布氏杆菌染色液

实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。

2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。

将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。

将两者混合即成。

3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。

将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。

两液混合即成。

4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。

5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。

7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。

8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。

60·2017.9 Veterinary clinical science 兽医临床科学布氏杆菌病又简称布病，是布氏杆菌引起的人畜共患的慢性传染病。

在1949年被列为二类疫病，防治工作得到了高度的重视。

特别是20世纪60年代期，对高危人群和家畜进行疫苗防治，使发病率大幅度下降，取得了举世瞩目的成就，90年代出此病的得到了较好的控制。

但是，随着养殖业的迅速发展，奶牛和羊大范围流动，加上免疫率下降，检疫监管力度不够等因素，发病率在2005～2006年间有上升的趋势，据农业部统计资料，2005年此病的布氏杆菌病的疫点有351个，2006年上升到了1178个。

猪布氏杆菌病以8～10月龄的性成熟的猪感染率较高，仔猪一般很少感染。

1 病原猪布氏杆菌为无鞭毛、无运动性、不形成芽孢，大多数无荚膜的革兰氏阴性菌。

此菌对干燥和寒冷的抵抗力很强，对人和阳光比较敏感，75℃5min就可以将其杀死，100℃条件下立刻死亡，阳光直射1～4h就可以死亡。

一般的消毒药如0.1%的升汞水、1%的来苏水、2%的福尔马林在15min内就可以将其杀死。

2 发病机制布氏杆菌侵入猪体后，先暂时在局部存活，以后逐渐进入淋巴结，如果在淋巴结中仍然可以存活，就会繁殖增多进入血液，扩散到全身，最后在脾、肝、淋巴结、骨髓等富有网状内皮组织的器官存活下来。

布氏杆菌除了在网状内皮组织系统外，还可以在关节囊、睾丸和乳腺中存活并引起炎症。

怀孕母猪的子宫适宜此菌的生长，可以引起胎盘化脓，同时通过胎盘，感染胎儿，导致其死亡。

胎盘由于病变，会丧失正常的生理机能，还可导致流产。

如果子宫长期有炎症，甚至还可以侵害卵巢，造成流产后不孕。

3 流行病学、临床诊断3.1 流行病学此病的易感动物范围很广，包括各种动物和人，猪是最易感的动物之一。

患病猪和带菌猪是本病的传染源。

病猪可以通过胎衣、阴道分泌物、乳汁、精液以及粪尿等散播病菌，污染饲料、饮水，经过消化系统感染，也可以经过皮肤、粘膜、交配以及吸血昆虫感染。

实验室常用染色液和试剂配方染色液和试剂在实验室中被广泛使用，用于各种科学研究和实验。

它们可以用来染色细胞、分析化合物和反应产物、诊断疾病等。

下面是一些常用的染色液和试剂配方。

1. Hematoxylin-Eosin染色液：Hematoxylin-Eosin（HE）染色液是一种经典的组织染色方法，常用于病理学研究和诊断。

配方如下：- Hematoxylin染色液：将5 g hematoxylin溶解在100 mL乙醇中，加入2 mL盐酸和900 mL蒸馏水，最后调节pH值为5-6-酸性酒红染液：将0.5g酸性酒红溶解在100mL乙醇中。

- Eosin染色液：将0.5 g eosin溶解在100 mL乙醇中。

2. Giemsa染色液：Giemsa染色液用于染色细胞，特别是白细胞，常用于血液学和微生物学研究。

配方如下：- Giemsa染色液：将4 g Giemsa粉末溶解在1 L蒸馏水中。

可以加入2 mL甲醇增强染色效果。

3.厌氧培养试剂：用于厌氧条件下培养微生物的试剂。

配方如下：- Thioglycollate培养基：将11.5 g thioglycollate溶解在1 L蒸馏水中，加热至溶解。

- Dithiothreitol（DTT）溶液：将1 g DTT溶解在100 mL蒸馏水中，用10 mL离心管分装，-20℃保存。

4. Bradford试剂：用于蛋白质的浓度测定，常用于生物化学和分子生物学实验。

配方如下：- Coomassie Brilliant Blue G-250：将100 mg染料溶解在50 mL浓硫酸中，加热至溶解。

再用1 L蒸馏水稀释至30%浓度。

5. Gill's胶片显影试剂：用于胶片的显影，常用于分子生物学实验。

配方如下：-显影溶液A：将1.5g氯化钴和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.8-显影溶液B：将3g溴化钾和1g柠檬酸溶解在200mL蒸馏水中，用0.1MNaOH调节pH值至6.4-6.86.RIPA裂解缓冲液：用于细胞或组织的裂解，提取蛋白质或RNA，常用于生物化学和分子生物学实验。

