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苏微呕吐毒素免疫亲和柱使用说明书【产品用途】呕吐毒素（DON）免疫亲和柱适合于和DON酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测DON。
适用于谷物、饲料等样本中的DON净化处理，提高了样品的纯度，纯化后的提取液可用不同的分析方法测定。
【产品性能】柱吸附能力：≥1000ng/支；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，呕吐毒素（DON）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的DON经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过DON免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，DON与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱DON，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；125μL凝胶/每支柱管说明书1份。
【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、聚乙二醇8000（PEG）、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5g聚乙二醇8000，并与125mL水混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用快速定性滤纸过滤，并用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
【亲和柱净化】注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！----将柱子上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上；----将20mL注射器连接于免疫亲和柱上部，用5~10mL pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）或者去离子水平衡柱子，以1滴/秒的速度缓慢通过免疫亲和柱，（用注射器加以正压或用真空泵施加负压，也可以使用泵流操作架配合免疫亲和柱）；----准确移取2mL上述滤液（相当于0.4g样品）注入注射器中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱；----用20mL 水冲洗柱子，弃去流出液，流速1滴/秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体；----准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。
ROMER 国际贸易北京有限公司编号：COKAQ4000_N O V 09呕吐毒素是B 型单端孢霉烯族化合物，由镰刀菌产生，特别是Fusarium graminearum. 这种霉菌毒素主要产生在谷物中，例如小麦，大麦，燕麦，黑麦和玉米中。
呕吐毒素具有非常高的毒性，1ppm 以上对猪有潜在的危害。
由受呕吐毒素污染的小麦做成的宠物食品具有急性毒性。
呕吐毒素是一种免疫抑制剂，可以引起肾的疾病。
当人类食用了受呕吐毒素污染的谷物后也同样会产生呕吐症状。
美国食品药品监督管理局(FDA)对呕吐毒素限量的法案规定如下： （1）人类食用的成品小麦产品：1ppm ； （2）猪和其他动物饲料中原料的谷物及谷类副产品：5ppm ； 猪饲料：1ppm ； 其他动物饲料：2ppm ； （3）食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料原料中的谷物及谷类副产品：10ppm ；食用牛、4个月以上的饲育牛及肉鸡的饲料：5ppm 。
AgraQuant ®呕吐毒素检测试剂盒应用固相直接竞争酶联免疫吸附原理，用去离子水或蒸馏水从研磨样品中提取呕吐毒素。
样品提取液或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物混匀后加入到抗体包被的微孔中，样品中的呕吐毒素或呕吐毒素标准品与酶-呕吐毒素偶合物中的呕吐毒素竞争结合微孔中的特异抗体。
