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HPLC法测定丹参酚酸渗透泵片中丹酚酸B的含量【摘要】目的建立测定丹参酚酸渗透泵片中丹酚酸B含量的方法。
方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相:甲醇乙腈水甲酸（体积比30∶10∶59∶1），流速1.0 mL·min-1，检测波长286 nm。
结果丹酚酸B的质量浓度在20～80 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 5），精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求。
结论本法准确、专属性好、简便，可用于丹参酚酸渗透泵片的质量控制。
【关键词】高效液相色谱法；丹酚酸B；丹参酚酸渗透泵片Abstract:Objective To establish an HPLC method for determining the content of salvianolic acid B in salvianolic acid B based controlled porosity osmotic pump tablets.Method Salvianolic scid B was analyzed on a Diamonsil C18 column (250 mm×4.6 mm，5μm). The mobile phase consisted of methanol acetonitrile water methanoic acid (30∶60∶59∶1) at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was 286 nm.Results The standard curves of salvianolic acid B were linear over the concentration range of 20-100 μg·mL-1 (r=0.999 5) with satisfied precision, repetition, stability and recovery. Conclusion The method is convenient, accurate and specific,which could be used for the quality control of salvianolic acid B based osmotic pump tablets.Key words:HPLC; salvianolic acid B; controlled porosity osmotic pump tablets丹参酚酸渗透泵控释片的主要有效成分是丹参酚酸，临床上用于治疗冠心病和脑动脉硬化［1］。
高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B 的含量注射用丹参多酚酸盐属于中药处方药，其80%为丹参乙酸镁。
临床上用于治疗心绞痛、冠心病和心血管内科病等疾病[1-2]，具有通脉养心、活血化瘀、养血安神、活血消肿等功效。
注射用丹参多酚酸盐的主要的活性成分丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸、异阿魏酸、紫草酸以及丹酚酸A、B、C、E 等。
注射用丹参多酚酸盐的质量控制主要是以酚酸B的含量作为质控指标[3-5]。
目前，还未见对注射用丹参多酚酸盐的丹酚酸B活性成分含量控制的报道。
本文建立了高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量的方法，用以测定该药品的质量。
一、试验器材与方法1.试验仪器与试剂岛津高效液相色谱仪（LC-15C，四元泵，氘灯监测，可控温度，C18色谱柱）；注射用丹参多酚酸盐（生产厂家：上海绿谷制药XX公司，规格：每瓶装量50mg，批号：13032821）；丹酚酸B标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号：111562-200302）；甲醇、乙腈为色谱纯（国药）；水为重蒸馏水；甲酸为分析纯（国药）。
2.色谱分析条件C18反相柱（5μm，100A250mm×46mm）；柱温度30摄氏度；紫外检测器；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）；流量：1.0mL/min；检测波长286nm；进样量20μl。
3.试验方法（1）溶液的配制1）标准品品溶液的配制精密称取丹酚酸B标准品5mg，定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀后精密量取5ml溶液置于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，既得10mg/L的标准品溶液。
2）供试品溶液的配制精密称取注液用丹参多酚酸盐5mg，定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，即得供试品溶液。
3）对照品溶液的制备将2）中的丹参多酚酸盐换为等量的纯水，配置方法与2）相同。
（2）检测方法设置好色谱条件后，吸取过微滤膜的上述溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，采用外标法以峰面积计算样品的含量，重复5次。
高效液相色谱法测定丹参提取物中丹酚酸B的含量
鹿泽启
【期刊名称】《广东化工》
