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胶体金免疫层析技术演示课件

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免疫胶体金技术PPT课件

免疫胶体金技术PPT课件
Development of Immune colloidal gold technique
➢ 1939-----雏形 Kausche等把烟草花叶病毒吸附到金颗粒上在电子
显微镜下观察金离子呈高电子密度。 ➢ 1971------作为标记物应用于免疫组织化学研究
Faulk等首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结 合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。 ➢ 1974------实现间接免疫金染色法
精选ppt课件
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
4
免疫层析法( immunochromatogra-phy，ICA)
是继IGFA之后发展起来的另一种固相膜免疫测定， 与IGFA利用微局限性膜的过滤性能不同，免疫层析法 中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层 析作用的横流 （lateral flow） )向另一端移动。移动过 程中被分析物 与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者 抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分 离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金 为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。
精选ppt课件
7
Colloidal Gold Synthesis
Solution color varies extensively with particle size Usually a deep red, but also dark brown/purple to light orange/yellow
Colloid size can be controlled by Au:Citrate ratios Anywhere between 1nm - 100nm +

《免疫胶体金技术》课件

《免疫胶体金技术》课件

添加标题
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实验仪器：离心机、电泳仪、显微 镜、移液器等
实验注意事项：避免污染、控制温 度、保持湿度等
实验步骤
准备实验材料： 制备胶体金溶 制备抗体溶液： 制备抗原溶液：
包括胶体金、 液：将胶体金 将抗体与缓冲 将抗原与缓冲
抗体、抗原、 与缓冲液混合， 液混合，搅拌 液混合，搅拌
缓冲液等
搅拌均匀
提高稳定性：通过优化实验条件、选择稳定的检测试剂等方法，提高检测结果的稳定性
提高自动化程度：通过开发自动化检测设备，提高检测效率和准确性
免疫胶体金技术的实验操作
实验准备
实验材料：胶体金、抗体、抗原、 缓冲液、洗涤液、显色剂等
实验步骤：样本处理、抗体孵育、 胶体金标记、洗涤、显色等
添加标题
添加标题
云计算和大数据技术：实现 检测数据的实时分析和共享
检测灵敏度提升
技术进步：通过改进胶体金颗粒的制备工艺，提高检测灵敏度
应用领域：在生物医学、食品安全、环境监测等领域具有广泛应用前景
技术融合：与其他检测技术相结合，提高检测灵敏度和准确性
发展趋势：随着科技的发展，免疫胶体金技术的检测灵敏度将不断提高，应用范围也将不 断扩大。
THANK YOU
汇报人：
免疫胶体金技术
汇报人：
单击输入目录标题 免疫胶体金技术概述 免疫胶体金技术的分类 免疫胶体金技术的优缺点 免疫胶体金技术的实验操作 免疫胶体金技术的应用实例
添加章节标题
免疫胶体金技术概述
定义和原理
免疫胶体金技术是一种基于免疫反应的检测技术 原理：利用抗原-抗体特异性结合，通过胶体金标记抗体，实现对目标抗原 的检测 特点：灵敏度高、特异性强、操作简便、快速

《胶体金检测技术》ppt幻灯片

《胶体金检测技术》ppt幻灯片
培训资料
12
培训资料四、B-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一 .适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb) 。 也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml 时，检测卡才 能检测到。
培训资料
23
培训资料六、发展方向(Developing)1.标记技术的探索顺磁粒子标记、量子点标记
免疫反应信号转化为电子信号模式
mndad/-CenjuyateSwhatratePeristaltiepurmP
2.生物传感器
wit.(b)(o)
oistansNc sbnste
培训资料
Sample Well
培训资料
20
培训资料五、常见问题及注意事项1.使用前将检测卡和待检样本恢复至室温2.保持干燥，避免受潮，打开包装请尽快使用试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
免疫胶体金快速检测技术
农业部饲料质量监督检验测试中心(西安)
主要内容一、免疫胶体金技术的发展历史二、 胶体金检测卡的基本原理及构造三、 免疫胶体金层析法检测原理及应用四、S-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍五、 常见问题分析与注意事项六、 免疫胶体金技术的发展的方向
培训资料
2
培训资料一 、免疫胶体金技术的发展史1. 1939年(英，植物) Kausche 和Ruska 把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。2. 1971年(美，微生物) Faulk 和Taylor 首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。3 . 1974年(奥) Romano 等将胶体金标记在马抗人IgG 上，实现了间接免疫金染色法。同年Bauer 等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。

