第七章 含量测定-HPLC
- 格式：ppt
- 大小：713.50 KB
- 文档页数：18
下载文档原格式
合集下载
HPLC法测定盐酸二氧丙嗪片的含量
HPLC法测定盐酸二氧丙嗪片的含量目的建立HPLC法测定盐酸二氧丙嗪片含量的方法。
方法采用HPLC 法，C18柱（46 mm×200 mm，5 μm）；流动相为醋酸盐缓冲液（取0.05 mol/L 的醋酸铵溶液1 000 mL，加三乙胺1 mL，用醋酸调节pH值至6.5）-乙腈（75︰25）；检测波长为258 nm。
结果盐酸二氧丙嗪在2.21～22.08 μg/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率为99.76%，RSD=0.52%。
结论本方法简便、快速、准确，专属性强，可作为盐酸二氧丙嗪片的含量测定方法。
标签：HPLC法；盐酸二氧丙嗪片；含量盐酸二氧丙嗪片又名咳速克，具有较强的镇咳作用，并具有抗组胺、解除平滑肌痉挛、抗炎和局部麻醉作用。
适用于镇咳、平喘，也适用于治疗荨麻疹及皮肤瘙痒症等。
关于其含量测定方法，《中国药典2010年版二部》为紫外分光光度法，用0.1 mol/L的盐酸溶液提取后测定其吸光度，该方法专属性差，杂质对测定有干扰[1]。
本实验建立用高效液相色谱法测定盐酸二氧丙嗪的含量，通过色谱条件及系统适应性试验，测出盐酸二氧丙嗪的含量与药典方法比较得出：HPLC 法测定其含量，操作简便，灵敏，专属性强，可作为本品的质量控制[2]。
1?仪器与试药岛津UV-2450型紫外分光光度计，METTLER双量程电子天平，HP1100高效液相色谱仪，在线脱气机，HP1100化学工作站，Agilent G1313ALS自动进样器。
盐酸二氧丙嗪对照品（中国药品生物制品检定所，批号10299-0001，供含量测定用）；盐酸二氧丙嗪片（焦作福瑞堂制药有限公司生产，H41021659），批号：20110608，20110611，20110703；水为超纯水；乙腈为色谱纯；其他试剂为分析纯。
2?方法与结果2.1?色谱条件色谱柱：Diamonsil-C18柱（46 mm×200 mm，5 μm）；流动相：醋酸盐缓冲液（取0.05 mol/L的醋酸铵溶液1 000mL，加三乙胺1 mL，用醋酸调节pH值至6.5）-乙腈（75︰25）；流速：1.00 mL/min；检测波长258 nm；灵敏度：0.01 A VFS；柱温：25℃；进样量：20 μL。
第七章 芳胺及芳烃胺类药物的分析
三、鉴别反应
1、重氮化-偶合反应 具有芳伯氨基药物，如盐酸普鲁卡因等，在酸性溶 液中与NaNO2 发生重氮化反应，再与碱性-萘酚偶 合产生红色偶氮化合物。
Ar
HCl NH2 NaNO 2
OH
-
重氮盐
萘酚
橙黄～猩红色
直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 盐酸普 鲁卡因胺 间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发 生此反应。
(C 2 H 5 ) 2 NCH 2 CON CH 3 蓝紫色
CH 3
+Co
2+
CH 3
CH 3
NCOCH 2 N(C 2 H 5 ) 2 (C 2 H 5 ) 2 NCH 2 CON CH 3 Co 亮绿色 CH 3
（3）羟肟酸铁的反应 具有芳酰胺结构，被H2O2氧化成羟肟酸，羟肟 酸与FeCl3反应生成紫红色羟肟酸铁，随即 变为暗棕色至棕黑色。如盐酸普鲁卡因胺。
NH 2
COOCH 2 CH 2 N(C 2 H 5 ) 2
OH
Ar-NH
OH
[H 2 O]
NaNO 2 +HCl
2
Ar-N 2 Cl
+
-
OH
-
Ar-N=N OH
NHCOCH
3
猩红或红色
NH 2
COOCH 2 CH 2 N(C 2 H 2 ) 2 HCl
+ NaNO 2 + 2HCl
N
N Cl
COOCH 2 CH 2 N(C 2 H 2 ) 2 + NaCl + 2H 2 O
对乙酰氨基酚以对硝基氯苯为原料合成。
NO2
NO 2
中国药科大学药物分析考点整理（适用于期末、研究生考试）
中国药科⼤学药物分析考点整理（适⽤于期末、研究⽣考试）第⼀章药典概况⼀、药典内容：凡例、正⽂、附录、索引1.凡例：解释和使⽤药典的基本原则，并规定共性问题标准品、对照品系指⽤于鉴别、检查、含量测定的标准物质，均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。
