实验十抗性菌株筛选

拮抗筛选实验是微生物学中常用的一种实验方法，旨在从自然界中筛选出对特定病原菌具有拮抗作用的微生物。

这种实验对于开发新型生物防治剂、提高作物抗病能力以及保护生态环境具有重要意义。

本实验旨在从土壤样品中筛选出对某种病原菌具有拮抗作用的微生物，并对其进行鉴定。

二、实验目的1. 筛选出对特定病原菌具有拮抗作用的微生物。

2. 对筛选出的拮抗微生物进行鉴定。

3. 探讨拮抗微生物的生物学特性。

三、实验材料1. 土壤样品：采集自农田、公园等环境。

2. 病原菌：实验室保存的已知病原菌。

3. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美蓝培养基、改良马丁培养基等。

4. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、离心机等。

四、实验方法1. 病原菌活化：将病原菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时，活化备用。

2. 土壤样品处理：将采集的土壤样品进行研磨、过筛，取适量土壤样品接种于改良马丁培养基中，37℃培养48小时，观察菌落生长情况。

3. 拮抗筛选：将活化后的病原菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃培养24小时。

取活化后的拮抗微生物接种于同一培养基中，37℃培养24小时。

观察病原菌和拮抗微生物的生长情况，记录抑菌圈直径。

4. 拮抗微生物鉴定：对筛选出的拮抗微生物进行菌落形态、生理生化特性及分子生物学鉴定。

5. 生物学特性研究：研究拮抗微生物的生长条件、代谢产物、抗菌谱等生物学特性。

1. 拮抗筛选：在土壤样品中筛选出5株对病原菌具有拮抗作用的微生物，编号分别为A、B、C、D、E。

2. 拮抗微生物鉴定：通过菌落形态、生理生化特性及分子生物学鉴定，确定A为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），B为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium），C为海恩西芽孢杆菌（Bacillus haynesii），D为罗氏芽孢杆菌（Bacillus rossii），E为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。

大肠杆菌抗药性菌株的筛选【实验目的】掌握微生物变异的原理，学习用梯度平板法分离抗药性突变株。

【实验原理】基因突变可分为自发突变和诱发突变。

许多物理、化学、生物因素对微生物都有诱变作用。

基因中碱基顺序的改变可导致微生物细胞的遗传变异。

这种变异有时能使细胞在有害的环境中存活下来，抗药性突变就是一个例子。

抗药性突变株是指野生型菌株基因突变产生的对某些化学药物的抗性变异类型，可在加有相应药物的培养基平板上选出。

抗药性突变是DNA 分子的某一特定位置的结构改变所致，有药物的存在无关，药物的存在只是作为分离某种抗药性菌株的鉴别手段。

在含有一定浓度抑制生长的药物平板上涂布大量的细胞群体，极个别抗性突变的细胞在平板上长成菌落。

纯化后进一步进行抗性试验，就可以得到所需的抗药性菌株。

为了便于选择适当的药物浓度，分离抗药性突变株常用梯度平板法。

本实验用梯度平板法分离大肠杆菌抗链霉素、青霉素和红霉素突变株。

【实验器材】大肠杆菌 ; LB液体培养基； LB琼脂培养基；链霉素、青霉素和红霉素；70%乙醇；无菌吸管，烧杯，试管，玻璃涂棒，水浴锅等。

【操作步骤】1.接种大肠杆菌与盛有5ml L B培养液的试管中，37℃震荡培养24h。

2.在水浴锅中融化LB培养基。

3.倒10ml已融化不含药物的LB琼脂培养基于无菌培养皿中，将培养皿一端垫起使培养皿表面在垫起的一端刚到培养皿的底与边的交界处凝固。

4.在凝固的平板底部高琼脂一边标上低，放平后在底层培养基上分别加入每毫升含有100ug链霉素、青霉素和红霉素的LB琼脂培养基10ml，凝固后制得链霉素浓度从0到另一端的100ug∕ml 的梯度平板。

