大鼠大脑中动脉栓塞模型的建立
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mcao拟血管性痴呆大鼠模型的建立3
mcao拟血管性痴呆大鼠模型的建立一、引言血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）是一种由脑血管疾病引起的认知功能障碍，严重影响了患者的生活质量。
目前，VD的病理机制尚不完全清楚，因此建立可靠的动物模型对于深入研究VD的发病机制、早期诊断和治疗具有重要意义。
本研究旨在通过改进线栓法制备大脑中动脉阻塞（Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO）大鼠模型，以模拟VD的病理过程，为VD的研究提供一个新的工具。
二、材料与方法1. 实验动物选取健康雄性SD大鼠，体重在250300g之间，饲养于清洁级动物房，自由摄食和饮水。
动物实验符合动物伦理学要求。
2. MCAO模型的制备（1）手术准备：大鼠术前禁食12小时，不禁水。
术前10分钟腹腔注射10%水合氯醛（350mg/kg）麻醉。
麻醉后，将大鼠仰卧位固定于手术台上，剪去颈部毛发，消毒皮肤。
（3）模型评估：术后24小时进行神经功能缺损评分（Neurological Severity Score，NSS）和脑梗死体积测量。
NSS评分包括运动、感觉和平衡功能，总分018分，分数越高表示神经功能缺损越严重。
脑梗死体积通过TTC染色法测量，梗死体积百分比（%）=（梗死体积/半球体积）×100%。
3. 数据处理采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。
计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验。
P<0.05为差异有统计学意义。
三、结果1. MCAO模型的制备成功率本实验共制备MCAO大鼠模型40只，成功率为95%（38/40）。
失败原因包括术中出血、术后死亡等。
2. 神经功能缺损评分术后24小时，MCAO组大鼠的NSS评分为（14.5±1.8）分，显著高于假手术组（1.8±0.5）分（P<0.01）。
3. 脑梗死体积术后24小时，MCAO组大鼠的脑梗死体积百分比为（38.5±5.2）%，显著高于假手术组（0.0±0.0）%（P<0.01）。
改良线栓法大鼠大脑中动脉阻塞模型的建立
【 关键 词】 中动脉阻塞再灌注 ； 型 ， 模 动物 【 中图分类号】Ｒ３ －３ 【 文献标识码 】Ａ 【 文章编号 】１７．８６２０ ）８００．０ ６ １ ５ ［０ ８０．０ ８ ３ ７ ０
Ａ ｏ ｉ ｅ ｉ ｄ ｅ Ｃｅ ｅ ｒ ｌＡｒ ｅ ｙ Ｏｃ ｌ ｓｏ ｅ ｈ ｄ ｆ ｒ Ｍ ｄ ｆ ｄ Ｍ ｄ ｌ ｒ ｂ ａ ｔ ｒ ｃ ｕ ｉ ｎ Ｍ ｔ ｏ ｏ ｉ
ｃｒｂａ ｒｅ ｃ ｌｓ ｎ （ ＡＯ）ｂ ｉａｉ ｆ ｅｐｅ ｇ ｐ ａｉｅａｔｒ （ Ｐ ｅｅｒｌａｔｒ ｏ ｃｕｉ ｙ ｏ ＭＣ ｙｌ ｔｎｏ ｔｒ ｏ ａ ｔ ｒ ｙ Ｐ Ａ）ａ ｄｉｓｒｏ ｆｓｔｒ－ｍｂ ｌｓｉｔ ｔｅｅ ｔｒａ ｇ ｏ ｈ ｔ ｙ ｌ ｎ ｅ ｎ ｅｔ ｎｏ ｕｕｅｅ ｏｕ ｏ ｈ ｘｅｎ ｎ ｉ ｎ ｌ
２ Ｄ ｐ ｍ ｎ ｏ Ｌ ｂ ｒ ｏｙＡ ｉ ａ Ｓｉ ｃ ， ｈ ｎ ｈ ｉ ｉ ｔ ｇＵ ｉ ｒ ｔ Ｓ ｈ ｌ ｆ ｅ ｉ ｎ ，Ｓ ａ ｇ ａ ２ ０ １ ，Ｃ ｉ ） ． ｅ￣ ｅ ｔ ｆ ａｏ ｔ ｎｍ ｃ ｎ ｅ Ｓ ａ ｇ ａ Ｊ ｏ ｎ ｎｖｓ ｙ ｃ ｏ ｄ ｉ ａｒ ｌ ｅ ａ ｏ ｅ ｉ ｏ Ｍ ｃ ｅ ｈ ｎ ｉ ０ ０ ｈ ａ ｈ １ ｎ
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MCAO模型的制备
实验前准备实验器材：干棉球、酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器(1ml、2ml)、黑色记号笔、固定大鼠用粗线绳、大鼠板、染色小烧杯、标本瓶手术器械：备皮剪子1、眼科剪1、大直镊 1 只、小弯镊 1 对、(动脉夹2)、止血钳2-3、缝合线、缝合针、持针器麻醉剂：10%水合氯醛( 400mg/kg)保温：60W白炽灯，于37cm高处直接照射能使肛温保持在37C栓线：直径0.24mm,头端光滑圆钝；在栓线18mm的位置用黑色记号笔标记；75%酒精清洁后置1: 2500单位肝素化生理盐水中备用。
体重与栓线直径：直径0.24mm的栓线适用于体重220-280g的SD大鼠。
TTC的配制：用L磷酸缓冲液(PBS)配成2%TTC溶液()，避光保存。
药物配制：无论生理盐水还是受试药物标签均采用代号，给药及评分均采用单盲。
仪器激光多普勒血流仪(Laser Doppler Flowmetry, LDF)系统，包括：PeriFlux 5001 Ma in Unit，PF5010 LDPM Unit (激光多普勒微血流灌注量检测单元) ，LD Probe 407-1 ( Perimed Co., Jarfalla, Sweden ;大鼠脑立体定位仪(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；牙科手钻(Stron g 90#, Korea);大鼠脑切片模具；荧光正置显微镜(NIKON ECLIPSE 80i, X400)及成像系统( ACT-2U NIKON Imaging System)。
大脑中动脉栓塞( MCAO )模型的制备参照Zea Lon ga等［2］建立的大鼠大脑中动脉内栓线阻断方法，作适当改进。
10 %水合氯醛溶液400mg/kg，腹腔注射麻醉动物。
大鼠仰卧位固定，颈部正中切开皮肤，钝性分离各层组织，暴露右侧颈总动脉(CCA) 。
分离至颈内动脉(internal carotid artery，ICA)、颈外动脉(external carotid artery，ECA)分叉后一段，仔细分离避免损伤迷走神经和气管，置线备用。
线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验(MCAO模型)的经验
线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型）的经验本人现在正在做线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型），这方面的资料我查了一些，这个实验我也作了一段时间，不敢说很专业了，不过现在基本上我能在15min左右完成手术，而且手术过程中不出一滴血，造模后缺血程度基本一致。
