空肠弯曲菌Cjejuni

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断鸡（Chicken Chicken）空肠弯曲杆菌）空肠弯曲杆菌IgG 抗体（抗体（CJ-IgG CJ-IgG CJ-IgG））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗原一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被鸡空肠弯曲杆菌IgG抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP 标记的检测抗原，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUT OFF值相比较，从而判定标本中鸡空肠弯曲杆菌IgG抗体（CJ-IgG）的存在与否。

样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。

3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.预处理后的样本请按照操作步骤用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无阴性对照0.5mL0.5mL无阳性对照0.5mL0.5mL无检测抗原-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释样本稀释液6mL3mL无底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

空肠弯曲菌图
空肠弯曲菌
空肠弯曲菌（c.jejuni）菌体轻度弯曲似逗点状，长1.5-5μm，宽0.2-0.8μm.菌体一端或两端有鞭毛，运动活泼，在暗视野镜下观察似飞蝇。

有荚膜，不形成芽胞。

微需氧菌，在含2.5-5%氧和10%CO2的环境中生长最好医学|教育网搜集整理。

最适温度为37-42℃。

在正常大气或无氧环境中均不能生长。

诱导免疫耐受的研究-免疫检验考点
诱导受体对移植物的免疫耐受，是最理想的排斥反应防治措施。

目前限于研究阶段，尚未应用于临床。

研究思路：
1.应用大剂量天然可溶性或人工合成的供者HLA分子医学教育|网搜集整理，通过封闭同种抗原特异性T细胞的TCR，以诱导受者特异性T细胞凋亡。

2.输注可溶性CTLA～4，阻断被移植组织细胞的B7与受者T细胞表面CD28的结合，干扰共刺激信号的形成。

3.阻断CD40～CD40L、CD2～LFA3等膜分子的相互作用，使T细胞功能障碍。

4.借助基因工程技术制备基因修饰的树突状细胞，介导特异性耐受医|学教育网整理。

5.T细胞疫苗，诱导抗独特型抗体的产生，破坏移植物特异性T细胞。

双歧杆菌（图）
双歧杆菌
双歧杆菌Bifidobacterium是1899年由法国学者Tissier从母乳营养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌，末端常常分叉，故名双歧杆菌。