免疫层析快速诊断技术简介课件

免疫层析快速诊断技术简介课件
目前涉足该领域的科研机构很多，从中科院 到CDC，细数来也有三五十家。
8
检测原理
免疫检测的原理就是使用一种分析物— 要么是抗原要么是抗体—探测和捕获与其 对应的另外一半。
9
免疫层析法检测原理分类介绍 （双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
10
免疫层析法检测原理分类介绍 （竞争反应）
（以吗啡检测为例）
13
胶体金结果判读方法：
1.色卡法 将反应好的试纸条T线颜色与制作的色卡比较，看颜色属于那一
个档次，则在数据记录时候填写该档次标识。最后做灵敏度比较。 2.图形扫描法
将反应好的试纸条放在扫描仪器内，选择灰度扫描，获得灰度线 条图象。然后打开分析软件，将该灰度图象导入，自动分析出灵敏 度，本底情况。 3.读条仪法
检测的物质
人类 医学
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭自 检；商检系统；边检口 岸；公安系统.
传染病（乙肝五项,HIV, SARS等） 标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋白等） 女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH)
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）
农 牧 畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感,兽瘟疫等）
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相关仪器设备
BIODOT XYZ3050 点膜喷金机
仪器参数 仪器尺寸为： 430mmx410mmX360mm 平台大小: 450mmX70mm 平台移动速度: 0-330mm/sec X、Y、Z轴移动误差: <50um 定位精度: ±10um in 1 axis;±25um in 2 axis 喷点方式 BJQ3000: 非接触喷点 AJQ3000: 非接触喷点 划线宽度 BJQ3000:0.50mm/line （喷点0.20mm/drop）

免疫胶体金_PPT课件

免疫胶体金_PPT课件

最近由于原料的精选和制作工艺的改进，已能制备出可用于定量测定的GICA试剂。Roche公司生产的用于急性心 肌梗死诊断的肌钙蛋白和肌红蛋白的GICA试剂和匹配的简便测读器Cardiac Reader，其精密度和准确性均符合 定量测定要求。
04
免疫胶体金技术的展望
免疫胶体金技术展望
01
提高胶体金的制备质量
04
实现多元化检测
采用多膜复合或单膜多元 受体固定的方式，是实现 多元检测的有效方法。
谢谢聆听
汇报人：詹积 学号：6160109017 专业：营养与食品卫生学
抗体和金颗粒的耦联
在适宜条件下，抗原和抗体与胶体金颗粒 反应产生聚集，达到一定的密度时，大量 聚集的标记物显示出肉眼可见的红色或粉 红色斑点。
胶体金的制备——化学还原法
基本原理：在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原成金原子。在适当条件下，还原的金原子
凝聚成一定大小的金颗粒，形成金溶胶。
Stop heating when a deep red color is obtained.
Hale Waihona Puke 3胶体金技术的种类及特点免疫胶体金快速诊断技术
快速免疫金渗滤法
免疫层析法 ( immunochromatogra-phy，ICA)
(immuogold filtration assay ，IGFA)
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
Add 100 mL of 1.0 % HAuCl4 to a 200 mL Erlenmeyer flask on a stirring hot plate. Add a magnetic stir bar and bring the solution to a boil.

胶体金技术简介 ppt课件

胶体金技术简介 ppt课件

稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存
检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测 尿或唾液,或处理后的组织等固体样品
6
免疫层析法应用领域
类别 人类医学
农牧业 环境 食品安全
应用领域
检测的物质
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭
自检；商检系统；边检 口岸；公安系统.
女性妊娠（hCG,LH等)
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头)
1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘
效应 3.生产方便性
20
样品垫
材料选择
各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
21
吸水纸
吸水效率 进口与国产纸的差异
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）

免疫胶体金PPT课件


免疫胶体金技术的应用领域
医学诊断
食品安全
用于检测各种疾病相关 的抗原、抗体，如HIV、
肝炎、癌症等。
用于检测食品中的有害 物质和添加剂，保障食
品安全。
环境监测
用于检测水体、土壤等 环境中的有害物质，保
护环境健康。
生物科学研究
用于研究生物分子相互 作用、细胞信号转导等
生物学过程。
02
免疫胶体金技术的原理
结果判断主观
02
该技术结果判断需要人工进行，不同操作者判断标准可能存在
差异，导致结果不一致。
适用范围有限
03
免疫胶体金技术主要适用于定性检测，对于定量检测和结构分
析等方面存在局限性。
改进方向
提高特异性
通过改进抗体和抗原的纯化技术、优化标记物和检测条件等手段， 提高免疫胶体金技术的特异性。
实现自动化
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、结果直观等。
免疫胶体金技术的发展历程
01
02
03
起源
20世纪70年代，英国科学 家利用胶体金标记技术制 备出了第一个单克隆抗体。
发展
随着技术的不断完善，免 疫胶体金技术在医学、生 物学等领域得到了广泛应 用。
最新进展
近年来，纳米胶体金标记 技术的研究取得了重要突 破，提高了检测的灵敏度 和特异性。
抗体与抗原的结合
将抗体与抗原混合，使其在一定 条件下结合。
洗涤
去除未结合的抗原和抗体，提高 实验的特异性。
胶体金的标记
胶体金的制备
通过还原剂的作用将金离子还原成胶体金颗粒。
胶体金的标记
将已制备好的胶体金与已结合的抗体结合，形成 金标抗体复合物。