【年(卷),期】2017(044)014
【摘要】以体积分数80％的甲醇水溶液作为提取液,通过超声波提取法实现了丹参中丹酚酸B的高效提取,结合高效液相色谱法测定准确快速地测定了丹参提取物中的丹酚酸B含量.对方法的准确性、精密度、线性范围、定量限进行了评价.方法的回收率在100.3％～102.7％之间,检出限为70 mg/g,RSD为0.01％～0.35％.【总页数】2页(P243-244)
【作者】鹿泽启
【作者单位】山东省烟台市农业科学研究院,山东烟台 265500
【正文语种】中文
【中图分类】O65
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定养肝利水丸中丹酚酸B、五味子醇甲的含量 [J], 丁晓爽;李惠
2.高效液相色谱法测定丹酚酸胶囊中丹酚酸乙的含量 [J], 李丽敏;张胜强;罗厚蔚
3.高效液相色谱法测定丹参注射液中丹酚酸B含量 [J], 许晓君
4.高效液相色谱法测定清补通络丸中丹酚酸B含量 [J], 邱远金;王林;周卫刚;宋海龙;李江涛;刘纪杉;李晓瑾;高辉;朱国强
5.高效液相色谱法测定丹参提取物中3种水溶性成分的含量 [J], 典灵辉;崔燎;吴铁
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高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参水溶性成分的含量[ 08-06-03 14:16:00 ] 作者：王书梅编辑：studa20【关键词】丹参素；,,,,原儿茶醛；,,,,丹参酚酸B,,;,,高效液相色谱法,;,,,含量测定摘要：目的建立反相高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分的含量。
方法以标准品丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B为内标,色谱柱: KromasilC18柱(4.6×20 mm,5 μm)；流动相：流动相A：水-二甲基甲酰胺-冰醋酸（90∶4∶2），流动相 B：甲醇。
梯度洗脱;流速：1.0 ml/min；检测波长：281 nm。
结果丹参素加样回收率为97.59%～101.66%，RSD为1.50%（n=6）；原儿茶醛加样回收率为97.19%～101.25%，RSD为1.90%,（n=6)；丹参酚酸B加样回收率为100.39%～102.11%，RSD为0.6%，(n=6)。
结论实验结果表明，该方法操作简便，重现性好,可作为样品的检测方法。
关键词：丹参素；原儿茶醛；丹参酚酸B ; 高效液相色谱法 ; 含量测定Determination of Water-solubility Component in Danhong Injection by HPLCAbstract:ObjectiveAn HPLC method was developed to separate and determine salvianic acid , protocatechuic aldhyde and salvianolic acid B in Injection Danhong。
MethodsSeparation was performed on an Kromasil C18(5 μm,4.6 mm×20 mm) with water-dimethylformanide -glacial acetic acid (90∶4∶2)as mobile phase and determination at 281nm . ResultsThe recoveries were between 97.59 and 104%. And RSD was not more than 2.0%。
高效液相色谱法测定丹红注射液中成分的含量丹红注射液是由中药丹参、红花采用现代中药制药提取工艺制作而成的中药复方注射液，现代药理研究显示[1-2]，丹红注射液中包含丹参素钠、原儿茶醛、尿苷、腺苷、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸羟基红花黄色素A（以下简称丹酚酸A）等有效成分，故其具有活血化瘀，理气通脉的功效，从而起到改善心肌缺血、抑制动脉粥样硬化，抗血小板凝聚、改善微小循环功能等作用，临床上常用于冠心病、心绞痛、心梗，缺血性脑卒中等瘀血闭阻所致诸证[7-9]。
虽然丹红注射液在临床上已经使用多年，且疗效良好，但是对其药物的有效成分进行定量分析的研究仍较少，未能有效的建立一个中药质量评定方法，不利于本品的产品质量控制。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是目前在中药成分研究领域中最为广泛使用的分析方法之一，其具有应用范围广、检测分析快、药物分离、检出灵敏度高、操作自动简便等优点[10-11]，本研究使用HPLC 对丹红注射液的各主要成分含量进行测定，现报道如下。
1 仪器与试药1.1 仪器Agilent高效液相（型号：1200型），其中该色谱系统还包括以下主要适配零件和系统，如二极管阵列DAD检测器（型号：G1315D型）、四元梯度泵（型号：G1311A型）、柱温箱（型号：G1316A 型）、在线脱气机和化学工作站（型号：G1322A型）。
购买于上海精密仪器仪表公司的电子分析天平（型号：*****型）和超声波清洗器（型号：KQ-100DE）;购买于法国*****E公司的超纯水系统（型号：Mili-RO Plus型），上海科导超声仪器有限公司;双光束紫外可见分光光度计（型号：MQK-UV1800型）购买于上海米青科实业有限公司。