标准品系指⽤于⽣物检定、抗⽣素或⽣化药品中含量或效价测定的标准物质，按效价单位（或ug）计，以国际标准品进⾏标定；对照品除另有规定外，均按⼲燥品（或⽆⽔物质）进⾏计算后使⽤。
2.正⽂：药品或制剂的质量标准。
按笔画顺序排列，单⽅制剂在其原料药后，药⽤辅料集中编排。
3.附录：制剂通则、通⽤检测⽅法、指导原则。
4.索引：中⽂按拼⾳排序，英⽂按字母排序。
⼆、药典进展与国外药典1.共8版药典：1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、200505版⾸次将《中国⽣物制品规程》纳⼊，列为三部2.美国USP(32)-NF(27)，英国BP，欧洲Ph-Eur，⽇本药局⽅JP三、药品检验⼯作基本程序：取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告。
第⼆章药物的鉴别试验⼀、概述：判别真伪，检验是否为标⽰药物，不能赖以鉴别未知物。
⼆、鉴别试验项⽬1.性状：外观、溶解度、物理常数（熔点、⽐旋度、吸收系数）2.⼀般鉴别试验：依赖阴阳离⼦及官能团，证实是某⼀类，不能证实是哪⼀种。
3.专属鉴别反应：证实某⼀种药物的依据，选⽤特有的灵敏定性反应，鉴别真伪。
三、鉴别⽅法1.化学法：呈⾊反应、沉淀⽣成反应、荧光反应、⽓体⽣成反应、使试剂褪⾊、测定⽣成物熔点2.光谱法：紫外（专属性不如红外）、红外、近红外、原⼦吸收、核磁共振3.X射线粉末衍射4.⾊谱法：薄层⾊谱、⾼效液相、质谱5.⽣物学法第三章药物的杂质检查⼀、概述1.来源（1）在⽣产过程中引⼊：在合成药物的⽣产过程中，原料不纯或未反应完全、反应的中间体与反应副产物在精制时未能完全除去⽽引⼊杂质。
（2）贮藏过程中引⼊：在外界条件影响下引起药物理化性质变化⽽产⽣杂质。
7_第七章__苯乙胺类肾上腺素药物的分析_2
沙丁胺醇注射液（及其片剂、胶囊、缓释片与缓释胶囊）、盐酸苯
乙双胍片、盐酸氯丙那林片、盐酸麻黄碱注射液与滴鼻液、盐酸氨 溴索（及其口服溶液、片剂、胶囊与缓释胶囊）等的含量测定方法。
指示剂的选 用及终点颜 色的判断要 注意
滴定剂的稳定性：挥发性溶剂，结果需要校正。 终点指示方法：电位滴定法、指示剂法。 其它干扰
四、Assay
二、溴量法
原理：药物分子中的苯酚结构，在酸性溶液中酚羟基的邻、
对位活泼氢能与过量的溴定量地发生溴代反应，再以碘量法 硫代硫酸钠滴定测定剩余的溴。根据与药物定量反应消耗的 溴滴定液的量，即可计算供试品的含量。
盐酸异丙肾上腺素
异丙肾上腺素红
淡红色溶液
溶液为无色或仅显 微红色或淡紫色
肾上腺素 或盐酸异丙肾上腺素
明显的红棕色 或紫色
第二节、Identification
四、氨基醇的双缩脲反应
盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱和盐酸去氧肾上腺素等药物分子结构中， 芳环侧链具有氨基醇结构，可显双缩脲特征反应
盐酸麻黄碱
盐酸克伦特罗
(clenbuterol ydrochloride)
瘦肉精
硫酸沙丁胺醇
(salbutamol sulfate)
盐酸麻黄碱
(ephedrine hydrochloride)
第一节 性质
R1 H H C C N R2 * H OH R3
弱碱性：
烃胺基侧链，仲胺氮－弱碱性。 游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂；其 盐可溶于水
三、Detection of specific impurities
二、有关物质
肾上腺素——HPLC 盐酸苯乙双胍——纸色谱法 盐酸去氧肾上腺素——TLC 其它药物——HPLC
第七章脂类的测定p93第一节概述
脂肪酸，根据油样质量和消耗碱液的量计算出油脂酸价。 测定方法：
称取混匀试样3-5g注入锥形瓶内，加入混合溶剂50ml，摇动使试样溶解， 再加3滴酚肽指示剂，用0.1mol/L碱液滴定至出现微红色，在30s内不消失，记 下消耗的碱液体积（V）。 结果计算：油脂酸价＝（V×c×56.1）/m 式中：V－滴定消耗的氢氧化钾溶液体积，mL；
乳、脱脂乳等）、各种炼乳、奶粉、奶油及冰其淋等能在 碱性溶液中溶解的乳制品，也适用于豆乳或加水呈乳状的 食品。需采用抽脂瓶。