胶体金免疫层析试验.ppt

《临床免疫学检验技术》 第十四章 胶体金免疫分析
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
金标抗体
样品垫 胶体金区
T
C
硝酸纤维膜
三、结果判定
组成 工作原理 结果判定 临床应用
层析方向
S
G
T
C
抗人-HCG抗体 抗人-HCG抗体
阳性结果 B
阴性结果
S
G
T
C
B
C
结果判定
T
MAX
C
C
C
T
T
T
阳性
阴性
无效
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
胶体金免疫 层析实验
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
1. 胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术是以胶体金作为示踪物或显示剂应 用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术
抗原抗体复合物
免疫标记技术
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
2. 蛋白质层析技术
蛋白质分离技术
固相与液相组成
蛋白质理化性质不同

胶体金 ppt课件


(三) 技术要点
• 1.试剂盒组成 ①滴金反应板 (图20-1)胶体 金免疫渗滤试验中主要试剂成分之一， 由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或 抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成。② 胶体金标记物 ③洗涤液 。
2.操作要点
• 2.操作要点 ①将反应板平放于实验台面上，于 小孔内滴加含待测抗原标本1-2滴，待完全渗 入；②于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1-2 滴，待完全渗入；
• （2）胶体金的颜色和光吸收性：对同一
种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小 不同，颜色亦不同，胶体金颗粒在5～ 20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒 红色，20～40nm之间吸收波长530nm， 液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收 波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心
去掉较大的金颗胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金 却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以 检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程 度及有无凝集颗粒等。在日光下仔细观察比较胶 体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。 当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的 粒径。制备的胶体金最好作电镜观察，并选一些 代表性的作显微摄影，可以比较精确地测定胶体 金的平均粒径。 良好的胶体金应该是清亮透明的， 若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示 此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
①先配制HAuC14水溶液，加热至沸。②搅动下准 确加入一定量的柠檬酸三钠 （Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。③继续加热煮 沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶 液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色， 随后逐渐稳定成红色。全过程约2～3min。④冷 却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。通过改变柠 檬酸三钠的用量可以制得不同大小的胶体金颗粒

