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小鼠睾丸支持细胞分离培养一、材料和器械：1、材料：小白鼠（18~ 20 日龄）1只2、配液：PBS 1L，高压灭菌细胞洗液：DMEM+双抗消化液：0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，0 1%( 质量分数) 胶原酶细胞培养液：DMEM+10%FBS+双抗3、器械：镊子、手术剪、手术刀各3-4把，高压灭菌500mL烧杯2个，高压灭菌25 mL离心管、5 mL离心管各20个，高压灭菌酒精棉一瓶细胞培养皿若干冰块若干二、操作步骤：1、处死小鼠颈椎脱臼法处死；2、消毒置于含75% ( 体积分数) 乙醇平皿中浸泡2 min, 然后置于超净台上；3、取睾丸用中剪剪开下腹部皮肤, 眼科剪从下腹部附睾部剪断精索, 取出双侧睾丸, 放入含预冷细胞洗液的培养皿中；4、取实质修剪睾丸附带的精索。
剥除睾丸被膜, 将睾丸实质剪成约1 mm 1 mm 1 mm 碎块, 静置3~ 4 min；5、消化转入25mL 离心管中。
吸出上层细胞洗液, 每只睾丸加入1 5mL 37 预温的0 25% ( 质量分数) 胰蛋白酶，37 高速振荡消化15~ 20min, 直到残存的间质消化成粘液状, 可见成片断的曲细精管；6、终止消化加入入少许血清终止消化,；7、离心1000 r/ min离心5 min, 倾去上层胰酶。
加入DMEM/ F12 培养基重悬, 1000r/min 离心5min。
倾去上层培养液；8、再消化每只睾丸加入1 mL 37 预温的0 1%( 质量分数) 胶原酶, 37 低速缓慢振荡消化20~ 25min；9、铜网过滤取滤液800 r/ min 离心5min, 2 次去除胶原酶, 用培养液洗涤；10、接种往离心管加入细胞培养液5ml左右，吹打均匀，接种到两个30细胞培养皿中，补加培养液到培养皿1/3~1/2,培养皿标记显微观察后放入36CO2培养箱培养。
三、换液纯化，计数结果鉴定。
实验一小鼠的基本实验操作一、实验目的:通过实际操作,掌握小鼠的一般操作方法,包括小鼠的抓拿、标记、给药(灌胃、腹腔注射、皮下、肌肉、尾静脉注射)、取血(眶后静脉丛,摘眼球)、脊椎脱臼法处死、大体解剖。
二、实验动物:昆明小鼠2只(1雌1雄)三、实验步骤1、抓取与固定,标记2、去毛3、给药:消化道、腹腔注射、尾静脉注射4、取血:眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法5、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉6、处死:脊椎脱臼法7、解剖:雄性:睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,胶质状,透明)雌性:双角子宫、卵巢肾上腺、胆囊、甲状腺、胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏、甲状腺四、实验结果1、抓取与固定标记:抓取:抓小鼠的尾根部固定:抓住小鼠的尾根部,让小鼠在粗糙平面上爬行,后拉尾跟部,右手的拇指与食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤,小指与无名指将尾巴固定在手掌面。
并标记: 2、灌胃法:左手抓取小鼠固定后,右手持特制灌胃针,沿一侧口角进针,紧贴咽后壁,头后仰以便伸直消化道,进针2/3后灌生理盐水0、5ml3、注射给药:腹腔注射:从下腹部的两侧进针 ,进针时针与腹部成45°。
进针后稍微晃动针,如无粘滞感则可注射药物尾静脉注射:一人固定小鼠,另一人用左手中指与拇指将尾拉直,食指托住尾部,在尾动脉位置进针注射0、5ml生理盐水。
注射完毕拔出针头,用无菌棉球压迫止血。
4、采血从眼角内侧0、5cm处进针眼球摘除法:左手抓取用固定小鼠,右手持弯头镊在眼球根部将眼球摘除,头朝下,眼眶内血迅速流出。