双歧杆菌分布在胃肠的数量随年龄阶段的增长而减少，分布最多的是母乳营养儿。

目前已经发现，双歧杆菌有32个亚型，含有双歧杆菌的生物制剂多达70种。

医学微生物学――第十六章其他细菌第十六章其他细菌第一节弯曲菌属弯曲菌属（Campylobacter）是一类呈逗点状或S形的革兰阴性杆菌。

有13个种，广泛分布于动物界，可引起动物和人类的腹泻、胃肠炎和肠道外感染。

对人致病的有空肠弯曲菌、大肠弯曲菌、胎儿弯曲菌等，其中以空弯曲菌（C。

jejuni）空肠弯曲菌生物学特性形态细长，呈弧形、螺旋形、S形或海鸥状。

运动活泼，一端或两端有单鞭毛。

无芽胞，无荚膜，革兰阴性。

微需氧，需在5％O2、10％CO2和85％N2的环境中生长。

在36～37℃生长良好，但在42℃中选择性好，此温度可使粪便中其他细菌的生长受到抑制。

营养要求高，用含血清的培养基培养后，在同一培养基上可出现两种菌落，一种为灰白、湿润、扁平边缘不整的蔓延生长的菌落；另一种为半透明、圆形、凸起、有光泽的细小菌落。

生化反应不活泼，不发酵糖类，氧化酶阳性，马尿酸盐水解试验阳性。

有菌体（O）抗原、热不稳定抗原和鞭毛（H）抗原。

根据（O）抗原不同将空肠弯曲菌分为42个血清型。

抵抗力较弱。

培养物放置冰箱中很快死亡，56℃5min即被杀死。

干燥环境中仅存活3h，培养物放室温可存活2～24周。

致病性与免疫性空肠弯曲菌引起胃肠道感染主要是该菌产生细胞毒素和一种不耐热肠毒素，后者与大肠埃希菌的LT和霍乱肠毒素有部分抗原交叉。

空肠弯曲菌是引起散发性细菌性肠炎最常见的菌种之一。

该菌常通过污染饮食、牛奶、水源等被食入，或与动物直接接触被感染。

由于空肠弯曲菌对胃酸敏感，经口食入至少104个细菌才有可能致病，该菌在小肠内繁殖，侵入肠上皮引起炎症。

临床表现为痉挛性腹痛、腹泻、血便或果酱样便，量多；头痛、不适、发热。

通常该病自限，病程5～8d。

机体感染空肠弯曲菌后可产生特异性抗体，能通过调理作用和活化补体等作用增强吞噬细胞的吞噬、杀灭细菌及补体的溶菌作用。

诊断与防治可用粪便标本涂片、镜检，查找革兰氏阴性弧形或海鸥状弯曲菌，或用悬滴法观察鱼群样运动或螺旋式运动。

2012年第9期从20世纪70年代起,空肠弯曲杆菌(Campylobacte r je-juni,Cj)在全世界就被普遍认为是肠道感染的主要原因。

其中最常见的是由感染该菌所致的腹泻。

在一些发达国家,Cj 感染引起的腹泻病例数甚至超过了沙门氏菌和志贺氏菌,仅次于致病性大肠杆菌引起的腹泻,主要通过消化道传播,成为最常见的腹泻致病菌。

我国76%轴索型GBS 和42%脱髓鞘型GBS 患者有Cj 前驱感染证据。

1病原学空肠弯曲菌(C.jejuni )菌体轻度弯曲似逗点状,长1.5~5μm ,宽0.2～0.8μm 。

菌体一端或两端有鞭毛,运动活泼,在暗视野镜下观察似飞蝇。

有荚膜,不形成芽孢。

革兰氏染色阴性微需氧杆菌,在含5%O 2、10%CO 2、85%N 2的环境中生长最好。

最适温度为37～42℃。

空肠弯曲菌抵抗力不强,易被干燥、直射日光及弱消毒剂所杀灭,56℃5min 可被杀死,对物理和化学消毒剂均敏感。

2传染源野生动物、家畜及宠物都是Cj 的主要宿主,家禽通常被视为是Cj 最重要的单一宿主,不过,国外也有一些证据显示,二者的血清型和基因型有一个共同的弯曲杆菌来源,而不是单一的直接家禽传染给人类。

Cj 在牛体内也普遍存在。

饮用未经消毒的鲜牛奶已经导致了几次弯曲杆菌感染的暴发。

由于环境的超负荷而导致牛粪的大量聚积所引起的感染较受污染的牛奶或牛肉成为一个新的更重要的因素。

3传播途径粪-口是主要的传播途径。

市售家禽家畜的肉、奶、蛋类多被弯曲菌污染,如进食未加工或加工不适当的肉、蛋、奶以及凉拌菜等均可引起感染。

此外,直接与带菌动物、宠物接触,常是屠宰场工人和儿童被感染的原因。

国际旅行常常是被感染的危险因素之一,多发生于从发达国家前往发展中国家的旅行者。

美国由此造成的感染占总数的5%~10%,英国10%~15%,瑞典、挪威50%~65%。

4临床表现大多数典型的Cj 感染为急性自限性胃肠炎,潜伏期1～10d ,平均为5d 。

文章编号:1002-2694(2010)08-0970-04空肠弯曲杆菌及其致病机制研究进展*倪宏波1,刘思国2中图分类号:R 378 文献标识码:A*兽医生物技术国家重点实验室开放课题基金项目(S KL VBF200807)通讯作者:刘思国,Email:siguo_liu @h 作者单位:1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆 163319;Email:nihongb o@s ;2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物细菌病研究室,哈尔滨 150001空肠弯曲杆菌(Camp y lobacter j ej uni ,C.j e j uni )是自上世纪80年代以来受到国内外广泛关注的人兽共患病原菌,对人的感染率不亚于沙门氏菌和志贺氏菌。

