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弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属、弯曲菌属、螺杆菌属●共性：G-直或微弯杆菌，氧化酶+,分属不同科。
●第一节弧菌属●定义：一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状G-菌，端单H，运动迅速；兼性厌氧，葡F，多需2~3%盐；氧+；●弧菌科: 弧菌属、异单胞菌属（气、邻单胞菌、发光杆菌属、利斯顿菌属、许旺菌属......弧菌属霍乱、副霍乱：O-1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌胃肠炎：非O-1群霍乱弧菌食物中毒：副溶血性弧菌胃肠炎、伤口感染菌血症：其他弧菌：拟态弧菌、河弧菌、溶藻弧菌、霍利斯弧菌、创伤弧菌、麦契尼可夫弧菌、......等）鉴别要点●弧菌：氧化酶+（区别于肠菌科）葡F（区别于假单胞菌和其他非发酵菌）霍乱弧菌临床意义一、致霍乱——烈性肠道传染病依O抗原（至少）分155个血清型O1群：生物型分古典生物型（霍乱）、ElTor生物型（副霍乱）血清型分小川型（AB）稻叶型（AC）彦岛型（ABC）O139（1992年分离）遗传及毒力基因与O1群似。
发病机制：过程：1、不洁饮食，粪-口途径传播胃酸易感2、菌毛（定植于肠粘膜上皮细胞）3、霍乱毒素（CT，属肠毒素）4、细胞分泌水、电解质；肠腔内水、钠潴留5、剧烈吐泻（“米泔水”样粪便）6、继而体液丢失、缺水、水电解质紊乱、休克、死亡微生物检查：（一）标本的采集和运送——早期用药前，肛拭或棉拭粘取患者或疑似患者大便、呕吐物以及外环境样品；采得的标本应立即接种于培养基（床边接种，置于灭菌带棉塞试管或碱性胨水中），尽早送检;较远则应放卡-布运送培养基（旧时为“文─腊氏”保存液内1:2),严密不易碎容器,室温专人送检。
需增菌的标本一般要在18小时内完成。
检验程序：步骤：见标本（呕吐物，米泔水样粪便）分别进行1、直接革兰染色Gˉ弧菌，运动活跃；2、分离培养碱性胨水、凝集反应；3、PCR肠毒各培养上的生长特征：●碱性胨水（APW，PH8.5）: （增菌液）迅速,6～9h（El：2~3h）,大量生长, 薄菌膜;●碱性琼脂: 中等大圆齐透或半无色或带青砖色如水滴状；●TCBS: 大、黄(蔗+）、轻凸;●双─洗: 大、圆、扁、齐、透或半；●亚─洗：中心呈浅灰褐色；●SS：不长;●血琼脂：古典——草绿色环；ElTor——透明溶血环生化特性：cb+明胶+“漏斗状”生长,霍乱红反应+,LOA++-,U-C+ONPG+葡乳麦甘蔗阿+-+++-，DNA酶+，0%~6%盐+羊RBC溶血、鸡RBC凝集、V-P、多B敏感、IV组Ф裂解、V组Ф裂解古典生物型/ El-Tor生物型：---++-/D++--+废弃物处理：1．污染饮用水须严格消毒处理；2．污水需经消毒处理后才能排放；3．被污染食物就地封存，消毒处理；4．粪便消毒处理达到无害化；5．污染物品须严格消毒或焚烧；6．病人尸体由治疗病人的医疗单位负责消毒处理，处理后应当立即火化。
![[病原生物学] 第9章 弧菌属](https://uimg.taocdn.com/47aac5c31eb91a37f0115c9d.webp)
第九章弧菌属、螺杆菌属与弯曲菌属第一节霍乱弧菌弧菌属（Vibrio）细菌是一类菌体成弧形的短小革兰阴性菌。
在自然界广泛分布，尤以水中含量最多。