5.用1ml无菌吸管吸取0.2ml大肠杆菌培养液加到梯度平板上。

用无菌玻璃涂棒将菌液均匀涂布到整个平板表面。

如用蘸有乙醇并经火焰灭菌的玻璃涂棒，可在火焰旁或伸进培养皿在板盖上充分冷却以免烫死细胞。

6.将平板于37℃培养48 h.7.选择1—2个生长在梯度平板中部的单个菌落，用无菌接种环接触该菌落朝高药物浓度的方向划线。

马铃薯块茎病原真菌拮抗菌株筛选及优良拮抗菌株鉴定马铃薯是一种重要的经济作物，但其产量往往受到各种病害的影响。

块茎病原真菌是导致马铃薯产量损失的主要因素之一。

研究马铃薯块茎病原真菌拮抗菌株的筛选和鉴定对于病害的防控具有重要意义。

在本研究中，我们以马铃薯块茎病原真菌作为试验材料，通过体外抑菌实验和田间拮抗效果观察来筛选优良的拮抗菌株。

我们采集了多份罗布麻（Populus deltoides）枝叶样品，并将其进行细菌分离纯化。

然后，我们将分离纯化的细菌菌株与块茎病原真菌进行共培养，并观察菌斑的生长情况。

根据菌斑的尺寸、形状和颜色等特征，筛选出优良的拮抗菌株。

在筛选阶段，我们共鉴定出10个具有拮抗效果的菌株。

这些菌株被命名为MA1、MA2、MA3、MA4、MA5、MA6、MA7、MA8、MA9和MA10。

为了进一步确认它们的拮抗活性，我们进行了体外抑菌实验。

我们制备了10个菌株的发酵液，并将其与块茎病原真菌进行体外对抗。

实验结果表明，所有的菌株发酵液均对病原真菌产生了抑制作用，其中MA6和MA8两个菌株的抑制效果最好。

为了评估这些优良拮抗菌株的实际防控效果，我们将其在田间进行了施用试验。

试验中，我们选取了两个不同的田块，分别施用了MA6和MA8两个菌株的发酵液。

我们设立了对照组和阳性对照组，分别施用了无菌水和化学农药。

在整个生长期间，我们定期对块茎病害的发生情况进行观察和统计分析。

实验结果显示，MA6和MA8两个菌株的防控效果明显优于对照组。

MA6菌株的防控效果最好，块茎病害发生率仅为2%，与阳性对照组的效果相当。

而MA8菌株的防控效果稍逊于MA6，但仍然明显好于对照组。

本研究筛选出的菌株MA6和MA8具有优良的马铃薯块茎病原真菌拮抗效果。

通过体外抑菌实验和田间施用试验的评估，我们证明了这两个菌株在马铃薯病害防控中的应用潜力。

未来的研究可以进一步探索这两个菌株的抗菌机制，并开发相应的生物农药产品，为马铃薯产业的可持续发展提供技术支撑。

第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选43第三章　抗植物病原菌活性菌株的筛选　对从芹菜和油菜中分离得到的215株内生菌包括34株内生放线菌进行拮抗植物病原菌的体外活性筛选第一节活性菌株的筛选１．１材料　１．１．１待测菌　从油菜和芹菜中分离的215株内生菌纯化后使用直喙镰孢菌Fusarium orthoceras由中国科学院沈阳应用生态研究所惠赠１．１．３培养基　改良沙氏培养基１．２方法　１．２．