虽然前面有很多前辈发了很多MCAO的很专业的贴子，不过我觉得比较凌乱，现在我把我的心得体会和以前的贴子的精华部分奉献给大家，希望这会对将要做这个实验的朋友有一丝的帮助。
虽然做实验总会有郁闷的时候，不过风雨之后总会见到彩虹的，这可以也是我的心得体会。
衷心祝福大家能把实验做的成功、完美！实验前准备麻醉剂：水合氯醛（应较好的控制大鼠体温）保温：60W白炙灯高度为37cm直接照射能使肛温保持在 37℃栓线的制备：1.取熔点为56℃的固体石蜡一块，在瓷杯中加热熔化。
直径为0.24mm、长5cm的鱼线一端5mm长的一段，垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面，其直径为0.26mm。
就这样，普通的鱼线即可变成规相一致头端光滑圆钝的栓线。
2.在鱼线18mm的位置用涂改液标记一个白色点。
TTC的配制：用0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS）配成2%TTC溶液（pH7.5），避光保存体重与栓线直径：线栓直径0.24mm采用的SD大鼠，体重250-300g。
实验方法：动物用10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。
仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），在CCA远心端和近心端与ECA处挂线备用。
用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA。
然后在距CCA分叉部4mm处剪一小口，将拴线插入到ICA，这时用绕在CCA远心端的细线轻轻系牢拴线。
（不可过紧，否则进线困难，但松了又会出血。
）用眼科镊轻推拴线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度在18 mm时（一定要将血管放松至原来状态, 且保证标记点在分叉处,由于标记的是白色的所以很容易看的），紧紧系牢CCA远心端的细线，此时的关键是动作轻柔，不要使ICA有任何的牵拉，否则栓线会脱出ACA，可能会造成缺血失败。
大鼠大脑中动脉缺血模型
大鼠大脑中动脉缺血模型
大鼠大脑中动脉缺血模型是一种用于研究脑血管疾病的实验动物模型。
该模型通过阻塞大鼠大脑中动脉，使特定区域的脑组织缺氧，从而模拟脑卒中等脑血管疾病的病理过程。
该模型的建立常用的方法有两种：颅骨开窗法和线栓法。
颅骨开窗法是通过手术在大鼠头部挖取窗口，暴露出脑表面的动脉，然后用丝线或微疏松的阻塞物将动脉堵塞，造成脑缺血。
线栓法则是将一根细线或者硬化的凝血物插入大鼠颈动脉，将其推进至前大脑动脉分支处，从而阻塞动脉血流。
这种模型可以模拟脑血管疾病引起的脑缺血损伤，包括缺血区域的神经元死亡、神经胶质细胞激活、炎症反应等。
研究人员可以通过该模型观察脑缺血后的病理变化和分子机制，评估各种药物或治疗方法对脑缺血的治疗效果。
需要注意的是，动物实验必须符合伦理规范和相关法律法规，研究人员应尽量减少动物的痛苦和不适。
同时，在进行实验前需要仔细设计实验方案，选择适当的动物模型和操作方法，以确保实验结果的可靠性和准确性。
改良法制作SD大鼠大脑中动脉栓塞永久模型
（ ）挂线 、结扎 在 已分离的 Ｃ Ａ段 ，分别于分叉处向近心 ２ Ｃ
Ｎｅ ｒ ｌ ｇｃ ｌ ｅ ｃｔ ｔｅａｅ ｆｉ ａ ｃ ｒ ｎ ｔｒ ｄｂ ＲＩ ｔ ｅｂ ａｎｓ ｃｉ ｎ ｒ ｔｉｅ ｙ ＴＴＣ， ｅ ａｃ ｌｔ ｎｆｒ ｔａｅ ｂ ａｎ ａｅ ｎ ｕ ｏ ｏ ｉａ ｆ ｉ，ｈ ｒ ａｏ ｒ ｔｗｅ ｅｍｏ ｉｏ ｅ ｙＭ ｄｉ ｎｆ ， ｈ ｒｉ ｅ ｔｏ ｓｗｅ ｅｓａｎ ｄｂ ｈ ｔ ｎｃ ｌｕａｅｔ Ｉ ａ ｃ ｒ ａ／ ｒ ｉ ａａ ｄ ｈｅ ｒ ｉ＇ ｃ ｅ ｃｅ ｔ ａ ｉｔ ． ｓ ｌｓＴｈｅｓ ｃ ｅ ｓｕ ａｅｏ ｘ ｃ ｔｏ ａ ４．４％ ． ｅ ｒ ｏ ｉ ａ ｅ ｃｔｓ ｏ ｉ ｆｅ ｈ ａ ４ｈｗａ ．３ ０６１ａ ｔｓ ｏ ｆ ｉｎ ｖ ｒａｉ ｉ ｏｆ ｏｎ Ｒｅ ｕ ｔ ｕ ｃ ｓｆ ｌｒｔ ｆｅ ｅ ｕｉ ｎｗ ｓ９ ４ ｎ ｕ ｏｌｇ ｃ ｌｄ ｆ ｉ ｃ ｒｎｇａ ｔｒ３ ｎｄ２ ｓ１８ ＿ ． ｎｄ３． ｉ ＋
ｒ ｐ ｏ ｕ ｉ ｌｔ ． ｅ ｒ ｄ ｃ ｂｉ ｙ ｉ
【ｅ ｒｓ Ｄｒｔ Ｍｉ ｌｃｒｂ ｌｒ ｒ ｏｃ ｓ ｎＭｏｅｂｉ ｉｇｎ ｌ ｌ ｅｔ Ｋ ｙ Ｗｏｄ 】Ｓ ｓ ｄ ｅ ｅｅｒ ｔ ｃｌ ｉ ； ｄｌｕｌ ｎ；ｙｏ ｆａ ｎ ａ； ｄ ａ ａｅ ｙ ｕｏ ｄ ｎ０ Ａ则为临床好发部位 ，对其病理生理和 保护机制进行研究一直是医学界关注的热点。建立稳定性好、重 复性 强、与人类疾病病理生理接近 的动物模型是脑血管疾病深入 研究的基础。大鼠 ＭＣ ＡＯ模型广泛应用于缺血性脑卒 中的实验
研 究 ，但 建立 ＭＣ ＡＯ模 型 的方 法 、成 功 率 、死 亡率 、可 重复 性 、
当 代医 学
２０ ０ ８年 ９月 总 第 １８期 ４
大鼠脑微栓塞模型的建立
子能稳定地造成大鼠 脑组织微梗死或神经细胞凋亡。
【关键词】 微栓子; 颅内栓塞; 颈动脉粥样硬化斑块; 大鼠
【中图分类号】 R7431 33
【文献标识码】 A
E stab lishmen t of m icroembolic m ode l in rat b rains ZH AO Yang, N I X iu-shi* , J IAO D ong-liang, XIA Yu. * D ep artm ent of N eurology, the T hird Affiliated H osp ital, N anj ing Univers ity of T rad itional Chinese M ed icine, N anjing 210001, China
K ey word s: M icroem bo l;i Intracranial embolism; A therosclerotic p laques; R ats