规模化牛场布氏杆菌病的防治措施刘军（栖霞市桃村畜牧兽医工作站 山东烟台 265301）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2018.09.009摘要：牛布鲁氏杆菌病是规模化牛场必须严格防控的一种重点疫病之一，对养牛业造成的危害比较大，同时也会对人的健康造成影响，所以要引起足够的重视。

本文对牛的布氏杆菌病原、诊断方法以及鉴别方法等进行了分析，并提出了防治措施，希望能为广大养殖户提供一定的参考。

关键词：布氏杆菌；诊断；防治布氏杆菌病简称为“布病”，是由布氏杆菌引起的人畜共患性全身传染病，其临床特点为长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等。

在当前已经严重地影响到了人们的生存和社会的和谐稳定。

牛的布氏杆菌病是一种人畜共患病，被我国列为二类动物传染疾病，如果牛的布氏杆菌病暴发，那么整个牛群都会殃及，临床现象以母牛流产、胎衣不下、胎膜有炎症或公牛睾丸炎症等生殖障碍为特点，同时也可以导致奶牛的奶产量与质量下降。

本病不仅会对奶牛的奶品质、产量和肉牛的肉品质造成严重影响，更会对人类的健康造成非常大的危害，一旦布氏杆菌病发生，病原会在整个地区长期潜伏，难以根除，目前通过用药物来治疗该病的难度极大。

因此预防牛布氏杆菌病很重要，广大牧场以及私人养殖场应该重视起来，避免发生不必要的损失。

1 牛布氏杆菌病原学研究1.1 病原1897年丹麦医生Bang首次在牛身上发现了布氏杆菌病毒。

时至今日，已经发现的布鲁氏菌属包括6个种19个生物型，其中牛种布氏杆菌分为1、2、3、4、5、6、7、9型，羊的分为1、2、3型，布氏杆菌是一组微小的球状、球杆状、短杆状细菌，宽约0.3～0.5μm，长0.6～1.5μm，显微镜下见到的羊种菌为明显的球杆状，牛种菌为明显的短杆状。

6种菌形态很难区分，一般来说羊的最小，牛的其次，猪的较大，布氏杆菌没有鞭毛，不形成夹膜和芽孢。

1.2 染色涂片染色检查很多为单个排列，极少见成对短链排列。

北京雷根生物技术有限公司
孔雀石绿水溶液(5%)
简介：
孔雀石绿又称孔雀绿，是人工合成的染料，CAS 号为569-64-2，分子量为364.92。

孔雀石绿水溶液(1%)主要由孔雀石绿、去离子水组成，可用于布氏杆菌染色或其他用途。

组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 孔雀石绿水溶液(5%)一般用于特殊用途，如果用于一般染色，应稀释至0.5～1%使用。

2、 涂片：载玻片编号，于载玻片中央滴加2～3滴孔雀石绿水溶液(0.5～1%)染色。

3、 加盖洁净的盖玻片，轻轻按压制成压片。

4、 光学显微镜在低倍、高倍或油镜下观察细菌形态。

注意事项：
1、 涂片之前应事先在背面做好圆圈标记，以便判断后续试验的位置。

2、 细菌培养时间会影响染色，阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解，都常呈阴性反应。

编号 名称 DM0076 Storage 孔雀石绿水溶液(5%) 100ml
RT 避光 使用说明书 1份。

微生物染色液配制及染色法2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。

2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。

滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。

2.1.3 结果菌体呈蓝色。

2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

2.2.2 革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。

2.2.3 沙黄复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。

2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。

2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。

2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。

2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。

水洗，待干，镜检。

2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。

革兰氏阴性菌呈红色。

注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。

2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。

2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。

2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。

染液如因蒸发减少时，应随时添加。

染5min，倾去染液，水洗。

2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。

布氏杆菌的检测方法
布氏杆菌是一种常见的细菌，可以引起人和动物的疾病。

以下是布氏杆菌的常见检测方法：
1. 细菌培养：将临床样品（如血液、尿液、脑脊液）在琼脂平板或液体培养基上进行培养，利用布氏杆菌的特性形态和生长特点观察和确认。

2. 石蜡包埋切片染色：将临床样本（如组织）进行固定、包埋和切片，然后进行特定的染色方法（如格拉姆染色、抗酸染色等）观察。

3. PCR检测：利用聚合酶链反应（PCR）技术，根据布氏杆菌的特异性基因序列进行扩增和检测，从而确定样品中是否存在布氏杆菌。

4. 免疫学方法：利用抗原与抗体的反应特性，使用免疫学方法（如酶联免疫吸附试验ELISA、免疫荧光法等）检测布氏杆菌。

5. 分子生物学方法：利用分子生物学技术，如DNA测序、限制性片段长度多态性（RFLP）等，进行布氏杆菌的鉴定和分析。

需要注意的是，具体的检测方法要根据实验室条件和临床需求来选择，同时需按照相关的实验操作规范进行操作，确保检测结果的准确性。