凝聚胺交叉配血试验 PPT
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血型鉴定及交叉配血 ppt课件
1min
二、ABO血型鉴定：
正定型 判定结果：
试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起， 观察有无凝集或溶血，
如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为 凝集（＋）；
如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮 起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；
若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。
注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血
二、ABO血型鉴定：
二、反定型： 原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐
水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血 清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体， 进一步判定血型。
二、ABO血型鉴定：
二、反定型 方法： 1、试管法：
-A
-B
加待测血清2滴
加标准红细 胞悬液1滴
混匀，离心 1000r/min 观察结果（方法同正定型） 1min
二、ABO血型鉴定：
抗A
抗B
结果
结果判定：
＋
—
A
—
＋
B
正定型
＋
＋
AB
—
—
O
反定型
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
A(RBC) B(RBC) 结果
＋
—
B
—
＋
A
＋
＋
O
—
—
AB
二、ABO血型鉴定
凝集强度的判断见实验指导表格
室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否 出现凝集判断是否有D抗原的存在。
Rh（D）血型鉴定
加抗D血清1滴
加红细胞悬 液1滴（5%
）
轻轻摇动玻片混匀， 2min内判断结果， 有凝集（＋），无凝 集需按照说明书进一 步实验确认是否为阴 性
二、ABO血型鉴定：
正定型 判定结果：
试管法：轻轻摇动（或捻动）试管，使沉于管底的RBC浮起， 观察有无凝集或溶血，
如上层清亮，管底有RBC凝块，轻弹管底，凝块无散开，为 凝集（＋）；
如上层清亮，管底有RBC沉积，边缘整齐，轻弹管底，RBC浮 起或成为均匀的RBC悬液，则为不凝集（一）；
若不确定，可将反应物倒在载玻片上，显微镜下观察。
注意：若上层为清亮的樱红色，考虑是否溶血
二、ABO血型鉴定：
二、反定型： 原理：用标准红细胞检测被检血清（血浆）,在盐
水介质中发生肉眼可见的凝集，从而测定被检血 清（血浆）中有无与标准红细胞相对应的抗体， 进一步判定血型。
二、ABO血型鉴定：
二、反定型 方法： 1、试管法：
-A
-B
加待测血清2滴
加标准红细 胞悬液1滴
混匀，离心 1000r/min 观察结果（方法同正定型） 1min
二、ABO血型鉴定：
抗A
抗B
结果
结果判定：
＋
—
A
—
＋
B
正定型
＋
＋
AB
—
—
O
反定型
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
A(RBC) B(RBC) 结果
＋
—
B
—
＋
A
＋
＋
O
—
—
AB
二、ABO血型鉴定
凝集强度的判断见实验指导表格
室温条件下盐水介质中产生特异性反应，根据是否 出现凝集判断是否有D抗原的存在。
Rh（D）血型鉴定
加抗D血清1滴
加红细胞悬 液1滴（5%
）
轻轻摇动玻片混匀， 2min内判断结果， 有凝集（＋），无凝 集需按照说明书进一 步实验确认是否为阴 性
凝聚胺交叉配血试验 ppt课件
9
操作
❖ 1. 取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受 血者血清(血浆)1滴，和供血者3～5％红细胞 悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管受血者 3～5％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴， 加供血者血清(血浆)1滴。
❖ 2. 各加LIM溶液3滴，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟或 参照说明书。
11
【注意事项】
❖ 1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。 ❖ 2.若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，
须多加4～6滴Po1ybrene溶液以中和肝素。 ❖ 3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操
作。
12
❖ 4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试 验操作，由于某些受血者血清中可能含有寒 冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现， 建议进行交叉配血试验操作时室温保持在 22℃左右，最后滴加Resuspending时，将 试管立即置入37℃水浴中，轻轻转动试管混 合，并在30秒内观察结果。
实验三 凝聚胺法交叉配血
医学检验系 张晨光
1
目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。
