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支原体清除实验支原体污染是细胞培养过程中的常见现象。
细胞被支原体污染之后，在显微镜下无法直接观察到，生长状态可能发生或不发生改变，因此一般不易被察觉。
但是支原体会改变细胞的很多生长参数，因而极易对后续实验造成影响，所以对支原体污染的检测和清除非常重要。
以下为一次支原体检测和清除的实例。
材料：细胞系：SH-SY5Y支原体PCR检测试剂盒：Myco-P-20 (上海炎熙生物 )支原体清除剂：Myco-E-1 (上海炎熙生物 )方法与结果：1，将已检测出有支原体污染的SH-SY5Y细胞以正常传代密度铺到6孔板中，一个孔加清除剂，作为测试孔，另一孔不加清除剂，作为阴性对照孔。
两孔之间间隔一个孔，以免互相污染。
2，在清除支原体的过程中细胞以常规方法传代培养，并使细胞在培养过程中一直处于清除剂的作用下。
在加清除剂后第4、8、9、11天各取1毫升培养上清。
每份上清与细胞已共培养48小时，除第9天的上清只共培养了24小时。
3，将这些培养上清在16000g离心5分钟，小心去除离心上清，将沉淀用无菌PBS洗三次，每次以16000g离心5分钟。
最后获得的沉淀用100微升纯水重悬，在100℃水浴中孵育5分钟，然后用于PCR反应。
4，按照支原体检测试剂盒Myco-P-20的说明书进行PCR检测操作，结果如下：4.1，与对照样品共同反应，用这种方式可以判断是否出现了假阴性结果。
在加清除剂后第4天的样品中仍可见到支原体阳性条带（约440bp），在第8、9、11天的样品中，已看不到支原体阳性条带。
4.2，不加对照样品，检测样品单独反应，用这种方式可以提高测试灵敏度。
可见在第8天和第9天的样品中，支原体阳性条带仍然出现，但是弱于第4天的样品。
在第11天的样品中，有明显的200bp以下的非特异的条带，且亮度高于阳性条带，所以判断此时的PCR产物是非特异反应的产物，样品中已没有支原体DNA。
注释：由于PCR是一种非常灵敏的检测方法，所以很容易出现假阳性条带。
猪细小病毒种子批中污染的猪鼻支原体的清除作者：郭龙飞燕贺杨霞高东生陈陆常洪涛王新卫赵军王川庆来源：《江苏农业科学》2014年第11期摘要：支原体是细胞和病毒培养中常见的污染物，本研究尝试使用滤膜过滤法、反复多次冻融法、支原体抑制药物M-plasmocin处理法、氯仿抽提法等4种方法清除猪细小病毒种子批中污染的猪鼻支原体，并对4种方法的清除效果进行比较。
结果表明，支原体抑制药物M-plasmocin处理法与氯仿抽提法效果较好，支原体抑制药物处理84h以及氯仿与被支原体污染的猪细小病毒液作用5min均能彻底清除猪细小病毒种子批中污染的支原体。
本研究筛选出的清除猪细小病毒中支原体方法为非囊膜类病毒种子批中支原体的清除提供了依据。
关键词：种子批；支原体；猪细小病毒；氯仿；M-plasmocin中图分类号：S852.65文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）11-0222-03生物制品是控制传染病的有效工具。
病毒种子批是制造生物制品的基础，其直接关系到生物制品的质量。
许多需要借助体外细胞培养增殖的病毒常因载体细胞受到支原体污染而被污染，致使生物制品报废[1]。
支原体（Mycoplasma）是大小介于细菌和病毒之间的一类无细胞壁的原核细胞微生物，一般过滤除菌方法无法去除，因此支原体污染一般难于消除，约有30%～50%的细胞培养物中有支原体污染[2]。
国内外研究结果表明，细胞培养中主要有口腔支原体、精氨酸支原体、猪鼻支原体、发酵支原体、梨支原体和莱氏无胆甾原体等支原体污染[3-5]。
支原体污染会导致细胞生长缓慢，从而影响需要借助细胞培养的病毒增殖，病毒种子批的建立，疫苗和相关生物制品的生产。
被支原体污染有的病毒种子批接种细胞后，支原体多吸附于细胞表面或散在细胞之间，通过竞争营养和分泌有毒代谢产物影响细胞的生理特性，常会误以为是病毒繁殖造成的病变效应，使研究结果的真实性和可靠性大大下降[6]。
利用被支原体污染的细胞增殖病毒时会干扰病毒的复制、影响病毒滴度[7]，进而影响疫苗的免疫效果，并可导致免疫抑制[8]。
应用PCR技术检测细胞培养或生物制品中的支原体污染胡孟冬;唐颂恩
【期刊名称】《国外医学：预防．诊断．治疗用生物制品分册》
【年(卷),期】1996(19)3
【摘要】本文介绍了应用PCR技术检测细胞培养和生物制品中支原体污染的研究进展。
作者从标本处理、引物选择、反应条件和两步法PCR等方面论述了PCR检测支原体污染物的要点。
与培养法和DNA荧光染色法相比,PCR具有高度敏感、特异、快速并能鉴定污染种别的优点。
作者最后指出,在操作中,应严格执行实验室规范,以免产生假阳性结果。