经过洗板去除未参加抗原-抗体反应的的呕吐毒素，当酶的底物被加入到微孔中，颜色变为蓝色，且颜色深浅与样品中或标准品中呕吐毒素含量成反比。
加入反应终止液终止反应后，反应液颜色应由蓝色转为黄色。
在450nm(OD450)滤镜及630 nm 示差滤镜下使用酶标仪对微孔板进行吸光度值测量。
利用标准品的吸光度值对标准品浓度制作标准曲线，将样品的吸光度值与标准品的吸光度值进行比较以进行结果的判读。
AgraQuant ® 呕吐毒素检测试剂盒操作方法0.25/5 ppmDeoxynivalenol （Vomixin ）呕吐毒素 Assay Principles 检测原理1.试剂盒在不使用时，需放置在2-8℃(35-46℉)保存，并确保在有效期之前使用。
一、概要
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）又称呕吐毒素（Vomitoxin）属于霉菌的单端孢菌素族，由某些镰刀霉真菌属产生。
呕吐毒素多分布于小麦、大麦、玉米等谷物籽实中，含量通常是mg/kg(μg/mL，ppm)级的，由于其具有高的细胞毒素及免疫抑制性质，对人类及动物构成了健康威胁。
本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品，能最大限度地减少操作误差和工作强度。
二、试验原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被呕吐毒素抗原，样本中的呕吐毒素和微孔条上预包被的抗原竞争抗呕吐毒素抗体（抗试剂），同时抗呕吐毒素抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，，经TMB底物显色，样本吸光度值与其所含呕吐毒素量呈负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中呕吐毒素的含量。
三、适用范围
可定性、定量检测，本试剂盒适用于饲料样本中呕吐毒素的含量检测。
四、交叉反应率
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）…………………………100%
3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (1)
五、检测步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出
2、取出需要数量的微孔板
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号
5、加标准品/样本
6、洗板
7、显色
8、测定
六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
样本最低检测限：
饲料……………………………………………………150µg/kg
回收率：
饲料……………………………………………………95±15%
七、贮藏条件及保存期
贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。
保存期：该产品有效期为12个月。
试剂盒使用方法试剂盒使用方法试剂盒是一种用于化学实验室的常见工具，用于检测样品中特定分子的存在或浓度。
以下是一个一般的试剂盒使用方法的步骤。
步骤一：准备工作在开始使用试剂盒之前，确保你已经阅读并理解了试剂盒的使用说明。
检查盒子的封口是否完好，以确保试剂没有在运输过程中泄漏或受到污染。
步骤二：样品处理根据试剂盒的要求，准备你的样品。
这可能包括取样、稀释或其他预处理步骤。
确保你使用干净的容器和仪器处理样品，以避免任何污染。
步骤三：试剂配制根据试剂盒的说明书，准备试剂溶液。
阅读说明书上所列的配方以及所需的体积和浓度。
使用准确的实验室仪器（如移液器或烧杯）来测量试剂并混合它们。
步骤四：品质控制在使用试剂盒进行实验之前，进行一次品质控制试验以确保试剂正常工作。
这可以通过添加已知浓度的标准溶液或阳性对照进行。
根据试剂盒的说明书，在预期浓度下运行控制组并观察结果。
步骤五：实验操作将处理后的样品与试剂溶液混合。
确保按照试剂盒说明书上的指示操作。
这可能包括混合、搅拌、加热或其他处理步骤。
步骤六：分析结果根据试剂盒说明书上的指示，分析实验结果。
这可能涉及样品的比色、测定吸收率或其他适用的测量方法。
确保在正确的时间内进行测量以获得准确的结果。
步骤七：数据处理根据试剂盒的说明书和实验室的需求，对实验结果进行数据处理。
这可能包括计算平均值、浓度或其他相关参数。
使用适当的统计分析方法评估结果的可靠性。
步骤八：结果解读根据试剂盒说明书上给出的参考值，解读你的实验结果。