目前C.j ej uni 已经成为许多工业化国家最为普遍的食源性疾病病原之一。

迄今为止,已经开展了对该菌的生物学特性、血清学特性、感染谱、质粒和染色体以及人类空肠弯杆菌性肠炎的流行病学、诊断治疗等方面的研究工作,但是关于其致病的分子机制知之甚少。

2000年完成了C.j ej uni NCTC11168基因组(1.6mega bases)测序工作,弯曲杆菌属的研究工作进入到具有重要意义的后基因组时代,尽管不同C.j ej uni 菌株的基因组和遗传信息是有效的研究工具,但是对C.j ej uni 毒力的透彻了解还有很多工作要做,目前已知的是C.j ej uni 和其他引起腹泻的细菌相比较不产生大量的典型毒力因子。

相反,人空肠弯曲杆菌病的流行病学资料和近期动物模型的研究均表明:在探讨人空肠弯曲杆菌病致病机制时应该充分考虑宿主的因素 1。

本文对C.j ej uni 有关致病因素与机制研究进行综述。

1 空肠弯曲杆菌病概述C.j ej uni 属于弯曲杆菌科,已报告16种。

现己发现该菌除引起人类发热、急性肠炎和格林巴利综合症(Guillain Barre syndro me,GBS)外,还可引起牛和绵羊流产,火鸡的肝炎和蓝冠病,童子鸡和雏鸡坏死性肝炎,以及雏鸡、犊牛、仔猪的腹泻等多种疾病。

论著吉兰巴雷综合征相关空肠弯曲菌waaF 基因序列对比研究陈娟李震中白欣立刘慧李鑫赵子春刘卫卫郭医杰邢丛丛李春岩摘要!目的了解吉兰巴雷综合征(GBS)相关空肠弯曲菌(C .jej uni)waaF 基因核酸及氨基酸序列特征,分析其遗传进化关系。

方法选取3株致GBS C.je j un i 菌株,提取其基因组测序。

应用生物信息学软件,以NCTC11168序列为参照进行比对,分析waaF 基因碱基及相应氨基酸突变、二级结构变化,计算遗传距离。

结果3株致GBS C .jejun i waaF 基因均由960个碱基构成,相同碱基突变位点有5个,1081462位zhanxi ng TA ,lule i 、qiaoyuntao TG 导致相同氨基酸改变:185位DE,该位点导致螺旋结构的改变。

3株致GBS C .jej uni waaF 基因遗传距离较小。

结论GBS 相关C .je j un i 菌株waaF 基因序列存在相同碱基及氨基酸突变及二级结构变化,这可能与C.jejun i 致GBS 能力的改变相关。

河北地区致GBS 的C.jejun i 在进化上存在聚类现象。

关键词!吉兰巴雷综合征;空肠弯曲菌;waaF 基因;序列分析;二级结构中图分类号:R 475.4+3文献标识码:A文章编号:1006351X(2011)01001605C o m pa r ison of waaF gene of G uilla i n Ba r r Synd ro m e a ssocia ted C am p yl obacter jejun i stra i nsC HE NJuan ,LI Zhen zhon g,BAI X i n li ,LI UHui ,LI Xin ,Z HA O Zi chun ,LI UWei wei ,GU O Y i jie ,XING Cong cong ,LI Chun yan ,Depart m ent of neurology ,the Second H ospita l ofH ebe iMedical Un i versity ,Sh iji azhuang ,050000,Ch i na C or r espond i ng au thor :LI Zhen zhong ,Em a i :l j ohndoctor @126.co mAbstra ct !O bjectiveTo i nv estigate t he pathogen i c m echan i s m of Gu illain Barr Syndro m e(GBS)associatedCa mpyl obacter jejuni (C .j e j uni)and t he phylo genic re l ati ons h i p of the m.M ethods3GBS associated C .jej uni stra i nswere cu lt ured to ge t geno m e sequences ,the 3waaF sequences were co mpared wit h the NCTC11168to fi nd t he base and a m i no ac i d mutati ons ,the change of seco ndary struct ure and phylo genic relati onship wit h bi oi nfor matics soft ware .R esu lts The waaF gene of 3GBS assoc i a ted C .j e j uni stra i ns a ll had 960base pa irs .The a lig nment sho wed t hat t here were 5same mu tati on sites ,of which 1081462zhanx i ng T A ,l u le,i q i aoyuntao TG caused correspondi ng a m i no ac i dmu tati on 185DE ,and changes i n a l pha regi ons .The gene ti c distance was near to each other .C onc l u si on sThere are sa m e base and a m i no ac i d m utati on and changes of secondary structure ,which m ay re l ate w it h the pathogenesi s of GBS .The GBS assoc i a ted C.jejun i stra i ns ofH ebe i provi nce has its regi ona l features .K ey wor ds !Gu illa i n Barrsyndro m e ;C a m pyl obacter j e j un;i W aaF gene ;Sequence ana l ys i s ;Secondarystructure基金项目:国家自然基金课题(30471919);国家863计划(2006AA02A237)作者单位5石家庄,河北医科大学第二医院神经内科(陈娟、李震中、李鑫、赵子春、刘卫卫、郭医杰、邢丛丛、李春岩),儿科(白欣立);中国医学科学院北京协和医院神经内科(刘慧)通信作者李震中,j @6吉兰-巴雷综合征(Gu illa i n Barr syndro me ,GBS)为最常见的急性弛缓性神经病变,其症状多以肢体感觉麻痹开始,继而进行性四肢无力,严重后表现为呼吸肌麻痹,死亡率3%~10%[1]。