# 509#
颈动脉内膜切除术 ( CEA ) 或颈动脉支架成形 术 ( CAS) 中脱落的 斑块碎 片可导 致脑动 脉微 栓 塞。脑保护滤网的应用虽然显著减少了 CAS术 中 斑块脱落引起的有症状脑栓塞的发生 [ 1, 2] , 但仍有 相当数量 的微栓子透过脑保护滤网流到远端脑 动 脉 [ 3, 4] 。这些微栓子潜在的急性和慢性神经损害尚 未完全明了。既往的微栓塞模型多采用血凝块、脂 肪颗粒或硅球等 [ 5-7] 。这些与脱落的颈动脉粥样硬 化斑块的性质差异很大。因此, 需要建立一种新的 大脑微栓塞动物模型, 以便更真实地模拟 CAS 术 中脱落的 动脉粥样硬化斑块引起脑栓塞的病理 学 改变。
Corresp onding author: N I X iu-shi Abstrac t: O bjective T o estab lish a w ell reproduc ible and h ighly stable m icroembolic mode l in rat bra ins and to prov ide a p latform fo r investiga ting the ischem ic neurona l in jury of m icroem bo l.i M ethod s F ifty-four Sprague-D aw ley rats w ere random ly assigned to sham-operation g roup ( n = 10) and athe rosclero -t ic plaque m icroem bo lic mode l group ( n = 44). T he latte r were further red iv ided into 106-150 Lm ( n = 20), 75-105 Lm ( n= 12) and 55-74 Lm ( n = 12) g roups acco rd ing to the size o fm icroem bo l.i U nder the operating m icroscope, an indwe lling venous catheter w as inserted retrograde ly from exte rnal ca ro tid arte ry into interna l caro tid artery. E ach ratw as in jec ted 100 co rresponding m icro embo li of atherosclerotic plaque. T he rats w ere k illed after 24 hours. T he sever ity o f neuronal ischem ic injury w as de tected by HE sta in ing, the in situ TUNEL me thod for de tection of apoptosis and immunoh istochem istry staining for caspase-3 prote in. R esu lts N o infarction w as found in the patho log ica l sec tion of bra in tissue in the sham-operation g roup. T he propo rtion of cerebral infarction in the 106-150 Lm, 75-105 Lm and 55-74 Lm g roups we re 15 /17, 11 /12 and 5 /12, respectively, there w as sign ificant d ifference as compared w ith the sham-operation group ( P < 0105) ; The num be rs o f TUNEL apoptosis w ere 331 3 ? 1019, 251 9 ? 91 7 and 181 0 ? 61 9 / HP, respective ly, and they w ere s ignificantly higher than those in the sham-operation group ( 51 7 ? 21 7 / HP ) ( allP < 0101) . T he cell numbers o f positive express ion of caspase-3 pro tein w ere 67 ? 11, 59 ? 12 and 46 ? 11 /H P, respectiv ely, and they w ere sign ificantly higher than those in the sham-operation g roup
关于两种方法制作大鼠大脑中动脉栓塞再灌注模型比较
关于两种方法制作大鼠大脑中动脉栓塞再灌注模型比较【摘要】目的制作短暂性大鼠大脑中动脉栓塞再灌注模型，比较颈总动脉进线法和颈外动脉进线法(改良LONGA法)优劣。
方法颈总动脉进线法和改良LONGA法栓塞大鼠大脑中动脉，栓塞2 h后再灌注24 h，以LONGA法标准对模型评分，并对梗死体积进行测定， 7 d时流式细胞仪检测细胞凋亡情况。
结果改良LONGA 法和颈总动脉进线法神经行为学评分分别为2.30±0.82和1.00±0.63，两种方法比较差异有显著性（t=6.886，P<0.05）；两法脑梗死体积相比差异有显著性(t=3.96～4.45，P<0.05)；两法细胞凋亡率比较差异有显著性（F=348.46，q=22.89，P<0.05）。
结论与颈总动脉进线法相比，改良LONGA法大鼠神经行为学评分高、脑梗死体积大、凋亡细胞数多，模型稳定性好。