【总页数】5页(P110-114)
【关键词】生物制品;细胞培养;聚合酶链反应;支原体
【作者】胡孟冬;唐颂恩
【作者单位】美国菌种保藏中心
【正文语种】中文
【中图分类】R392-33
【相关文献】
1.应用PCR技术检测兽医生物制品中污染病毒的研究 [J], 朱善元
2.应用PCR技术检测细胞培养或生物制品中的支… [J], 胡孟冬
3.应用巢式PCR检测细胞培养物中的支原体污染 [J], 张曦;滕峥
4.应用SYBR Green Real Time PCR技术检测细胞培养物中支原体污染 [J], 丁敏;张瑞婷;毛开荣;朱鸿飞
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现代医院2021年2月第21卷第6期Modern Hospitals Fed2000Vot21No6一种新的抗生素联合用药方案清除细胞支原体污染的研究黎少梁永康冯思桦彭青高毅【摘要】目的支原体污染是细胞培养过程中最为常见也较为棘手的问题，因此，解决细胞支原体污染问题存在必要性和迫切性。
但是目前可用的商品化去除支原体试剂选择少，价格贵，本研究拟探索一种操作简单，成本低且去除支原体效果佳的抗生素联合用药方案。
方法选取四种抗生素药物联合用药：红霉素、氯霉素、泰乐菌素和环丙沙星，连续2天处理培养支原体污染的C5A肝癌细胞。
首先通过倒置显微镜观察加药处理后，C5A细胞内颗粒、形态等变化；加药处理C3A细胞后通过CCK-8法检测其活率。
其次,进行支原体聚合酶链式反应(PCR)检测和荧光染色，评价抗生素联合用药方案去除支原体的有效性。
最后，实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测C3A细胞主要功能基因角蛋白(CK18)、白蛋白(ALB)、氨甲酰磷酸合成酶l(CPSl)和细胞色素P454酶系1A2(CYP1A2)等功能基因的表达恢复情况。
结果经抗生素联合用药处理后，细胞形态更为规整，胞内颗粒显著减少，形态透亮折光度增强等特征变化，对C3A细胞活率无明显影响，抗生素联合用药组PCR电泳结果显示没有支原体DNA条带，同时荧光结果表明没有出现其余点状或者串点的支原体荧光，支原体去除后功能基因CK18、ALB、CPS1和CYP1A6相对表达量均升高。
结论新的抗生素联合用药方案能够达到支原体去除效果,C3A细胞活率维持较好,去除支原体后细胞主要功能基因表达可得到恢复提升。
【关键词】抗生素处理；支原体去除；支原体检测；基因表达中图分类号：R678.1；R375+.3文献标志码：A doi：10.3969/j.issn.271-332X.2021.02.041A new cambination of antibiotics heytmeet for cellular mycoplasma cantaminationLA SUan*,LIANG Yonzkan,,FENG SiOua,PENG Qin,,GAO Y,[Abstract]Objective Mycoplasma contamination can cousc c wiUe range of WouUlesome podlems associateX with celt cu U uo in bioloyy oseaoO,it is tbeoforo necessay to Veep celt cu U uo free of mycoplasma contamination.However,tbero are few options to cOooso the cvvilaPte commeoict mycoplasma omovct Uogs wOicO are also expensive.It is Oope to explore c new antibiotic toatwext wOicO is l ow cost；simple-opeotion,an)eXective in mycoplasma removal.Methods A new antibiotic toct-mext was combineX with four antibiotic Uogs incluUing eothomyciu,cOloompOexicot,tylosiu anU cipo2oxcciu,wOicO was ap-plieX in C3A celt Une contaminateX by mycoplasma for16days.First of alt,we odseoeX the cOanges of the paOicles anU moo of C3A celt afer treatment of the new combination antibiotic