玉米SSR引物合成

ICS 65.020.20B 21备案号：21532-2007 DB Array北京市质量技术监督局发布前 言本标准的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。

本标准由北京市农业局提出。

本标准由北京市农业标准化技术委员会种植业分会归口。

本标准起草单位：北京市种子管理站、北京市农林科学院玉米研究中心、全国农业技术推广服务中心。

本标准主要起草人：贾希海、郭景伦、辛景树、律宝春、田雷、吴明生、赵久然、王凤格、云晓敏、郭慧杰。

I玉米品种纯度及真实性SSR分子检测方法1 范围本标准依据SSR分子标记原理，规定了进行玉米单交种和亲本自交系的品种纯度及真实性检测方法的仪器设备及试剂、引物筛选、试验步骤、纯度检测和真实性鉴定。

本标准适用于玉米单交种及亲本自交系的纯度及真实性检测。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。

2.1品种纯度 varietal p u rity品种在DNA分子标记带型方面典型一致的程度，用供检样品中本品种的种子数占样品种子总数的百分率表示。

2.2品种真实性 varietal genuineness供检品种与标准品种的符合程度。

2.3SSR分子标记 simple sequence repeat marker由寡核苷酸为单位的简单串联重复序列。

2.4引物 primer结合在模板DNA上的互补短链，提供3＇-OH末端作为DNA合成的起点，延伸合成模板DNA的互补链。

3 原理在玉米基因组中普遍存在着由寡核苷酸为基本单位的简单串联重复序列，品种间因其重复次数不同而存在多态性，据此可以利用适宜引物进行PCR扩增，从而检测出特定SSR位点的多态性，以鉴别品种的纯度及真实性。

4 仪器设备及试剂4.1 仪器设备PCR扩增仪；DNA序列分析电泳槽；高压电泳仪（3000V, 400mA, 400W）；电子天平（感量0.01g, 0.001g）；冰箱；微量加样器（0.5µL～10µL, 20µL～200µL, 100µL～1000µL）；磁力搅拌器；胶片观察灯；水平摇床；高压灭菌锅；酸度计等。

构建玉米新品种新科19指纹图谱的SSR引物筛选作者：王文洁,周联东,郭玉霞,刘经纬,刘喜存来源：《湖北农业科学》2011年第17期摘要：以玉米新品种新科１９及其亲本为材料，从５０对玉米ＳＳＲ引物中筛选出在新科１９双亲之间多态性明显、重复性较好的５对引物ｂｍｃ１７９２、ｂｎｌｇ１４９６、ｕｍｃ２１０５、ｂｎｌｇ２２９１和ｐｈｉ０６５，可用于鉴定新科１９的真实性，同时为鉴定该种子的纯度提供参考。

该方法具有准确可靠、实用性强等优点，可为生产上杂交种新科１９真实性的快捷有效鉴定提供科学依据。

关键词：玉米；杂交种；ＳＳＲ标记；真实性鉴定中图分类号：Ｓ５１３文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）17－3635-02ＳｃｒｅｅｎｉｎｇＳＳＲＰｒｉｍｅｒｓｆｏｒＦｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＭａｉｚｅＨｙｂｒｉｄＸｉｎｋｅ１９ＷＡＮＧＷｅｎ－ｊｉｅ，ＺＨＯＵＬｉａｎ－ｄｏｎｇ，ＧＵＯＹｕ－ｘｉａ，ＬＩＵＪｉｎｇ－ｗｅｉ，ＬＩＵＸｉ－ｃｕｎ（ＸｉｎｘｉａｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆＨｅｎａｎ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３０００，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡｏｆＸｉｎｋｅ１９ａｎｄｉｔｓｐａｒｅｎｔｓｗａｓｅｘｔｒaｃｔｅｄｆｏｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇＳＳＲｍａｒｋｅｒｓｔｈａｔｃｏｕｌd ｂｅａｐｐｌｉｅｄｉｎｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｆｒｏｍ５０ｐａｉｒｓｏｆＳＳＲｐｒｉｍｅｒｓ．Ａｓａｒｅｓｕｌｔ，ｆｉｖｅｐａｉｒｓｏｆｐｒｉｍｅｒｓ，ｂｍｃ１７９２，ｂｎｌｇ１４９６，ｕｍｃ２１０５，ｂｎｌｇ２２９１ａｎｄｐｈｉ０６５，ｗｈｉｃｈｐｒｅｓｅｎｔｅｄ apparent ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐａｒｅｎｔｓ，ｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｓｃａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒ authenticity identification ｏｆＸｉｎｋｅ１９．Ｔｈｉｓｐｒｏｃｅｄｕｒｅｗｉｔｈｈｉｇｈａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｓｔｒｏｎｇｐｒａｃｔｉｃａｌｉｔｙｗａｓａｐｐｌｉｃａｂｌｅｆｏｒｔｅｓｔｉｎｇｓｅｅｄ authenticity ｏｆＸｉｎｋｅ１９ｒａｐｉｄｌｙａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍａｉｚｅ（ＺｅａｍａｙＬ．）；ｈｙｂｒｉｄ；ＳＳＲｍａｒｋｅｒ； authenticity identification随着品种数量的增多以及少数骨干亲本的集中应用，玉米品种间的遗传差异越来越小，同工酶和蛋白质电泳技术已经不能有效鉴定种子的纯度和真实性。

