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细胞培养中的支原体污染的预防及处理Mycoplasma国内主要有三种译名，医学文献译为“支原体”（分枝原体，枝原体，类菌质体），动物医学文献译为“霉形体”或“支原体”，台湾、香港则译为微浆菌。
支原体是目前已知一类能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。
自然界分布广泛，种类多，有80余种，分为两个属：一为支原体属（Mycoplasma），有几十个种；另一为脲原体属（Ureaplasma），仅有一种。
与人类感染有关的主要是肺炎支原体和解脲脲原体。
支原体无细胞壁，多呈不规则球状、长丝状，可分枝，营寄生共生或腐生。
一般侵害对象为动植物，可造成多种疾病。
细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。
国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和菜氏无胆甾原体（idlawii），为牛源性。
国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。
支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染（某些支原体在人体是正常菌群）、培养基的污染、被污染细胞造成的交叉污染、实验器材的污染、制备细胞的原始组织或器官的污染，等等。
体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。
对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。
对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。
由于体外培养细胞自身没有抵抗污染的能力，而且培养基中的抗生素抗污染能力有限，因而培养细胞一旦发生污染多数将无法挽回。
支原体污染后，因为它们不会使细胞死亡可以与细胞长期共存，培养基一般不发生浑浊，细胞无明显变化，外观上给人以正常感觉，实则细胞手到多方面潜在影响，如引起细胞变形，影响DNA合成，抑制细胞生长等。
甲：细胞里突然出现小黑点，问君能有几多愁?乙：珍贵的细胞萎靡不振，扔了重买?相顾无言，惟有泪千行。
丙：细胞转染效率极低，实验结果遥遥无期，我的课题前功尽弃!但见泪恨湿，不知心恨谁!细胞培养中，最怕的就是生物污染，支原体污染就是其中的一种。
支原体这种微小的微生物，是细胞培养中令人头疼的大问题。
支原体结构也比较简单，多数呈球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，故具有较大的可变性。
支原体污染可能来自培养基、血清或实验操作者，会影响细胞生长率、细胞形态、基因表达、细胞代谢和细胞活力。
支原体感染不易察觉，因此对培养细胞定期进行支原体检测就非常重要。
污染实验室培养细胞的支原体主要有八种，但还没有哪种检测方法能够单枪匹马把这八种支原体都检测出来。
支原体非常顽强，通常用于细胞培养的绝大多数抗生素都对其无效。
例如青霉素主要作用于细菌细胞壁，但支原体没有细胞壁因此就不受影响。
无懈可击的细胞培养技术始终是预防支原体感染的最佳方式，另外及时找出受到支原体感染的培养物也很重要，这样才能在感染扩散前快速采取有效措施。
支原体污染在细胞培养中实际上是比较常见的，可达30%甚至更高。
支原体污染时细胞表现为长得不好，也不死亡，同时，培养基又是清亮的，时间长达一周也没有什么变化，这时基本上可以判断出是支原体污染了。
定期检测支原体感染会使培养细胞慢慢枯萎，因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。
一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。
将定期支原体检测常规化坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。
预防支原体污染的建议：细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作;细胞培养基和器材要保证无菌;在细胞培养基中加入适量的抗生素。
支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有：抗生素处理抗血清处理抗生素加抗血清和补体联合处理支原体最突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如内酰胺类、万古霉素等完全不敏感;对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。
支原体感染危害及预防措施支原体感染是一种常见的细菌感染疾病，可引起多种疾病，包括肺炎、气管支气管炎和生殖道感染等。
具有很高的传染性，容易通过空气飞沫和密切接触传播。
本文将介绍支原体感染的危害及预防措施。
一、支原体感染的危害支原体感染的危害主要体现在以下几个方面：1. 呼吸道感染：支原体感染可引起呼吸道疾病，如肺炎、支气管炎等。
在感染后，患者常常出现咳嗽、咳痰、咽痛等症状，严重时可导致呼吸困难，严重影响日常生活。
2. 生殖道感染：支原体感染还可引起生殖道疾病，如尿道炎、宫颈炎等。
女性患者可能会出现白带异常增多、异味以及阴道瘙痒等症状，严重时可引起盆腔炎症。