【关键词】脑中动脉；再灌注损伤；细胞凋亡；大鼠［ABSTRACT］ Objective To make a transient middle cerebral artery occlusion model in rats， and to compare the methods of occlusion of common carotid artery and LONGA’s technique. Methods The cerebral artery occlusion was obtained via blockage of either common carotid artery (CCA) or external carotid artery (modified LONGA’s group). After two hours of artery occlusion and 24 hours of reperfusion， the rats were evaluated by LONGA’s score standard. The volume of cerebral infarction was estimated by TTC staining. The number of apoptotic cells was detected by flow cytometry after seven days of occlusion. Results The neurological behavior scorings in modified LONGA’s group and CCA group were 2.30±0.82 and 1.00±0.63， respectively (t=6.886，P<0.05). The infarction volume between the two groups was significantly different (t=3.96-4.45，P<0.05). The number of apoptotic cells was significantly different between the two groups (F=348.46，q=22.89，P<0.05). Conclusion Compared with the CCA occlusion group， the neurological behavior scoring of modified LONGA’s group was higher， the infarction volume was larger， the number of apoptotic cells was greater， and thestability was better.［KEY WORDS］ Middle cerebral artery; Reperfusion injury; Apoptosis; TTC staining; Rats大脑中动脉栓塞再灌注模型是局灶性脑缺血的标准模型。
一种新的线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型方法
谢 婷， 赵 琰 ， 会化 ， 屈 高卫 平 ， 李翼 飞， 王庆 国 （ 京 中 医药 大学 ， 北 北京 １０ ２ ） ０ ０ ９
［ 要］ 目的 改进 线 栓 法 大鼠局 灶 性 脑缺 血 （ ＡＯ模 型 ， 其 制作 简便 ， 高造模 的成 功率和 摘 Ｍｃ ） 使 提 可 重 复性 ，制 成稳 定 均一 的 ＭＣ ＡＯ模 型 。 方法 大鼠麻 醉 后 ，分 离颈 总 动 脉（ Ｃ 和 颈 外动 脉 Ｃ Ａ）
［ 中图分 类号］ ５３ ［ Ｑ９．３ 文献 标 识码］ ［ Ａ 文章编 － １０－４ ８２ ０ ）２０ ８ ．５ ￣］０４８４ （０ ８０ ．０００
１８ 年，Ｋ ｉ ｍ 等 ９６ ｏｕｉ １ ｚ １ 首次报道 了不用开颅的
线栓法 制作 ＭＣ ＡＯ模 型 ，开创 了 ＭＣ Ｏ模 型 的新 Ａ 途 径 ，进 而成 为 ＭＣ Ｏ模 型 的经 典方 法 。 １８ 年 ， Ａ ９９ Ｚ ａ ｏｇ 等【 该方 法进 行 改进 并建立 了评价神 经 ｅ． ｎ ａ 。 Ｌ １ 对 功 能缺 损 程 度 的 标准 。此后 ， 该方 法 被 广 泛 运 用 并 不 同程 度 改进 ，但 仍 存 在 着 动 物 死亡 率 高 、脑
维普资讯
８ ０
实验动物 与比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ Ａ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｖ ｄｃ ｅ ａｏａ ｙ ｎｍａａ ｄ ｍｐ ｒｔ ｅ ｏ Ｃ ｉ Ｍｅｉｉ ｎ
Ａｐ ２ ０ ，８２ ｒ ０ ８ （） ２
．
一
种 新 的线 栓 法 制备 大 鼠大脑 中 动脉 缺 血模 型 方 法
假 手术 组 。Ｍ ＣＡＯ 组 ３ ０只 ，假 手 术 组 ６只 ，术 前 ８ ｈ禁 食 。 １２ 主要试 剂和 仪 器 ． ０ １ ５ｒｒ 尼 龙 线 由北 京 上 州屋 提供 ，有机 硅 ．８ ｌｌ ｌｌ 胶 由道康 宁有 机硅 有 限公 司 生产 ， 电子数显 卡尺 由
［ 要］ 目的 改进 线 栓 法 大鼠局 灶 性 脑缺 血 （ ＡＯ模 型 ， 其 制作 简便 ， 高造模 的成 功率和 摘 Ｍｃ ） 使 提 可 重 复性 ，制 成稳 定 均一 的 ＭＣ ＡＯ模 型 。 方法 大鼠麻 醉 后 ，分 离颈 总 动 脉（ Ｃ 和 颈 外动 脉 Ｃ Ａ）
［ 中图分 类号］ ５３ ［ Ｑ９．３ 文献 标 识码］ ［ Ａ 文章编 － １０－４ ８２ ０ ）２０ ８ ．５ ￣］０４８４ （０ ８０ ．０００
１８ 年，Ｋ ｉ ｍ 等 ９６ ｏｕｉ １ ｚ １ 首次报道 了不用开颅的
线栓法 制作 ＭＣ ＡＯ模 型 ，开创 了 ＭＣ Ｏ模 型 的新 Ａ 途 径 ，进 而成 为 ＭＣ Ｏ模 型 的经 典方 法 。 １８ 年 ， Ａ ９９ Ｚ ａ ｏｇ 等【 该方 法进 行 改进 并建立 了评价神 经 ｅ． ｎ ａ 。 Ｌ １ 对 功 能缺 损 程 度 的 标准 。此后 ， 该方 法 被 广 泛 运 用 并 不 同程 度 改进 ，但 仍 存 在 着 动 物 死亡 率 高 、脑
维普资讯
８ ０
实验动物 与比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ Ａ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｖ ｄｃ ｅ ａｏａ ｙ ｎｍａａ ｄ ｍｐ ｒｔ ｅ ｏ Ｃ ｉ Ｍｅｉｉ ｎ
Ａｐ ２ ０ ，８２ ｒ ０ ８ （） ２
．
一
种 新 的线 栓 法 制备 大 鼠大脑 中 动脉 缺 血模 型 方 法
假 手术 组 。Ｍ ＣＡＯ 组 ３ ０只 ，假 手 术 组 ６只 ，术 前 ８ ｈ禁 食 。 １２ 主要试 剂和 仪 器 ． ０ １ ５ｒｒ 尼 龙 线 由北 京 上 州屋 提供 ，有机 硅 ．８ ｌｌ ｌｌ 胶 由道康 宁有 机硅 有 限公 司 生产 ， 电子数显 卡尺 由
线栓法制作大鼠大脑中动脉梗死模型的体会与造模失败原因分析