SSR反应体系的构建及其在玉米重离子辐照育种中的应用研究SSR反应体系的构建及其在玉米重离子辐照育种中的应用研究引言：玉米是我国最重要的粮食作物之一，也是全球重要的经济作物之一。

然而，玉米生长过程中常受到环境因素的影响，包括致病菌的侵袭以及自然辐射引起的基因突变。

重离子辐照育种是通过利用重离子辐射诱发植物基因突变，从而创造新的优良品种。

SSR（Simple Sequence Repeat）是一种高度多态性的DNA微卫星标记方法，广泛应用于植物遗传研究和育种工作中。

本文旨在探讨SSR反应体系的构建方法及其在玉米重离子辐照育种中的应用研究。

一、SSR反应体系的构建1. DNA提取：DNA提取是SSR分析的第一步。

一般采用传统的CTAB法或商用DNA提取试剂盒进行DNA提取，目的是获取高质量的DNA模板。

2. 引物设计：根据玉米基因组序列，设计适合玉米的SSR引物。

引物的选择应考虑多态性、位点稳定性、扩增特异性等因素。

3. PCR反应：根据引物的选择，设置合适的PCR反应体系。

常用的PCR反应缓冲液包括Taq缓冲液、MgCl2、dNTPs等，扩增温度一般为94℃预变性，然后是30-35个周期的变性（94℃）、退火（50-65℃）、扩增（72℃）。

4. 电泳分析：将PCR产物进行电泳分析，一般使用水平电泳或垂直电泳，以便观察样品中SSR位点的多态性。

二、SSR在玉米重离子辐照育种中的应用研究1. 玉米重离子辐照育种的优势：重离子辐照具有高能量、高密度的特点，可以更好地诱发基因突变，提高变异效应。

相比传统的X射线辐射育种，重离子辐照育种技术更具潜力。

2. SSR在玉米重离子辐照育种中的应用研究：SSR分析是评估辐射诱变后玉米基因组稳定性和多样性的关键工具。

利用SSR分析，可以检测重离子辐射诱变后玉米的遗传多样性，从而选择出具有优良性状的突变体。

3. 以SSR为基础的定向选育：通过SSR分析得到的突变体，可以根据其基因组特征和稳定性，进行定向选育。

玉米品种鉴定技术规程 ssr标记法SSR（Simple Sequence Repeat）标记法是一种用于玉米品种鉴定的技术规程。

以下是关于玉米品种鉴定技术规程 SSR 标记法的一些基本信息：1. SSR 标记的原理：SSR 标记是基于短小简单重复序列的分子标记技术。

这些重复序列在基因组中广泛存在且具有高度多态性。

通过设计特定的引物，可以扩增并检测这些 SSR 标记，从而识别不同品种之间的差异。

2. DNA 提取：从待鉴定的玉米样本中提取高质量的 DNA 是进行 SSR 分析的重要步骤。

通常使用适当的 DNA 提取方法，如 CTAB 法或商业试剂盒。

3. SSR 引物设计：针对玉米基因组中的 SSR 位点，设计特异性的引物对。

这些引物可以根据已发表的玉米 SSR 数据库或通过自行开发来获得。

4. PCR 扩增：使用设计的 SSR 引物对，对提取的 DNA 进行 PCR 扩增。

PCR 反应条件可以根据引物的特性和设备要求进行优化。

5. 电泳和凝胶分析：扩增产物通过电泳在琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶上进行分离。

