牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别
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丹皮的鉴别方法丹皮的功效与作用1、取粉末微量升华,显微镜下可见长柱形结晶或针状及羽状簇晶,滴加三氯化铁醇溶液,则结晶溶解而显紫红色。
(示牡丹酚)2、取粉末2g,加水50ml蒸馏,将产生的蒸气导入盛有氯亚胺基2,6-二氯苯醌试剂(取氯亚胺基2,6-二氯苯醌0。
1g,加硼砂3、2g,研磨均匀即得)0。
1g与蒸馏液1ml中,2min内牡丹皮的溶液显蓝色(示丹皮酚)。
芍药根皮不显色。
3、薄层层析:(1)牡丹皮(2)牡丹皮(3)牡丹皮(4)丹皮酚样品液:本品粉末1g,加乙醚10ml,振摇10分钟,过滤,滤液挥干,残渣加丙酮溶解,使成2ml,作供试液备用。
对照品液:取丹皮酚对照品加丙酮制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。
展开:环己烷-醋酸乙酯(3:1)显色:酸性5%三氯化铁乙醇溶液,热风吹至斑点显色清晰,供试品色谱在与对照品相应的位置显相同的色斑。
丹皮的临床研究用重用牡丹皮组成的复方,治疗原发性血小板减少性紫癜32例,效果尚佳牡丹皮(中西医结合杂志,1985,4:245);单用牡丹皮水煎服,治疗高血压7例,疗效较好(辽宁医学杂志,1960,7:48);用牡丹皮清水浸泡后的蒸馏液滴鼻,治疗过敏性鼻炎,有效率为87。
1%(湖南医药杂志,1983,4:24);用3、5%丹皮酚霜外涂皮损处,治疗急性湿疹27例,治愈8例,显效5例,好转6例(中医杂志,1983,10:19)。
丹皮的药毒理学牡丹皮和牡丹酚的毒性小。
牡丹酚对小鼠的半数致死量(观察48小时),静脉注射为96mg、kg,腹腔注射为781mg、kg,灌胃为3430mg、kg。
牡丹酚溶于50%花生油中,小鼠1次灌胃,观察3天,其半数致死量为4、9士0。
47g、kg;用于治疗实验性高血压犬,未见肝功能、血象、血液非蛋白氮、心电图等异常,仅有眼分泌物稍增加,眼粘膜有充血现象。
喜马拉雅山产之喜马牡丹Paeoniaemodi热浸液对各种动物子宫均有兴奋作用,但对蛙心则抑制,对兔、豚鼠肠管有解痉作用。
丹皮酚的提取与鉴定丹皮酚的提取分离及结构鉴定摘要:丹皮酚是牡丹皮和徐长卿的主要活性成分,在医药、香料、化工领域具有广泛用途,其药理活性广泛: 镇静、镇痛、催眠、解热、抗炎、抗过敏,免疫调节等,提取丹皮酚的方法主要有有机溶剂浸出法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法等。
本报告主要就丹皮酚的研究状况等作了介绍,实验采取水蒸气蒸馏法从牡丹皮中提取丹皮酚。
并用薄层色谱法,紫外分光光度法等对丹皮酚进行了结构鉴定。
关键字:丹皮酚水蒸气蒸馏法薄层色谱法一、文献综述1 前言丹皮酚( paeonol, 简称Pae) , 又称牡丹酚, 主要是从萝摩科植物徐长卿干燥根或全草和毛茛科芍药属植物牡丹、芍药的根皮中提取分离出来的一种活性成分, 其成分单一、纯度高、质量控制良好、药理作用明确、毒副反应小,而且临床使用安全。
是一种小分子的酚类化合物, 化学式为,2-羟基-4-甲氧基-苯乙酮,呈白色针状结晶, 具有镇静、镇痛、解热、解痉、抗炎等作用, 并具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化、改善微循环、保护缺血组织、抗菌和抑制皮肤色素合成等作用。
近年来还发现丹皮酚具有抗肿瘤作用, 同时能提高机体免疫力且无明显副作用。
2.研究进展丹皮始载于《本经》, 具有清热凉血, 活血化瘀的功效, 为历版《中华人民共和国药典》收载品种,.其主要有效成分为丹皮酚。
药理活性广泛、高效、低毒,在心脑血管系统疾病和肿瘤防治等方面具有广阔的开发前景和临床应用价值。
目前市场上对丹皮酚的需求量较大,除用于医药制剂原料外,还广泛用作牙膏及护发、护肤、美容等日化产品的原材料。
对于丹皮酚的研究,早在1964,Doifode等就合成了α-溴代的丹皮酚。
Rehman等合成了丹皮酚5-位的卤化衍生物,并且发现均具有较好的抗真菌性。
1995年,徐鸣夏等合成了乙酰水杨酸丹皮酚酯,即2-(乙酰氧基)苯甲酸-2-乙酰基-5-甲氧基苯酯,其药理作用与乙酰水杨酸酯类药物相似,但抗血栓形成作用较强,适用于防治心脑血管栓塞性疾病。
牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别作者:肖霞曹俊凯来源:《中国实用医药》2014年第26期【摘要】目的建立牡丹皮的薄层鉴别方法。
方法以薄层色谱法鉴别。
结果此法操作简单,专属性强,重现性好,检出斑点清楚。
结论该法可作牡丹皮的质量控制方法之一。
【关键词】牡丹皮;薄层色谱法丹皮酚是牡丹皮主要挥发性成分之一,是一种小分子酚类化合物,化学名2-羟基-4-甲氧基苯乙酮,为白色或微黄色有光泽的针状结晶,熔点49~51℃,气味特殊、味微辣、易溶于乙醇和甲醇,在热水中溶解,不溶于冷水。
丹皮酚可吸收UV光,在硅胶GF254薄层板上形成暗斑,用对照药材与对照品进行对照,可起到鉴别牡丹皮中丹皮酚的作用。
1 仪器与试剂1. 1 仪器双槽层析缸、玻璃板10 cm×10 cm(厚3 mm)、2 μl毛细管、研钵、50 ml喷雾瓶、电吹风、电子天平、三用紫外线分析仪。
1. 2 试剂牡丹皮药材、丹皮酚对照品。
2 定性鉴别2. 1 硅胶GF254薄板的制作称取硅胶GF254 1份与3份0.3%的羟甲基纤维素钠放入研钵中,研匀,倒入涂布器中,进行涂布(厚度为0.25~0.5 mm),取下涂好薄层的玻璃板,于温室下,置水平台上晾干,于110℃烘30 min,冷却后放入干燥器中备用。
2. 2 供试品制备取本品粉末1 g,加乙醚10 ml,密塞,振摇10 min,滤过,滤液挥干,残渣加丙酮2 ml使溶解,作为供试品溶液。
2. 3 对照品制备取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1 ml含2 mg的溶液,作为对照品溶液。
2. 4 点样用毛细管吸取上述两种溶液各10 μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上。
2. 5 展开以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂,上行展开,其展距5~7 cm,取出,晾干。
2. 6 显色喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。
2. 7 检视供试品色谱中,在与丹皮酚对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝褐色斑点。
丹皮酚的提取分离及结构鉴定摘要:丹皮酚是牡丹皮和徐长卿的主要活性成分,在医药、香料、化工领域具有广泛用途,其药理活性广泛: 镇静、镇痛、催眠、解热、抗炎、抗过敏,免疫调节等,提取丹皮酚的方法主要有有机溶剂浸出法、水蒸气蒸馏法、超临界流体萃取法等。
本报告主要就丹皮酚的研究状况等作了介绍,实验采取水蒸气蒸馏法从牡丹皮中提取丹皮酚。
并用薄层色谱法,紫外分光光度法等对丹皮酚进行了结构鉴定。
关键字:丹皮酚水蒸气蒸馏法薄层色谱法一、文献综述1 前言丹皮酚( paeonol, 简称Pae) , 又称牡丹酚, 主要是从萝摩科植物徐长卿干燥根或全草和毛茛科芍药属植物牡丹、芍药的根皮中提取分离出来的一种活性成分, 其成分单一、纯度高、质量控制良好、药理作用明确、毒副反应小,而且临床使用安全。
是一种小分子的酚类化合物, 化学式为,2-羟基-4-甲氧基-苯乙酮,呈白色针状结晶, 具有镇静、镇痛、解热、解痉、抗炎等作用, 并具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化、改善微循环、保护缺血组织、抗菌和抑制皮肤色素合成等作用。
近年来还发现丹皮酚具有抗肿瘤作用, 同时能提高机体免疫力且无明显副作用。
2.研究进展丹皮始载于《本经》, 具有清热凉血, 活血化瘀的功效, 为历版《中华人民共和国药典》收载品种,.其主要有效成分为丹皮酚。
药理活性广泛、高效、低毒,在心脑血管系统疾病和肿瘤防治等方面具有广阔的开发前景和临床应用价值。
目前市场上对丹皮酚的需求量较大,除用于医药制剂原料外,还广泛用作牙膏及护发、护肤、美容等日化产品的原材料。
对于丹皮酚的研究,早在1964,Doifode 等就合成了α-溴代的丹皮酚。
Rehman等合成了丹皮酚5-位的卤化衍生物,并且发现均具有较好的抗真菌性。