5、麻醉:0、5%氯胺酮腹腔麻醉:本小鼠重22g,按100mg/kg的药量给药,2分钟麻醉成功6、处死:脊椎脱臼法:按住头部,将尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死7、解剖:雄性:寻找到睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺雌性:双角子宫、卵巢 3、7、2 肾上腺:米粒大小胰腺:位于胃下方,类似于脂肪组织,浑浊状 3、7、4 ,胆囊:芝麻大小,浅绿色,半透明,甲状腺:紧贴环状软骨 ,另可解剖出胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏。
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过对小鼠进行解剖，了解小鼠的主要器官位置和结构，掌握解剖技巧，提高实验操作能力，为后续的生物学和医学研究打下基础。
二、实验材料与工具1. 实验动物：成年小鼠（体重约20-30g）2. 实验器材：解剖台、剪刀、镊子、解剖刀、解剖针、解剖剪、解剖显微镜、生理盐水、酒精、碘酒、棉球等三、实验步骤1. 实验动物准备：将小鼠置于解剖台上，用棉球蘸取适量的生理盐水湿润小鼠的皮肤，以便于解剖操作。
2. 解剖过程：（1）切开皮肤：用剪刀沿小鼠腹部正中线剪开皮肤，注意避免损伤内脏器官。
（2）暴露内脏：用镊子提起皮肤，显露内脏器官，包括心脏、肺、肝脏、胃、小肠、大肠、肾脏、膀胱、生殖器官等。
（3）解剖器官：用解剖刀和剪子依次解剖各个器官，观察其位置、形态和结构特点。
（4）记录数据：详细记录每个器官的位置、形态、大小等数据。
3. 实验结果分析：（1）心脏：心脏位于胸腔中央，呈红褐色，分为左右两个心房和两个心室，心脏壁由心肌组成。
（2）肺：肺位于胸腔两侧，呈粉红色，肺泡是肺的基本结构单位，肺泡壁与毛细血管壁紧密相连，有利于气体交换。
（3）肝脏：肝脏位于腹腔右上侧，呈红褐色，具有解毒、代谢和储存营养物质等功能。
（4）胃：胃位于腹腔左侧，呈粉红色，分为贲门、胃底、胃体和幽门，胃壁具有分泌胃酸和消化酶的功能。
（5）小肠：小肠位于腹腔中部，分为十二指肠、空肠和回肠，是消化吸收的主要场所。
（6）大肠：大肠位于腹腔右下方，分为盲肠、阑尾、结肠和直肠，主要吸收水分和电解质。
（7）肾脏：肾脏位于腹腔腰部，呈红褐色，具有过滤血液、生成尿液和调节体内水分和电解质平衡等功能。
（8）膀胱：膀胱位于腹腔底部，呈粉红色，是储存尿液的器官。
（9）生殖器官：雄性小鼠的生殖器官包括睾丸、附睾、阴茎等；雌性小鼠的生殖器官包括卵巢、输卵管、子宫和阴道等。
四、实验心得体会1. 解剖操作过程中，要熟练掌握解剖刀、剪子等工具的使用方法，注意操作规范，避免损伤内脏器官。
小鼠输精管结扎和简单精子操作121140052 王哲迪 174一、实验目的1、掌握小鼠手术的基本技巧2、学习雄性小鼠生殖系统特点3、练习显微操作技术二、实验结果及分析1、以腹部横切法剪开小鼠腹壁后，用镊子夹住脂肪垫将睾丸、附睾和输精管拉出切口。
实验时我们将下面图片中镊子夹着的地方剪掉了1cm。
但是在仔细观察过右边这个图后发现，我们错把附睾体当做了输精管。
我们剪掉的是附睾体，而不是输精管。
2、下面这张图片是小鼠腹壁缝合后的照片。
我们采取了方洁的打结方式。
在将睾丸放回腹腔的过程中，发现不管怎么推，都不能把睾丸推回阴囊，这给缝合带来了一定的难度。
缝合腹壁时一定要小心，因为缝合针很容易扎到皮肤和腹腔内的脏器。
3、下图为皮肤缝合后的照片，同样采用的是方结的打结方式。
皮肤相对于腹壁而言较容易缝合。
4、下图为在解剖镜下观察得到的照片。
可能由于角度问题，这张图片上只能分辨出脂肪体和睾丸，并不能看到附睾体和输精管。
取出睾丸时的操作也存在问题，并没有注意到输精管在哪里。
上面剪切输精管时也没有找对输精管，所以实验失败在没有观察到输精管。
脂肪体睾丸4、下图为在显微镜下观察精子得到的照片。
正如细线所指的，图中有着尖尖的头部和一条细长的尾巴的就是精子。
由于载玻片上有一些脂肪体残留的脂肪，所以在显微镜下会看到很多油花，影响精子的观察。
但是仔细看还是可以看到许多在快速无规则运动的精子。
精子三、备注1、本人在实验中操作的部分：对小鼠进行断颈处理切开腹壁夹出睾丸、附睾和脂肪体剪掉1cm输精管（其实剪掉的是附睾）部分缝合操作2、实验要求用乙醚麻醉小鼠，但是实验过程中发现用乙醚麻醉的方法并不好，小鼠经常会醒过来，而且用乙醚操作时间长了，实验人员出现头疼恶心等不适症状。
由于并不需要对小鼠进行回收，所以为了方便操作我们直接采取了断颈处理的方法。
