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交叉配血操作规程交叉配血试验（凝聚胺法）[原理]凝聚胺试验是利用低离子溶液促进红细胞抗原与血清（浆）中的抗体反应，再利用凝聚胺引起红细胞间非免疫性的凝集，让已有抗体（IgG）反应的红细胞间的距离缩短。
距离缩短后更能引起已反应的抗体和别的红细胞产生反应形成免疫性的凝集。
而由凝聚胺所引起的非免疫性红细胞凝集反应可被后来加入的复悬液所中和而散开，如有免疫反应，凝集就不会散开，为阳性反应。
如没有免疫反应，凝集就会散开，为阴性反应。
交叉配血试验是在盐水介质的基础上加入凝聚胺，检测供患之间是否相合，患者血清（浆）中是否含有具临床意义的红细胞异体抗体。
[试剂组成]1，洁净试管，离心机，显微镜。
2，0.85% 氯化钠溶液：准确称取氯化钠（AR）8.5 g，用蒸馏水溶解并定容至1000 ml。
试剂启用后，有效期为：二周。
3，凝聚胺试剂*1 低离子介质溶液：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。
*2 凝聚胺溶液：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。
*3 复悬液：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。
*4 阳性对照血清：含抗D血清，氯化钠及稳定剂。
4，抗人IgG 血清。
[试剂保存和稳定性]1．凝聚胺试剂须保存在2-25℃。
2．有效期内可使用。
3．抗人IgG血清低温冰箱保存。
复溶后放2—4℃冰箱保存。
[标本收集和准备]1．抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。
以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。
2．2% 红细胞悬液：用生理盐水洗涤红细胞3次。
根据下表进行红细胞悬液的配制。
悬液浓度（%）压积红细胞（滴）盐水（滴）----------------------------------------------------------------2 1 2ml(40)5 1 0.8ml(16)----------------------------------------------------------------[操作步骤]1．取出3支试管分别标记主，次及对照测试：主测管：加入病人血清（浆）2滴，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴，次测管：加入供血者血清（浆）2滴，再加入病人3-5%红细胞悬液1滴，对照管：加入2滴*4阳性对照血清，再加入供血者3-5%红细胞悬液1滴。
凝聚胺法交叉配血的临床意义
凝聚胺法交叉配血是一种常用于临床血液输注的方法，其主要作用是在进行输血前排除患者体内存在的抗体，以防止发生血液不相容反应。
这种方法基于血纤维蛋白凝集反应，可以通过观察血液凝结的程度来判断是否存在抗体，从而选择合适的血液供应者，提高输血的安全性和有效性。
凝聚胺法交叉配血在临床上具有重要的意义。
首先，凝聚胺法交叉配血可以避免血液不相容反应的发生。
血液不相容反应是指输注不匹配的血液成分后，患者体内的抗体与供血者的血液发生反应，导致溶血等严重后果。
通过使用凝聚胺法交叉配血，可以事先检测出患者体内的抗体，并将其与供血者的血液进行对比，从而避免使用不相容的血液成分，减少发生不良反应的风险。
其次，凝聚胺法交叉配血可以提高输血的安全性。
通过对患者体内的抗体进行筛查，并选择与之相匹配的供血者，可以显著降低输血相关的并发症和风险。
这种方法可以避免输注错误血型、不匹配的Rh因子等情况，减少输血引起的不良反应和并发症，更好地保障患者的生命安全。
此外，凝聚胺法交叉配血还可以提高输血的有效性。
通过事先排除患者体内的抗体，可以避免抗体与供血者的血液发生反应，血液成分的输注得到更好的保持和有效利用。
这将有助于提高患者的营养供给，增强免疫系统功能，促进恢复和康复。
总而言之，凝聚胺法交叉配血在临床上具有重要的意义。
通过排除患者体内的抗体，选择合适的供血者，可以避免血液不相容反应的发生，提高输血的安全性和有效性。
这种方法在临床实践中被广泛应用，为患者提供更安全、更有效的血液输注服务。
用凝聚胺做交叉配血试验的操作程序
1.目的：检出和鉴定意外抗体；红细胞血型抗原定型
2.原理：凝聚胺溶解后产生的阳离子中和红细胞表面的唾液酸使红细胞间距缩短，发生由IgG直接搭桥的可逆的非特异性凝集，当非特异性凝集回复时，只剩下由抗原抗体搭桥的特异性凝集。