1995年,徐鸣夏等合成了乙酰水杨酸丹皮酚酯,即2-(乙酰氧基)苯甲酸-2-乙酰基-5-甲氧基苯酯,其药理作用与乙酰水杨酸酯类药物相似,但抗血栓形成作用较强,适用于防治心脑血管栓塞性疾病。
来自中国药典2005一部牡丹皮拼音名:Mudanpi英文名:CORTEX MOUTAN书页号:2005年版一部-119本品为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮。
秋季采挖根部,除去细根和泥沙,剥取根皮,晒干。
【性状】本品呈筒状或半筒状,有纵剖开的裂缝,略向内卷曲或张开,长5~20cm,直径0.5~1.2cm,厚0.1~0.4cm。
外表面灰褐色或黄褐色,有多数横长皮孔样突起及细根痕,栓皮脱落处粉红色;内表面淡灰黄色或浅棕色,有明显的细纵纹,常见发亮的结晶。
质硬而脆,易折断,断面较平坦,淡粉红色,粉性。
气芳香,味微苦而涩。
【鉴别】(1) 本品粉末淡红棕色。
淀粉粒甚多,单粒类圆形或多角形,直径3~16μm,脐点点状、裂缝状或飞鸟状;复粒由2~6 分粒组成。
草酸钙簇晶直径9~45μm,有时含晶细胞连接,簇晶排列成行,或一个细胞含数个簇晶。
木栓细胞长方形,壁稍厚,浅红色。
(2) 取本品粉末1g,加乙醚10ml,密塞,振摇10分钟,滤过,滤液挥干,残渣加丙铜2ml使溶解,作为供试品溶液。
另取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1ml 含5mg 的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述两种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(3:1) 为展开剂,展开,取出,晾干,喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝褐色斑点。
【检查】水分照水分测定法(附录ⅨH第二法)测定,不得过13.0%。
总灰分不得过5.0%(附录ⅨK)。
酸不溶性灰分不得过1.0%(附录IX K)。
【浸出物】照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法(附录X A)测定,用乙醇作溶剂,不得少于15.0%。
【含量测定】照高效液相色谱法(附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(45:55)为流动相;检测波长为274nm。
牡丹皮中丹皮酚的测定方法综述摘要:本文主要对丹皮中丹皮酚的测定方法进行详细综述。
牡丹皮中含有的丹皮酚具有镇痛、消炎、抗菌等作用,对现代医药研究与应用有着重大意义。
随着中药现代化的进展,对中药有效成分的分离提取、含量测定已成为新的热点课题。
关键词:牡丹皮丹皮酚定性和含量测定牡丹皮为毛茛科植物牡丹的干燥根皮, 有清热凉血、活血化瘀的作用。
用于湿热发斑、吐血衄血、夜热早凉,经闭痛经、痈肿疮毒、跌打伤痛等。
其主要有效成分为丹皮酚[1]。
丹皮酚又名牡丹酚、芍药酚,化学名为“2-羟基-4-甲氧基苯乙酮”,为白色或微黄色有光泽的针状结晶,无色针状结晶(乙醇),熔点49℃-51℃,气味特殊,味微辣,易溶于乙醇和甲醇中,溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中,稍溶于水,在热水中溶解,不溶于冷水,能随水蒸汽挥发。
丹皮酚可随水蒸气蒸馏,且在紫外光区有强烈吸收,在274nm波长处E(1% 1cm)为862,利用此性质可用紫外分光光度计进行测定。
现代药理研究证明丹皮酚具有抗炎、镇静、降压、抗氧化、保护心肌细胞及抑制血小板凝集等作用。
丹皮酚的含量高低是作为衡量牡丹皮品质优劣的一种重要指标,其含量的高低直接影响药品的疗效。
目前,丹皮酚的定性含量测定有高效液相色谱法(HPLC)、分光光度法、薄层扫描法等。
以下是对薄层扫描法,高效液相色谱法(HPLC)的简要介绍。
一、丹皮酚提取分离方法1.蒸馏-煎煮法蒸馏-煎煮法蒸馏-煎煮法蒸馏-煎煮法是指先蒸馏提取挥发性成分,药渣再加水提取的方法,适用于含挥发性成分药材的提取。