原理：聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶
解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷， 有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红 细胞的Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的吸 引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生 紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电 荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开； 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使 非特异性凝集消失。
灵敏度高；但费时，准确性和稳定性差。
14
❖ 4.卡式配血（微柱凝胶法）已成为国际安
操作
❖ 1. 取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受 血者血清(血浆)1滴，和供血者3～5％红细胞 悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管受血者 3～5％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴， 加供血者血清(血浆)1滴。
❖ 2. 各加LIM溶液3滴，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟或 参照说明书。
11
【注意事项】
❖ 1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。 ❖ 2.若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，
须多加4～6滴Po1ybrene溶液以中和肝素。 ❖ 3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操
作。
12
❖ 4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试 验操作，由于某些受血者血清中可能含有寒 冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现， 建议进行交叉配血试验操作时室温保持在 22℃左右，最后滴加Resuspending时，将 试管立即置入37℃水浴中，轻轻转动试管混 合，并在30秒内观察结果。
实验三 凝聚胺法交叉配血
医学检验系 张晨光
1
目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。
原理：聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶
解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷， 有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红 细胞的Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的吸 引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生 紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电 荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开； 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使 非特异性凝集消失。
灵敏度高；但费时，准确性和稳定性差。
14
❖ 4.卡式配血（微柱凝胶法）已成为国际安
交叉配血试验 (凝聚胺法)
【标本收集和准备】
1．抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。
以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。
9．进行交叉配血前逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型，正确无误时可进行交叉配血。
页码：第4页，共4页
6、
6、不凝集，可能是标本中含有肝素。如洗肾病人的标本或其他干扰存在，此时需多加2-4滴*2凝聚胺溶液以中和肝素或干扰因子。
7．0.85% 氯化钠溶液启用时，及时贴上启用时间；超期的溶液要及时更换。使用过程中，怀疑污染到溶液时或配血结果可疑时，必须更新该溶液。
8．受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。2%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。
5．在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清（浆）中可能含有寒冷凝集素等因子而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，请再滴入2滴*3复悬液，将试管立即置入37 C水浴中轻轻混匀，并在一分钟内观察结果。
**医院
输血科
文件编号：
HF2Y-SXK-SOP-06
交叉配血试验（凝聚胺法）
版序：2007-05
2．2% 红细胞悬液：
用生理盐水洗涤红细胞3次。
根据下表进行红细胞悬液的配制。
悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴）