（3）操作方法： 取一定量样品于抽脂瓶中，加入1.25ml氨水，充分混匀，置于60℃水浴中加热
5min，再振摇2min，加入10ml乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却后，加入25ml乙醚， 振摇半分钟，加入25ml石油醚，在振摇0.5min，静置30min，待上层液澄清时，读取 醚层体积，放出一定体积的醚层于一个已恒重的烧瓶中，蒸馏回收乙醚和石油醚，挥 发干残余醚后，放入100-105℃烘箱中干燥1.5h，取出放入干燥器中冷取至室温后称重， 重复操作至恒重。
别适宜于水产品、家禽、蛋制品等食品脂肪的提取。 采用乙醚提取脂类时，必须采用无水乙醚作提取剂，且要求样品必须烘干； 对于结合态脂类，必须预先用酸或碱破坏脂类和非脂成分的结合后才能提
取； 用溶剂提取食品中的脂类时，对样品要求一定的预处理，如粉碎、碾磨，
烘干等，目的是为了增加样品的表面积，减少样品含水量，使有机溶剂更有效 的提取出脂类。
（4）结果计算： 脂肪含量%= (m2-m1)/( m×V1/V) ×100
式中：m2——烧瓶和脂肪总质量，g； m1—空烧瓶质量，g； m—样品质量，g V－读取醚层总体积，mL； V1－放出醚层体积，mL
（5）说明与讨论：
3、巴布科克氏和盖勃氏法 （1）原理：
称取混匀试样3-5g注入锥形瓶内，加入混合溶剂50ml，摇动使试样溶解， 再加3滴酚肽指示剂，用0.1mol/L碱液滴定至出现微红色，在30s内不消失，记 下消耗的碱液体积（V）。 结果计算：油脂酸价＝（V×c×56.1）/m 式中：V－滴定消耗的氢氧化钾溶液体积，mL；
乳、脱脂乳等）、各种炼乳、奶粉、奶油及冰其淋等能在 碱性溶液中溶解的乳制品，也适用于豆乳或加水呈乳状的 食品。需采用抽脂瓶。
（3）操作方法： 取一定量样品于抽脂瓶中，加入1.25ml氨水，充分混匀，置于60℃水浴中加热
5min，再振摇2min，加入10ml乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却后，加入25ml乙醚， 振摇半分钟，加入25ml石油醚，在振摇0.5min，静置30min，待上层液澄清时，读取 醚层体积，放出一定体积的醚层于一个已恒重的烧瓶中，蒸馏回收乙醚和石油醚，挥 发干残余醚后，放入100-105℃烘箱中干燥1.5h，取出放入干燥器中冷取至室温后称重， 重复操作至恒重。
别适宜于水产品、家禽、蛋制品等食品脂肪的提取。 采用乙醚提取脂类时，必须采用无水乙醚作提取剂，且要求样品必须烘干； 对于结合态脂类，必须预先用酸或碱破坏脂类和非脂成分的结合后才能提
取； 用溶剂提取食品中的脂类时，对样品要求一定的预处理，如粉碎、碾磨，
烘干等，目的是为了增加样品的表面积，减少样品含水量，使有机溶剂更有效 的提取出脂类。
（4）结果计算： 脂肪含量%= (m2-m1)/( m×V1/V) ×100
式中：m2——烧瓶和脂肪总质量，g； m1—空烧瓶质量，g； m—样品质量，g V－读取醚层总体积，mL； V1－放出醚层体积，mL
（5）说明与讨论：
3、巴布科克氏和盖勃氏法 （1）原理：
HPLC法测定生物素含量
HPLC法测定生物素含量摘要：目的：建立以HPLC法测定生物素的含量。
检测方法：色谱柱为VP－ODS，流动相：乙腈-磷酸-0.05%三氟乙酸(250:1:750)，检测波长：210nm，流速为 1.0ml/min,进样量为20ul。
结果：生物素检测浓度的线性范围为0.05～0.30mg/ml(r=0.9999)；平均回收率为99.9%，RSD＝0.53%。
结论：本方法操作简便、精密度好、结果准确。
关键词关键词：高效液相色谱法生物素含量测定前言生物素(d-Biotin)又称维生素H或辅酶R，主要作为各种羧化酶的辅助因子。
对糖、脂肪、蛋白质和核酸等代谢有重要意义，广泛应用于医疗，多维制剂及饲料添加剂等方面。
已载入美国及欧州等国药典，含量测定均采用化学滴定法。
本文建立了测定生物素的HPLC法，操作简便，结果准确，速度比较快。
实验部分一、主要仪器与试剂1.仪器高效液相色谱仪：Agilent 1100Chemstation 色谱工作站2.试剂乙腈( 浙江临海市浙东特种试剂厂，色谱纯)三氟乙酸(上海化学试剂厂，分析纯)磷酸（杭州化学试剂厂，分析纯）3.试验样品生物素对照品(中国药品生物制品鉴定所，含量100%，批号：1029*1-0001)。