丹皮酚随蒸气馏出后,在冷藏状态下大量析出,滤过干燥即可用于成型,保存方便且转移率较高[2],但其提取率远低于醇提法[3];提取过程中选择适宜的pH范围使丹皮酚溶解,并确保溶液贮存过程中的稳定已成为丹皮酚提取液体制备过程中的关键,在蒸馏过程中可以加盐、先加碱后加酸等提高提取率,研究认为加盐蒸馏法是丹皮酚提取的最优方法;为了提高其在水中溶解度,通常采用有机溶剂、助溶剂、表面活性剂等途径来解决问题,有文献报道将其制成β-环糊精包合物来提高其稳定性和生物利用度,能降低其挥发性,增加其溶解度[4]2 醇提法醇提法以无水乙醇为溶剂,40℃温度下回流提取,即可将丹皮酚提取出来。
天药实验设计--牡丹皮中丹皮酚的提取、分离、鉴定
2010级药物制剂二班《天然药物化学》实验设计一
----牡丹皮中丹皮酚的提取、分离与鉴定一、提取
主要实验材料:
牡丹皮、氯化钠、95%乙醇、蒸馏水
主要仪器设备:
挥发油提取器、蒸馏瓶(100ML)、回流冷凝管、电炉、锥形瓶
二、制备硅胶与薄层板
主要实验材料:
蒸馏水、硅胶G、CMC-Na
主要仪器设备:
烧杯、玻璃棒、研钵、电炉、电子天平、玻璃板(2、7*7、4cm)
三、精制
主要实验材料:
丹皮酚粗品、95%乙醇、蒸馏水
主要仪器设备:
烧杯、减压抽滤装置(布氏漏斗、抽滤瓶、真空泵)、玻璃棒
四、丹皮酚鉴定
主要实验材料:
自制丹皮酚、丹皮酚标准品、95%乙醇、环己烷、乙酚乙醇、盐酸酸化的5%FeCl3溶液
主要仪器设备:
层析缸、小烧杯、硅胶G薄层板
温馨提示:
请大家根据上面的提示,查阅相关资料,以小组为单位进行小组讨论后,设计出一个合理可行的实验方案。
将打印稿于下周三之前交给我,不交则每位组员平时成绩均将受到影响。
PS:为了锻炼同学们的自我创新能力,提高同学们的团结合作,实验课上老师将会当堂抽查提问,每组同学都应该对本周实验方案了如指掌,望同学们认真做
好准备。
有问题可以随时联系我,潘昱:189********.望大家相互转告。
基金项目:河北省教育厅创新创业教育教学改革研究与实践项目(No.2023cxcy159)作者简介:殷宏艳,研究方向:药物分析;E mail:3088850691@qq.com通讯作者:郭春燕,教授,硕士生导师;研究方向:体内药物分析和靶向药物分析;E mail:guochy0311@163.com不同产地牡丹皮薄层鉴别及丹皮酚含量测定殷宏艳1 尤斯涵1 赵永明1 颜凡莉2 陈明霞2 姜海燕2 郭春燕11.河北北方学院药学院,河北省神经药理学重点实验室,张家口,075000,中国2.北京斯利安药业有限公司,北京,100176,中国【摘要】 目的:高效液相色谱法测定安徽、河南、山东产地牡丹皮中丹皮酚含量,薄层色谱鉴别不同产地牡丹皮药材。
方法:采用G型薄层层析硅胶薄层板,以环己烷 乙酸乙酯 冰醋酸(4∶1∶0.1)为展开剂,喷以2%香草酸硫酸乙醇溶液显色;采用?分C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇 水(45∶55V/V)洗脱,流速为1.0mL·min 1,检测波长为274nm,柱温为30℃,进样体积为10μL。
结果:21批次牡丹皮药材薄层鉴别斑点显色清晰,丹皮酚含量的范围为2.7%~2.9%,均高于药典标准,其中山东省丹皮酚含量最高。
结论:山东、河南、安徽种植的牡丹皮质量好,品相佳,不同批次间差异小,品质均匀稳定。
【关键词】 牡丹皮;高效液相色谱法;薄层色谱法;丹皮酚【中图分类号】 R282 【文献标识码】 A 犇犗犐:10.3969/j.issn.2095 1396.2023.05.004犜犺犻狀犔犪狔犲狉犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犪狀犱犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犘犪犲狅狀狅犾犆狅狀狋犲狀狋犻狀犕狅狌狋犪狀犆狅狉狋犲狓犳狉狅犿犇犻犳犳犲狉犲狀狋犗狉犻犵犻狀狊YINHong yan1,YOUSi han1,ZHAOYong ming1,YANFan li2,CHENMing xia2,JIANGHai yan2,GUOChun yan11.DepartmentofPharmacy,HebeiNorthUniversity,HebeiKeyLaboratoryofNeuropharmacology,Zhangjia kou,075000,China2.BeijingSilienPharmaceuticalCo.,Beijing,100176,China【犃犅犛犜犚犃犆犜】 犗犫犼犲犮狋犻狏犲:Highperformanceliquidchromatography(HPLC)wasusedtode terminethecontentofpaeonolinMoutanCortexofdifferentorigins,andthin layerchroma tography(TLC)wasusedtoidentifytheherbsofMoutanCortexofdifferentorigins.