实验六、小鼠采精方法中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVEMEDICINE2005年4月第15卷第2期April, 2005 Vol.15 No。
2郑新民,李聚学，魏雁，乔宪凤,周荆荣（湖北省农科院生物技术研究所，武汉430072小鼠是世界上研究最为详尽的哺乳类动物［1］.但是目前人们仍然是通过手术法从小鼠附睾中获取精子，国内外尚无小鼠非手术法采精的报道.手术法采精为众多的科学研究带来了不便：（1)手术法采精必须将雄鼠处死，分离其附睾和输精管来获取精子,过程繁琐，费时费工,且造成不必要的经济浪费［2]。
另外，从附睾中获取的精子由于缺少副性腺中的诸多有益成分，精子品质难以保证[3];（2）不利于小鼠生殖生理的研究,在医学上,人们都是通过“杀鸡取卵”式地宰杀大量的雄鼠来获取精子进行科研分析[4-6],不但造成了很大的经济浪费，而且增加了实验的误差和难度;(3)不利于某些动物模型的建立,例如，由于小鼠精子获取繁琐，人工授精技术不易建立，精子载体转基因技术尚无理想的动物模型,这极不利于该项研究的开展［7］。
由此可见,建立一种方便快速的小鼠非手术法采精技术对解决小鼠手术法采精中存在的问题、小鼠生殖生理的研究和建立某些小鼠动物模型都是很有意义的。
1 材料和方法1。
1 实验动物SPF级昆明小白鼠雄鼠,购自湖北省预防医学科学院。
合格证号为：SYXK(鄂）20035853。
1.2 小鼠假阴道抽吸器的制备小鼠假阴道的制作：取一段长约2 cm,内径8 mm的软质透明塑料管,在其内侧套上一层厚度约0.1 mm的胶膜,胶膜要求透明且有良好的弹性。
在塑料管中部钻一直径为2 mm的小孔,将一外径与小孔相当的硬质插管插入小孔中，深度与塑料管管壁厚度相当,小孔周围用强力胶水密封,向小管中轻轻吹入空气即可将塑料管内侧胶膜充起。
将制好的小鼠假阴道与胶头吸管相连,小鼠假阴道抽吸器即制作完毕。
1.3 电刺激采精仪的制备电刺激采精仪由电刺激发生器和直肠探子两部分组成。
实验一小鼠的基本实验操作一、实验目的:通过实际操作，掌握小鼠的一般操作方法，包括小鼠的抓拿、标记、给药(灌胃、腹腔注射、皮下、肌肉、尾静脉注射)、取血（眶后静脉丛，摘眼球)、脊椎脱臼法处死、大体解剖。
二、实验动物：昆明小鼠2只（1雌1雄)三、实验步骤1、抓取和固定,标记2、去毛3、给药：消化道、腹腔注射、尾静脉注射4、取血：眼眶后静脉丛、尾静脉、眼球摘除法、断头法5、麻醉：氯胺酮腹腔麻醉6、处死:脊椎脱臼法7、解剖：雄性：睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺（在膀胱下方，胶质状，透明）雌性:双角子宫、卵巢肾上腺、胆囊、甲状腺、胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏、甲状腺四、实验结果1、抓取和固定标记：抓取：抓小鼠的尾根部固定:抓住小鼠的尾根部，让小鼠在粗糙平面上爬行，后拉尾跟部,右手的拇指和食指抓住小鼠两耳及其间的颈部皮肤,小指和无名指将尾巴固定在手掌面.并标记：2、灌胃法：左手抓取小鼠固定后，右手持特制灌胃针，沿一侧口角进针，紧贴咽后壁，头后仰以便伸直消化道，进针2/3后灌生理盐水0.5ml3、注射给药：腹腔注射：从下腹部的两侧进针 ,进针时针与腹部成45°.进针后稍微晃动针，如无粘滞感则可注射药物尾静脉注射：一人固定小鼠，另一人用左手中指和拇指将尾拉直，食指托住尾部,在尾动脉位置进针注射0.5ml生理盐水。
注射完毕拔出针头，用无菌棉球压迫止血.4、采血从眼角内侧0。
5cm处进针眼球摘除法：左手抓取用固定小鼠,右手持弯头镊在眼球根部将眼球摘除，头朝下，眼眶内血迅速流出。
5、麻醉:0.5％氯胺酮腹腔麻醉：本小鼠重22g，按100mg/kg的药量给药,2分钟麻醉成功6、处死:脊椎脱臼法：按住头部,将尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死7、解剖：雄性：寻找到睾丸、附睾、输精管、鼠蹊腺雌性：双角子宫、卵巢 3。
7.2 肾上腺：米粒大小胰腺：位于胃下方，类似于脂肪组织，浑浊状 3。
7。
4 ，胆囊：芝麻大小，浅绿色,半透明,甲状腺：紧贴环状软骨，另可解剖出胃、肝脏、脾、肺、肾、心脏。