１菌块活性的检测　采用菌块对峙培养测定法接种于改良沙氏培养基的培养皿中央下培养24 h¶ÔÕÕ²»½Óɸѡ¾ú下培养72hÑ¡ÔñÞ׿¹×÷ÓÃÃ÷ÏԵľúÖê½øÐи´É¸蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探44初筛有活性的菌株用改良沙氏液体培养基28·¢½ÍÒº5000rpm离心10minÖظ´3次ｍ的滤膜过滤下保存冷却凝固后28ÒÔÖ±½ÓÅàÑøµÄ²¡Ô-¾ú×÷Ϊ¶ÔÕÕÒÔÈçϹ«Ê½¼ÆËãÏà¶ÔÒÖÖÆÂÊÔÚʵÑéÊÒµÄÌåÍâ»îÐÔɸѡÖÐ时初始对照组菌块直径对于215株内生菌包括34株放线菌进行了菌块活性的初筛其中放线菌为8株而从放线菌中筛选到活性菌株的比例为23.5可见从放线菌中发现生物活性的概率远高于其它微生物１ ＹＣＥＤ　３　 ＹＣＥＤ　１５Ｂ＊ ＹＣＥＤ　１６Ｂ＊ ＹＣＥＤ　２４Ｂ＊ 第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选45ＣＨＳＨ　１２Ｂ　 ＣＨＳＨ　１９Ａ＊ ＣＨＳＨ　２５Ｂ ＣＨＳＨ　３４＊ ＣＨＳＨ　３８＊ ＹＩＭ１８　¾úÖê±àºÅÖдøÓÐ*标志的为放线菌代表有活性代表没有活性　１．３．２发酵液活性检测　 发酵液活性复筛的实验结果如图３当相对抑制率小于３０图中不做表示从图３放线菌ＣＨＳＨ１９Ａ　发酵液拮抗立枯丝核菌的活性最高ＹＣＥＤ７ＣＨＳＨ１９ＢＣＨＳＨ３４和ＣＨＳＨ３５６对三种病原真菌均有拮抗活性　部分菌株固体培养时有抑制活性如ＣＨＳＨ３２对三种病原菌ＹＣＥＤ３其原因可能有产生抗生素的同时产生一种分解抗生素的物质抗生素的产生与琼脂中含有的某些微量物质有关发酵液显示出活性ＹＩＭ１６和ＹＩＭ１８对立枯丝核菌ＣＨＳＨ１８和ＣＨＳＨ１２Ｂ对苹果黑腐皮壳虽然比较简便造成漏筛也就是前面使用的菌块活性和发酵液活性适于大量筛选液体发酵可利用发酵液进行更多的试验蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探46性电泳　固体发酵与液体发酵有时有一定的差别而液体发酵时无抗菌活性他们从土壤分离到６５００株放线菌这些活性菌株再用液体发酵时而有２５株在液体发酵时无抗菌活性初筛时在琼脂培养基上产生的抗生素与液体培养产生的抗生素可能不是同一抗生素可以用这几种培养液或者某些提取物重新检测［１］菌株编号中带*标志的为放线菌图3第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选47第二节活性菌株的染色和显微观察对显示出抑制植物病原真菌活性的菌株２．１材料　 第一节筛选出的２０株活性菌株干燥２．２．２染色　用草酸铵结晶紫染液染色1min２．２．３媒染　滴加革兰氏碘液冲去残水用水冲去碘液滴加95²¢ÇáÇáÒ¡¶¯ÔØƬԼ0.5min立即用水冲净乙醇并用滤纸轻轻吸干必须严格掌握乙醇脱色的程度脱色不够时阴性菌被误认为阳性菌水洗以金黄色葡萄球菌作为阳性菌对照细胞呈紫色的是革兰氏阳性菌蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探48染液配法参见附录２．３．结果和讨论　 在２０株活性菌株中占４０细菌为１２株放线菌是生物活性菌株的极好来源表３活性菌株的基本特征　菌株　来源　革兰氏染色结果　形状　大小ｍ５　ＹＣＥＤ　３　芹菜叶　革兰氏阴性菌　杆菌　１ｘ２　ＹＣＥＤ　７　芹菜叶　革兰氏阴性菌　球菌　０ＣＨＳＨ３５因为菌种退化没有染色观察第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选49第三节　小结　１．　筛选出２０株内生菌　２．　６株内生菌　３．　活性细菌以革兰氏阴性菌为主参考文献　［１］．吴剑波主编黄仪秀主编．微生物学实验教程．北京。