1．抽取受血者静脉血3-4ml（操作中小心防止红细胞破损），放入一已贴标签干燥洁净的试管中为血清管(也可用EDTA-K2抗凝血液)，并将注射器中余下的少量血液配成2%红细胞生理盐水悬液，放入另一已贴标签干燥洁净的试管中为红细胞悬液管。
以上标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。
9．进行交叉配血前逐项核对输血申请单、受血者和供血者血样，复查受血者和供血者ABO血型（正、反定型），并常规检查患者Rh（D）血型，正确无误时可进行交叉配血。
页码：第4页，共4页
6、
6、不凝集，可能是标本中含有肝素。如洗肾病人的标本或其他干扰存在，此时需多加2-4滴*2凝聚胺溶液以中和肝素或干扰因子。
7．0.85% 氯化钠溶液启用时，及时贴上启用时间；超期的溶液要及时更换。使用过程中，怀疑污染到溶液时或配血结果可疑时，必须更新该溶液。
8．受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12 小时的，必须重新采集标本。2%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。
5．在冬天气温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清（浆）中可能含有寒冷凝集素等因子而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，请再滴入2滴*3复悬液，将试管立即置入37 C水浴中轻轻混匀，并在一分钟内观察结果。
**医院
输血科
文件编号：
HF2Y-SXK-SOP-06
交叉配血试验（凝聚胺法）
版序：2007-05
2．2% 红细胞悬液：
用生理盐水洗涤红细胞3次。
根据下表进行红细胞悬液的配制。
悬液浓度（%） 压积红细胞（滴） 盐水（滴）
交叉配血(凝聚胺法)
精心整理交叉配血（凝聚胺法）1.原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。
加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。
2.标本采集：2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染。
溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6.试剂：6.1试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。
6.3试剂组成：试剂 1.低离子介质(LowLonicMedium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-25度贮存，有效期为2年。
试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4.8.5％生理盐水。
7.仪器：7.1血型血清离心机：80-2型离心机江苏金坛市大地自动仪器厂7.2离心机：江苏金坛市大地自动仪器厂7.3电热恒温水箱：江苏金坛市医疗器械厂精心整理精心整理7.4显微镜：XSZ-H3(中国）8.操作步骤及结果判断：8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。
加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。
主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
交叉配血试验临床应用PPT课件
交叉配血试验临床应用
4
实验原理
红细胞表面带有大量的负电荷，悬浮在电解 质溶液中，会吸引大量阳离子，红细胞则被扩散 的双层离子云所围绕，形成zeta电位。
交叉配血试验临床应用
5
实验原理
凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM）降低 介质的离子强度，减少红细胞周围的电子云， 如有红细胞抗原相应的血清抗体存在，则可促 进红细胞抗原与血清抗体的特异结合。
交叉配血试验临床应用
21
临床新进展
流式细胞术 基因分ຫໍສະໝຸດ 技术 卡式微柱凝胶法交叉配血试验临床应用
22
卡式微柱凝胶法
交叉配血试验临床应用
23
卡式微柱凝胶法
交叉配血试验临床应用
24
戴安娜全自动配血系统
卡式微柱凝胶法可实现自动检测
交叉配血试验临床应用
25
二 实验原理
谢谢！ 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在
11
实验步骤
四、剪下供血者血袋上的血辫，将供血者红 细胞1滴加入主侧管，血浆2滴加入次侧管
交叉配血试验临床应用
12
实验步骤
五、在主次侧各加入低离子溶液各0.65毫 升，混合均匀。
交叉配血试验临床应用
13
实验步骤
六、在主、次侧管分别加入2滴凝聚胺溶液， 混匀后3400r/min离心10秒，弃去上清， 观察红细胞的非特异凝集现象。
交叉配血试验临床应用
26
弃 上 清
交叉配血试验临床应用
14
实验步骤
七、最后各加入悬浮液2滴，轻轻转动试管 混匀并观察结果。
交叉配血试验临床应用
15
实验步骤
八、如果在60秒内，主、侧管凝集均散开， 说明是由凝聚胺溶液引起的非特异性凝集， 配血相合。
交叉配血(凝聚胺法)
3.红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适 当，反应不明显易误判。
4.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时， 可溶性血型物质中和了相应的抗体。
交叉配血（卡式配血）
原理
凝胶具有分子筛效应和亲合效应，在微柱凝胶介质中红细 胞抗原与相应抗体结合，经低速离心，凝集的红细胞悬浮 在凝胶上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部， 试验结果可用肉眼观察。
