山楂总黄酮

山楂中总黄酮的提取及含量测定（吕培银）一、实验目的1.掌握黄酮类物质的提取方法。

2.掌握分光光度法测定黄酮含量的原理。

二、实验原理山楂富含黄酮类化合物，具有重要的生理活性和药效。

黄酮化合物的母核由C6-C3-C6即A-C-B三个环组成，A环和B环具有芳香化合物的性质，C环具有黄酮化合物的独特性质。

母核中某些位置如C3和C5上含有羟基或具有邻二酚羟基时能与铝、铅等金属离子形成稳定的络合物，这些络合物在光谱上产生明显变化。

黄酮与金属离子的这种作用不仅可以用于鉴别这类成分中羟基的位置，还可以作为进行定量分析的基础。

本实验利用碱性条件下，在亚硝酸盐存在时，硝酸铝与黄酮进行络合反应，生成红色络合物，且在500 nm左右有最大吸收，可利用分光光度法进行测定。

因此，本实验采用索氏提取法提取山楂中的总黄酮，并采用分光光度法对其含量进行测定。

三、实验用品1、仪器：索氏提取器、平底烧瓶、电热套、量筒、试管、容量瓶、移液管、玻璃比色皿、可见分光光度计等。

2、药品：山楂粉末、无水乙醇、芦丁标准品、硝酸铝、亚硝酸钠、氢氧化钠等。

四、实验内容1、山楂总黄酮的提取精密称取山楂粉末6 g,滤纸包好后置于250 mL索氏提取器中，加60%乙醇150 mL，连续回流提取1-1.5h, 冷却，将提取液转移至250 mL的容量瓶中，将圆底烧瓶润洗3次，60%乙醇定容至刻度线，摇匀，过滤。

取1 mL滤液稀释至10mL,摇匀，即为样品待测溶液。

2、芦丁标准溶液的配制精密称取芦丁20 mg，加入60 mL无水乙醇超声使其溶解后，以蒸馏水定容至100mL，摇匀，即得0.2 mg/mL的芦丁标准液。

3、芦丁标准曲线的制定分别精密吸取芦丁标准液5mL、6mL、7mL、8mL、9mL至10mL容量瓶中，60%乙醇定容后得到浓度为0.10 mg/mL、0.12 mg/mL、0.14 mg/mL、0.16mg/mL 和0.18mg/mL的芦丁系列浓度梯度溶液。