3.适用范围：交叉配血、免疫性抗体检查
4.所需材料：聚凝胺试剂、洁净试管、滴管、离心机
5.操作程序：（以交叉配血为例）
5.1以生理盐水洗涤受血者和献血者红细胞1—3次，配成3-5%的悬液。
5.2交叉配血试验：
主侧：2滴患者血清加1滴供者3-5%的RBC悬液。
次侧：2滴供者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。
5.3每只试管加600微升低离子液，混合放置1分。
5.4分别加2滴Polybrene应用液，混合放置15秒。
5.5离心3400转/分15秒，弃上清，控干。
5.6观察管底有无聚凝物，如果没有则需重做。
5.7每管各加2滴解聚液，轻轻混合10秒，观察结果并做记录。
5.8结果判定：10秒内若为Polybrene引起的聚合应该会散开，判为阴性。
若为抗原抗体引起的凝聚则不会散开，判为阳性。
6.注意事项：
6.1可以用EDTA血浆代替血清
6.2加入解聚液后应该在3分钟之内观察结果
6.3解聚液不可多加，以免降低试验灵敏度。
凝聚胺法在交叉配血试验结果的分析【摘要】对405名受血者标本与其同型献血员标本做交叉配血，谱细胞反应分别用抗人球蛋法和凝聚胺法测定。
结果分析得出凝聚胺法具有操作简便、快速、敏感性强和结果清晰等优点,是目前基层医院急诊配血时交叉配血试验比较理想的方法。
【关键词】凝聚胺检测技术交叉配血中图分类号：r446.1 文献标识码：b 文章编号：1005-0515（2012）1-344-01交叉配血试验是临床上确保安全有效输血的重要手段。
传统的盐水配血法虽然简便快捷，但只能检出不现相配合的完全抗体，而不能发现不完全抗体。
抗人球蛋白法虽然能检出不完全抗体，但实验操作步骤繁琐、耗时长、易耽误危重病人的抢救时间。
微柱凝胶技术融合了分子筛技术、离心技术和免疫反应技术，具有标本用量少，灵敏度高，特异性强，操作简便，结果可长期保持优点。
凝聚胺法具有操作简便、快速、敏感性强和结果清晰等优点,是目前基层医院交叉配血理想的方法。
需要注意的是出现配血不合的标本最好微柱凝胶法和凝聚胺法联合应用。
现将凝聚胺检测技术在本血站应用的结果作一阐述与分析。
1 材料与方法1.1 试剂polybrene试剂(包括低离子介质缓冲液、凝聚胺溶液和重新悬浮液) 珠海贝索生物技术有限公司产品；抗人球蛋白试剂、谱细胞由广州市血液中心提供。
1.2 标本2005年至2010年大连市中心血站由各医院提供送检的标本共405例受血者标本与其同型献血员标本做交叉配血。
1.3 方法凝聚胺检测技术：在主侧管内加受检血清2滴和献血员2%红细胞悬液2滴,次侧管加入献血员血清2滴和受检者2%红细胞悬液2滴；各管分别加入低离子介质0.6 ml,混匀,于室温下静置1 min；各管加入凝聚胺2滴,混匀,3 500 r/min离心15 s,移去上清液,观察管底红细胞有无凝块(如无凝块必须重做)；加重新悬浮液2滴,轻轻摇动观察凝块是否散开,若为凝聚胺引起的非免疫性凝集在1 min内即自然散开，若是特异性抗原抗体引起的凝集即不会散开,必要时可在显微镜下观察；常规法按《全国临床检验操作规程第三版》操作。
交叉配血操作规程凝聚胺法交叉配血是指将一定数量的输血者的红细胞与另一组供血者的血清进行混合，通过观察混合血后是否发生凝集反应来确定血型。
交叉配血操作主要采用凝聚胺法进行，以下是交叉配血操作规程的详细步骤。
1.准备工作a.配置所需试剂，包括输入血浆、配血瓶、试剂盘、标本管、溶血酶溶液、配血盘等。
b.通过测定输血者和供血者的血型，确认双方的血型信息，并记录在相关记录表中。
2.标本采集a.采集输血者和供血者的静脉血标本，放入标本管中，避免血样凝固。
b.标本采集的相关操作要符合严格的无菌原则，确保血样的无菌及安全性。
3.标本处理a.将标本管中的静脉血标本置于冰上，在4℃下保存。
b.用溶血酶溶液处理输血者的红细胞，将3滴红细胞加入到每一个配血瓶中，轻轻摇动混合均匀。
4.试剂配置a.将配血盘中的试剂盘取出，配置新鲜的抗血型血清和已知血型标准红细胞。
5.凝胶装配a.打开凝胶洞口，将配血盘的试剂盘放入凝胶洞中。
b.确保试剂盘的位置正确，使试剂液体触及到凝胶洞的底部。
6.样本混合a.取出保存在冰上的输血者和供血者的静脉血标本，放置于试剂盘的对应位置。
b.轻轻旋转试剂盘，使血样和试剂充分混合起来，注意避免搅拌过于激烈。
7.观察凝聚反应a.在一定的时间内，观察配血盘中是否发生凝聚反应。
b.根据凝聚反应的情况，判断输血者和供血者的血型是否兼容。
8.结果判读a.若输血者的红细胞与供血者的血清发生凝聚反应，表示两者的血型不兼容，不适合进行输血。