生物素样品(浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：20070826，20070827，20070831)。
二、实验方法1.色谱条件高效液相色谱仪：安捷伦（Agilent）1100 （LC）色谱柱：VP-ODS色谱柱(4.6 mm×250mm,5um)；流动相：取乙腈250ml，加磷酸1ml，再加入0.05%三氟乙酸溶液750ml，混合均匀，过滤；检测器：紫外检测器检测波长：210nm；进样体积：20μl柱温：室温。
2.测试方法精密称取生物素样品约10mg，置于50ml容量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。
另精密称取生物素对照品约10mg，置于50ml 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。
药物分析设计题含答案(大学期末复习资料).docx
一.苯巴比妥分子量:232.24根据药物结构设计合理化学鉴别法(3种)；ChP采用何种方法进行含量测定，简述方法，原理，注意事项，主要条件(溶剂，试剂，滴定剂，指示终点方法)，计算滴定度(按照滴定浓度为0.05mol/L计算)，并写出含量计算公式1. (1).具有酰亚胺基团，易水解开环，产生氨气，可使湿润的红色石蕊试纸变蓝。
(2).有环状丙二酰服和酰亚胺基团，能与重金属反应，生成难溶性有色化合物。
(如与银盐反应生成白色沉淀，与铜盐反应生成紫堇色沉淀，与钻盐反应呈蓝紫色，与汞盐生成白色沉淀。
)(3).具有状丙二酰脉集团，能与香草醛发生反应生成棕红色产物。
(4).具有苯环取代基，与NaN02 —H2SO4反应生成橙黄色？橙红色。
与甲醛一H2SO4反应生成玫瑰红色环。
2.(1).具有1,3--酰亚胺基团，有弱酸性，可用非水酸量法含量测定。
(2).具有有环状丙二酰服和酰亚胺基团可用银量法含量测定。
(3).具有苯环，有紫外吸收，可用紫外分光光度法测定含量。
(4).可用HPLC测定其制剂和生物样品的分析。
3.含量测定:Ch.P采用银量法测定含量。
原理:具有有环状丙二酰服和酰亚胺基团，溶解于碳酸钠溶液后，与硝酸银试液反应，首先生成可溶性一银盐，当有过量硝酸银存在时，则生成难溶性二银盐白色沉淀。
由于此现象很难判别，所以多用电位滴定法指示终点，反应摩尔比l：lo滴定液:硝酸银滴定液试剂:甲醇，无水碳酸钠指示终点的方法:自身指示剂，电位滴定法。
Ch.P.采用电位滴定法。
滴定度：T = CM/n = 0.05x232.24/1 = 11.61 mg/ml含量计算公式:含量％ = —X 100%____ C R X^XDXVXW片剂：标示量％ = - — X 100%Wx标小里二.硫喷妥钠分子量:264.32根据药物结构设计合理化学鉴别法（3种）;ChP采用何种方法进行含量测定，简述方法，原理，注意事项，主要条件（溶剂，试剂，滴定剂，指示终点方法），计算滴定度（按照滴定浓度为0.05mol/L计算），并写出含量计算公式1.（1）.具有酰亚胺基团，易水解开环，产生氨气，可使湿润的红色石蕊试纸变蓝。
HPLC外内标法测定含量
测定
(1)安装C18。反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。 (2)色谱条件：C18一ODS色谱柱(5um，4．6 mm×250 mm)；流动相 比例：乙腈一0．1％磷酸水(20：80，V／V)；流动相流速：1．0 mL／ min；检测波长：273 nm。 (3)换上流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为 0．016、0．08、0．16、0．4、0．8 g／L扑热息痛和0．02、0．10、 0．20、0．50、1．0 g／L阿司匹林、内标物咖啡因浓度为0．2 g／L的 5种混合对照品溶液各10uL进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键 停止分析。记录各色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以对照品峰面积与 内标物峰面积之比为纵坐标(y)，以浓度为横坐标(x)，绘制标准曲线，进 行回归分析，求扑热息痛和阿司匹林的线性方程。 (4)采用进样器吸取供试品溶液10uL，进样，通过保留时间确定扑热息 痛、阿司匹林、咖啡因色谱峰的位置，记录扑热息痛、阿司匹林、咖啡 因色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算待测样品溶液中扑热息痛、 阿司匹林的含量。