Uogs thouah an inveOeX microscope；the viaPility of C3A celt was UetecteX by celt connting Vit-8(CCK-8)assay afer toatwext.Moreover,polymerase cOain reaction(PCR)Uetec-tion an)fnooscext staininu of mycoplasma were peOormeX to evaluate wOetbes the new combination antibiotic Uoas could remove mycoplasma contamination.Finally,oct-tine quantintive PCR(qPCR)metboP was useX to Uefine the recovery of the main functional uenes expression incluUing cytoPeotin13(CK13),albumin(ALB),ccmamoyl pOospUate syptheWse I(CPS1)anU Cuman cytocOome P4501A6(CYP1A2).RescUs Ates the treatment of new combination antibiotic Uoas,more oyulcs an)uniform celt momholoyicct cOanges were showeX,the suUsequext oXuctions in intocellulcs paOicles an)exUanceX momholoyicct transpaoxey were odseoeX,furthermore no sipnificant eXect on the C3A celt viaPility occoroX.Mycoplasma DNA ban)was no-posexteX by PCR Uetection,anU the fnooscence results inUicateX that the C3A celt Vept away from othes spots os cross-points of mycoplasma2uorescexcc•Ater the removal of mycoplasma,the relative expression level of CK13,ALB,CPS1an)CYP1A6 incoaseX.Conclcsion T0e result of mycoplasma removal could be acOieveX by the new combination antibiotic Uoas toatmext with welt-maintaineX viaPility an)restoration of functional uenes expression in C3A celt.[Key words”Antibiotic toatwext；Mycoplasma removal；Mycoplasma Uetection；Gene expression[Author's address]*ZOujiang Hospital of Sontbern MeXicct University,Guangzhon514230,COinc支原体污染是细胞培养、基础研究和生物制品生产等主要问题［一2。
生物制品中支原体污染及清除方法的研究进展杜金玲，王丹娜，石磊，吕超超，王吉玮，孟姗姗，刘长辉，卢会英，赵亚荣（北京大北农动物医学研究中心，北京100097）［收稿日期］2011－09－23［文献标识码］A ［文章编号］1002－1280（2012）02－0057－04［中图分类号］S852．6［摘要］支原体是生物制品污染中较常见的一种微生物，它可以污染细胞、病毒批、血清等制品，给科研及生物制品产业带来危害。
文章简要介绍了支原体污染生物制品后带来的危害，并对清除支原体方法的研究进展进行了综述。
［关键词］支原体污染；危害；清除作者简介：杜金玲，硕士，从事动物传染病疫苗研究。