合；反之，依照不同强度的凝块，试验结果判为阳性， 供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。
异常结果处理：
1. 细胞自凝： 在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝 集素而导致交叉配血假阳性；遇此现象可用37℃-40℃生 理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。
2.若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须 多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
交叉配血（凝聚胺法）
血型鉴定
原理
根据红细胞膜表面有无A抗原和(或)B抗原，将血型分为 A型、B型、AB型和O型4种。可利用红细胞凝集试验， 通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是指用 标准抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗 原和（或）B抗原；所谓反定型，是指用标准A型细胞和 B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B。
结果判定（同血型鉴定）
－ 100﹪的红细胞沉在微管的底部 ﹢/ 100﹪的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80﹪的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo.. 溶血
结果判定（同血型鉴定）
4.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时， 可溶性血型物质中和了相应的抗体。
交叉配血（卡式配血）
原理
凝胶具有分子筛效应和亲合效应，在微柱凝胶介质中红细 胞抗原与相应抗体结合，经低速离心，凝集的红细胞悬浮 在凝胶上层，而未和抗体结合的红细胞则沉于凝胶底部， 试验结果可用肉眼观察。
合；反之，依照不同强度的凝块，试验结果判为阳性， 供受者血液不配合。实验结果必须在3分钟内判读。
异常结果处理：
1. 细胞自凝： 在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝 集素而导致交叉配血假阳性；遇此现象可用37℃-40℃生 理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。
2.若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须 多加4-6滴polybrene溶液以中和肝素。
交叉配血（凝聚胺法）
血型鉴定
原理
根据红细胞膜表面有无A抗原和(或)B抗原，将血型分为 A型、B型、AB型和O型4种。可利用红细胞凝集试验， 通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是指用 标准抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗 原和（或）B抗原；所谓反定型，是指用标准A型细胞和 B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B。
结果判定（同血型鉴定）
－ 100﹪的红细胞沉在微管的底部 ﹢/ 100﹪的红细胞沉在微管的下端1/3之内 1+ 80﹪的红细胞沉在微管的下端2/3之内 2+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端2/3之内 3+ 80﹪的红细胞沉在微管的上端1/3之内 4+ 凝集的细胞全部处于微管的顶部 d.p. 双群 Hemo.. 溶血
结果判定（同血型鉴定）
交叉配血试验50384精编PPT课件
实验原理
天然IGM类血型抗体与对应的红细胞抗原在室温下盐水介质中发生凝集现象。可以检查供、受者血清中是 否存在破坏对方RBC 的IgM抗体(ABO 血型中抗A 抗B抗体以IgM抗体为主)。 实验步骤 取二试管， 分别注明“主”、“次”字样， 主侧滴入供血者红细胞悬液 一滴和受血者血清一滴；次则滴 入受血者红细胞悬液一滴和供血者血清 一滴。混匀后 1000rpm离心1min， 取出观察结果。 如两侧均 无凝集现象，可多量输血；如主侧无凝集而次侧有凝集只可考虑少量输血；如主侧凝集则不能输血。 低离子聚凝胺介质交叉配血试验 实验原理
Байду номын сангаас
实验原理
微柱凝胶介质交叉配血试验 实验原理 利用抗原抗体特异性反应的作用→通过离心技术→利用凝胶的 微孔过滤作用，将发生凝集反应的RBC阻滞于凝胶之内，而未 凝集的单个RBC则穿过微孔运动至柱底→从而区分有无凝集。 实验步骤 见PPT所述。结果判定肉眼直接观察。
实验注意事项
实验注意事项
1.器材、试剂、反应温度、 离心、标本等注意事项同ABO 血型鉴定。 2.血清优于血浆；不用溶血标本；配血后，标本置冰箱内保存至少7天 。 3. RBC要用生理盐水洗干净。 4.溶血现象， 实质是阳性结果， 为配血不合。 5. ABO血型系统同型而不容，应首先排除ABO血型鉴定是否有误。 6.盐水介质法仅能检测 IgM型RBC血型抗体，不能检测 IgG型 RBC抗体。凝聚胺法 可以检查出IgG 型的血型抗体 7.临床输血进行交叉配血试验时，应当首先进行盐水介质法试验，再进行聚凝胺介 质法试验。 8. 聚凝胺介质法试验尽快观察结果(<3min)
交叉配血试验50384精 编PPT课件
演讲人
目录
01
【实验器材和药品】
凝聚胺方法不规则抗体 PPT课件
疗效判定标准