1.2 试药于北京谱析科技有限公司和中国药品生物制品检定所购买丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、咖啡酸对照品、迷迭香酸对照品、芦丁对照品、丹酚酸B对照品、丹酚酸A对照品，批号分别为*****-*****、*****-*****、***-*****、*****-*****、*****-*****、***-*****、***-*****。
高效液相色谱法测定复方丹参片中丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量王莉萍【期刊名称】《医药导报》【年(卷),期】2007(26)10【摘要】目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定复方丹参片中丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量.方法色谱柱:Hypersil ODS(4.6 mm×250 mm,5μm);用甲醇-乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱作为流动相;流速:0.9 mL·min-1;检测波长:270 nm;柱温:40℃;进样量:10μL.结果丹酚酸B在24.2～242.0μg·mL-1,丹参酮ⅡA在5.25～52.50μg·mL-1的浓度范围内线性关系良好,丹酚酸B的平均回收率为98.2%(RSD=0.92%,n=3),丹参酮ⅡA的平均回收率为98.4%(RSD=0.97%,n=3).结论该方法灵敏快速、准确可靠,可作为复方丹参片的质量控制方法.【总页数】2页(P1215-1216)【作者】王莉萍【作者单位】江西省抚州市第一医院药剂科,344000【正文语种】中文【中图分类】R286;R927.2【相关文献】1.高效液相色谱法测定复方丹参片中丹酚酸B的含量所用溶剂的研究 [J], 刘娜;刘赟娜2.高效液相色谱法测定复方丹参片中有效成分丹参酮ⅡA的含量 [J], 潘磊3.反相高效液相色谱梯度洗脱法测定安神补心片中丹参酮ⅡA和丹酚酸B含量 [J], 唐晓蓉;余敏灵4.高效液相色谱法测定复方丹参喷雾剂中丹酚酸B和丹参酮Ⅱ_A的含量 [J], 张永东;钟颖;谭鸿毅;金承怀;孟亚军;阳国平5.高效液相色谱法测定复方丹参分散片中丹参酮ⅡA的含量 [J], 唐春莲;章家伟;章泽恒因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法分析丹参水溶性成分研究概况作者：季庆亮来源：《中国新技术新产品》2011年第04期摘要：丹参是一种传统中药，但其水溶性成分的研究是近年才展开的。
本文概述了高效液相色谱法分析丹参水溶性成分的研究进展。
关键词：丹参；水溶性成分；高效液相色谱法中图分类号：R9 文献标识码：A中药丹参为唇形科鼠尾草属植物丹参的干燥根及根茎，是常用的活血化瘀中药。
丹参活性成分主要分为脂溶性成分和水溶性成分两类。
国内外对丹参及其同属植物的脂溶性成分进行了大量研究，然而中医传统用药方法是用水煎剂，即丹参的水溶性部位。
所以研究丹参水溶性成分更有意义。
现就目前高效液相色谱法分析丹参水溶性成分方面的研究作一综述。
1 丹参素的HPLC测定如注射用丹参（冻干）中丹参素钠的测定，就是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以二甲基甲酰胺-甲醇-水-冰醋酸（4：4：90：2）为流动相；检测波长为281nm。
代彩芹等报道，用反相HPLC法，以甲醇-0.4%醋酸(5:95)作流动相，检测波长281 nm。
结果样品平均加样回收率为99.71%，RSD为0.96%。
王杰民等采用以甲醇和0.25%醋酸溶液分别为流动相A和B 的梯度洗脱技术，YWGC18H37色谱柱，对羟基苯甲酸为内标，280nm波长处检测。
结果线性关系良好，丹参素的回收率为104.0%±1.7%。
李正国等以水-甲醇-冰醋酸（94：4：0.6）为流动相，用C18-ODS柱测定丹红注射液中丹参素的含量，检测波长278nm,外标法定量分析, 结果样品平均加样回收率为100.90%,RSD为1.41%。
余练康等以甲醇-0.2mol/L的醋酸铵(12:88)为流动相(硫酸调节PH2.2)，测定乐脉颗粒中丹参素的含量。
2 原儿茶醛的HPLC测定向大雄等采用YWG- C18反相柱，甲醇-乙腈-冰乙酸-水（15：5：1：84）为流动相测定了不同丹参制剂中原儿茶醛的含量。
王凌等以甲醇-水(15:85)为流动相(磷酸调节PH2.45)，检测波长281nm,用C18-ODS柱测定原儿茶醛含量。
药品质量及检验高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B 等3种有效成分游勇基1,陈铭辉2(1.福建省药品检验所,福建福州350001;2.福建中医学院药学系,福建福州350003)摘要:目的 测定丹参中丹酚酸B,丹参素和原儿茶醛等3种水溶性有效成分的含量。
方法 采用高效液相色谱法测定。
以甲醇-5%冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,以对羟基苯甲酸为内标,检测波长为281nm,柱温30 。
结果 丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 浓度分别在3.95~47.4 g mL -1(r =0.9996),5.14~61.68 g mL -1(r =0.9999),16.8~117.6 g mL -1(r =0.9994)范围内呈良好线性关系,丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 的平均回收率分别为101.43%(RSD = 2.88%,n =6),99.89%(RSD=3.04%,n =6)和103.43%(RSD=1.52%,n =6)。