测定
(1)安装C18反相柱，按仪器操作说明依次打开色谱仪各单元的电源。 (2)色谱条件。C18一ODS色谱柱(53um，4．6 mm×250 mm)；流动相 比例：甲醇-0．5％冰乙酸水(1：1)；流动相流速：1．0 mL／min；检 测波长：238 nm。 (3)换卜流动相，待基线稳定后，采用进样器依次吸取浓度分别为 0．004，0．02，O．04，0．1，0．2，0．4 g／L的栀子苷对照品溶 液各10仙L进样，待组分色谱峰出完后，按“停止”键停止分析。记录 栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，以栀子苷进样浓度(g／L)为横 坐标，色谱峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析。 (4)采用进样器吸取栀子样品溶液10¨L，进样，通过保留时间确定栀子 苷色谱峰的位置，记录栀子苷色谱峰面积(保留时间、峰面积)，并计算 栀子药材中栀子苷的含量。
第七章 含量测定-HPLC
• 溶解后能制成溶液的样品 • 不受样品挥发性和热稳定性的限制 • 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型 样品均可检测 5 • 用途广泛，占有机物的80%
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
含量测定方法：外标法、内标法、 外标法结果准确，精密度高，但要求进样量必 须准确，仪器必须有良好的稳定性。 外标法的定量依据是待测组分色谱峰的峰面积 或峰高与其浓度或质量在一定范围内成线性关 系，按药品标准方法制备供试品溶液和对照品 溶液，分别将供试品溶液和对照品溶液注入液 相色谱仪，测定供试品和对照品中待测组分色 谱峰的峰面积或峰高，按正比关系计算供试品 溶液的浓度。
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定
OH O OH
OH O OH
HO 素
大黄酚
10
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定 【含量测定】大黄 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为 254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备 取大黄素对照品和大黄酚对照品适量， 精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液制成每 1ml含大黄素10μg、大黄酚25μg的混合液，即得。 供试品溶液的制备 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注 入液相色谱仪，测定，即得。 本品每片含大黄以大黄素（C15H10O5）和大黄酚（C15H10O4） 总量计，小片不得少于1.55mg；大片不得少于3.1mg。
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定定
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
含量测定方法：外标法、内标法、 外标法结果准确，精密度高，但要求进样量必 须准确，仪器必须有良好的稳定性。 外标法的定量依据是待测组分色谱峰的峰面积 或峰高与其浓度或质量在一定范围内成线性关 系，按药品标准方法制备供试品溶液和对照品 溶液，分别将供试品溶液和对照品溶液注入液 相色谱仪，测定供试品和对照品中待测组分色 谱峰的峰面积或峰高，按正比关系计算供试品 溶液的浓度。
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定
OH O OH
OH O OH
HO 素
大黄酚
10