高效菌筛选方法及策略菌筛选是指在大量细菌中筛选出具有特定性状或有潜力的菌株。

高效菌筛选方法和策略的研发对于开展微生物研究和利用具有重要意义。

以下是一些常用的高效菌筛选方法及策略。

1.快速筛选方法：快速筛选方法主要通过缩短菌筛选的时间，提高筛选效率。

其中一种常用方法是利用荧光标记在特定条件下或对特定物质的响应。

如利用绿色荧光蛋白（GFP）标记菌株，通过荧光筛选可以快速获取目标菌株。

2.抗性筛选方法：抗性筛选方法通过添加特定抗性基因或对抗特定抗生素，来获得对这些抗生素具有耐受性的菌株。

这样一来，对抗生素的敏感菌株可以被消除，而具有抗性的菌株则可以快速筛选出来。

3.变异筛选方法：变异筛选方法通过利用菌落的形态、色素等可变性特征，筛选出变异菌株。

可以通过菌落形态观察、涂片染色、荧光筛选等方法，快速获得形态或性状变异的菌株。

4.高通量筛选方法：高通量筛选方法利用自动化设备，如微孔板阵列、高通量测序仪等，对大量菌株进行快速筛选。

这种方法主要应用于菌株库的筛选或特定代谢产物高效筛选等方面。

5.代谢产物筛选方法：这种方法通过检测菌株代谢产物的产量或特性，筛选出具有特定代谢产物的菌株。

可以通过色谱-质谱联用技术、高效液相色谱、质谱成像等手段，对菌株代谢物进行分析和筛选。

6.分子筛选方法：分子筛选方法利用特定的分子探针或探测基因，在菌株中筛选具有特定基因或特定基因表达的菌株。

可以通过PCR、南方印迹等技术，对菌株的基因组或转录组进行筛选。

综合利用上述方法和策略，可以实现高效菌株的筛选。

同时，还可以采用多因素组合的策略，如结合菌株形态、生长能力、产物产量和基因组信息等进行筛选。

高效菌筛选方法和策略的研发有助于加快菌株研究和开发，提高微生物资源的利用效率。

第1篇一、实验目的本实验旨在通过设计合理的实验方案，从自然界中筛选出具有特定生理生化特性的菌种，为后续的发酵生产、生物转化等研究提供基础菌株。

二、实验原理菌种筛选是微生物学研究的重要环节，通过选择具有特定生理生化特性的菌种，可以优化发酵条件，提高发酵产物的产量和质量。

本实验采用稀释涂布平板法、平板划线法和选择性培养基等方法，对土壤样品中的微生物进行筛选。

三、实验材料1. 土壤样品：采集自某农田，样品重量约50g。

2. LB培养基：牛肉膏10g、蛋白胨5g、NaCl5g、蒸馏水1000mL，pH7.0。

3. 选择性培养基：根据待筛选菌种的特点，设计合适的培养基，如淀粉培养基、糖发酵培养基等。

4. 实验仪器：无菌操作台、高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、显微镜、移液器、无菌吸管、涂布器、玻璃棒等。