根据 SSR 标记的大小差异，可以观察到不同的电泳条带。

6. 数据分析：对电泳结果进行分析，记录每个品种的 SSR 标记图谱。

通过比较不同品种之间的图谱差异，可以鉴定出品种的独特特征。

7. 品种鉴定：根据 SSR 标记的多态性和品种特有的图谱模式，可以对玉米品种进行准确的鉴定和区分。

需要注意的是，SSR 标记法需要专业的实验室设备和技术操作，同时也需要对玉米基因组和 SSR 标记的相关知识有一定的了解。

在进行品种鉴定时，建议遵循相关的标准操作程序和实验室安全规范。

SSR分子标记技术在玉米育种中的应用王勇,张元昶,方忠(广西大学农学院,广西南宁530005)摘要介绍了S SR分子标记技术的原理、特点、类型及其在玉米遗传图谱的构建、品种纯度鉴定和玉米遗传多样性等育种中的应用。

关键词玉米;S SR;遗传育种中图分类号S513.032文献标识码 A 文章编号0517-6611(2007)01-00052-03U t iliza t ion o f SSR M a rk e rs in M a iz e G e n e tic B re e d in gW ANG Yo n g e t a l(A g r icu ltu ra l C o lle ge,G u an gx i U n ive rsity,N ann in g,G u an gx i530005)A b s tra c t T h e pr in cip le,ch a racte r is tics an d types o f S SR m a rk e rs w e re in trodu ced.In add ition,its app lica tion w a s m a in ly rev iew ed inth re e a spects in-clud in g th e con stru ction o f th e gen e tic lin k age m ap,th e de te ction o f th e pu r ity o f va rie ty and th e stu dy o f th e m a ize gen e tic d ive rs ity.K e y w o rd s M a ize;S SR;G en e tic breed in g玉米是重要的粮食与饲料作物,是世界三大作物之一。

但是由于对玉米中许多性状的遗传机制缺乏了解,从而限制了玉米产量的提高与品质的改善,阻碍了玉米育种工作的进程。

SSR分子标记技术及其在构建玉米DNA指纹库上的应用摘要SSR分子标记技术是在PCR基础上发展起来的一种DNA多态性检测技术，已广泛应用于植物基因组研究的各个领域。

概述了SSR标记的原理、类型、功能及其引物的来源，利用SSR构建玉米DNA指纹库的进展，玉米DNA指纹库在品种鉴定、品种保护及品种监测等方面的应用等，以为玉米品种的研究提供参考。

关键词SSR分子标记;玉米;DNA指纹库;应用AbstractSimple sequence repeat(SSR)markers on the basis of PCR as a technology of detection DNA polymorphism have been widely used in the studies of plant genome research in some fields. In the paper，the theories，types，functions and sources of primers by SSR marker were clarified. Then the processes of maize DNA fingerprinting pool construction by SSR were elaborated. Finally the application of maize DNA fingerprinting pool on cultivar identification，cultivar protection，cultivar detection et al was pointed to take references for maize varieties research.Key wordsSSR molecular marker;maize;DNA fingerprintingdatabase;application玉米是一种重要的饲用、粮用和工业加工作物，在国民经济中占有重要的地位。

SSR标记及其在玉米研究中的应用于新艳1,2,王凤格2,赵久然2,王玺13,匡猛2　(1.沈阳农业大学农学院,辽宁沈阳110161;2.北京市农林科学院玉米研究所,北京100097)摘要　概述了SSR反应的原理、特点,总结了其在玉米亲缘关系和遗传多样性研究、DNA指纹库建立、遗传图谱构建和基因定位及分子标记辅助育种等方面的应用,并对SSR在植物遗传领域的应用前景进行了探讨。