根据国际通用分类方法，可将弧菌属分为56个种，其中至少12个种可感染人类，又以霍乱弧菌感染最为严重。
霍乱我国法定甲类传染性疾病，霍乱弧菌（Vibrio cholerae）是其病原体。
迄今为止，全球已发生7次大流行，前6次由古典生物型引起。
最后一次由El-Tor生物型引起。
一、生物学性状（一）形态与染色从患者体内新分离出的细菌形态典型，呈弧形或逗点状，大小约（0.5~0.8）μm×(1.5~3) μm。
多次传代培养后，细菌多呈杆状。
G-。
菌体无芽胞、有菌毛，个别菌株有荚膜，菌体一端有着生单鞭毛（图9-1）。
悬滴法观察液体样本时可见呈穿梭样或流星状运动菌体。
图9-1霍乱弧菌（二）培养特性霍乱弧菌兼性厌氧，无严格营养要求，但在含氧条件下生长更好。
对温度要求不高，18~37℃均可生长，因此可在野外环境下长期生存。
该菌耐碱不耐酸，在pH9左右的碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上生长良好，而其他细菌不易生长，故多以碱性蛋白胨水富集增菌提高初次分离效率。
霍乱弧菌与其他致病性弧菌的区别在于其可以无盐环境中生长。
触酶（过氧化氢酶）阳性，氧化酶阳性，产酸不产气。
可代谢多种糖类，如葡萄糖、蔗糖和甘露醇，不利用阿拉伯糖；可还原硝酸盐，吲哚反应阳性。
碱性琼脂平板培养后可形成圆形、透明或半透明的无色扁平菌落。
在TCBS （thiosulfate-citrate-bile-sucrose）培养基上菌落呈黄色，培养基呈暗绿色。
（三）抗原构造与分型霍乱弧菌有两种抗原：O抗原（菌体抗原）和H（靶毛抗原）抗原。
O抗原耐热，有155个血清群，其中O1群、O139群可引起霍乱，但两者无抗原交叉性，其余血清群可引起人类肠胃炎等疾病。
H抗原不抗热的，无特异性。
根据菌体抗原因子不同，O1群又可分为3个血清型：小川型（A抗原因子）、稻叶型（B抗原因子）、和彦岛型（C抗原因子）。
根据表型差异，O1群霍乱弧菌血清型还可分为2个生物型：古典生物型（classical biotype）和El Tor生物型（EL Tor biotype）。
古典生物型多粘菌素敏感，不溶解羊红细胞，不凝集鸡红细胞，可被第Ⅳ群噬菌体裂解。
El Tor生物型多粘菌素不敏感，溶解羊红细胞，凝集鸡红细胞，不被第Ⅳ群噬菌体裂解。
（四）抵抗力霍乱弧菌对热敏感，煮沸2分钟或60℃加热10 分钟可致死；O1群El Tor 生物型和其他非O1群霍乱弧菌在自然界中的生存力比O1群古典型强，在淡水水中可存活1~3周或更长。
霍乱弧菌对一般消毒剂敏感，0.5ppm氯15分钟即可致死，故以1:4比例加漂白粉处理病人排泄物或呕吐物1小时，可达消毒目的。
不耐酸，在胃酸中仅存活4分钟。
二、致病性与免疫性（一）致病物质霍乱弧菌的致病物质涉及染色体上多个基因，可分为两大类，一是由ToxR 蛋白调控的ctxA、ctxB、zot、cep、ace、tcp等基因；二是不受 ToxR蛋白调控的毒力因子基因hly A和 hap。
1．霍乱肠毒素(cholera toxin)：是致泻毒素中最为强烈的毒素。
该毒素由一个A亚基（cholera toxin A，分子量为27.2kDa）和5个相同的 B亚基 (每个亚单位分子量为l l.7kDa) 组成。
该蛋白热不稳定，A亚基和B亚基分别由前噬菌体携带的结构基因ctxA 和ctxB 编码。
霍乱弧菌O1群古典生物型染色体上广泛散布着CTX单元（2个拷贝ctx为一组）； O1群El Tor 生物型染色体上 CTX单元为多拷贝随机分布。