b.若输血者的红细胞与供血者的血清没有发生凝聚反应，表示两者的血型兼容，可以进行输血。
9.记录和报告a.记录每次交叉配血的操作过程和结果，包括输血者和供血者的血型信息、配血的凝聚反应情况等。
b.报告输血者的血型结果和是否适合进行输血。
交叉配血操作规程凝聚胺法主要是通过观察凝聚反应来判定血型的兼容性，该方法操作简单、结果可靠。
但需要注意的是，交叉配血结果只能作为指导输血的参考依据，还需要综合考虑患者的临床情况和输血指征等因素，确保安全有效地进行输血操作。
一盐水介质交叉配血试验1. 原理盐水介质配血法是目前最常用的配血方法，可以发现临床上最重要的ABO 不配合性。
本试验主要用以检测受血者（献血者）血清（浆）中有无破坏献血者（受血者）红细胞的抗体。
如存在相应的抗体，则交叉管中将发生凝集或溶血现象，此即为交叉不合，反之则交叉相合。
2. 操作（单位：滴）混匀，1000~2000rpm×1~2分钟离心，观察结果。
3．结果观察主、次、混合管均无凝集，无溶血现象，示无配血禁忌，继续下一步进行聚凝胺法或抗人球蛋白法。
主、次、混合管均有凝集和/或溶血现象，示有配血禁忌，需进一步核查，寻找原因。
主、混合管有凝集和/或溶血现象，示有配血禁忌，需进一步检查，寻找原因。
次、混合管有凝集和/或溶血现象，示有部分配血禁忌，需进一步检查，寻找原因。
4．注意事项结果观察时，除肉眼观察外，均需显微镜观察。
要注意真、假凝集的鉴别。
二凝聚胺试验1.原理：凝聚胺(Polybrene)是一种多价阳离子溴化己二甲胺多聚物，具有中和肝素作用：又称肝素灵，溶解后产生许多正电荷，能中和红细胞表面唾液酸所带的负电荷，使红细胞的Zeta电位降低，诱发红细胞产生可逆的非特异性凝聚。
在此过程中，若有IgG分子已直接与红细胞搭桥，当非特异性的红细胞凝聚消散后，只有由抗原抗体引起的搭桥的特异性凝集仍存在。
反应分三个步骤：．红细胞致敏阶段：红细胞在低离子培育基中与相应抗体致敏。
．凝聚阶段：聚凝胺使红细胞非特异性地紧密接近，诱发凝聚现象，因而允许抗体与相应抗原形成桥连。
．再悬阶段：再悬液具有中和聚凝胺的作用，使聚凝胺诱发的非特异性凝聚散开，留下抗原抗体反应所致的特异性凝集不能散开，凝集的强度与抗体的浓度、抗原的浓度及反应的导热特性有关。
2、操作步骤：、在盐水法通过的基础上，在主、次管均加入低离子介质4滴，混合后置于室温1分钟。
、在主、次管均加入聚凝胺溶液2滴，混合后，室温15秒。
、3500转/分，离心10秒，彻底弃上清液。
精心整理交叉配血（凝聚胺法）1.原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。
加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。
2.标本采集：2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染。
溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6.试剂：6.1试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。
6.3试剂组成：试剂 1.低离子介质(LowLonicMedium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-25度贮存，有效期为2年。
试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4.8.5％生理盐水。
7.仪器：7.1血型血清离心机：80-2型离心机江苏金坛市大地自动仪器厂7.2离心机：江苏金坛市大地自动仪器厂7.3电热恒温水箱：江苏金坛市医疗器械厂精心整理精心整理7.4显微镜：XSZ-H3(中国）8.操作步骤及结果判断：8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。
加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。
主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
凝聚胺检测试剂盒使用说明书【产品名称】通用名：凝聚胺测试剂盒英文名：Polybrene Kit【包装规格】100人份/盒【预期用途】本产品用于交叉配血、抗体的筛查及鉴定，不适用于血源筛查。
【检验原理】凝聚胺是一种多价阳离子氨基聚合物，它可以引起红细胞的可逆性凝集。
低离子介质促进红细胞与相应抗体的结合后，在凝聚胺作用下，红细胞发生凝集，加入再悬液后，如果存在不完全抗体，细胞将不会散开，发生不可逆凝集，表明交叉配血不合或存在不完全抗体；反之凝集的细胞将均匀散开，表明交叉配血相合或不存在不完全抗体。