E －mail ：dujinling@163．comResearch Progress on Mycoplasma Contamination ofBioproducts and the Elimination MethodsDU Jin －ling ，WANG Dan －na ，SHI Lei ，LV Chao －chao ，WANG Ji －wei ，MENG Shan －shan ，LIU Chang －hui ，LU Hui －ying ，ZHAO Ya －rong（Veterinary Medicine Research Center of Beijing Da Bei Nong ，Beijing 100097，China ）Abstract ：Mycoplasmas always contaminate cell lines ，viruses ，serum and other materials for basic research and for manufacturing of bioproducts．It generally considered to be frequent commensals．The article briefly summarized the harm of Mycoplasma contamination in bioproducts ，and reviewed the elimination methods of Mycoplasma contamination．Key words ：Mycoplasma contamination ；harm ；elimination 支原体（Mycoplasma ）属于柔膜体纲，是介于细菌和病毒间的一类无细胞壁的原核细胞微生物，也是目前所知能在无生命培养基中生长繁殖的最小微生物，大小一般在0．3 0．5μm 之间，呈高度多形性。
生物制品中影响支原体检验用培养基效能因素及支原体污染的清除方法[摘要]本文以支原体检验用培养基为重点，系统介绍了支原体的特点及营养需求、支原体培养研究进展、影响培养基检测效能的因素以及支原体在兽用生物制品中污染的预防和清除办法。
支原体是生物制品中较常见的污染物，即使有大量的支原体污染也不会像细菌、真菌那样在普通培养基上明显地观察到，必须有适宜其生长的培养基才行。
因此，对于可检验出与否，培养基的质量是能否检验出支原体污染的关键[1]。
1.支原体特点及营养要求支原体（Mycoplasma）是目前所知的能在培养基中独立生活、自行繁殖的最小生物。
它不同于其他原核生物的重要的特点是没有细胞壁，也不能合成胞壁前体，而是代之以三层结构的单位膜。
支原体具有多型性、可变性、可过滤性、易溶解性、对干扰细胞壁合成的抗生素（如青霉素等）具有天然抗性等生物学特性[2]。
支原体基因组分子量小，生物合成能力有限，因此需要从体外摄取许多能通过细胞膜的大分子物质。
此外，支原体内能量供应机构效率不高，必须从体外摄取大量能源物质，包括葡萄糖、精氨酸和尿素[2]。
以下通过表格列出支原体培养基的一般组成成分及所需营养物质。
表1 支原体培养基的一[3]2.支原体培养基研究进展2.1辅酶Ⅰ（NAD）替代物培养禽类的滑液支原体、鸡败血支原体等时要添加辅酶Ⅰ（NAD），但其属于不耐热物质，配制较麻烦，使培养基质量不稳定。
徐濂等(1986)[7]用烟酰胺替代辅酶Ⅰ，烟酰胺具有耐高压、价格便宜和使用方便的优点，即使在将马血清、葡萄糖用量减少一半的情况下，鸡败血支原体仍能生长良好。
2.2指示剂支原体培养基的常用指示剂为酚红，但其变色范围的pH较高（pH6.8-8.4），支原体生长后，培养基颜色变化较快，观察时间短且易出现假阳性结果。
唐七义等(1992)[4]在培养莱氏支原体时加入溴甲酚紫作为指示剂（变色范围的pH较低，pH5.2~6.8）,使实验结果易于观察。
生物制品中支原体污染及清除方法的研究进展杜金玲，王丹娜，石磊，吕超超，王吉玮，孟姗姗，刘长辉，卢会英，赵亚荣（北京大北农动物医学研究中心，北京100097）［收稿日期］2011－09－23［文献标识码］A ［文章编号］1002－1280（2012）02－0057－04［中图分类号］S852．6［摘要］支原体是生物制品污染中较常见的一种微生物，它可以污染细胞、病毒批、血清等制品，给科研及生物制品产业带来危害。
文章简要介绍了支原体污染生物制品后带来的危害，并对清除支原体方法的研究进展进行了综述。
［关键词］支原体污染；危害；清除作者简介：杜金玲，硕士，从事动物传染病疫苗研究。
E －mail ：dujinling@163．comResearch Progress on Mycoplasma Contamination ofBioproducts and the Elimination MethodsDU Jin －ling ，WANG Dan －na ，SHI Lei ，LV Chao －chao ，WANG Ji －wei ，MENG Shan －shan ，LIU Chang －hui ，LU Hui －ying ，ZHAO Ya －rong（Veterinary Medicine Research Center of Beijing Da Bei Nong ，Beijing 100097，China ）Abstract ：Mycoplasmas always contaminate cell lines ，viruses ，serum and other materials for basic research and for manufacturing of bioproducts．