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定 【含量测定】大黄 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为 254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备 取大黄素对照品和大黄酚对照品适量， 精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液制成每 1ml含大黄素10μg、大黄酚25μg的混合液，即得。 供试品溶液的制备 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注 入液相色谱仪，测定，即得。 本品每片含大黄以大黄素（C15H10O5）和大黄酚（C15H10O4） 总量计，小片不得少于1.55mg；大片不得少于3.1mg。
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定定
HPLC测定有关物质和含量方法验证
HPLC测定有关物质和含量方法验证HPLC测定有关物质和含量方法验证1．有关物质（适用于API，制剂，也适用于起始物料，中间体）有关物质方法验证的前提条件：1.各杂质与主峰的混合溶液能用拟定的分析方法有效分离2.根据混合溶液中各峰的紫外吸收波长（或单独测定各组分紫外吸收），选择合适的检测波长。
多波长检测（如有）则分别考察。
3.在检测波长下，选择峰高最小的，计算S/N，预估主成分浓度4.各杂质纯度已知5.根据合成跟踪检测，合理制定各杂质的限度6.供试品溶解方法和提取方法得到合理证明1.1专属性：1.1.1概念在其他成分（如其他杂质，辅料，溶剂）可能存在的情况下，拟定的分析方法能正确测定被检测物的能力。
1.1.2试验方法1.1.2.1定位试验：A.目的对各已知杂质和主峰进行定位B.试验方法：a．配制一定浓度（能够显示出峰纯度，一般为0.1mg/ml）的各已知杂质溶液、拟检测浓度的主成分作为定位溶液b．配制限度浓度各已知杂质与检测浓度的主成分的混合溶液作为分离度试验溶液c．使用拟定分析方法分别进行定位。
C.试验要求：a．空白应不干扰各杂质的测定：如杂质附近有空白峰，二者分离度应大于1.5；杂质峰保留时间处不得为梯度峰拐点b．定位溶液中，已知杂质与主峰的峰纯度应符合规定c．分离度试验溶液中，主峰与相邻杂质的分离度应大于2.0（至少1.5）；各已知杂质之间的分离度应大于1.5（至少1.2）；1.1.2.2强制降解试验A.目的一是通过考察药品在一系列剧烈条件下的稳定性，了解该药品内在的稳定特性及其降解途径与降解产物。
其二，这些试验也能在一定程度上对有关物质分析方法用于检查降解产物的专属性进行验证。
B.试验方法对于高温、光照、强酸、强碱及强氧化剂的浓度及时间、取样方式等没有明确的规定。
具体品种具体模索，初步试验了解样品对影响的因素（高温、光照、酸、碱、氧化）等条件基本稳定情况后，进一步调整破坏试验条件，只要使主药有一定量的降解，并对可能的降解途径和降解机制进行分析，保证实验的意义即可。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定定
HO COOH OH OH OH O O OH O O
14
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定 【含量测定】黄芩 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1)为流动相；检测波长为 274nm。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500。 对照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50% 甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50% 甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至 刻度，摇匀，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入 液相色谱仪，测定，即得。 本品每1ml含黄芩以黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于10.0mg。