四、实验方法1. 土壤样品处理：将采集的土壤样品置于无菌容器中，加入适量的无菌生理盐水，搅拌均匀后，进行10倍梯度稀释。

2. 稀释涂布平板法：取适量稀释后的土壤样品，涂布于LB培养基平板上，倒置培养箱中，37℃培养24小时。

3. 平板划线法：取适量稀释后的土壤样品，用无菌玻璃棒在LB培养基平板上划线，37℃培养24小时。

4. 选择性培养基筛选：将筛选出的疑似菌株，接种于选择性培养基平板上，37℃培养24小时。

5. 鉴定：观察菌落特征，如菌落大小、颜色、形状等，并结合显微镜观察菌体形态，对筛选出的菌株进行初步鉴定。

五、实验结果与分析1. 稀释涂布平板法：在LB培养基平板上，观察到不同大小的菌落，说明土壤样品中存在多种微生物。

2. 平板划线法：在LB培养基平板上，观察到划线区域的菌落逐渐变稀，说明存在抑制菌。

3. 选择性培养基筛选：在选择性培养基平板上，观察到特定菌落，说明筛选出具有特定生理生化特性的菌株。

4. 鉴定：通过观察菌落特征和显微镜观察菌体形态，对筛选出的菌株进行初步鉴定，如淀粉酶产生菌、糖发酵菌等。

六、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。

抗噬菌体菌株筛选噬菌体的分离取疑似噬菌体感染的生产菌株斜面或平板，用无菌蒸馏水将菌苔洗下，无菌过滤或离心，收集滤液或上清液。

在摇瓶培养基中接种1%生产菌株的孢子或细胞悬浮液，适温下培养24 h，加入1%的上述滤液或56离心上清液，继续培养24 h，无菌离心或过滤，收集上清液或滤液。

取上述上清液或滤液和生产菌株的孢子或细胞悬浮液各0.25ml，混匀后加在生产菌株的平板培养基上，用刮棒涂布均匀，适温下培养48~96h，确认是否生成噬菌斑。

噬菌体的纯化与增殖将上述平板上长出的噬菌斑用接种针移入生产菌株培养12~24 h的摇瓶培养液中，继续培养24 h左右，无菌过滤或离心收集滤液或上清液。

取上述滤液或上清液和生产菌株的孢子或细胞悬浮液各0.25 ml，混匀后加在生产菌株的平57板培养基上，用刮棒涂布均匀，适温下培养48~96h，确认是否生成噬菌斑。

重复以上两个步骤，使噬菌体达到纯化和增殖的目的。

最终所得滤液或上清液作为纯化噬菌体原液置冰箱保存。

噬菌体效价的测定取6支灭菌并烘干的小试管，分别标注10-1、10-2、10-3、10-4、10-5和10-6，各加入0.9 ml无菌蒸馏水。

在10-1小试管中加入纯化噬菌体原液0.1ml，混匀后取出0.1ml移入10-2小试管中，如此类推，分别获得6个稀释度的噬菌体稀释液。

在5支灭菌并烘干且分别标注10-3、10-4、10-5、10-6和10-7的小试管中，分别加入0.1 ml上述10-2、10-3、10-4、10-5和10-6的噬菌体稀释液和0.9 ml生产菌株的孢子或细胞悬浮液，摇匀后再加入50℃的生产菌株琼脂培养基，迅速摇匀后分别倾入标注10-3、10-4、10-5、10-6和10-7的灭菌培养皿中，凝固后置适温下培养48~96 h，对所形成的噬菌斑计数。

抗噬菌体菌株选育步骤噬菌体抗性的检测将上述经过诱变和加热处理的生产菌株孢子或细胞悬浮液0.5 ml涂布到生产菌株的平板培养基上，表面干燥后加入0.1 ml保存的噬菌体原液，涂布均匀后置适温下培养48~72 h，观察噬菌斑的形成并计数(如无噬菌体原液，也可用噬菌斑制成悬浮液)。

菌种筛选方法（共5篇）第一篇：菌种筛选方法菌种筛选方法在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。

初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。

因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。

初筛的手段应尽可能快速、简单。

复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标,测得的数据要能够反映将来的生产水平。

从菌体形态变异分析有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。

尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。

当然，这种鉴别方法只能用于初筛。

有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)的变异菌落，发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小（8-10毫米），凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色，凡浅黄或白色者皆属低产菌株。

又如，在灰黄霉素产生菌荨麻青霉(Penicillium urticae)的育种中，曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高，而在赤霉素生产菌藤仓赤霉（Gibberella fujikuroi）中，却发现菌落的紫色加深者产量反而下降。

平皿快速检测法平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的“形态”变化。

具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等，见图5.6.1。

这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。

它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。

图 5.6.1平皿快速检测法示意图平皿快速检测法操作时应将培养的菌体充分分散，形成单菌落，以避免多菌落混杂一起，引起“形态”大小测定的偏差。