犕犲狋犺 狅犱狊:TheseparationwasperformedonaG typethin layerchromatographysilicagelplatewithcyclohexane ethylacetate glacialaceticacid(4∶1∶0.1)astheunfoldingagent,andthecolorwasdevelopedbysprayingwith2%vanillicacidethanolsulfatesolution;thesepara tionwascarriedoutonaChevonneC18column(4.6mm×250mm,5μm)withtheelutionofmethanol water(45∶55V/V)asthemobilephase,attheflowrateof1.0mL·min 1andthedetectionwavelengthof274nm.Themobilephasewasmethanol water(45∶55V/V)ataflowrateof1.0mL·min 1,thedetectionwavelengthwas274nm,thecolumntemperaturewas30℃,andtheinjectionvolumewas10μL.犚犲狊狌犾狋狊:Theresultsshowedthatthethin layeridentificationspotsof21batchesofpeonydandelionherbswereclear,andthecontentsofdandelionwereintherangeof2.7%~2.9%,whichwerehigherthanthepharmacopoeiastandard,ofwhichdandelioninShandongprovincewasthehighest.犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀:ThequalityofpeonybarkgrowninShandong,HenanandAnhuiisgood,withgoodcharacter,smalldifferencesbetweendifferentbatches,anduniformandstablequality.【犓犈犢犠犗犚犇犛】 moutancortex;highperformanceliquidchromatography;thinlayerdis tinction;paeonol 牡丹皮为毛茛科植物牡丹的干燥根皮,又名丹皮,牡丹根皮或者丹根,始载于《神农百草经》,具有清热凉血、活血化瘀的功效,常用于治疗热入营血、温毒发斑、吐血衄血、夜热早凉、无汗骨蒸、经闭痛经、跌扑伤痛、痈肿疮毒[1 2]。
牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别第一部分方案设计一、实验目的1.中药的薄层定性鉴别自主设计和实验方法2.掌握薄层色谱法在中药分析中的应用3.掌握高效液相色谱仪在中药分析中的应用二、实验原理丹皮酚是牡丹皮主要挥发性成分之一,是一种小分子酚类化合物,化学名2-羟基-4-甲氧基苯乙酮,为白色或微黄色有光泽的针状结晶,熔点49~51℃,气味特殊、味微辣、易溶于乙醇和甲醇,在热水中溶解,不溶于冷水。
丹皮酚可吸收UV光,在硅胶GF254薄层板上形成暗斑,用对照药材与对照品进行对照,可起到鉴别牡丹皮中丹皮酚的作用。
利用高效液相色谱法进行丹皮酚的含量测定。
分析时,为了减少实验条件波动对分析结果的影响,常采用随行外标一点法。
三、仪器与试剂1.仪器双槽层析缸、玻璃板10×10cm(厚3mm)、毛细管2µL、研钵、喷雾瓶50mL、电吹风、电子天平、三用紫外线分析仪、液相色谱仪、微量注射器、C18反相色谱柱、棕色量瓶(25mL,50mL)、吸量管、超声提取器。
2.试剂硅胶GF254、氯化钠、三氯化铁、盐酸、甲醇、乙醇、环己烷、乙酸乙酯、重蒸馏水等。