霍乱肠毒素的致病机理是：B亚基与小肠黏膜上皮细胞的GMI神经节苷脂受体特异性结合，从而介导A亚基进入细胞，经蛋白酶作用裂解为A1和A2两条多肽，A1作为腺苷二磷酸核糖基转移酶可使NAD（辅酶I）上的腺苷二磷酸核糖转移至G蛋白上，激活腺苷酸活化酶，使细胞内ATP转化为cAMP，cAMP水平升高，使细胞主动分泌Na+、K+、Cl-、HCO3-等离子和水，最终导致患者出现严重的腹泻和呕吐（图9-2）。
另外，由 zot编码的紧密连接毒素能破坏小肠黏膜细胞间的紧密连接，增加黏膜的渗透性； cep编码的副霍乱肠毒素可增加肠液的分泌。
图9-2 霍乱肠毒素致病示意图2．鞭毛、菌毛及其他毒力因子：鞭毛有助于霍乱弧菌穿过肠黏膜表面黏液层到达肠壁上皮细胞。
细菌菌毛有助于细菌定居于小肠。
与此相关的基因有acf (accessory colonization factor)和fcp A(toxin coregulated pilus A)。
acf编码黏附素，tcp A编码菌毛蛋白中分子量约为20kDa的亚单位。
若tcp失活，该菌则失去定居功能和致泻能力。
3．其他毒力因子：其他毒力因子还有溶血-溶细胞蛋白，由hly A(hemolytic-cytolytic A)基因编码; 血凝素/蛋白酶，由hap (hemagglutimin/protease)基因编码。
除了上述致病物质和相关基因外，O139群还存在多糖荚膜和特殊 LPS毒性决定簇，可抵抗血清中的杀菌物质，使细菌黏附于小肠黏膜。
(二)所致疾病霍乱弧菌所引起的最常见疾病是霍乱，一种烈性肠道传染病，人类是霍乱弧菌的唯一易感者。
除患者外和无症状感染者均是重要传染源。
误食污染的水源或食物是霍乱弧菌最主要的传播途径，不常见人人之间直接传播。
正常生理状态下，需要摄入进人108以上霍乱弧菌方能致病，但当胃酸含量或pH较高时时，感染剂量会大幅降低。
霍乱弧菌突破胃酸到达小肠后，可黏附于肠黏膜表面并迅速繁殖，菌体不侵入小肠上皮细胞和肠腺，但繁殖过程中产生毒素类可致病。
人类感染O1群霍乱弧菌后，症状轻重不一，即可无症状，也可轻型腹泻，严重者为致死性腹泻。
在O1群中，古典生物型所致疾病较为严重。
常见病发流程为：感染细菌后2~3天突然出现剧烈腹泻和呕吐，典型特征是米泔水样腹泻物。
由此导致患者大量失水（每小时失水量可高达1L）和电解质丧失，导致代谢性酸中毒、低容量性休克、低碱血症、心律不齐和肾衰竭，若不及时治疗，死亡率高达60%。
及时补充液体和电解质可有效降低死亡率。
O139群霍乱弧菌感染更为严重，可致患者严重脱水，死亡率比O1类群高。
病愈后部分患者仍可于胆囊中带菌2周左右，个别 El Tor型病例带菌时间较长，从数月到数年不等。
(三)免疫性O1群霍乱弧菌感染愈后，机体可获得牢固免疫力，少见再次感染。
发病数月后，患者血液和肠腔中可检出保护性抗肠毒素抗体（针对霍乱毒素B亚基）及抗菌抗体（针对O抗原），其中肠道局部黏膜免疫是霍乱保护性免疫的基础。
肠腔中的sIgA可凝集黏膜表面的霍乱弧菌，使其失去运动能力；与菌毛结合可阻止霍乱弧菌黏附至肠黏膜；与霍乱肠毒素B亚基结合可阻断肠毒素与小肠上皮细胞受体的结合。
O139群感染后的免疫应答与 O1群基本一致，但 O1群霍乱弧菌脂多糖与O139群存在显著差异，并且O1群无荚膜多糖抗原，因此两者无显著交叉免疫作用。
O139群的保护性免疫主要以针对脂多糖和荚膜多糖的抗菌免疫为主，以抗毒素免疫为辅。