【主要组成成份】1、凝聚胺溶液（0.5%凝聚胺、0.9%氯化钠）10mlx12、低离子介质（5%葡萄糖、0.2%乙二胺四乙酸二钠）10mlx23、再悬液(3.5%柠檬酸、2%葡萄糖) 10mlx14、阳性对照（效价为16的IgG型抗D试剂）1mlx1【储存条件及有效期】2~8℃ 保存，有效期为12个月。
试剂开封后2~8℃ 保存，自开封之日起3个月内使用。
【使用仪器】离心机离心力和离心转数的换算公式为：rpm=299√g/r（r为离心半径，单位：cm）。
【样本要求】1、交叉配血:静脉抗凝全血，抗凝剂为EDTA.Na2、柠檬酸等，2~8℃保存48小时。
2、抗体筛查：采集静脉血于血清分离管中，2000 rpm，离心5分钟，收集血清。
采集静脉血于抗凝管中，2000rpm，离心5分钟，收集血浆，抗凝剂为EDTA.Na2、柠檬酸等，2~8℃ 保存48小时，或-20℃ 保存12个月。
不能用于发生溶血、黄疸及高脂的样本检测。
【检验方法】操作前，将所有试剂平衡至室温。
一、交叉配血试验1、标识:取试管2支，分别标明主、次侧管；另取试管2支，分别标明阳性、阴性对照管。
2、加样：主侧管加受血者血浆100μl（两滴）、献血者红细胞（3~5%）50μl（一滴）、低离子介质200μl（4滴）；次侧管加献血者血浆100μl（2滴）、受血者红细胞（3~5%）50μl（1滴）、低离子介质200μl（4滴）；阳性对照管加阳性对照100μl（2滴）、O型RhD+红细胞（3~5%）50μl（1滴）、低离子介质200μl（4滴）；阴性对照管加生理盐水100μl（2滴）、O型RhD+红细胞（3~5%）50μl（1滴）、低离子介质200μl（4滴）。
凝聚胺法交叉配血试验操作规程[目的]保证交叉配血试验准确，确保临床输血安全。
[适用范围]XXX医院输血科[职责]具有专业技术的工作人员主要负责XXX医院输血标本的交叉配血试验，但只对该单份标本负责。
[相关文件]试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序[相关记录]仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录交叉配血记录紧急用血记录[实验原理]红细胞表面带有大量的负电荷，以避免产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质中时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。
凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞与血清（血浆）中的抗体结合。
其次加入的凝聚胺（Polybrene）溶液是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞的Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝集。
最后加入的悬浮液（Resuspending）具有中和凝聚胺（Polybrene）阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝集而不会散开，试验结果为阳性。
[仪器器械]玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
[试剂]生理盐水、凝聚胺试剂、Anti-human IgG血清，均为有合格证件的正品。
[试剂保存和稳定性]1．凝聚胺试剂须保存在2-25℃（其中阴、阳对照血清应储存在2~8℃）。
在适当储存条件下有效期24个月。
2．抗人IgG血清低温冰箱保存。
复溶后放2—4℃冰箱保存。
3．凝聚胺试剂①低离子介质溶液（LIM）：含葡萄糖，乙二胺四醋酸-2钠及稳定剂。
②凝聚胺溶液（Polybrene）：含凝聚胺，氯化钠及稳定剂。
③复悬液（Resuspending）：含柠檬酸钠，葡萄糖及稳定剂。
④阳性对照血清：含抗D血清、氯化钠及稳定剂。
⑤阴性对照血清：含AB血浆、氯化钠及稳定剂，不含红细胞血型抗体。
[标本收集与处理]1、受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。
2、2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，先用生理盐水洗涤红细胞33输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。