17
18
简述 方法 应用实例
其他分析法
挥发油测定法 氮测定法
第七章 中药制剂的含量测定技术
《中国药典》一部含量测定方法汇总表
类别 分析方法 高效液相色谱法 气相色谱法 仪器分析法 薄层扫描法 品种数 850 50 29 项目数 956 52 29 新增项 709 24 12
高效液相色谱法
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定
OH O OH
OH O OH
HO O
CH3
H O
CH3
大黄素
大黄酚
10
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定 【含量测定】大黄 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15）为流动相；检测波长为 254nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000。 对照品溶液的制备 取大黄素对照品和大黄酚对照品适量， 精密称定，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）混合溶液制成每 1ml含大黄素10μg、大黄酚25μg的混合液，即得。 供试品溶液的制备 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注 入液相色谱仪，测定，即得。 本品每片含大黄以大黄素（C15H10O5）和大黄酚（C15H10O4） 总量计，小片不得少于1.55mg；大片不得少于3.1mg。
C 供(大黄酚) C 对（大黄酚）
A供（大黄素） A对（大黄素） A供（大黄酚）
A对（大黄酚）
10.04 25.14
285721 463379 538079 478910
6.191（ g/ml） 28.25（ g/ml）
大黄素含量
C 供（大黄素） D V mS
色谱柱的选择和保存
反相键合相色谱：十八烷基硅烷键合硅胶（ODS或C18）
8
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
含量测定—外标法
C供 C对
A供 A对
C供：供试品溶液的浓度；
A供：供试品的峰面积或峰高；
A对：对照品的峰面积或峰高；
C对：对照品溶液的浓度。
9
第七章 中药制剂的含量测定技术
2
第七章 中药制剂的含量测定技术
讲授内容
高效液相色谱法
简述 方法 应用实例
气相色谱法
简述 方法 应用实例——川贝枇杷糖浆
薄层扫描法
简述 方法 应用实例
容量分析法
北豆根片中总生物碱的测定 克痢痧胶囊中雄黄的测定 万氏牛黄清心丸中朱砂的测定
高效液相色谱法
第七章 中药制剂的含量测定技术
1
第七章 中药制剂的含量测定技术
【学习目标】
知识目标 掌握高效液相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法、气 相色谱法测定中药制剂含量的原理和方法 熟悉紫外-可见分光光度计、薄层扫描仪、液相色谱仪、气 相色谱仪的工作原理、使用方法及操作注意事项 了解容量分析法和挥发油测定法的原理和方法 技能目标 熟练掌握高效液相色谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法 、气相色谱法的测定中药制剂含量的基本操作和技能 学会正确查阅《中国药典》，学会正确选取仪器、试药， 学会配制试液，学会计量器具和检验仪器的操作，规范操 作，并学会正确计算、处理各种数据、判定检测结果
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：双黄连口服液中黄芩的测定
C对
0.02510 25 1 10 103 0.1004（mg/ml）
含量 C 供 D C 对 0.1004
A供 A对
D 50 1 11.64（mg/ml）
38001.8 16981.7
原子吸收分光光度法 滴定分析 氮测定法 化学分析法 挥发油测定法 重量法 鞣质测定法
4
17
2 27 11 4 3 1
17
2 27 11 4 3 1
8
1 9 9 1 0 1
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