三、微生物学检查法霍乱是烈性传染病，因此首例患者的病原学诊断应快速、准确，及时出具疫情报告并报告相关主管部门。
发病早期，应尽量在使用抗菌药之前采集样本。
（一）标本的采集因霍乱以腹泻和呕吐为主，患者呕吐物、粪便、肛拭子等常作为样本；由于霍乱弧菌耐碱不耐酸及不耐干燥，为避免运输途中粪便发酵产酸灭活病菌，应及时将标本放入 Cary-Blair保存液中并及时培养。
因甘油对弧菌有毒性，故而甘油盐水缓冲液不适合用于弧菌的运输。
流行病学调査时还需及时采用水样。
（二）镜检显微镜下发现革兰染色阴性弧菌（红色）；悬滴法观察时，细菌呈穿梭样运动。
在悬液中加1滴不含防腐剂的霍乱弧菌多价诊断血清，可见呈快速流行样运动的弧菌停止运动并发生凝集。
（三）分离培养标本先接种至碱性蛋白胨水（pH8.8），37℃孵育6~8小时候增菌后直接镜检，转至TCBS选择性培养基（硫代硫酸盐-枸橼盐酸-胆盐-蔗糖培养基），37℃，空气条件下培养20 h，观察有无黄色菌落（霍乱弧菌因分解蔗糖产酸）。
挑选可疑黄色菌落进行生化反应及与O1群和O139多价和单价血清作玻片凝集反应。
常用的分离培养基还有碱性平板、4号琼脂、血平板、庆大霉素琼脂和牛磺胆酸亚碲酸盐明胶琼脂（TTGA培养基）等。
四、防治原则环境卫生是霍乱弧菌传染的重要因素。
改善生活环境，加强水源管理；养成良好生活习惯；不生食水产品等是预防霍乱弧菌感染及流行的重要措施。
我国早期通过肌肉注射O1群霍乱死菌苗预防霍乱的流行，虽可增强人群的特异性免疫力，但抗体持续时间较短，3~6个月后失效。
目前，霍乱疫苗预防以肠道局部免疫为主，使用方式也从肌肉注射转至口服疫苗，常用口服疫苗有B亚基-全菌灭活口服疫苗、基因工程减毒活菌苗、基因工程疫苗等，灭活口服疫苗和减毒活菌苗的有效保护率和保护时间正在评估中。
O139群因发病较晚，目前尚无预防性疫苗。
霍乱会造患者机体电解质和水份大量流失，及时补充液体和电解质是预防低血容量性休克和酸中毒的关键；辅助使用抗菌药可减少外毒素的产生，加速细菌的清除。
常用抗菌药有四环素、多西环素、呋喃唑酮、氯霉素和复方SMZ-TMP等。
第二节幽门螺杆菌1979年，澳大利亚珀斯皇家医院研究人员Warren意外地发现无数细菌紧黏着胃上皮。
1982年4月，澳大利亚学者巴里·马歇尔（Barry J. Marshall）和罗宾·沃仑（J. Robin Warren）从人胃粘膜组织中分离出幽门螺杆菌(Helicobacter pylori ,Hp)。
此后又根据RNA序列、细胞脂肪酸谱、生长特征及其他分类特征，于1989年正式划分出螺杆菌属(Helicobacter)，随后又从雪豹胃内分离到H.mustelae，从平顶猴胃内分离出H.nemi strinae，从猫胃内分离到H.felis。
除胃内有螺杆菌外，在人和其他哺乳动物及鸟类的肠肝内也有螺杆菌存在。
目前，螺杆菌属共包含23个种。
幽门螺杆菌是螺杆菌属的代表种，目前研究表明与胃窦炎、十二指肠溃疡、胃溃疡，胃腺癌和胃粘膜相关B细胞淋巴瘤（MALT)的发生关系密切。
为表彰两人发现了幽门螺杆菌以及在胃炎和胃溃疡等疾病中的作用，马歇尔和沃仑分享了2005年诺贝尔生理学或医学奖。
一、生物学性状（一）形态与染色幽门螺杆菌菌体长约2~4μm，宽约0.5~1.0μm，末端钝圆，螺旋形弯曲，常成S形或海鸥状，含1~2个微小弯曲。
G-（图9-3）。
菌体端生多鞭毛。
染色体呈环状，约2/3基因可通过gene bank获取功能基因，进而推测生物学功能，约1/4基因为螺杆菌特有基因，约1/5基因功能未知。