4、标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。
[实验方法与步骤]1、分别制备受血者和献血者3~5%的红细胞悬液（取2支使管分别标注为受血者管和献血者管，再分别加入2ml生理盐水，在受血者管加入1滴受血者红细胞，在献血者管加入1滴献血者红细胞，混匀后备用）。
2、取4支使管，分别标注主侧、次侧、阴性对照和阳性对照：主侧管：先加入2滴受血者血清（血浆），再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液；次侧管：先加入2滴献血者血清（血浆），再加入1滴受血者2~5%红细胞悬液；阴性对照管：先加入2滴阴性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液；阳性对照管：先加入2滴阳性对照血清，再加入1滴献血者2~5%红细胞悬液。
3、混匀后各加入LIM溶液0.65ml，轻轻混匀，于室温下静置1分钟。
4、再各加入2滴Polybrene溶液，轻轻混匀，于室温下静置15秒。
5、用交叉配血专用离心机3400 r/min（相当于1000g离心力）离心10秒，然后倒掉上清液（不要沥干），让管底残留约0.1 ml液体。
6、轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。
重做后仍然没有凝集现象出现，可能试剂失效。
7、最后各加入2滴Resuspending溶液，轻轻摇动试管并同时目测凝集是否散开，再进一步倒在玻片上用显微镜观察凝集是否散开。
如果在60秒内凝集散开，表明是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。
如果想进一步检测Anti-K抗体，则必须继续做辅助性的抗球蛋白试验，步骤如下：8、再滴入1滴Resuspending溶液。
9、用生理盐水洗红细胞3—5次，并把最后一次上清液完全倒干。
10、滴入2滴Anti-human IgG血清，并混匀。
11、用交叉配血专用离心机3400rpm离心15s.12、观察有无凝集反应，如果有凝集反应，表示有Anti-K抗体，则必须进一步做抗体冲出试验，供血者的血液不适合病人使用。
如果没有凝集反应，为了确保输血的安全性，须再各添加1滴已知致敏性红细胞至所有没有凝集的试管中，混匀，3400rpm 离心1分钟。
正常应有2+反应。
如果没有凝集反应，可能是假阴性，辅助性抗球蛋白试验必须重做。
[结果判断]1、ABO同型配血，主侧和次侧均无溶血及凝集表示无输血禁忌，可以输血。
2、如急需输血但一时无同型血液，作异型配血时（指O型血输给A，B或AB型，或A，B型血输给AB型时），主侧无溶血及凝集，但次侧必然有凝集或溶血。
[质量控制与注意事项]1、在进行交叉配血试验时，一定要严格按操作规程进行，每进行一步操作，必须进行一次核对，防止操作错误，尤其防止主侧和次侧加样加错。
操作方法应按规定先加血清，然后再加红细胞悬液，以便核实是否漏加血清。
同时，注意区别凝聚胺所引起的凝集反应。
2、受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。
2~5%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。
3、如果主侧发生凝集反应，说明配血不合，不论次侧配血如何都不能输血。
如果仅次侧配血发生凝集反应，只有在紧急情况下才有可能考虑是否输血。
4、可以用EDTA抗凝血浆代替血清使用，不能使用溶血标本及含有枸橼酸钠、肝素的抗凝血浆标本。
5、加Polybrene溶液离心去上清后不凝集，可能是标本中含有肝素或其它干扰因子。
若病人血清(血浆)含有肝素或其它干扰因子，如洗肾患者，需多加4~6滴Polybrene 溶液以中和肝素或其它干扰因子。
6、红细胞悬液以3~5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显而易误判。
7、未开封的试剂应储存于温度在2~25℃、相对湿度不大于80%、无腐蚀性气体的环境中；已开封的试剂应储存于相对湿度不大于80%、无腐蚀性气体和通风良好的室温环境中；试剂用后应及时拧紧瓶盖保存；未开封试剂的有效期为两年，在有效期内已开封的试剂应在开封后的6个月内使用完。
8、试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
9、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