食品卫生微生物学检验空肠弯曲菌检验1 范围本标准规定了食品中空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)的检验方法。

本标准适用于食品和食源性疾病样品中空肠弯曲菌的检验。

2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌与培养设备外，其他设备与材料如下：2.1 冰箱：2℃～8℃。

2.2 恒温培养箱：25℃±l℃，36℃±l℃，42℃±l℃。

2.3 恒温振荡培养箱：36℃±l℃，42℃±l℃。

2.4 水浴装置：36℃±l℃，l00℃。

2.5 微需氧培养装置：提供微需氧条件(5％氧气、l0％二氧化碳和85％氮气)。

2.6 均质器。

2.7 电子天平：感量0.1g2.8 过滤装置及滤膜(0.22µm，0.45µm)。

2.9 显微镜：l0×～100×，有相差功能。

2.10 离心机：离心力≥20 000×g。

2.11 全自动微生物鉴定系统(VITEK 2)。

2.12 全自动酶联荧光免疫分析仪(VIDAS或mini VIDAS)。

3培养基和试剂3.1 Bolton肉汤：按第A.1章规定。

3.2 改良CCD(mCCD)琼脂：按第A.2章规定。

3.3 哥伦比亚琼脂：按第A.3章规定。

3.4 布氏肉汤：按第A.4章规定。

3.5 氧化酶试剂：按第A.5章规定。

3.6 马尿酸钠水解试剂：按第A.6章规定。

3.7 Mueller Hinton琼脂：按第A.7章规定。

3.8 吲哚乙酸酯纸片：按第A.8章规定。

3.9 Skirrow琼脂：按第A.9章规定。

3.10 0.1％蛋白胨水：按第A.10章规定。

3.11 CFA显色平板n。

3.12 1mol／L碳酸氢钠(NaHC0。

)溶液。

3.13 3％过氧化氢溶液。

3.14 API Campy生化鉴定试剂盒。

3.15 VITEK 2 NH生化鉴定卡。

4检验程序空肠弯曲菌检验程序见图1图1 空肠弯曲茵检验程序5操作步骤5.1 样品处理5.1.1 一般样品取25g(或25 mL)样品(水果、蔬菜、水产品为50g)加入盛有l00 mL Bolton肉汤的有滤网的均质袋中(无滤网的均质袋可使用无菌纱布过滤)，用拍击式均质器均质1 min～2 min；或加入盛有l00 mL Bolton肉汤的均质杯中，以8 000 r／min～10 000 r／min均质l min～2min，经滤网或无菌纱布过滤。

空肠弯曲菌恒温扩增核酸试纸条检测试剂盒说明书【产品名称】空肠弯曲菌恒温扩增核酸试纸条检测试剂盒【英文名称】Campylobacter jejuni（CJ）Isothermal Amplification Diagnostic Kit 【包装规格】单管单人份，20人份/盒。