It generally considered to be frequent commensals．The article briefly summarized the harm of Mycoplasma contamination in bioproducts ，and reviewed the elimination methods of Mycoplasma contamination．Key words ：Mycoplasma contamination ；harm ；elimination 支原体（Mycoplasma ）属于柔膜体纲，是介于细菌和病毒间的一类无细胞壁的原核细胞微生物，也是目前所知能在无生命培养基中生长繁殖的最小微生物，大小一般在0．3 0．5μm 之间，呈高度多形性。
在医学和兽医学上，支原体是一类重要的病原微生物，对人类、猪、牛、禽和实验动物等有广泛的致病性，也是生物制品污染物中比较常见的一种。
细胞、病毒种子批、血清等的支原体污染均给科研、疫苗生产及生物制品产业带来很多麻烦，甚至造成事故。
我国药典三部和欧洲药典都明确提出要对生物制品生产用细胞基质、病毒种子批、病毒收获液和细胞建库所用胰酶进行支原体检测［1－6］。
由于支原体高度多形性和可塑性，可通过除菌滤膜，因此支原体污染一般难于清除。
广大科研工作者在支原体清除方面进行了大量的探索和研究，试图寻求一种简单，有效的清除支原体方法，本文就支原体污染及清除方面的研究进展进行了综述，以为借鉴。
1支原体污染的危害细胞、病毒种子批、血清、鸡胚、组织、原材料等被支原体污染给科研和生产造成严重的危害［7－8］。
尤其是细胞被支原体污染更是世界性难题，在细胞培养中支原体感染发生率可达30% 50%，若不及时处理，还会产生交叉污染，造成极大的半成品和成品报废［9－10］。
目前能污染细胞的支原体多达20种以上，细胞污染支原体后，部分敏感细胞可见生长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落，但多数细胞污染后无明显变化。
支原体主要是依靠附着在宿主细胞表面，通过与细胞竞争培养液中的单糖，氨基酸和核酸前体物质及产生代谢产物使细胞代谢发生一系列改变，从而使细胞表现出一些特殊的功能，而一些正常的功能则被抑制。
污染时间的长短及核酸代谢改变决定了支原体污染造成的危害程度。
某些支原体附着在细胞表面后，会与宿主细胞交换膜抗原成分，随着细胞膜成分的改变，细胞形态及抗原性发生改变，会影响细胞抗原性。
支原体污染还会干扰细胞的筛选，如污染支原体的骨髓瘤细胞会导致融合失败；污染支原体的杂交瘤细胞会使生长受到抑制或使抗体分泌能力下降以致丧失［11－12］。
细胞是制备疫苗的主要载体之一，支原体可通过污染细胞系危害各种生物制品，由于支原体与病毒大小相当，具有滤过性，可引起细胞病变，通过竞争营养和抑制干扰素分泌等机制，产生有毒的代谢产物，显著影响生产用细胞的培养及相应生物技术的发挥，干扰病毒复制，影响疫苗病毒的产量［13］，并诱导机体产生免疫抑制［14］。
在疫苗制造中，常会误以为是病毒繁殖造成的病变效应而导致虚假的效力测定结果，影响病毒真正滴度的测定，使研究结果的真实性和可靠性大大下降，给生物药剂及疫苗等的使用带来危险，甚至导致疾病的传播，直接危害人体健康［15－18］。
2支原体的清除一般在生物制品中，一经发现有支原体污染，最好是及时灭活弃之。
但对于一些无可替代或不可复得的珍贵细胞系和种毒等被污染还应尽力考虑支原体的清除［19］。
表1概括近些年广大工作者在支原体清除上做出的尝试，现就其中几种常用的方法予以介绍。
表1清除支原体方法概括作用性质具体方法物理清除法微型过滤器过滤；辐射；清洗纯化法；加温处理法化学试剂处理清除法清洁剂处理；乙醚、氯仿苯乙醇等有机溶剂处理；甲基乙酸处理；多聚对苯烯基甲醚钠处理法；6－甲基嘌呤脱氧核苷处理法免疫学清除法巨噬细胞吞噬法；裸鼠体内接种法；特异性抗支原体抗体处理法；补体结合处理法；细胞克隆化学治疗清除法抗生素处理；抗生素+免疫球蛋白/巨噬细胞；软琼脂+抗生素2．1抗生素处理法抗生素处理是清除支原体最常用也是最有效的方法，但支原体对大多数常用抗生素都能产生抗性，另外受污染后的细胞在生理、生化、遗传诸方面都已发生变化，因此选择抗生素消除支原体污染时，要根据支原体的种、株来定，所选择抗生素的某一浓度要即能消除支原体污染，又不能对细胞产生毒性。