10、各种原因引起的红细胞溶解，易误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。
11、中国人极少有Anti-K抗体，但其他人种比例较高，尤其是白种人，所以，当病人是其他人种时，为求安全起见，应加做辅助性抗球蛋白试验。
加做辅助性抗球蛋白试验是为了增加检测Anti-K抗体的敏感度，对检测其他的抗体无帮助。
所以，除非想进一步检测Anti-K抗体，否则不须做到辅助性抗球蛋白试验。
12、进行交叉配血前逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型，正确无误时可进行交叉配血。
13、结果判断必须先肉眼观察，再进行显微镜观察。
注意观察弱凝集和排除非特异性凝集。
14、交叉配血试验中发现有不配合时，首先应考虑受血者和供血者的ABO血型和Rh(D)血型定型是否错误，必要时进行抗体筛检。
其次，应注意有无特异性同种抗体，特异性未知的同种抗体存在，或者患者的血清在室温37℃或抗球蛋白血清中凝集所有的其他红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步作有关试验进行鉴定。
15、两人值班时，交叉配血试验由两人互相核对；一人值班时，操作完毕后自己复核，并填写配血试验结果。
（按“交叉配血核对制度”进行）。
16、各供血者间需进行交叉配血；已经输注的血液不足24 小时的，供血者间也需进行交叉配血。
17、凝聚胺试剂还可用于辅助抗体筛检试验、辅助性抗人球蛋白试验和辅助性血型鉴定。
具体操作方法详见凝聚胺试剂盒使用说明书。
18、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
[交叉配血的影响因素及解决方法]准确的交叉配血是临床安全有效输血的最后一条重要保证。
输血配合是选择适合受血者输注的血液，使输血的成分能在受血者体内有效存活，并且无不良反应，即输入的红细胞在受者体内必须不凝集和不溶血，输入的血浆成分不导致受者自身红细胞显著破坏，使受血者恢复健康。
影响交叉配血的因素很多，主要如下：1、标本①血标本的采集错误、稀释和溶血。
另从受检者采集l份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不合。
标本一般要求离体后尽快实验，最长不能超过3天，每次输血后受血者和供血者的血标本应在2～8℃保存7天。
②患者的药物使用有时也对实验有一定影响，当受血者使用肝素治疗时，应使用硫酸鱼精蛋白对抗使标本凝集；如果受血者使用右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等治疗，应注意将红细胞洗涤。
③受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤)，以及类B或cisAB等。
●如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗—A或抗—B血清做吸收及放散试验，以及用受检者唾液作A、B、H血型物质测定（只对80％HAB分泌型的人有用）。
●如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：(1) 观察细胞与抗—A及抗—B的凝集强度，与抗—A的反应要比与抗—B的反应强，这种区别用玻片法作试验更为明显；(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身红细胞上的类B抗原；(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质；(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
④受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症)，或实验时温度过高，常引起红胞呈缗钱状排列。
如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水l滴。
混和，往往可使缗钱现象消失。
注意不应先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞做试验，以免使血清中抗体被稀释。
⑤细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。
多凝集红细胞具有以下特点：(1)能被人和许多家兔的血清凝集；(2)能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。