3.试药牡丹皮药材、丹皮酚对照品。
四、实验内容与步骤(一)定性鉴别1.硅胶GF254薄板的制作:称取硅胶GF2541份与3份0.3%的羟甲基纤维素钠放入研钵中,研匀,倒入涂布器中,进行涂布(厚度为0.25~0.5mm),取下涂好薄层的玻璃板,于温室下,置水平台上晾干,于110℃烘30分钟,冷却后放入干燥器中备用。
2.供试品制备:取本品粉末1g,加乙醚10ml,密塞,振摇10分钟,滤过,滤液挥干,残渣加丙酮2ml使溶解,作为供试品溶液。
3.对照品制备:取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。
4.点样:用毛细管吸取上述两种溶液各10µl,分别点于同一硅胶G254薄层板上。
5.展开:以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂,上行展开,其展距5~7cm。
牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别
第一部分方案设计
一、实验目的
1.中药的薄层定性鉴别自主设计和实验方法
2.掌握薄层色谱法在中药分析中的应用
3.掌握高效液相色谱仪在中药分析中的应用
二、实验原理
丹皮酚是牡丹皮主要挥发性成分之一,是一种小分子酚类化合物,化学名2-羟基-4-甲氧基苯乙酮,为白色或微黄色有光泽的针状结晶,熔点49~51℃,气味特殊、味微辣、易溶于乙醇和甲醇,在热水中溶解,不溶于冷水。
丹皮酚可吸收UV光,在硅胶GF254薄层板上形成暗斑,用对照药材与对照品进行对照,可起到鉴别牡丹皮中丹皮酚的作用。
利用高效液相色谱法进行丹皮酚的含量测定。
分析时,为了减少实验条件波动对分析结果的影响,常采用随行外标一点法。
三、仪器与试剂
1.仪器双槽层析缸、玻璃板10×10cm(厚3mm)、毛细管2µL、研钵、喷雾瓶50mL、电吹风、电子天平、三用紫外线分析仪、液相色谱仪、微量注射器、C18反相色谱柱、棕色量瓶(25mL,50mL)、吸量管、超声提取器。
2.试剂硅胶GF254、氯化钠、三氯化铁、盐酸、甲醇、乙醇、环己烷、乙酸乙酯、重蒸馏水等。
3.试药牡丹皮药材、丹皮酚对照品。
四、实验内容与步骤
(一)定性鉴别
1.硅胶GF254薄板的制作:称取硅胶GF2541份与3份0.3%的羟甲基纤维素钠放入研钵中,研匀,倒入涂布器中,进行涂布(厚度为0.25~0.5mm),取下涂好薄层的玻璃板,于温室下,置水平台上晾干,于110℃烘30分钟,冷却后放入干燥器中备用。
2.供试品制备:取本品粉末1g,加乙醚10ml,密塞,振摇10分钟,滤过,滤液挥干,残渣加丙酮2ml使溶解,作为供试品溶液。
3.对照品制备:取丹皮酚对照品,加丙酮制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液。
4.点样:用毛细管吸取上述两种溶液各10µl,分别点于同一硅胶G254薄层板上。
5.展开:以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂,上行展开,其展距5~7cm。
取出,晾干。
6.显色:喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液,加热至斑点显色清晰。
7.检视:供试品色谱中,在与丹皮酚对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝褐色斑点。
(二)含量测定
1. 色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(45:55)为流动相;检测波长为274nm。
理论板数按丹皮酚峰计算应不低于5000。
2. 对照品溶液的制备:精密称取丹皮酚对照品适量,加甲醇制成每1ml含20µg的溶液,即得。
3. 供试品溶液的制备:取本品粗粉约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,摇匀,称定重量,超声处理(功率300W,频率50kHz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。
精密量取续滤液1ml,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