目前市场已有的产品如BM－cyclin、MC－210及Ciprofloxacin、M－Plasmocin 等，这些药单独或联合使用，在抗支原体方面取得一定效果，但由于价格昂贵来源有限，很难广泛推广使用。
此外enrofloxacin（恩诺沙星）、sparfloxacin （司氟沙星）、卡那霉素、四环素、庆大霉素、链霉素、金霉素、氯霉素、新霉素B、巴龙霉素等应用也较广泛，作用效果良好。
在实际应用中，多是联合使用几种抗生素，切记长时间使用同一抗生素，以防抗药性产生。
通常将细胞培养在无抗生素的培养基中，加入各种针对支原体的抗生素，连续培养7d，做为一个循环，一般需3个或更多个循环。
培养结束时，再进行支原体检测，连续数次均为阴性，即可证明支原体已被清除［20－25］。
2．2化学介质克隆法克隆法即有限稀释法，将污染支原体的细胞以6－MPDR（6－甲基嘌呤脱氧核苷）进行有限稀释，浓度为20μmol/L时最佳，接种于96孔培养板，使每孔只接种一个细胞，经连续三次的克隆化培养，每次克隆化期间，间隔2 4d 换半量培养液，进行再克隆，通过稀释分离出未受支原体感染的细胞传代。
此法实际并非是真正清除支原体，而是通过有限稀释和检测，从污染的细胞株中分离出未受污染的细胞再重新克隆传代，所以有可能获得性状未发生变化的克隆化细胞株，因此具有重要意义。
2．3清洗纯化法离心洗涤法是利用离心力、细胞和支原体质量及悬液的浮力差达到清除支原体的目的。
主要是通过换液降低单位污染量，由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生，所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液，使其中潜在的支原体数量降低至极限。
一般常采用PBS等缓冲液冲洗细胞，冲洗后可以见不少小黑点被去掉了，再经600r/min3min，大部分的细胞会被离心下来，然后再结合敏感抗生素的抑杀作用和重复的清洗传代，可达到清除支原体的目的［26］。
2．4加温处理法支原体耐热性较差，在56ħ条件下，30s内半数死亡；在45ħ环境中，15 30min 内全部死亡。
以支原体和培养细胞之间对温度耐受性的差别为基础，将污染了的细胞培养物在41ħ持续加温，依据支原体种类的不同，加温时间亦有所不同，直至支原体死亡，培养细胞虽也会发生形态的变化，但降到正常温度后可复原。
买霞等［27］将污染了支原体的人胃低分化粘液腺癌细胞系（MGC80－3）放入41ħ温箱中，每隔2h在倒置光显微镜下观察细胞形态变化，加温作用8h细胞表面的支原体较对照组有所减少，随作用时间的延长，支原体治疗的效果更加明显，作用16h时细胞表面及其周围的支原体几乎消失。
另外Kotani［28］利用软琼脂技术，经50ħ加热（4 6min）灭活污染细胞的支原体，再于37ħ培养13d，使琼脂中抗生素与支原体进一步作用，使热灭活的支原体彻底被清除。
苏国华［29］在相对湿度为88%，温度45ħ的条件下经过48h的热处理，结果彻底消除了种蛋中的支原体，而且热处理对孵化率无明显影响。
宁宜宝等［30］连续报道了以热力清除普通鸡蛋中支原体污染在实际中的应用，经热力处理过的鸡胚用于制造疫苗，不影响疫苗效力，其血凝也较同批对照组高1 4倍。
因此加温处理法也成为解决普通蛋制苗中支原体污染的一个简便易行的方法。
2．5特异性血清处理法血清中含有一些天然的抗微生物成份，未灭活的血清对污染细胞中的支原体有杀灭作用。
多克隆的抗血清更是有可以消除细胞中的多种支原体污染。
采用人及动物血清中的补体或抗支原体抗体与污染细胞株于体外培养，使之与支原体结合并裂解破坏支原体。
杨吉成等［31］用5%的兔支原体免疫血清去除支原体污染，经抗血清处理后11d即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。
2．6接种动物法如果是肿瘤细胞和杂交瘤细胞被支原体污染，则将细胞接种到同种系动物皮下或腹腔，或接种于裸鼠腹腔，利用动物体内免疫系统杀伤支原体。
常用的动物裸鼠是先天性胸腺缺陷的突变小鼠，其T细胞缺陷导致特异性细胞免疫功能丧失，B细胞功能正常，非特异性细胞免疫系统NK细胞活力强，故可用于肿瘤细胞的污染清除。
通常待肿瘤长至1．0 1．5cm时，利用肿瘤组织重新进行培养，获得细胞系。
刘玉琴等［17］将两种污染支原体的人鼻咽癌CNE22Z和小鼠前胃癌MFC 细胞，接种到裸鼠，新获得的细胞经PCR法支原体检测均为阴性。
2．7巨噬细胞吞噬法利用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬法处理支原体污染的细胞简便效果好，而且取材容易且经济，适用于救治受支原体严重污染的各种珍贵细胞系或细胞株，一般经过连续二至三轮巨噬细胞吞噬处理后，即使受支原体污染严重的细胞亦可以完全消除污染，使细胞恢复原有的生长活力和正常形态。