结论 方法简便,分离效果好,能同时测定丹参中丹酚酸B 、丹参素、原儿茶醛等3种水溶性有效成分的含量,结果准确可靠。
关键词:丹参;丹参素;原儿茶醛;丹酚酸B;高效液相色谱法中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1001-2494(2003)12-0950-03Determination of three effective components in Salvia miltiorrhiza by means of HPLCYOU Yong -ji 1,CHEN M ing -hui 2(1.Fuj ian I ns titute f or Dr ug Contr ol,Fuz hou 350001,China;2.D ep ar tment of Phar macy ,Fuj ian Colle ge of T r aditional Chinese M edicine,Fuz hou 350003,China)ABSTRAC T:OBJECTIVE T o investigate the determination of three water soluble components in S alvia miltior r hiz a .METHODS T he analysis w as carr ied on a column of Hypersil C 18(250mm 4.6mm,5 m)w ith a mobile phase of methano-l 5%acetic acid (gradient elution from 10 90to 35 65in 20minutes),using 4-hydrox y -benzoic acid as the internal standard.T he detection wave -length w as at 281nm.RESULTS T he linearit y w as obtained over 3.95~47.4 g mL -1(r =0.9996)for Danshensu,5.14~61.68 g mL -1(r =0.9999)for pro to catechuic aldrhyde and 16.8~117.6 g mL -1(r =0.9994)for salviamolic acid B,respectively.T he average recoveries w er e 101.43%(R SD=2.88%,n =6)for Danshensu,99.89%(RSD=3.04%,n =6)for protocatechuic a-l drhyde and 103.43%(RSD = 1.52%,n =6)for salv iamolic acid B,respectively.C ONC LUSION T his method appear ed to be r apid,simple and accurate.KEY WORDS :S atvia miltior r hiz a Bg e.;Danshensu;protocatechuic aldehyde;salv iamo lic acid B;HPL C 作者简介:游勇基,男,硕士,副主任药师Tel:(0591)7621966-3521E -mail:youyj @丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorr hiz a Bge.)的干燥根及根茎,是重要的传统中药。
具有祛淤止痛、活血调经、养心除烦的功效。
丹参在临床上广泛用于治疗心血管系统疾病,其水溶性活性成分为丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B 等,具有抗血栓、改善血流环、抗氧化等作用,其中丹酚酸B 活性较强[1]。
它们的分析测定主要有HP LC 测定丹参药材及制剂中[2~3]丹参素和原儿茶醛含量以及用薄层扫描法测定丹参药材中丹酚酸B 等酚酸类化合物的含量[4]。
用H PLC 同时测定丹参药材中丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 的含量,笔者未见文献报道。
本实验建立了高效液相色谱法同时测定丹参中丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 的含量,方法简便易行,分离效果好,准确可靠。
1 实验材料仪器:Integral 4000型高效液相色谱系统(美国Perkin -Elmer 公司)。
试药:丹参药材(产地:河北,甘肃,湖南,四川,云南,市售品),经福建省药品检验所中药室周继斌主任药师鉴定为Salvia miltir r hiz a Bg e.丹参对照药材(中国药品生物制品鉴定所,批号0923-9804),对羟基苯甲酸(分析纯),甲醇(色谱纯),水为超纯水,其它试剂均为分析纯。
对照品:丹参素,原儿茶醛对照品(中国药品生物品检定所),丹酚酸B 对照品(福建漳州制药厂,HPLC 显单一色谱峰,纯度大于98%)。
2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱:Hypersil C 18(4.6mm 250mm,5 m,大连依利特科学仪器公司装填);流动相:甲醇-5%冰醋酸溶液(10 90),pH 2.5~3.0,维持0~5min,在5~10min,流动相比例线性改变至(35 65),10~20min,维持比例(35 65),再返回起始流动相;流速:1mL min -1;检测波长:281nm;柱温:30 。