HPLC的特点和应用 “三高” “一快” “一宽” 高柱效——n=104片/米，柱效高（LC） 高灵敏度 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物）
12
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定
C 对（大黄素）
0.02509 25 1 100 106 10.04（ g/ml）
C 对（大黄酚）=
0.06286 25
1 100
106 25.14（ g/ml）
C 供(大黄素) C 对（大黄素）
拖尾因子（T）
• 评价色谱峰的对称性 • 除另有规定外，T应在0.95～1.05之间
7
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法--外标法
供试品溶液和对照品溶液的制备
供试品溶液和对照品溶液均应制备2份 供试品溶液应用0.45µm的滤膜滤过
流动相的制备
试剂，一般用色谱纯；水应为新鲜配制的高纯水 凡规定PH值的流动相，应使用精密PH计进行调节，偏差 一般不超过±0.2PH单位 应通过0.45µm滤膜滤过 使用前须脱气 常用甲醇-水或乙腈-水为底剂的溶剂系统
16
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
回答下列问题： 系统适用性试验参数__、___、___、____。 提取的方法是____________。 分离精制方法是____________。(如果有） 取样范围是____________。 计算：
• m= • V= • D=
6
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
系统适用性试验 理论板数（n）
• 色谱柱的效能 • 一般为待测组分或内标物质的理论板数
分离度（R）
• 分离程度，衡量色谱系统效能 • 分离度应大于1.5。
重复性
• 连续进样后，色谱系统响应值的重复性能
–外标法：峰面积测量值的相对标准偏差（RSD）应不大于2.0% –内标法：校正因子的相对标准偏差应不大于2.0%。
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
实例：三黄片（小片）中大黄的测定 供试品溶液的制备 取本品20片，除去包衣，精密
称定，研细（过三号筛），取约0.26g，精密称定，置 锥形瓶中，精密加乙醇25ml，称定重量，加热回流1小 时，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取 续滤液10ml，置烧瓶中，蒸干，加30%乙醇-盐酸 （10:1）混合溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立 即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15ml，合 并三氯甲烷液，蒸干，残渣用无水乙醇-乙酸乙酯 （2:1）的混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释 至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得
• 溶解后能制成溶液的样品 • 不受样品挥发性和热稳定性的限制 • 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子和离子型 样品均可检测 5 • 用途广泛，占有机物的80%
第七章 中药制剂的含量测定技术
高效液相色谱法
含量测定方法：外标法、内标法、 外标法结果准确，精密度高，但要求进样量必 须准确，仪器必须有良好的稳定性。 外标法的定量依据是待测组分色谱峰的峰面积 或峰高与其浓度或质量在一定范围内成线性关 系，按药品标准方法制备供试品溶液和对照品 溶液，分别将供试品溶液和对照品溶液注入液 相色谱仪，测定供试品和对照品中待测组分色 谱峰的峰面积或峰高，按正比关系计算供试品 溶液的浓度。
6.191 10-3 25 10
25 10
m
25
0.2610
28.25 10-3
5.310 0.394（mg / 片） 20
5.310 1.796（mg / 片） 20
13
25
大黄含量 0.394 1.796 2.190 2.19（mg/片）