线栓法制作大鼠大脑中动脉梗死模型的体会与造模失败原因分析胡华;刘杰;张燕辉;刘晶;杨元元;葛金文【摘要】线栓法制备大脑中动脉梗死(MCAO)模型是目前制备脑梗死模型最常用的方法,但目前仍存在诸多制约因素,譬如造模技术要求高、模型死亡率高、存活率和成功率较低、术后个体差异性大等许多亟待解决的问题.从实验动物的选择、麻醉剂的选择、线栓制备选择及插入深度、手术操作 4个方面对模型制备进行探讨,并从术中出血过多,术前、术后干预不足及其他可能导致造模失败的原因进行分析.【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2018(016)010【总页数】3页(P1359-1361)【关键词】大脑中动脉梗死;线栓法;造模;失败;体会;原因【作者】胡华;刘杰;张燕辉;刘晶;杨元元;葛金文【作者单位】湖南中医药大学第一附属医院长沙 410007;湖南中医药大学第一附属医院长沙 410007;湖南中医药大学第一附属医院长沙 410007;湖南中医药大学第一附属医院长沙 410007;湖南中医药大学第一附属医院长沙 410007;湖南中医药大学第一附属医院长沙 410007【正文语种】中文【中图分类】R743.1;R255.2大鼠因其成本低、脑内血管解剖特性与人类相似等诸多特点，至今仍是研究脑缺血疾病最常用的动物。
制作动物脑梗死模型的方法有很多种，其中大脑中动脉梗死(MCAO)线栓法模型因不开颅、易于操作而被广泛应用。
大鼠MCAO模型是目前公认的研究脑梗死、脑缺血的经典模型，为研究脑缺血再灌注的机制及评估其治疗方案的疗效提供了可靠验证平台[1]。
近年研究发现，短暂性脑缺血对神经细胞起保护作用，可抵御其后发生的严重脑缺血，减轻缺血组织的病变程度，即诱发了脑缺血耐受(IT)[2]。
脑缺血耐受是指给予短暂的亚致死性缺血后诱导的脑内源性保护机制，从而对后续长时间缺血损伤产生耐受及自身保护作用。
建立脑缺血耐受的模型为进一步研究脑缺血对脑梗死神经保护作用的机制有重要意义。
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ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ａｎｉｍａｌ ｍｏｄｅｌ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ（ＭＣＡＯ） ｉｎ ｒａｔｓ ｓｏ ｔｈａｔ ｔｏ ｃａｒｒｙ ｏｕｔ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｓｐｒａｇｕｅ － Ｄａｗｌｅｙ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｓｓｉｇｎｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ： Ｍｏｄｅｌ ａｎｄ Ｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ （ＯＰ）． Ｍｉｄｄｌｅ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｂｙ ｔｈｒｅａｄ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｉｎ ａｌｌ ｒａｔｓ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ， ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ． Ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｐｅｎｕｍｂｒａ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｂｙ ＭＲＩ，ｔｏｏ． Ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｃｉｄａｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘｅｓ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： Ｔｈｅ ｒａｔｓ ｉｎ Ｓｈａｍ ＯＰ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ａｌｌ ａｌｉｖｅ． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｔｗｏ ｒａｔｓ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｄｉｅｄ ｉｎ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｏｎｅ ｒａｔ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｎｏｔ ｂｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｔ ７ ｒａｔｓ ａｌｌ ｈａｄ ｔｈｅ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ Ｈｏｒｎｅｒ ｉｎ ｌｅｆｔ ｓｉｄｅ， ａｎｄ ｔｈｅ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓｃｏｒｅ ｗａｓ １ ｔｏ ３． Ｏｂｖｉｏｕｓ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｃｈａｎｇｅｓ ｗｅｒｅ ｆｏｕｎｄ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｇｒｅａｔ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ｂｙ ＭＲＩ． Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＳＯＤ ａｎｄ ＧＳＨ － ＰＸ ｉｎ Ｍｏｄｅｌ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｓｈａｍ ＯＰ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ＭＤＡ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｓｈａｍ ＯＰ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ： ＭＣＡＯ ｉｓ ｓｕｃｃｅｓｓ．Ｔｈｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ＭＣＡＯ ｍｏｄｅｌ． ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ Ｍｉｄｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ； Ｍｏｄｅｌ； Ｒａｔ