950 Chin Phar m J,2003December ,Vol.38No.12中国药学杂志2003年12月第38卷第12期在此色谱条件下的色谱图见图1。
图1 HPL C 色谱图a-对照品;b-丹参药材(河北); -丹参素; -原儿茶酸; -原儿茶醛; -对羟基苯甲酸(内标); -丹酚酸BFig 1 HPL C chromato grams of the three componentsa-standard;b-Satvia mil tiorrhiza Bge.(H e bei ); -Danshe nsu; -prot ocat -echuic acid; -protocatechuic aldrhy de; -4-hydrox y -benzoic aci d (i nternal subst ance.); -salviamoli c acid B2.2 线性关系精密称取丹参素3.95mg,原儿茶醛5.14mg,丹酚酸B 8.4mg 分别置于25mL 棕色量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液A,B,C 。
精密称取内标对羟基苯甲酸0.02g,置50mL 量瓶,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为内标溶液。
精密吸取贮备液A 0.25,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL ,贮备液B 0.25,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0mL,贮备液C 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5mL,分别置于7个10mL 量瓶中,加入内标0.5mL,用甲醇稀释至刻度。
精密吸取20 L 进样,分别以丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 与内标的峰面积比,对丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 的浓度进行线性回归处理,得回归方程与线性关系见表1,表明3种成分在所列浓度范围内具有良好线性关系。
表1 回归方程与线性关系Tab 1 Regression equations and their linearit y水溶性成分回归方程r 线性范围/ g mL -1丹参素Y =-0.0213+0.0164X 0.9986 3.95~47.4原儿茶醛Y =0.0403+0.1235X 0.9999 5.14~61.68丹酚酸BY =0.0011+0.0216X0.999416.8~117.62.3 精密度实验分别精密吸取贮备液A ,B 和C,1.5,1.5和2.0mL ,于10mL 量瓶中,加入内标0.5mL,用甲醇稀释至刻度。
精密吸取20 L 进样,记录峰面积,并分别计算丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 与内标的峰面积比,丹参素、原儿茶醛和丹酚酸B 与内标的峰面积比的RSD 分别为1.19%,0.89%和0.57%(n =5)。
2.4 重复性实验取丹参对照药材(0923-9804)按上述含量测定方法,计算含量。
丹参素,原儿茶醛和丹酚酸B 的平均含量分别为0.2444%,0.02572%和4.792%,RSD 为3.90%,3.49%和3.87%,n =5。
2.5 回收率实验精密称取已知含量的丹参对照药材0.2g,分别精密加入一定量的3种对照品,按以上方法测定。
结果丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B 的平均回收率分别为101.43%,99.89%,103.43%,RSD 为2.88%,3.04%,1.52%。
2.6 样品含量测定精密称取样品细粉(过4号筛)约1g,加水30mL ,浸泡过夜后热提2h,静置过滤。
滤液用10%盐酸酸化至pH 2,用醋酸乙酯萃取5次,每次10mL ,合并萃取液,蒸干后用甲醇溶解并定量转移到25mL 量瓶中,并稀释至刻度,摇匀。
精密吸取2mL 及内标溶液0.5mL,置10mL 量瓶,甲醇定容。
精密吸取20 L 注入液相色谱仪,记录丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B 与内标的峰面积,分别以它们与内标的峰面积比为定量指标,根据内标法求算相应的浓度。
结果见表2。
表2 丹参药材测定结果.%Tab 2 Contents of Danshensu,protocatechuic aldrhyde and salviamolic acid B in Satv ia miltiorr hiz a Bge.%样品丹参素含量原儿茶醛含量丹酚酸B 含量丹参药材(四川)0.2700.050 4.36丹参药材(河北)0.1060.0070 3.96丹参药材(甘肃)0.3790.0054 3.77丹参药材(湖南)0.1600.0069 3.72丹参药材(云南)0.4110.089 5.12丹参对照药材0.2440.0264.79(0923-9804)3 讨 论3.1 提取条件的选择 参考文献[2,4]考察了样品提取条件,曾通过实验比较了不同提取方法(冷浸、热提及超声波提取)、不同提取溶剂(水、甲醇、酸性甲醇)及不同提取时间的提取效果。