免疫胶体金技术 ppt课件


Stop heating when a deep red color is obtained.
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Synthesis and properties of different particle size
胶体金粒径 (nm)
1%柠檬酸三钠加 入量(ml)
16
2
24.5
1.5
41
1
71.5
0.7
定其pH即可.
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蛋白 与胶体金结合的最佳pH测定
取若干1.5ml的试管，分别加入1ml胶体金 用K2CO3将pH分别调为3，4，5，6，7，8，9，10； 去96孔培养板，按pH从高到低分别将上述胶体金分别取
100ul加入孔中，重复三次； 每孔分别加入20ul浓度为10%的NaCl溶液，混合，室温下
a). ionic attraction between the negatively charged gold and the positively charged protein
b). hydrophobic attraction between the antibody and the gold surface c). Sulfur binding (Cysteine and Methionine)
H2AuCl4
O O
OH
O
Cit-
O O
O H2O, 100OC
Cit-
CitCit-
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Turkevich, et. al. Discussions Faraday Soc. 1951, No. 11 585-75.
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Procedure of Colloidal Gold Synthesis
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15
临床上将缺铁性贫血分为以下三个阶段：
铁缺乏阶段 潜在性缺铁期
血清铁蛋 白含量
转铁蛋白 红细胞游离 饱和度 原卟啉（FEP）
血红蛋白
<12ng/ml
缺铁性红细胞生成 <12ng/ml <15%
缺铁性贫血
<12ng/ml <15%
>4.5μg/L >4.5μg/L
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什么是缺铁性贫血
当机体对铁的需求与供给失衡，导致体内贮存铁耗尽 （ID），继之红细胞内铁缺乏（IDE），最终引起缺 铁性贫血（IDA）。IDA是铁缺乏症（包括ID，IDE 和IDA）的最终阶段，表现为缺铁引起的小细胞低色 素性贫血及其他异常。
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胶体金免疫层析法检测试剂盒的特点
操作方便，读取结果的时间短：一般只需要一个加样步骤，得 到结果时间最短的只需要3~5分钟，最长的也不会超过30分钟 。
灵敏度和特异性好，受外界影响少：高度特异的抗原抗体反应 保证该检测结果保持很高的特异性和灵敏度。
成本低廉，所需样本很少：一般只需要不到100μl样本即可得到 检测结果。
情商受损：情感淡漠，不开心、紧张、易疲劳；兴趣少， 不容易逗乐，不合群，注意力难集中。
身体发育受影响：听视觉神经反应迟缓；细胞、体液免 疫功能降低，易感染；延缓运动神经的发育，运动功能 受损。小儿长期贫血不仅会影响生长发育，还可诱发一些感
染性疾病。
更重要的一点是：胎儿及婴幼儿时期铁缺乏，甚至无法
被日后的补铁所逆转。
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10
什么是铁蛋白（Ferritin）
铁蛋白为机体内一种贮存铁的可溶 组织蛋白，是一种棕色的含铁蛋白，含 铁量为23％，分子量约750kDa，它是一 种直径为12～14nm的球形蛋白，主要在 肝脏合成。
正常人血清中含有少量铁蛋白，但 不同的检测法有不同的正常值。一般正 常均值男性约80－130ug/L(80-130ng/ml) 女性约35－55ug/L(35-55ng/ml)。
产品和检测结果均易于保存：固相的产品条件，使得该产品的 有效期能够达到18月以上，而且只需要保存在室温条件下。
不依赖于辅助的仪器设备，而且非专业人员也可以操作，产品 的适用范围广，移植能力强。
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3/36
铁蛋白检测试剂盒
铁蛋白检测—— 缺铁性贫血的预防性金指标
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严重的会因血红蛋白携带氧气不足而致
胎儿缺氧，引起胎儿宫内发育迟缓、早
产，甚至死胎。
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孕妇容易发生贫血的原因
妊娠妇女对铁的需求量明显增加，胎儿生长发育期共需 要铁约350毫克，母体血容量的增加需要铁约650毫克，考虑 妊娠全过程无月经来潮的失血，约积存铁200毫克，故孕期 需要铁800毫克。每天饮食中含铁10～15毫克，其吸收利用 率仅为10%，为1～1.5毫克，而此时孕妇每天至少需要4毫克 铁。到妊娠后半期，铁的最大吸收率可达40%，仍不能满足 要求。
年长患儿可自述头昏、眼前发黑、耳 鸣等。部分患儿还可有异食癖(如嗜食 泥土、墙皮、煤渣等)。
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9
婴幼儿发生缺铁性贫血的危害
智商降低，再记忆功能受损：据联合国儿童基金会的报 道，贫血的儿童其智商较正常儿童平均低９ 个点；我国 的研究报道，贫血儿童的运动和智能发展指数甚至较正 常儿童低得更多。
铁蛋白缺乏是缺铁性贫血的初期阶段，在这个阶段及时 调整就能够避免后期的贫血出现。
即使在贫血发生以前，铁缺乏就已经对机体多项功能 造成伤害，有些伤害甚至是不可逆的。
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检测铁蛋白可以协助预防缺铁性贫血
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11
铁蛋白起什么作用？
铁蛋白在体内作用主 要有两条：一是作为体内 铁的储存库用于血红蛋白 的合成；二是将铁保存在 中空的球形蛋白内，防止 细胞内游离铁过多而产生 有害作用。
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IDA是最常见的贫血。其发病率在发展中国家、经济 不发达地区及婴幼儿、育龄妇女明显增高。
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6/36
孕妇发生缺铁性贫血的后果
增加心输出量和胎盘血流量，加重心脏 负担。
胎儿缺氧Leabharlann 生长发育受阻。 影响免疫、消化等多系统的正常功能
多种妊娠并发症。
胎儿先天铁储存不足，婴幼儿期易缺铁。
12
血清铁蛋白含量的多少是判断体内缺铁还是铁负 荷过量的指标。在临床上血清铁蛋白降低见于缺铁性 贫血和体内贮存铁减少导致的继发性贫血。
体内储铁缺乏的诊断 指标为：
血清铁蛋白<12ng/ml。
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铁蛋白在缺铁性贫血中的作用
缺铁性贫血的症状是在一个较长时间内逐渐形成的。铁 耗竭期，贮存铁耗尽，血清铁蛋白减低，此时并无贫血，若 缺铁进一步加重。贮存铁耗尽，血清铁蛋白和血清铁下降， 总铁结合力增高，出现缺铁性贫血。
因此，孕期若不补充足够的铁，孕妇极易发生缺铁性贫 血。
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8
婴幼儿发生缺铁性贫血的主要临床表现
皮肤粘膜逐渐苍白，尤以唇、口腔粘 膜及甲床最为明显。
伴有易疲乏、不爱活动、精神不振、 对周围环境反应差、烦躁不安、注意 力不集中、食欲不振、呕吐、腹泻等 症状。
胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析技术简介
Colloidal gold (enhanced) immunochromatography assy (GICA)
以免疫学的高度特异性的抗原抗体反应作为反应基础 以胶体金颗粒作为显示标记物 应用层析法的反应形式，以硝酸纤维素膜作为载体制备
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