对侧前肢不能完全伸展； ２ 分： 爬行时向对侧转圈； ３ 分： 行走时身体向偏瘫侧倾倒； ４ 分： 不能自发行走， 意识丧失。１～３ 分为造模成功。 １．４．３ 病理学检查 １．４．３．１ ＴＴＣ 染色： 术后 ２４ ｈ， 将实验大鼠断头取脑， 将脑从额极向后连续冠状切面， 约 ２ ｍｍ 切一层， 将 脑片置于 ２％的 ＴＴＣ 溶液中， 于 ３７ ℃孵育 ３０ ｍｉｎ， 取 出置于 １０％多聚甲醛液中固定， 拍照， 正常脑组织着 鲜红色， 梗死脑组织着白色。 １．４．３．２ ＨＥ 染色： 常规脱水、透明、浸蜡、包埋， 脑组 织连续切片， 厚度 ５ μｍ， 裱片于涂有粘附剂的 载 玻 片上， 烤片后置于室温备用， 常规 ＨＥ 染色， 封片， 光 镜下观察病理变化。 １．４．４ 磁 共 振 成 像 检 查 于 造 模 后 进 行 磁 共 振 检 查。ＭＲＩ 扫描方式： 使用 ＧＥ １．５Ｔ Ｔｗｉｎ Ｓｐｅｅｄ Ｉｎｆｉｕｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｅｘｃｉｔｅ Ｉ 超导型磁共振成像系统， 扫描序列包括 ＭＲＩ 冠状位弥散加权成像（ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｗｅｉｇｈｔｅｄ ｉｍａｇ－ ｉｎｇ， ＤＷＩ） 检查和弥散张量成像（ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｔｅｎｓｏｒ ｉｍａｇ－ ｉｎｇ ， ＤＴＩ） 检 查 。ＤＷＩ： 重 建 表 观 弥 散 系 数 （ ａｐｐａｒｅｎｔ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ＡＤＣ） 图。ＤＴＩ： 重建平均弥散系 数 （ａｖｅｒａｇｅ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ＤＣａｖｇ）图 ， 部 分 各 向 异性（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ａｎｉｓｏｔｒｏｐｙ ， ＦＡ）图。 １．４．５ 血 清 ＳＯＤ 活 性 、ＧＳＨ－ Ｐｘ 活 性 、ＭＤＡ 含 量 测 定 测 定 造 模 前 后 血 清 抗 氧 化 指 标 ＳＯＤ 和 ＧＳＨ－ ＰＸ 活性、ＭＤＡ 含量。ＳＯＤ 活性测定采用黄嘌呤氧化 酶法， ＧＳＨ－ Ｐｘ 活性测定采用 ＤＴＮＢ 直接法， ＭＤＡ 含 量测定采用硫代巴比妥酸（ ＴＢＡ） 法。 １．５ 统 计 处 理 各 项 指 标 均 以 ｘ±ｓ 表 示 ， 采 用 ＳＰＳＳ１１．５ 统计软件进行分析。两组间比较采用 ｔ 检验。 ２ 结果 ２．１ 体 征 及 神 经 功 能 缺 损 评 分 假 手 术 组 大 鼠 全 部存活， 模型组除 ２ 只因麻醉过度死亡、１ 只插线未 成功 外 ， 其 余 ７ 只 均 出 现 左 侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征 ， 神 经 功 能 缺损评分在 １～３ 分之间， 达到模型成功标准， 模型成 功率为 ７０％。 ２．２ 病理检查结果 经 ＴＴＣ 染色， 模型组大鼠脑组 织形态见显著病理改变， 神经细胞体积明显缩小， 染 色加深， 胞浆及胞核固缩， 胞突消失， 部分细胞呈三 角形， 胶质细胞亦固缩， 神经细胞、胶质细胞及毛细 血管、小血管与周围脑间质的间隙显著增大， 间质疏 松。假手术组大鼠脑组织神经细胞未见异常， 胞突形 态规则， 神经细胞、胶质细胞及毛细血管、小血管与 周围脑间质的间隙未见加大， 间质亦脑 中 动 脉 栓 塞 （ ＭＣＡＯ） 模 型 ， 以 便 今 后 进 一 步 进 行 缺 血 性 脑 梗 死 方 面 的 研 究 。 方 法 ： 将 大
鼠 随 机 分 成 模 型 组 和 假 手 术 组 ， 采 用 线 栓 法 建 立 大 鼠 左 侧 ＭＣＡＯ 模 型 ， 术 后 观 察 体 征 ， 进 行 神 经 功 能 缺 损 评 分 、脑
第 １３ 卷３ 期 ２００７ 年 ９ 月
天津医科大学学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＩＡＮＪＩＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
Ｖｏｌ． １３， Ｎｏ． ３
Ｓｅｐ． ２００７
３２７
大鼠大脑中动脉栓塞模型的建立
常 红， 黄国伟， 刘 莉， 王晓峰， 刘欢， 王永明， 张雪君 （ 天津医科大学公共卫生学院， 天津 ３０００７０）
随着当今社会的老龄化， 脑血管病发病率不断 上升， 是目前公认的危害人类健康最重要的疾病之 一。脑血管疾病以缺血性脑梗死和脑出血为主要病
基金资助：天津市高等学校科技发展基金计划项目（ ２００４０１１４） 作者简介：常红（ １９６６－ ） ， 女， 副教授， 硕士， 研究方向： 营养卫生； 黄 国 伟（ １９６２－ ） ， 男， 教授， 硕士， 研究方向： 营养卫生。
组织病理学检查、磁共振成像（ ＭＲＩ） 检查、血清抗氧化指标测定。 结果： 假手术组大鼠全部存活， 模 型 组 除 ２ 只 因 麻
醉过度死亡、１ 只插线未成功外， 其余 ７ 只均出现左侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征， 神经功能缺损评分在 １～３ 分之间。模型组大鼠脑组
织可见显著病理改变， ＭＲＩ 检查脑组织缺血病变明显。模型组血清 ＳＯＤ 和 ＧＳＨ－ Ｐｘ 活性高于假手术组， ＭＤＡ 含量低
ＣＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ， ＨＵＡＮＧ Ｇｕｏ－ ｗｅｉ， ＬＩＵ Ｌｉ， ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ ｆｅｎｇ， ＬＩＵ Ｈｕａｎ， ＷＡＮＧ Ｙｏｎｇ－ ｍｉｎｇ， ＺＨＡＮＧ Ｘｕｅ－ ｊｕｎ （ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００７０， Ｃｈｉｎａ）
３２８
天津医科大学学报
第 １３ 卷
遗留不同程度的残疾， 从而给国家和众多家庭带来 沉重的经济负担［１］。本研究采用线栓法建立大鼠大脑 中动脉缺血模型， 通过对神经细胞形态学的观察、脑 组织病理学检查、磁共振检查以及抗氧化指标的测 定， 证实造模成功， 为今后进一步进行缺血性脑梗死 方面的研究打下基础。 １ 材料与方法 １．１ 实 验 动 物 （ ２３０ ±３０） ｇ 清 洁 级 健 康 成 年 Ｓｐｒａｇｕｅ－ Ｄａｗｌｅｙ（ ＳＤ） 大 鼠 ２０ 只 ， 雌 雄 各 半 ， 购 自 北 京大学医学部实验动物科学部。 １．２ 试剂与器材 动脉夹、缝 合 线 、缝 合 针 ， 碘 伏 、 剪刀、镊子、直径 ０．２６ ｍｍ 尼龙钓丝、氯化三苯基四 氮唑（ ＴＴＣ） ， １０％水合氯醛。 １．３ 研究方法 １．３．１ 动物分组及处理 动物自由摄食饮水， 适应 环境 ３ ｄ， 大鼠随机分成两组： 模型组和假手术组。模 型组采用线栓法造大鼠左侧大脑中动脉栓塞（ ｍｉｄ－ ｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ， ＭＣＡＯ） 模 型 ； 假 手 术 组 除不插线外， 其余手术步骤同模型组。 １．３．２ 手 术 操 作 大 鼠 用 １０％水 合 氯 醛 腹 腔 注 射 麻醉， 仰卧固定于手术台上， 颈部正中切口， 剪开浅 筋膜， 显露左侧胸锁乳突肌。钝性分离胸锁乳突肌 与胸骨舌骨肌间的肌间隙， 暴露左侧颈总动脉 （ｃｏｍｍｏｎ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＣＣＡ）和迷走神经。钝性分离 ＣＣＡ 和 迷 走 神 经 。 找 到 左 侧 颈 外 动 脉 （ｅｘｔｅｍａｌ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＥＣＡ） 和 颈 内 动 脉 （ｉｎｔｅｍａｌ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＩＣＡ）分 叉 ， 分 离 ＥＣＡ、ＩＣＡ， 结 扎 ＥＣＡ 近 分 叉 端。在近心端和分叉前分别用动脉夹夹住 ＣＣＡ， 在 距动脉分叉 ５ ｍｍ 处用针扎一小口， 插入栓线， 松开 分叉前的动脉夹， 将栓线缓慢向 ＩＣＡ 插入， 至 ＩＣＡ、 ＥＣＡ 交 叉 处 时 ， 调 整 插 线 角 度 ， 目 视 线 栓 头 部 进 入 ＩＣＡ 而不是 ＥＣＡ。继续将线栓缓慢向 ＩＣＡ 入颅方向 推进， 直到标记至分叉处为止。将栓线与 ＣＣＡ 结扎 固定， 松开近心端动脉夹， 剪除线栓多余末端， 最后 缝合筋膜、皮肤。假手术组除不插线外， 其余手术步 骤同模型组。 １．４ 观察指标与测定方法 １．４．１ 造模成功体征 左侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征［２］（ 瞳孔缩小、 上眼睑下垂、眼球内陷） ， 右前肢瘫痪， 大鼠麻醉清醒 后， 提尾悬空时右侧前肢内收、屈曲， 自主运动时身 体向右侧转圈。 １．４．２ 神 经 功 能 缺 损 评 分 Ｌｏｎｇａ 评 分［２］分 级 标 准 为： ０ 分： 无神经系统功能缺损症状， 活动正常； １ 分：
对侧前肢不能完全伸展； ２ 分： 爬行时向对侧转圈； ３ 分： 行走时身体向偏瘫侧倾倒； ４ 分： 不能自发行走， 意识丧失。１～３ 分为造模成功。 １．４．３ 病理学检查 １．４．３．１ ＴＴＣ 染色： 术后 ２４ ｈ， 将实验大鼠断头取脑， 将脑从额极向后连续冠状切面， 约 ２ ｍｍ 切一层， 将 脑片置于 ２％的 ＴＴＣ 溶液中， 于 ３７ ℃孵育 ３０ ｍｉｎ， 取 出置于 １０％多聚甲醛液中固定， 拍照， 正常脑组织着 鲜红色， 梗死脑组织着白色。 １．４．３．２ ＨＥ 染色： 常规脱水、透明、浸蜡、包埋， 脑组 织连续切片， 厚度 ５ μｍ， 裱片于涂有粘附剂的 载 玻 片上， 烤片后置于室温备用， 常规 ＨＥ 染色， 封片， 光 镜下观察病理变化。 １．４．４ 磁 共 振 成 像 检 查 于 造 模 后 进 行 磁 共 振 检 查。ＭＲＩ 扫描方式： 使用 ＧＥ １．５Ｔ Ｔｗｉｎ Ｓｐｅｅｄ Ｉｎｆｉｕｉｔｙ ｗｉｔｈ Ｅｘｃｉｔｅ Ｉ 超导型磁共振成像系统， 扫描序列包括 ＭＲＩ 冠状位弥散加权成像（ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｗｅｉｇｈｔｅｄ ｉｍａｇ－ ｉｎｇ， ＤＷＩ） 检查和弥散张量成像（ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｔｅｎｓｏｒ ｉｍａｇ－ ｉｎｇ ， ＤＴＩ） 检 查 。ＤＷＩ： 重 建 表 观 弥 散 系 数 （ ａｐｐａｒｅｎｔ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ＡＤＣ） 图。ＤＴＩ： 重建平均弥散系 数 （ａｖｅｒａｇｅ ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ， ＤＣａｖｇ）图 ， 部 分 各 向 异性（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ａｎｉｓｏｔｒｏｐｙ ， ＦＡ）图。 １．４．５ 血 清 ＳＯＤ 活 性 、ＧＳＨ－ Ｐｘ 活 性 、ＭＤＡ 含 量 测 定 测 定 造 模 前 后 血 清 抗 氧 化 指 标 ＳＯＤ 和 ＧＳＨ－ ＰＸ 活性、ＭＤＡ 含量。ＳＯＤ 活性测定采用黄嘌呤氧化 酶法， ＧＳＨ－ Ｐｘ 活性测定采用 ＤＴＮＢ 直接法， ＭＤＡ 含 量测定采用硫代巴比妥酸（ ＴＢＡ） 法。 １．５ 统 计 处 理 各 项 指 标 均 以 ｘ±ｓ 表 示 ， 采 用 ＳＰＳＳ１１．５ 统计软件进行分析。两组间比较采用 ｔ 检验。 ２ 结果 ２．