1.取试管3支，各加被检血清（或血浆）100ul，分别加入 3-5%筛检红细胞各50ul。 2. 各加 LIM0.65ml，混匀后，再加入 Polybrene 溶液 100ul， 并混合均匀。
3.用输血科专用离心机3400rpm/min离心10秒，然后倒掉 上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
技术路线
（包括总体安排和进度步骤及其可行性论证）
不规则抗体筛选试验（凝聚胺法）是在凝聚胺试验法的
辅助作用下让受检者血清与特殊试剂红细胞 ---筛选红细 胞发生免疫反应，以发现在 37℃下有活性抗体的试验方 法。
抗体筛选试验（凝聚胺法）不一定能检验出所有有临床
意义的抗体，一些低频率抗原产生的抗体或者剂量效应 的抗体，可能被漏检，这时需选择抗原性更完全和特异 性更敏感的筛选细胞做试验，或用更高敏感度的技术作
一、献血者的血清或血浆进行抗体筛查，可以防止 含有不规则抗体的血液输注给病人，避免由于献血者血 液中的不规则抗体引起病人红细胞的破坏而引起的溶血
性输血反应，同时可以减少血液浪费，可将有不规则抗
体的血液制备成抗体血清，用于稀有血型的检测。 二、对需要输血治疗的患者，进行不规则抗体筛查， 有利于血液的选择，从而有充分的时间来选择不含有针 对某抗体的相应抗原的血液，从而防止因为输注含有某 抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证输血 安全。
适应症
适应症：禁忌症来自不良反应不规则抗体筛选试验（凝聚胺法）
第一类产前病人：测定非典型抗体以排除新生儿溶血病
发生的可能。
第二类输血前病人：确定供应相应抗原阴性血液，供血
者、受血者之间相容性评估。
第三类献血员：避免有阳性抗体阳性血，发现稀有血型
凝聚胺交叉配血试验
1 实验原理凝聚胺试验应用于血库作业上，进行血型鉴定、交叉配血、完全抗体与不完全抗体的筛选，其灵敏度、特异性远高于其他介质1倍～250倍，方法简单快速，因此，陆续取代了盐水、木瓜酶试验。
其原理是利用低离子溶液降低离子强度，加速分子运动，减弱红细胞静电斥力，缩短红细胞间距，促进红细胞抗原和血清(血浆)中抗体结合发生非特异凝集，当附加假凝集清除液后非特异凝集立即散开，而由抗原抗体反应引起的特异性凝聚将依然存在。
由此，检出完全抗体或不完全性抗体。
2 试剂组合低离子介质-凝聚胺溶液：含葡萄糖、凝集胺、氯化钠、乙二胺四醋酸2钠及稳定剂；悬浮液：含柠檬酸钠、葡萄糖及稳定剂。
试剂由台湾贝索生物技术有限公司提供。
3 交叉配血试验取试管2支，分别标明主与次，主侧加入受(供)血清2滴，加供(受)血者3%～4%红细胞盐水悬液1滴。
各管加入低离子介质0.8 ml，混匀静置1 min，加凝聚胺1滴，混匀，以3 500 r/min离心10 s～15 s，倒出上清液(残留0.1 ml)，轻摇试管肉眼可见明显的凝集状，如无凝集须重做。
再加1滴假凝集清除液，边摇动边观察结果。
如果凝集散开为阴性，即为非特异性凝集，如不能散开为阳性，即为特异性凝集。
如反应可疑应用显微镜观察，上述凝聚胺配血方法见(输血技术学)［1］。
4 注意事项可以用含EDTA血浆代替血清进行交叉配血使用。
若使用血清可把标本放入37 ℃水浴箱,使其纤维蛋白析出后再用，否则，红细胞缠绕在纤维蛋白上造成假凝集现象。
如洗肾患者，血清(浆)中含有肝素，可出现假凝集，此时，须多加2滴～4滴凝聚胺溶液，以中和肝素。
冬天室温低，某些患者可能含有冷凝集素而导致假阳性结果出现，遇此情况，须再滴入2滴悬浮液后37 ℃水浴1 min，再观察，若凝集消失说明为冷凝集。
如盐水试验不凝集，凝集胺试验凝集说明有不完全抗体，必须进一步做抗体鉴定。
5 讨论凝聚胺交叉配血技术主要用于检测患者血清(浆)中是否有具有临床意义的红血球异体抗体。
交叉配血图示(3)
IgG 在盐水介质中凝集抗原位点多的红细胞
没有血是最不安全的 不输血是最安全的
感谢聆听
聚凝胺
枸橼酸钠
3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺
4 由于不完全抗体的 结合，红细胞的特异 性凝集不消失
不完全抗体
IgG凝集红细胞示意图
IgG 在盐水介质中一般不产生凝集
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
抗球蛋白试验
抗球蛋白
红细胞间的距离缩短， IgG产生凝集
酶处理、凝聚胺
IgG凝集红细胞示意图
聚凝胺交叉配血技术示意图1
1 红细胞间有一定间距
聚凝胺
枸橼酸钠
2 加入聚凝胺后，可以 缩短红细胞之间的距离， 使其非特异Байду номын сангаас凝集
3 加入枸橼酸钠，可以 中和聚凝胺
4 红细胞的非特异性 凝集消失
聚凝胺交叉配血技术示意图2
1 红细胞上已有不完全 抗体致敏
2 加入聚凝胺后，缩短红 细胞之间的距离，让不完 全抗体可以同时与两个红 细胞结合使其特异性凝集
交叉配血示意图
世博高新医院输血科 牛树疆
低离子聚凝胺交叉配血技术
➢ 原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳 离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正 电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使 红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞 可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏 的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。
没有血是最不安全的 不输血是最安全的
感谢聆听
聚凝胺
枸橼酸钠
3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺
4 由于不完全抗体的 结合，红细胞的特异 性凝集不消失
不完全抗体
IgG凝集红细胞示意图
IgG 在盐水介质中一般不产生凝集