4. 测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪,测定,并计算含量。
五、注意事项
1.自制的薄层板应平整、均匀、无麻点、无气泡、无污损。
2. 展开用的层析缸要洗净烘干,放入板之前,要先加展开剂,盖上表面皿,让烧杯内形成一定的蒸气压。
点样的一端要浸入展开剂0.5cm 以上,但展开剂不可没过样品原点。
当展开剂上升到距上端0.5-1cm 时要及时将板取出,用铅笔标示出展开剂前沿的位置。
3.在使用高效液相色谱仪前,应了解仪器的结构、功能和操作程序。
其开机时先打开工作站,排气泡后再连接泵,最后连接检测器,关闭程序与开机相反。
第二部分综述
丹皮酚在现代医学中有广泛的应用价值。
其具有镇痛、抗炎、解热和抑制变态反应的作用。
对压尾、醋酸等物理或化学因素所致的疼痛,具有明显的镇痛作用。
对由角叉菜胶、蛋清、甲醛、组胺、5-羟色胺、缓激肽、二甲苯及内毒素等所致的炎症反应,具有明显的抑制作用。
对伤寒菌苗、三联疫苗等引起的体温升高,具有明显的解热作用。
对II、III、IV型变态反应均具有抑制作用。
同时具有镇静、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血压等作用,在日化方面,丹皮酚能抑制细胞内O2-自由基产生,能使皮肤增白,将皮肤中沉积色素还原退色,消淤化斑;同时也具有消炎、消肿止痛、抗过敏、抗病毒等作用。
对色斑、肌肉痛、皮肤瘙痒、牛皮癣、带状疮疹、湿疹具有较好的治疗和保健效果,此外,在牙膏、含漱液、牙粉、牙痛水中有较好的作用。
所以对牡丹皮中丹皮酚的鉴别有很好的研究价值。
丹皮酚为白色或微黄色有光泽的针状结晶,无色针状结晶(乙醇),熔点49℃-51℃,气味特殊,味微辣,易溶于乙醇和甲醇中,溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中,稍溶于水,在热水中溶解,不溶于冷水,能随水蒸汽挥发。
丹皮酚可随水蒸气蒸馏,且在紫外光区有强烈吸收,在274nm波长处E(1% 1cm)为862,利用此性质可用紫外分光光度计进行测定。
[1]
在本实验中采用薄层层析法进行定性鉴别,薄层层析可用于证实两个化合物相同;测定混合物中组分的数目;决定适用于柱层析分离
用的溶剂;监控柱层析分离;检查通过柱层析、结晶或萃取所达到的分离的有效程度;跟踪一个反应的进程等。
薄层色谱可随时改换展开剂、展开方向,随时衍生、显色、观察、检测,方法开发快;灵敏度及分辨率高、分离快速、操作方便、同时分离多个样品、样品预处理简单、设备简单等特点。
薄层色谱法应用在药物领域的研究已趋成熟,尤其在质控方面已有许多的报道。
采用TIC扫描法测定银杏叶浸膏中白果内酯的含量,可得到平均回收率为99.83%(RSD=1.78%)的结果。
该法较高效液相色谱分析简便易行,不需繁杂的前处理,精确度高,可用于银杏叶浸膏的质量控制。
例如采用同一块薄层板,同一种展开剂可同时鉴定葛根、黄芩、黄连三味药,并可采用薄层色谱扫描法对葛根素进行定量。
该法定性鉴别简便快速、专属性强、重现性好。
[2]本实验采用高效液相色谱法进行含量测定,杨洁等采用HPLC法,结果显示丹皮酚在0.01~0.55 μg/ml范围内线性关系良好(r = 0.999 6) ,平均回收率99.87% ,RSD 为1.46%。
该法简便、快速,重现性好,精度高,适用于牡丹皮中丹皮酚的定量分析。
实验中试用不同体系和比例的流动相,如甲醇-磷酸,甲醇醋酸水,结果以甲醇醋酸水溶液为流动相时丹皮酚的分离效果最好。
李海燕等以甲醇0. 5%磷酸(60∶40)为流动相,检测波长274 nm下应用反相高效液相色谱法对丹皮酚含量进行测定,其检测效果也较为理想。
[3]综合文献资料,采用薄层色谱法进行定性鉴别,高效液相色谱法进行含量测定。
参考文献:
[1]国家药典委员会,中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005.
[2]杨洁,贾国强,刘萍,等.HPLC法测定不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量[J].科学技术与工程,2006,6(3):299.
[3]李海燕,陈小坚. 牡丹皮中丹皮酚含量动态变化研究[J].时珍国医国药, 2000, 11(3):197。