山楂黄酮的正常含量
山楂黄酮是一种天然的营养物质，属于类黄酮物质的一种。

山楂黄酮
具有很强的抗氧化作用，并且能够降低血脂、保护心血管等多种功效，被广泛应用于保健品和食品添加剂中。

但是，山楂黄酮的正常含量并
没有统一的标准。

山楂黄酮的含量主要与山楂的品种、生长环境等有关，一般而言，不
同品种和生长环境的山楂黄酮含量差异较大。

另外，在不同采收季节，山楂黄酮含量也有所不同。

在自然环境下生长的山楂，其山楂黄酮含
量较为稳定，一般在1%-3%之间。

而在人工种植、施肥等干预下生长的山楂，其山楂黄酮含量可能会高于天然环境中。

在食品添加剂中，山楂黄酮的含量一般也不是固定的。

根据不同的产
品配方和生产工艺，山楂黄酮的含量可能会有所不同。

在保健品中，
山楂黄酮的含量往往比较高，一般在10%-30%之间，但也有部分产品山楂黄酮含量较低。

需要注意的是，山楂黄酮含量较高并不一定就意
味着产品的功效更好，因为山楂黄酮的吸收利用也受到多种因素影响。

总的来说，无论是自然环境中的山楂还是食品添加剂中的山楂黄酮，
其正常含量并没有固定的标准。

因此，在选择食品添加剂或保健品时，应该综合考虑产品的成分、品质以及生产工艺等多方面的因素，而不
是单纯追求山楂黄酮含量的高低。

同时，消费者应该根据自己的身体状况和健康需求，选择适合自己的产品。

新鲜山楂去核 、切片 ,晒干 ,制成干山楂备用 。 准确称取 5 g干山楂置于圆底烧瓶中 ,加入 100 mL 80%乙醇水溶液 ( v / v) ,于 70 ℃回流提取 1 h, 重复 1次 ,合并提取液 ,真空浓缩至无醇味 (约 20 mL ) ,加无水乙醇定容至 50 mL ,摇匀 ,备用 。 1. 2. 2 山楂总黄酮的纯化 1. 2. 2. 1 洗脱剂的选择 准确吸取提取液 1 mL ,加入装有 1 g聚酰胺粉 的小层析柱中 ,吸附 5 m in,先用 40 mL 水把色素等 杂质洗去 ,再用 50 mL 一定浓度的乙醇洗脱 ,真空浓 缩后用 60%乙醇水溶液定容至 50 mL ,摇匀 ,得样品 溶液 。 1. 2. 2. 2 洗脱剂用量的选择 准确吸取提取液 1 mL ,加入装有 1 g聚酰胺粉 的小层析柱中 ,吸附 5 m in,先用 40 mL 水把色素等 杂质洗去 ,再用一定量 80%乙醇水溶液洗脱 ,真空 浓缩后用 60%乙醇水溶液定容至 50 mL ,摇匀 ,得样 品溶液 。 1. 2. 3 最大吸收波长的确定 吸取一定量的标准溶液和样品溶液 ,分别置于
山楂为蔷薇科植物 ( R osaceae) 山楂 ( C ra taegus
pinna tifida B unge ) 、山 里 红 ( C ra taegus pinna tifida B unge va r. M a jor N. E. B r. ) 及 野 山 楂 ( C ra taegus cunea ta S ieb et Z ucc. )的干燥成熟果实 [ 1 ] ,是我国为 数不多的既是食品又是药品的天然产物 。近年来的 临床和实验研究认为 ,山楂有降压 、降血脂 、舒张血 管 、抗心率失常 、抗氧化等作用 [ 2 - 4 ] ,其中 ,黄酮类化 合物是其最主要的有效成分 。

脉血 栓所 致 局 部脑 缺 血 的 预 防作 川 一结 果 山楂 总 黄 酮 ｌｍｇ ｇ ２ ｍ ／ｇ４ ｍｇ ｇ 脉 注 射 均可 显 著 降 低 大 鼠局 灶 性 脑 ２ ／ 、４ ｇ 、８ ／ 静 ｋ ｋ ｋ
缺 血 损伤 后 脑 含水 量 ， 山楂 总黄 酮 ２ ｍｇ ｇ及 ４ ｍ ／ｇ 脉 注 射 可 显著 降 低 大 鼠脑 梗 死范 罔。 ４ ／ ｋ ８ ｇｋ 静 结论 山楂 总 黄 酮 注射 液 对 脑 缺血 性 损 伤具 有 良好 的保 护 作用
王 燕霖 龚 小妹 张 建 勇 王 硕
【 要 】 目 的 观 察 山 楂 总黄 酮 注射 液 对 大 鼠大 脑 中 动脉 血 栓 所致 局 部 脑缺 血 性 损 伤 的保 护 作用 。 法 摘 方 采用 三 氯
化 铁 局部 涂 抹 损伤 血 管 形成 大 鼠大脑 巾动 脉 血栓 模 型 ， 以脑 梗 死 范 围 、 含 水 量 为观 察指 标 ， 究 Ｉ 楂 总 黄 酮对 大 脑 中动 脑 研 Ｌ Ｉ
１ ． 品 和仪器 山楂总 黄 酮注射 液及 丹 酚酸 注射 ２药 液均 南 中同医学科学 院药用 植物研 究所提 供。手术
显微 镜 为 Ｅ本 Ｏ Ｙ Ｕ ｔ Ｌ ＭＰ Ｓ公 司 生 产 Ｌ — Ｓ Ｇ Ｐ ２型 ， 恒 温 水 浴 箱 为 德 国 ＭＥ ＭＭＥ Ｔ公 司 生 产 ＷＢ１ Ｒ ４型 。
ｉｔ ｖ ｎ ｕ ｊｃ ｏ ａ ｂ ｉｕｌ ｒｄ ｃ ｒｉ ｗ ｔ ｏ ｔ ｔ ｅ ｎ ｈｌ ｉ ｒｄ ｃ ｄ ｔ ｅｅ ｒｌ ｎａ ｔ ｎｒｎ ｅ Ｃ ｎ ｌ ｉｎ ｎ ａ ｅ ｏ ｓ ｎｅ ｔ ｎｃ ｎｏ ｖ ｓ ｕ ｅｂａ ａ ｒ ｎ ｎ，ｍ ａ ｗ ｉ ， ｔ ｅ ｕ ｅ ｅｃ ｒｂａ ｉ ｒ ｉ ｇ ． ｏ ｃ ｓｏ ｒ ｉ ｉ ｏ ｙｅ ｎ ｅｃ ｅ ｅ ｈ ｆｃｏ ａ ｕ Ｔ ｅｈ ｗ ｈ ｒ ａ ｏ ｏｄ ｊｃｉ Ｏ Ｓ ｉｎ ｃ ｎ ｐｏ ｃｉ ｃｉ ｎ ｃｒｂａ ｉ ｈ ｍｉ ｄ ｍ ｇ ｌ ａ ． ｈ ａ ｔｏｎｆ ｖ ｎ ｉｓ ｎ ｔ ｎＳ Ｗ ｇ ｉ ａ ｔ ｒｔ ｔ ｅ ｔ ｎｏ ｅｅ ｒｌ ｓ ｅ ｃ ａ ａ ｅｉ ｒ ｓ ｌ ｉｅ ｏ Ｈ ｓ ｆ ｅ ｖａ ｏ ｉ ｃ ｌ ｔ