患 者 ， 性 ７ 女 ８例 ， 男性 ２ ２例 ， 用精 制 外
蛇毒 乳 膏（ 中国 医科 大 学 老 年 病 防 治研 究 中心 ） 涂
于 患 处 ， 日 ３ ４次 ， 每 ～ ７ｄ为 １个 疗 程 。 用 药 １周