关键词　SSR;分子标记;玉米中图分类号　Q789 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2007)07-01918-03SSR M arker and its Application to M aizeYU X in2yan et al　(Agricultural C ollege,Shenyang Agricultural University,Shenyang,Liaoning110161)Abstract　T his paper clarified the theories and characteristics of SSR.And its applications in genetic polym orphism and genetic relationship,establish2 m ent of DNA fingerprinting2pool,construction of genetic m ap,gene localization and m arker2aided selection of m aize were summ arized.T he m eth od opens up broad prospects for the studies of plant genetics.K ey w ords　SSR;M olecular m arker;M aize 分子标记是20世纪80年代初发展起来的遗传标记,能够在DNA水平上准确揭示出遗传标记位点。

文章编号!!""#$"%"&’(""#)"($""!&$"(适用于!!"分子标记的玉米单粒种子#$%快速提取新方法郭景伦!赵久然!王凤格’北京市农林科学院玉米研究中心"北京!"""*%)摘要!研究了玉米单粒种子+,-的提取新方法"利用该方法提取+,-"液氮#研磨#离心#沉淀#.+.#/0-1及氯仿都不用"一个工作人员提取!""粒种子’!个检测样品2+,-只需3"456左右"一天可以提取!&""粒种子7!&个检测样品2的+,-"并且提取的+,-分子量大"不降解"完全可以满足利用..8分子标记进行+,-指纹分析的需要"为+,-指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题$关键词!玉米%单粒种子%+,-提取%..8分子标记中图分类号!.#!39"3#93文献标识码!-%&’(")*+,#&%-./0)1/+234’/52,60274)+8’!+39:’;0<!’’,!=+/)>:’620!!"?3):<@+@:;<=56>$?@6A BC-<=5@$DE6A F-,:GH6>$>H7!"#$%&%’%"()*+%,-%(./%#0#,12)"3%456721(#)89-8("9",3:6(%’-(5;)#%,)%’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’<(20,@J[E5SH\+DU THHM\+,-HNODEPO5Q6\..8E6E?UT5T+,-指纹技术的诞生"对于玉米种子纯度和真伪鉴定来说"是一场技术革命"解决了过去一些玉米品种利用同工酶和蛋白质电泳技术无法进行纯度鉴定的难题$然而+,-指纹技术能否得到普及和推广"+,-快速提取技术是关键"因此国内外学者一直没有停止对+,-快速提取方法的研究$但是目前应用的方法提取时间仍然偏长"不能适应玉米种子纯度快速鉴定的需要$因此"本文尝试研究出一种新的玉米单粒种子+,-提取方法"不仅能进一步提高+,-的提取速度"而且提取的+,-又能完全满足..8分子标记的需要"解决+,-指纹技术在玉米种子纯度快速鉴定中应用存在的关键性技术难题$收稿日期!(""]$!!$!"作者简介!郭景伦’!%&*$2"男"山东苍山人"硕士"副研究员"主要从事分子标记辅助玉米遗传育种科研工作$0H?!"!"$#!#"3##*^$4E5?!>_?&‘!"!*a!(&9PQ4!材料与方法7!2实验材料$京科!#种子!"粒"母本%*#3种子#粒"父本1-种子#粒$7(2+,-提取$将每一粒干种子的胚取下"分别放入%&孔深孔板中"每孔加入!#"!b提取液7"9![ ,E<C""9!c溴酚蓝2"盖上封口膜"沸水加热#456"然后每孔分别加入!#"!b0^缓冲液7LC(9"2"放在]d冰箱保存备用$利用!9"e琼脂糖凝胶电泳"溴乙锭染色"紫外灯下观察照相"检测+,-质量$732引物$本试验采用的..8引物由上海生工合成$7]2..8反应体系$("!b反应液中包括!!"44Q?f b0D5T$C/?"#"44Q?f b g/?""9""!e:H?EO56"(9#44Q?f b[>/?(""9!&44Q?f b]M,0h""9(#!4Q?f b..8引物"!单位0EW+,-聚合酶"(!b+,-模板$玉米科学(""#A!3&(’!!&i!‘"(#=Q@D6E?QR[E5SH.P5H6PHT!"#$$%反应程序!