确定样品中的特定分子的存在或浓度。
将结果记录在实验记录中，以备将来参考。
步骤九：清理和处理废物在使用试剂盒之后，将所有使用过的试剂和废弃物妥善处理。
根据实验室的安全要求，将废物放入合适的容器中，并根据实验室规则处置。
步骤十：实验总结与整理根据实验结果和经验，总结你的实验并记录任何有关试剂盒使用方法的问题或改进意见。
这有助于你在以后的实验中避免错误并提高实验的效率和准确性。
呕吐毒素检测测量系统分析
韦冰;陈艳熙;覃均生
【期刊名称】《中国饲料》
【年(卷),期】2022()20
【摘要】ELISA试剂盒法和上转发光法是检测呕吐毒素含量的两种常用方法,为确
保检测数据的可靠性,本研究针对这两种检测方法进行测量系统分析。
试验结果表明,两种测量系统分辨力均满足十分之一法则,但ELISA试剂盒法更为精确;稳定性、偏倚和线性均满足要求;重复性和再现性的实验中,ELISA试剂盒法R&R%为
6.56%,P/T%为5.48%,均小于10%,表明该测量系统测量误差在可接受范围内;而上转发光法R&R%和P/T%均大于30%,不能满足要求。
建议减少使用上转发光法检测样品中的呕吐毒素含量,试验结果以ELISA试剂盒法的检测结果更为准确、可靠。
【总页数】5页(P66-70)
【作者】韦冰;陈艳熙;覃均生
【作者单位】南宁学院
【正文语种】中文
【中图分类】S816.17
【相关文献】
1.酶联免疫吸附试验检测呕吐毒素测量不确定度评定的探讨
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3.胶体金免疫层析技术快速检测
谷物中的黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素4.荧光定量检测试纸检测饲料中
呕吐毒素5.高效液相色谱同步检测饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮及呕吐毒素的方法
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霉菌毒素检测方法1.呕吐毒素(DON)的检测ELISA法测试前请仔细阅读本说明在2—8℃冷藏—不要冻结1.简介 DON毒素脱氧瓜萎镰菌醇（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。
脱氧瓜萎镰菌醇的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。
研究表明猪对脱氧瓜萎镰菌醇很敏感。
当脱氧瓜萎镰菌醇含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。
其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对脱氧瓜萎镰菌醇的敏感性各不相同。
研究表明脱氧瓜萎镰菌醇会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。
因此，精确测定可能含有脱氧瓜萎镰菌醇的食物和食品就现得十分重要。
FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了脱氧瓜萎镰菌醇含量的强制标准。
美国食品药物管理局已经颁布的DON毒素建议限量如下：2.方法原理本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppm级的DON毒素。
样品和标准控制液中游离的DON毒素与轭合物中的DON毒素竞争抗体结合位置。
清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明DON毒素越少。
将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中DON毒素的准确浓度。
3.贮存要求本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
4.试剂与仪器4.1已提供的材料48个包被了抗体的孔；48个红色标记的混合孔；5瓶2ml浓度为0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制标准液(黄色标签)；1瓶DON毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)；1瓶24ml底物溶液(绿色标签)；1瓶32ml红色终止液（红色标签）4.2需要但未提供的材料提取材料；蒸馏水或去离子水；100ml量筒；150ml的具塞三角瓶；滤纸；样品收集具塞试管；漏斗；粉碎机；称量为5～25克的秤；带450nm滤光片的酶标仪；200μl移液器；200μl吸咀；纸巾或等效的吸水材料；计时器；防水记号笔；洗瓶；移液器用的试剂槽；蒸馏水或去离子水；计时器等5.注意事项本测试盒不使用时应在2～8℃下存放。