【预期用途】用于空肠弯曲菌的快速检测和筛查。

仅供科研。

【检验原理】本试剂盒将DNA 扩增、核酸杂交和核酸试纸条检测三种技术有机地融为一体，在反应中加入两对空肠弯曲菌的特异性引物和一对特异性探针，一次性完成DNA 扩增及杂交过程，然后用一次性核酸检测装置（3号）对空肠弯曲菌进行定性检测。

由于待测样本的扩增（PCR 管盖和石蜡油双重保护）和检测过程均在物理封闭条件下完成，所以本试剂盒具有防止实验室扩增物交叉污染，防止假阳性的效果。

【试剂盒组成】 1 试剂盒A*不带标签，反应管中包括除样本外的所有试剂。

上覆矿物油，以防止扩增中产生气溶胶，防止假阳性。

2 试剂盒B【储运条件及有效期】1.运输条件：试剂盒A 需要-20℃冷冻运输，运输过程中，试剂盒A 在-20℃-0℃内保存时间不超过五天；试剂盒B 可以常温运输。

2.储存条件：试剂盒A 在-20℃保存；试剂盒B 在2℃-30℃干燥保存。

3.有效期：有效期12个月【仪器要求】恒温装置如：水浴锅、金属浴、各种型号PCR 仪等。

【操作步骤】1 样本处理及DNA 提取未提供 2 恒温扩增2.1 根据需要确定所需反应液的管数，然后从试剂盒中取出反应管并做上标记； 2.2 待反应液解冻后，以>4000rpm 的转速离心3-5秒；2.3 在任何样本被加入之前，首先在一管反应液中直接加入10ul ddH 2O，用移液器吹打混匀，作为阴性对照； 2.4 在其余标记好的反应管中，依次加入6ul ddH 2O 和4ul 处理好的样本或阳性对照（试剂盒中提供），并 用移液器吹打混匀（阳性对照应在阴性对照和所有样品之后被加入）； 2.5 将加好样的反应液以>4000rpm 的转速再离心3-5秒；2.6 将反应管放置恒温仪上，60℃温浴60min （在温浴过程中和温浴结束后不得打开反应管盖）。

同聚体G_C轨道分析在菌株07001中共发现25个多聚（G_C）束，与其他空肠弯曲杆菌菌株相似（NCTC 11168中29个，RM1221中25个，81-176中19个）[8-1 0]。

多聚（G_C）束的位置在补充表S3中进行了描述。

其中,在CDS区域发现了18个小区，在基因间区域发现了7个小区。

在空肠弯曲杆07001检测到的25个菌株中，在CPS区域中发现6个，在FM区域中发现6个，在II型限制性修饰酶区域中发现1个，在位于可变区域的基因之间的基因间区中发现3个区域。

空肠弯曲杆菌分离株之间的CDS同源性参考菌株的CDS序列是根据RefSeq ID从NCBI处获得。

用相应的测序基因和预测的对应于菌株81-176,81-11 6，NCTC11168，RM1221和269.97的蛋白质序列对DNA和预测的蛋白质序列进行默认参数的喷射绘制。

在该研究中检查的6个空肠弯曲杆菌菌株的基因组中也发现了来自菌株07001的1,179个同源基因。

在人的81-176,81-116和NCTC11168分离株中也观察到来自菌株07001的1,351个同源基因。

菌株07001和81-176,81-116，NCTC11168，RM1221和269.97之间分别有1441,1416,1396,1409和1229个同源基因。

菌株81-176,81-116，NCTC11168，RM1221和269.97有138,163,183,170和350存在的CDS。

然而，在菌株07 001中未观察到236,256,284,468和544的CDS，其对菌株81-176,81-116，NCTC11168，RM12 21和269.97具有特异性。

空肠弯曲杆菌亚种间共有1 316个同源基因。

空肠弯曲杆菌亚种中缺少空肠菌株81-176,81-116，NCTC11168和RM1221和137基因，doylei269.97基因组。

共有32个基因是菌株07001独有的，特别是在菌株07001中存在的CDS，其不存在于81-1 76,81-116，NCTC11168，RM1221和269.97中的基因。