&’%扩增在&(’)*++&’%仪,-.%/0/1234#上进行!反应程序为"5"6预变性789:#一个循环$5;6变性;+0#""6退火<"0#=76延伸;"0#共<+个循环$最后在=76延伸=89:%!>#电泳!&’%产物变性后在;?"@测序胶上分离!预电泳A"B &7+89:$电泳A+B &7+89:%,=#银染%*+@冰醋酸固定<89:$双蒸水快速漂洗*次&不超过*+0$+?7@CDEF <溶液染色"89:$显影液,<@E1FG &+?"@甲醛#显影$*+@冰醋酸定影%7结果与分析!"#$%&质量每管吸取*"!H IEC &分别加入"!H 溴酚蓝&用*@琼脂糖电泳检测IEC 质量,图*#%从图*中可以看出&虽然用快速提取方法在提取IEC 的过程中&没有用液氮碾磨&没有用氯仿’$I$等试剂&没有离心&没有沉淀&但是提取出来的IEC 却没有降解!*J "号为母本5A"<的IEC &>J *"为京科*"的IEC &*>J 7+为父本KC 的IEC图’用快速方法提取的$%&质量!"!(()分析结果将上述IEC 一起进行$$%分析,图7#&尽管用快速方法提取的IEC 中含有多种杂质&如多糖’蛋白质’叶绿素等&但是并不影响&’%扩增&即对$$%分析结果没有影响!从图7上可以看出&京科*"母本5A"<和父本KC 都只有一条带&母本带分子量大&父本带分子量小&而京科*"的带型为父母本互补&有两条带&带型清晰!因此&用快速方法提取的IEC 质量完全可以满足利用$$%分子标记进行IEC 指纹分析的需要!*J "号为母本5A"<的指纹&>J *"为京科*"的指纹&*>J 7+为父本KC 的指纹图!利用新方法提取的$%&(()分析结果<讨论利用本文介绍的玉米单粒种子IEC 提取新方法&提取的IEC 仍然能够满足$$%分析的需要&最关键的是速度快&一个人提取*++粒种子的IEC 只需<+89:左右&一人一个工作日可以提取*>++粒种子,*>个种子样品#的IEC !因此&经过改进IEC 提取方法&优化&’%反应程序&简化银染技术&要分析一个玉米种子样品,*++粒种子#的纯度&从IEC 提取&到&’%扩增&经过电泳&染色&到最后统计出结果&总共只需;4左右!与目前普遍应用的同工酶和蛋白质电泳技术相比&IEC 指纹技术已经成为室内检测玉米种子纯度的最快方法!虽然利用快速提取新方法提取的IEC 没有降解&但是由于存在多糖’蛋白质’叶绿素等细胞内含物杂质以及E1L ’(290)G’M ’NI(C 等化学物质&因此扩增时IEC 用量不宜过多&7J <!H 比较合适&如果IEC 用量过大&容易造成反应体系中杂质过多&影响扩增&容易发生有些管扩增不出来的现象&并且IEC 用量越大&缺管数量就越多!参考文献"O*P 王玉民&庄丙昌&等?玉米半粒种子IEC 提取及%C&I 分析O.P ?玉米科学&*55>&;!<Q "7=)7A ?O7P 郭景伦&赵久然&尉德铭&等?玉米单粒种子IEC 提取新方法O.P ?北京农业科学&*55=&*"!7Q "*)7?!下转第"#页$7期*=郭景伦等"适用于$$%分子标记的玉米单粒种子IEC 快速提取新方法!上接第"#页$!"#高文伟!李晓辉!李新海!等$玉米单粒和单叶片%&’快速提取及(()标记分析!*#$玉米科学!+,,-!.+/+0"...1.."$!-234%567839$%&’:;<=>4<?56@=5A8=B C::8C@5=)’D%>6>7BC?C?6E>=?:<>7?8:6<?@?4><?56C<F8?:C$(::8(4?:64:>68G:4H6575IBJ.KK-J++L.M.1.MN$!O2PH:6%QJ)56>78D P$’=>R?8%&’A?6?R=:R>=><?56A:<H58CF?<S >T7:@5=’UVD>685<H:=DP)>RR7?4><?56C$D7>6<357:4F7>=9?575IB ):R5=<:=J.KKKJ.ML O"1OM$WN2PC>?X7Y3J9>C<?>6QJ9=:<<C4H6:?8:=)J:<>7$P5AR>=><?E:>6>7BC?C 5@8?@@:=:6<%&’:;<=>4<?56R=5<5457CL’@>C<J F6?E:=C>7A>;?1R=:R>S =><?565@H?IH ZF>7?<B R7>6<%&’@5=I:6:<?4:E>7F><?56>68RHB75I:S 6:<?4C<F8?:C$D7>6<357:4F7>=9?575IB):R5=<:=J.KK[J.NL NK1[N$!M2(<:?6&J Q:==:6\>68]:77:=9$’6:^%&’:;<=>4<?56A:<H58@5= H?IH1<H5FIRF<A>=X:=>6>7BC?C?6>7>=I:1I:65A:CR:4?:C CF4H>C G=?<?4FA>:C<?EFA$D7>6<9=::8?6IJ+,,.J.+,L"O-1"ON$W[2杜何为!黄敏!张袒新$玉米%&’的小量快速提取W*2$玉米科学!+,,-!.+/+_"..-1..O$。