１ 体 征 及 神 经 功 能 缺 损 评 分 假 手 术 组 大 鼠 全 部存活， 模型组除 ２ 只因麻醉过度死亡、１ 只插线未 成功 外 ， 其 余 ７ 只 均 出 现 左 侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征 ， 神 经 功 能 缺损评分在 １～３ 分之间， 达到模型成功标准， 模型成 功率为 ７０％。 ２．２ 病理检查结果 经 ＴＴＣ 染色， 模型组大鼠脑组 织形态见显著病理改变， 神经细胞体积明显缩小， 染 色加深， 胞浆及胞核固缩， 胞突消失， 部分细胞呈三 角形， 胶质细胞亦固缩， 神经细胞、胶质细胞及毛细 血管、小血管与周围脑间质的间隙显著增大， 间质疏 松。假手术组大鼠脑组织神经细胞未见异常， 胞突形 态规则， 神经细胞、胶质细胞及毛细血管、小血管与 周围脑间质的间隙未见加大， 间质亦脑 中 动 脉 栓 塞 （ ＭＣＡＯ） 模 型 ， 以 便 今 后 进 一 步 进 行 缺 血 性 脑 梗 死 方 面 的 研 究 。 方 法 ： 将 大
鼠 随 机 分 成 模 型 组 和 假 手 术 组 ， 采 用 线 栓 法 建 立 大 鼠 左 侧 ＭＣＡＯ 模 型 ， 术 后 观 察 体 征 ， 进 行 神 经 功 能 缺 损 评 分 、脑
第 １３ 卷３ 期 ２００７ 年 ９ 月
天津医科大学学报 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＴＩＡＮＪＩＮ ＭＥＤＩＣＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
Ｖｏｌ． １３， Ｎｏ． ３
Ｓｅｐ． ２００７
３２７
大鼠大脑中动脉栓塞模型的建立
常 红， 黄国伟， 刘 莉， 王晓峰， 刘欢， 王永明， 张雪君 （ 天津医科大学公共卫生学院， 天津 ３０００７０）
随着当今社会的老龄化， 脑血管病发病率不断 上升， 是目前公认的危害人类健康最重要的疾病之 一。脑血管疾病以缺血性脑梗死和脑出血为主要病
基金资助：天津市高等学校科技发展基金计划项目（ ２００４０１１４） 作者简介：常红（ １９６６－ ） ， 女， 副教授， 硕士， 研究方向： 营养卫生； 黄 国 伟（ １９６２－ ） ， 男， 教授， 硕士， 研究方向： 营养卫生。
组织病理学检查、磁共振成像（ ＭＲＩ） 检查、血清抗氧化指标测定。 结果： 假手术组大鼠全部存活， 模 型 组 除 ２ 只 因 麻
醉过度死亡、１ 只插线未成功外， 其余 ７ 只均出现左侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征， 神经功能缺损评分在 １～３ 分之间。模型组大鼠脑组
织可见显著病理改变， ＭＲＩ 检查脑组织缺血病变明显。模型组血清 ＳＯＤ 和 ＧＳＨ－ Ｐｘ 活性高于假手术组， ＭＤＡ 含量低
ＣＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ， ＨＵＡＮＧ Ｇｕｏ－ ｗｅｉ， ＬＩＵ Ｌｉ， ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ ｆｅｎｇ， ＬＩＵ Ｈｕａｎ， ＷＡＮＧ Ｙｏｎｇ－ ｍｉｎｇ， ＺＨＡＮＧ Ｘｕｅ－ ｊｕｎ （ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００７０， Ｃｈｉｎａ）
３２８
天津医科大学学报
第 １３ 卷
遗留不同程度的残疾， 从而给国家和众多家庭带来 沉重的经济负担［１］。本研究采用线栓法建立大鼠大脑 中动脉缺血模型， 通过对神经细胞形态学的观察、脑 组织病理学检查、磁共振检查以及抗氧化指标的测 定， 证实造模成功， 为今后进一步进行缺血性脑梗死 方面的研究打下基础。 １ 材料与方法 １．１ 实 验 动 物 （ ２３０ ±３０） ｇ 清 洁 级 健 康 成 年 Ｓｐｒａｇｕｅ－ Ｄａｗｌｅｙ（ ＳＤ） 大 鼠 ２０ 只 ， 雌 雄 各 半 ， 购 自 北 京大学医学部实验动物科学部。 １．２ 试剂与器材 动脉夹、缝 合 线 、缝 合 针 ， 碘 伏 、 剪刀、镊子、直径 ０．２６ ｍｍ 尼龙钓丝、氯化三苯基四 氮唑（ ＴＴＣ） ， １０％水合氯醛。 １．３ 研究方法 １．３．１ 动物分组及处理 动物自由摄食饮水， 适应 环境 ３ ｄ， 大鼠随机分成两组： 模型组和假手术组。模 型组采用线栓法造大鼠左侧大脑中动脉栓塞（ ｍｉｄ－ ｄｌｅ ｃｅｒｅｂｒａｌ ａｒｔｅｒｙ ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ， ＭＣＡＯ） 模 型 ； 假 手 术 组 除不插线外， 其余手术步骤同模型组。 １．３．２ 手 术 操 作 大 鼠 用 １０％水 合 氯 醛 腹 腔 注 射 麻醉， 仰卧固定于手术台上， 颈部正中切口， 剪开浅 筋膜， 显露左侧胸锁乳突肌。钝性分离胸锁乳突肌 与胸骨舌骨肌间的肌间隙， 暴露左侧颈总动脉 （ｃｏｍｍｏｎ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＣＣＡ）和迷走神经。钝性分离 ＣＣＡ 和 迷 走 神 经 。 找 到 左 侧 颈 外 动 脉 （ｅｘｔｅｍａｌ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＥＣＡ） 和 颈 内 动 脉 （ｉｎｔｅｍａｌ ｃａｒｏｔｉｄ ａｒｔｅｒｙ， ＩＣＡ）分 叉 ， 分 离 ＥＣＡ、ＩＣＡ， 结 扎 ＥＣＡ 近 分 叉 端。在近心端和分叉前分别用动脉夹夹住 ＣＣＡ， 在 距动脉分叉 ５ ｍｍ 处用针扎一小口， 插入栓线， 松开 分叉前的动脉夹， 将栓线缓慢向 ＩＣＡ 插入， 至 ＩＣＡ、 ＥＣＡ 交 叉 处 时 ， 调 整 插 线 角 度 ， 目 视 线 栓 头 部 进 入 ＩＣＡ 而不是 ＥＣＡ。继续将线栓缓慢向 ＩＣＡ 入颅方向 推进， 直到标记至分叉处为止。将栓线与 ＣＣＡ 结扎 固定， 松开近心端动脉夹， 剪除线栓多余末端， 最后 缝合筋膜、皮肤。假手术组除不插线外， 其余手术步 骤同模型组。 １．４ 观察指标与测定方法 １．４．１ 造模成功体征 左侧 Ｈｏｒｎｅｒ 征［２］（ 瞳孔缩小、 上眼睑下垂、眼球内陷） ， 右前肢瘫痪， 大鼠麻醉清醒 后， 提尾悬空时右侧前肢内收、屈曲， 自主运动时身 体向右侧转圈。 １．４．２ 神 经 功 能 缺 损 评 分 Ｌｏｎｇａ 评 分［２］分 级 标 准 为： ０ 分： 无神经系统功能缺损症状， 活动正常； １ 分：