试剂盒的使用方法
一、总体使用注意事项
1.请检查试剂盒的条码与您的检测药物的相符合，以确保使用的是正确的试剂盒；
2.使用试剂盒之前，请先仔细阅读使用说明，以免操作不当造成检测结果翻转；
3.试剂盒只能在-20℃以上进行长时间保存，使用以及长时间存放时，请将所有试剂
盒放入冰箱内，严禁放在室温内存放，以免试剂变质；
4.如使用时长超过8小时，请及时更换新的试剂盒；
5.使用试剂盒前，先检查是否有污染、变质现象，如发现污染、变质现象，请警惕使用，以免影响试剂使用效果；
6.为了保证实验数据精准性，请按照使用说明正确操作，仔细操作，勿欠考虑，以免
造成影响检测结果。
二、试剂使用操作步骤
1.打开试剂包装箱，检查试剂盒上的标签上的信息和试剂盒内的试剂是否完整与正确；
2.取出试剂盒，阴性标记和正面的样品部分置于容器中，将红色试剂液滴到样品容器中；
3.将标记的血液滴在检测室容器中，将蓝色试剂液加入容器；
4.搅拌均匀，观察容器的检测结果，若检测结果出现细菌，顺时针旋转容器，直到将
检测结果完全观测出来；
5.检测完毕，将试剂盒及药液抛弃，并安全放置，禁止拆开。
1.使用试剂盒前，务必检查一遍，若发现有异常，请抛弃，勿使用；
2.平时要定期无菌，清除室内污染物，保证实验室的干净整洁；
3.做实验时，务必呵护安全，穿活跃的外套，不要实验室的服装；
4.使用试剂盒时，用管完整拧好，以免试剂溶剂排放；
5.尽量使用无菌用品或用具，实验室内有菌物质要丢弃；
6.实验室准备好常见的急救器材，以备不时之需。
呕吐毒素快速检测试纸条使用说明书【产品简介】脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol）又称呕吐毒素（Vomitoxin），本产品为呕吐毒素胶体金快速检测卡，用于定性检测谷物样品中呕吐残留，整个检测过程只需要5分钟，检测卡灵敏度为250ng/ml（2 50ppb）。
谷物样品的检测限为1μg/ml（1ppm）。
【检测原理】基于竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中如果含有呕吐毒素，其浓度又高于检测试纸的灵敏度，则会与试纸卡上的抗体结合形成复合物，使应该在试纸上出现的红色T线不显色，结果判为阳性。
反之为阴性。
【适用范围】快速筛查粮食或饲料中呕吐毒素是否超标以及食物中毒发生后快速筛查中毒因子是否为呕吐毒素。
【包装组成】●呕吐毒素胶体金法检测卡（40份）●一次性塑料滴管（40支）●塑料一次性手套（5只）●使用说明书（1份）【样品处理】1.取5g以上有代表性的粉碎后的谷物样品（过20目筛），准确称取0.5g均匀粉碎试样，加入到配套的15 ml离心管中。
2．向离心管中准确加入纯净水和乙酸乙酯各2mL，将瓶塞盖紧密封，用力振荡5分钟，4000rpm离心1分钟（备注：如实验室没有大离心机设备，可以用小离心管取1.5ml上清液，用小离心机离心）。
3．用吸管取0.6mL上清液到小玻璃杯中，吹干滤液，然后用0.3ml体积稀释液复溶杯底固体。
此溶解液即为检测液.4．取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
5．5~10分钟判断结果，半小时后的结果判读无效。
【结果判断】阴性（－）：C、T线均显色。
表示样品中不含有待检测物质或其浓度低于检测限。
阳性（＋）：检测T线不显色，则表示样品中待检测物质浓度高于检测限。
无效：质控C线未显色，表明操作过程不正确或试纸条已失效。
【贮存条件及有效期】2-30℃，密封干燥，检测卡保存时间18个月，乙酸乙酯为易挥发性有机溶剂，保存为12个月。
真菌毒素胶体金检测试纸基于抗原抗体的免疫原理，利用纳米胶体金层析技术，在真菌毒素的现场检测时具有以下优势：1) 单个样品即可检测，无需仪器设备，特别适合现场检测；2) 灵敏度高: 免疫层析法可检出量可达ng级，ELISA法最低检出量可达pg级，并可定量测定。
呕吐毒素DON(脱氧雪腐镰刀菌烯醇)检测试剂盒
适用
Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测试剂盒利用竞争酶联免疫吸附原理定量检测小麦，大麦，麦芽，玉米及燕麦中的呕吐毒素。
检测原理
Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测试剂盒是基于竞争性酶联免疫吸附检测法。