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2007,15(6):964~969*基金项目： 北京农业育种基础研究创新平台、 北京市自然科学基金项目 （No.YZPT02­06）、 北京市科技新星项目 （No.2003B23） 和吉林省科技 计划项目 （No.20030555） 资助。

**通讯作者。

Author for correspondence.赵久然， 研究员， 主要从事玉米遗传育种及品种鉴定研究。

E­mail:<jiuran@>； 戴景瑞， 院士， 教授， 主要从事玉米遗传育种研究。

E­mail:<daijr@>. 收稿日期：2006­11­21 接受日期：2007­01­31 ·研究论文· 适于玉米杂交种纯度鉴定的 SSR 核心引物的确定 *王凤格 1,2 , 赵久然 1 **,王 璐 1 , 易红梅 1 , 郭景伦 1 , 戴景瑞 2**, 原亚萍 3 , 卢柏山 1 ,杨国航 1 (1.北京市农林科学院玉米研究中心， 北京 100097； 2.中国农业大学农学与生物技术学院， 北京 100094；3.吉林大学植物科学学院， 长春 130062)摘要: 为了确定一套适于玉米杂交种纯度鉴定的核心 SSR 引物， 利用 10 个 SSR 引物对 420 份已知玉米 （ ） 杂交种进行 DNA 指纹分析。

综合考虑多态性和杂合率两个指标，确定 bnlg161和bnlg1450为玉米杂交种纯度鉴定的首选核心引 物，利用这两个引物进行筛选，412 个品种 (占 98%) 能够找到具有杂合带型的鉴定引物, 确定 5 个引物 bnlg439、 bnlg125、 umc2105、 umc1705和 bnlg1792为玉米杂交种纯度鉴定的备选核心引物。

玉米品种鉴定技术规程 ssr标记法玉米（Zea mays L.）是世界上最重要的粮食作物之一，具有广泛的生态适应性和经济价值。

为了满足农业生产的需求和科学研究的需要，科学家们开发了多种玉米品种，并针对其进行了鉴定和分类。

其中，SSR标记法是一种常用的玉米品种鉴定技术规程，本文将重点介绍该技术规程的原理和步骤。

SSR（Simple Sequence Repeat）标记法是一种基于已知序列的重复单元寻找多态性位点的分子标记技术。

其原理是利用多态性位点的存在或不存在来鉴定不同的品种。

在玉米品种鉴定中，研究人员根据SSR标记法的原理，选取一些具有丰富多态性的SSR标记位点，通过PCR扩增和凝胶电泳等技术手段，检测和分离出目标位点，并根据目标位点的存在与否来判定玉米品种。