IgM抗体凝集红细胞示意图
IgGM在盐水介质中产生凝集
抗球蛋白试验
抗球蛋白
红细胞间的距离缩短， IgG产生凝集
酶处理、凝聚胺
IgG凝集红细胞示意图
聚凝胺交叉配血技术示意图1
1 红细胞间有一定间距
聚凝胺
枸橼酸钠
2 加入聚凝胺后，可以 缩短红细胞之间的距离， 使其非特异Байду номын сангаас凝集
3 加入枸橼酸钠，可以 中和聚凝胺
4 红细胞的非特异性 凝集消失
聚凝胺交叉配血技术示意图2
1 红细胞上已有不完全 抗体致敏
2 加入聚凝胺后，缩短红 细胞之间的距离，让不完 全抗体可以同时与两个红 细胞结合使其特异性凝集
交叉配血示意图
世博高新医院输血科 牛树疆
低离子聚凝胺交叉配血技术
➢ 原理：聚凝胺（Polybrene），一种高价阳 离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正 电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使 红细胞之间距离减少，能引起正常红细胞 可逆性的非特异性凝集。如果使抗体致敏 的红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。
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操作
❖ 1. 取试管两支，标明主侧次侧，主侧管加受 血者血清(血浆)1滴，和供血者3～5％红细胞 悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管受血者 3～5％红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)l滴， 加供血者血清(血浆)1滴。
❖ 2. 各加LIM溶液3滴，混合均匀后，再各加 Polybrene溶液1滴，并混合均匀，置室温1分钟或 参照说明书。
【注意事项】
❖ 1.可以用含EDTA抗凝血浆代替血清使用。 ❖ 2.若受血者血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，
须多加4～6滴Po1ybrene溶液以中和肝素。 ❖ 3.试剂使用前请放置至室温平衡后再行操
作。
❖ 4.在冬天室温极低的情况下进行交叉配血试 验操作，由于某些受血者血清中可能含有寒 冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现， 建议进行交叉配血试验操作时室温保持在 22℃左右，最后滴加Resuspending时，将 试管立即置入37℃水浴中，轻轻转动试管混 合，并在30秒内观察结果。
❖ 3．普通离心机1000g离心15秒，然后把上清液 倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
❖ 4．轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如 无凝集，则必须重作。
❖ 5．最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混 匀并时观察结果。
❖ 6. 结果判定：如果在30秒内（或按说明书） 凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性 聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为 红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结 果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片 上用显微镜观察。
试验分步原理
加重悬液
加入重悬液减 弱 了 Polybrene 的作用
试验分步原理
阳性结果
已被血型抗体 致敏的红细胞 不会散开
试验分步原理
阴性结果
未被血型抗体致敏 的红细胞很快散开
大家学习辛苦了，还是要坚持
继续保持安静
❖试剂: 凝聚胺试剂盒；生理盐水 ❖ 器材：小试管、滴管、试管架、记
号笔、显微镜、离心机。 ❖ 标本：静脉血。
凝聚胺交叉配血试验
目的：掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。
原理：聚凝胺分子是带高价阳离子多聚季铵盐，溶
解后带有很多正电荷可以中和红细胞表面负电荷， 有利于红细胞凝聚，低离子强度溶液也能降低红 细胞的Zeta电位 ，可进一步增加抗原抗体间的吸 引力。
当血清中存在IgM或IgG类血型抗体时，与红细胞发生 紧密结合，此时加入枸橼酸盐解聚液以消除聚凝胺的正电 荷，使IgM或IgG类血型抗体与红细胞产生的凝集不散开； 如果血清中不存在IgM或IgG类血型抗体，加入解聚液可使 非特异性凝集消失。
灵敏度高；但费时，准确性和稳定性差。
❖ 4.卡式配血（微柱凝胶法）已成为国际安
全输血检查的推荐方法，该法具有：①检测 项目全②灵敏度高③特异性强④重复性好⑤ 客观性好⑥节省样品、试剂，结果易保存⑦ 可自动化操作。不足之处是成本昂贵。
❖ 5.抗球蛋白介质配血法是检查不完全抗体
最敏感、可靠的方法；但试剂价格较贵，操 作复杂、费时。
试验分步原理
血清
加入LIM
混合液 红细胞悬液
Polybrene 受体
IgG 抗 体 迅速致敏
血型抗原
试验分步原理
加入 Polybrene
Polybrene 分 子 连 接到红细胞上
试验分步原理
离心
Polybrene 拉 近 红细胞间的距 离并造成凝集
1 个 IgG 分 子 同时连接两 个红细胞
❖ 5．不同的凝聚胺试剂盒操作方法各不相同， 实验时请严格按照说明书操作。
【方法学评价】
1. 凝聚胺介质配血法反应较盐水法灵敏度高，
能检测几乎所有规则与不规则血型抗体，适用 于各类输血患者的配血。
2. 盐水介质配血法操作简单、反应快速，但
只能发现完全抗体。
3. 酶介质配血法操作较为简便，试剂便宜，