用水震荡萃取粉碎样品中的DON,过滤水相萃取物，然后进行免疫学检测。
加入呕吐毒素的酶标记物到已加有标准或样品的测试孔中，抗体被加入后反应开始，样品及酶标记物竞争结合连接在微孔上的抗体，10分钟培养后，倒掉孔中的溶液，洗掉微孔中未的结合呕吐毒素和酶标记物。
加入无色的底物溶液，培养5分钟，所有结合的酶标记物使底物转化成蓝色物质。
加入停止液然后读取吸光度值，未知浓度样品与标准吸光度值进行比较，就可以得到样品的呕吐毒素浓度。
特异性
Beacon脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测试剂盒对于脱氧雪腐镰刀菌烯醇有很强的特异性，以下表格展示了与其他形式的交叉反应率。
复合物交叉反应率
3-acetyl-deoxynivalenol >1%
15-acetyl-deoxynivalenol <300%
LOD(最低检测限) 100ppb
LOQ(最低定量限) 200ppb
试剂及材料
若试剂盒保存在2-8℃，未拆开包装的试剂盒在标识的保质期之前均可放心使用。
1．真空包装，包含干燥剂的8×12的微孔板。
2．5瓶2ml浓度为0，0.2，0.5,1.0,2.5 ug/ml（ppm）的DON标准品，（注意：因为谷物样品在萃取过程中1：5稀释，标准品实际上为设定标准浓度的1/5，原始样品的浓度无需换算。
）
3．1瓶8ml的酶标记物。
4．1瓶8ml的鼠抗DON抗体。
5．1瓶14ml的底物溶液
6．1瓶14ml的停止液（注意：1N 盐酸，小心操作！）
7．1包洗液粉末。
8．操作说明书
注意事项
1．每种试剂最适用于Beacon DON试剂盒。
其他生产商的试剂不可替代本试剂盒中的任何试剂，不同批次之间的试剂不可混用。
2．试剂的稀释及污染以及程序中未提及的样品，均会导致结果失真。
3．不可使用过期试剂。
4．开始实验前试剂回温到室温（20-28℃）,避免试剂在室温存放过久（＞24小时）。
5．DON为极毒物质，将所有丢弃的液体倒入盛有家用漂白粉(不低于10%)的塑料容器中，所有的实验器具必须在30%家用漂白粉溶液中浸泡至少1小时，戴上手套穿上防护服以避免皮肤及黏膜与试剂或样品萃取物接触，如果一旦接触，必须立即用大量水冲洗。
6．停止液为1N 盐酸，避免皮肤及黏膜接触，如果有喷洒，立即清除并用大量水冲洗，
所需材料（不提供）
1．实验室用蒸馏水或去离子水
2．100ml量筒
3．用于萃取样品及收集萃取液玻璃器皿
4．滤纸，Whatman GF/A及相当者
5．可吸取50ul容量的移液器及一次性吸头
6．可吸取50ul或100ul的八道移液器及一次性吸头
7．吸水纸
8．450nm的酶标仪
9．计时器
样品的准备
1．粉碎好的样品过20目筛并彻底混合，不立即分析的样品需冷冻储存。
2．称取20g样品，量取100ml水到一有盖容器中。
3．剧烈震荡3分钟。
4．静置2-3分钟，使样品沉淀。
5．用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤15ml萃取液，收集滤液到一干净容器中。
清洗液的准备
1．将清洗浓缩液倒入1L容积的容器中，加入实验室用蒸馏水。
2．将配好的清洗液转移至洗瓶中。
检测程序（注意标准及样品做重复，可以提高检测的准确度及精确度）
1．开始实验前要求试剂及样品萃取液达到室温。
2．取适量的孔条固定在微孔板架上，确定未使用的孔条，与干燥剂一同放入密封袋中保存。
3．加入50ul的酶标记物到微孔中。
4．加入50ul的样品及标准品到相应的孔中，注意使用一次性吸头防止交叉污染
5．加入50ul抗体溶液到微孔中，轻微震荡微孔板。
6．室温下孵育10分钟。
7．倒掉微孔中溶液，微孔中注满清洗液，然后到掉，重复4次，共五次洗板。
8．最后一次清洗完后，倒掉孔中溶液，然后翻转微孔板在吸水纸上拍干。
9．每孔中加入100ul的底物溶液。
10．室温下孵育5分钟。
11．每孔中加入100ul停止液。
12． 450nm读吸光度值。
结果判断
1．半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的DON含量大于此标准的DON浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的DON含量小于此标准的DON浓度。
2．定量结果判定，需要以标准的吸光率为X轴，标准浓度的半对数为Y轴绘制曲线图，将标准浓度及吸光率的点用直线连接，根据样品的吸光率在Y轴上即可找到相应样品的浓度，如果样品的吸光率大于最小标准的吸光率或小于最大标准的吸光率，即可说明此样品中DON的含量小于0.2ppm或大于2.5ppm。