玉米品种鉴定的具体步骤如下：1. 提取玉米DNA：玉米DNA的提取是进行SSR标记法鉴定的关键步骤。

通常采用的方法是将玉米叶片或种子样品经过粉碎处理，使用提取试剂将DNA从细胞中分离出来。

2. PCR扩增：PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种通过体外合成技术快速扩增特定DNA片段的方法。

在玉米品种鉴定中，选择目标SSR标记位点进行PCR 扩增，采用合适的引物组合和PCR条件，使目标位点得到特异性扩增。

3. 凝胶电泳：凝胶电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分离和鉴定扩增产物。

将PCR扩增产物与DNA分子量标记物一同加载到琼脂糖凝胶孔中，施加电场后，根据扩增产物的大小，观察和记录目标位点的迁移距离。

4. 结果分析：通过观察凝胶电泳图像，可以判断目标位点的存在与否以及不同品种之间的差异。

如果目标位点在某个品种中存在，而在其他品种中不存在，则可以判定该品种具有独特的SSR标记，从而进行鉴定和分类。

SSR标记法作为一种快速、准确、可重复的玉米品种鉴定技术规程，广泛应用于玉米遗传育种和种质资源保护等领域。

它不仅可以用于鉴定玉米品种的纯度和纯度保持，还可用于种质资源的评价、亲源分析和遗传多样性研究等方面。

SSR标记在玉米研究中的应用研究进展SSR（Simple Sequence Repeats）是一类分子标记，在玉米研究中被广泛应用于遗传多样性分析、种质资源评价、亲缘关系确定、基因定位与连锁图构建、优良品种选育等方面。

随着分子生物学、生物信息学和基因组学等领域的快速发展，SSR标记的应用也得到了不断加强和拓展。

一、遗传多样性分析遗传多样性是指种群或个体间基因型和表型的差异程度。

通过SSR标记的多态性分析，可以准确测定玉米种质资源的遗传多样性水平，评估品种的亲缘关系，为玉米育种提供依据。

通过分析遗传多样性，可以发现不同地理分布的玉米亚种之间的遗传差异，从而为玉米的种质创新和种质改良提供理论指导。

二、新品种选育在玉米育种中，新品种的选育需要对大量的种质资源进行筛选和评估。

SSR标记可以帮助鉴定表现良好的亲本，加速杂交配制和品质改良过程。

通过SSR标记与目标性状之间的关联分析，可以筛选出与特定性状相关的分子标记，缩短选育周期，提高选育效率。

SSR标记也可用于品种纯度鉴定和品种保护。

三、基因定位与连锁图构建SSR标记常用于基因定位和连锁图构建，有助于了解玉米基因组结构和基因座间的遗传距离。

通过标记与性状的关联分析，可以找出与目标性状相关的分子标记，进而鉴定和定位相应的基因。

SSR标记的高度多态性和均匀分布特性，为构建高密度的连锁图提供了可靠的工具，促进了玉米的分子遗传学研究。

四、种质资源评价SSR标记可以帮助对玉米种质资源进行鉴定和评价。

通过遗传多样性的分析，可以评估遗传资源的丰富性和多样性。

通过SSR标记的分析，可以揭示种质资源中的关联关系和遗传背景，为玉米育种提供合适的亲本材料和育种策略。

SSR标记在玉米研究中有着广泛的应用。

通过对遗传多样性的研究，可以了解玉米种质资源的多样性和遗传背景，为玉米育种提供理论依据。

通过与目标性状的关联分析，可以筛选出与特定性状相关的分子标记，加速选育过程。

通过基因定位和连锁图构建，可以了解玉米基因组结构和基因座间的遗传距离。

专利名称：一种玉米纹枯病菌SSR标记及其制备方法、应用专利类型：发明专利
发明人：王玲,黄世文,刘连盟
申请号：CN201610841026.8
申请日：20160922
公开号：CN106399508A
公开日：
20170215
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种玉米纹枯病菌SSR标记及其制备方法、应用，属于分子生物技术领域。

该玉米纹枯病菌SSR标记包括了8组引物对，该标记的制备方法包括：1）提取玉米纹枯病菌的基因组DNA；2）利用限制性内切酶酶切总DNA，获得DNA片段；3）生物素标记的探针与目的片段杂交；4）利用磁珠对含有SSR序列的DNA片段进行富集；5）对含有SSR序列的DNA片段进行扩增并纯化；6）将DNA片段进行克隆测序；7）根据SSR的侧翼序列设计SSR引物，用于扩增该位点的微卫星片段。

本发明引物特异性高、扩增稳定、操作简便，周期短、成本低，同时，SSR标记自身具有共显性遗传、多态性丰富的优点，能够用于玉米纹枯病菌遗传多样性的分析。

申请人：中国水稻研究所
地址：311401 浙江省杭州市富阳区水稻所路28号
国籍：CN
代理机构：杭州浙科专利事务所(普通合伙)
代理人：沈渊琪
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