3. 眼部感染：支原体感染还可导致结膜炎，患者可能会出现眼红、眼痒、流泪等症状，严重时可影响视力。
4. 关节炎：一些支原体感染还可引起关节炎，患者可能会出现关节红、肿、疼痛等症状，影响关节活动能力。
二、支原体感染的预防措施对于支原体感染，我们可以采取以下措施进行预防：1. 加强个人卫生：保持良好的个人卫生习惯，包括勤洗手、勤换洗衣物、保持室内空气流通等，有助于减少病菌的传播。
2. 避免密切接触：尽量避免与已经感染支原体的人密切接触，特别是在其症状明显时。
避免使用他人的个人物品，并注意避免与呼吸道有感染的人分享餐具和杯子。
3. 良好的饮食习惯：保持良好的饮食习惯，注意均衡饮食，增加对抵抗力的养护。
多食用富含维生素和矿物质的新鲜蔬菜水果，同时远离辛辣刺激性食物，有助于提高免疫力。
4. 健康生活方式：保持良好的生活习惯，适度运动，保证充足的睡眠，提高身体素质和免疫力，降低感染的风险。
5. 定期健康检查：定期进行健康体检，如定期进行妇科、泌尿科等相关检查，早期发现和治疗感染，有助于避免并发症的发展。
总结起来，支原体感染是一种常见的细菌感染疾病，具有较高的传染性。
为了预防该疾病的发生，我们应该加强个人卫生意识，避免与感染者密切接触，保持良好的饮食习惯和生活方式，定期进行健康体检等。
白色念珠菌污染革兰氏染色阳性中间长梭型的是正在分裂的念珠菌生命经纬网友布兰卡的观点为：我个人感觉，操作之前酒精擦手消毒非常重要，因为环境再差，无菌台里一般是没问题的，但是，污染往往在这里操作时发生，因此，个人手的卫生非常重要，白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类（尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着），我认为绝大多数污染是我们自己带进去的，因此，如果环境不是太差，那就找找自身的原因。
生命经纬网友dsh1205的观点为：灭菌水,是否有必要我也不太肯定。
其实这一点是很容易办到的，有总比没有好。
多注意一些可能的因素，对细胞总是有力的。
被污染总是很麻烦的，细胞长得不好不说，还影响实验进程。
我认为有两个环节很重要，操作台及温相。
我们操作前、后都要紫外杀菌30min，而且保持操作台通风设施正常。
我们的温相好像从来没有用酒精擦过，更没用紫外照射。
我们开温相时，先清洁剂洗手，在酒精擦手，范围与手术洗手差不多，时间一般在几秒内。
另外，我自己将瓶放回相中时，还对瓶体进行酒精擦洗。
当然还有给细胞换液也要注意了，吸管尽量不要深入瓶内，要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。
HepG2细胞，荧光染色检测支原体支原体污染检测在上面的支原体检测图片里没大片的针状点，但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体，可是要有也不应该就这么几个啊？（细胞一共培养了40小时）生命经纬网友bianmin8024认为：这么大面积的污染，你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
其实我觉得在每次试验前，最好简略写一下操作步骤做到心中有数。
这样可以避免实验中的忙乱。
既然现在已经污染了，就全部更换你的器皿。
培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。
以上图片细胞系念珠菌污染处理办法：扔掉，善后办法，养成良好的无菌操作的习惯，拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。
支原体感染的危害支原体是一类寄生病原体，主要通过呼吸道传播，引起支原体感染。
该病原体可以感染人类的多个器官和系统，对人体健康产生严重的危害。
本文将详细介绍支原体感染的危害，并提出预防和治疗建议。
一、呼吸系统危害支原体感染最常见的危害之一是对人体呼吸系统的侵害。
感染可引起呼吸道炎症，包括喉炎、气管炎、支气管炎和肺炎等。
患者常常出现咳嗽、咳痰、呼吸困难等症状。
严重的支原体感染可导致肺部感染并引发肺炎，对老年人、婴儿和免疫功能较弱的患者尤为危险。
二、生殖系统危害除了呼吸系统，支原体感染也可危害人体的生殖系统。
在女性中，支原体感染可以引起宫颈炎、子宫内膜炎和盆腔炎等疾病。
这些炎症可能导致不孕、流产和早产等问题，对生育能力造成严重威胁。
而在男性中，支原体感染与前列腺炎和尿道炎等疾病相关，也会对生育能力造成不利影响。
三、关节和心血管系统危害支原体感染还可对关节和心血管系统造成危害。
一些研究发现，支原体感染与风湿性关节炎、类风湿性关节炎和心内膜炎等疾病相关。
这些病症会导致关节疼痛、关节肿胀和心脏功能异常等症状，给患者的生活和健康带来极大困扰。
四、眼部感染危害支原体感染亦可危害人体的眼部。
结膜炎是常见的眼部疾病，由支原体引起的结膜炎常伴有眼结膜充血、眼痛、畏光等症状。
此外，支原体感染还与角膜炎和泪鼻管炎等病症相关。
五、其他系统危害除了以上列举的系统，支原体感染还可能对消化系统、中枢神经系统和循环系统等带来一定危害。
消化系统可能出现腹痛、腹泻等问题，中枢神经系统可能表现为头痛、乏力等症状，而循环系统可能出现心悸、胸痛等异常。
预防和治疗建议针对支原体感染的危害，以下是一些预防和治疗建议：1. 提高个人卫生意识，保持良好的生活习惯，勤洗手、多通风，避免接触患者的呼吸道分泌物。
2. 加强呼吸道感染的防范，避免密集场所和人群，尽量佩戴口罩。
3. 在性生活中使用安全套，并与长期性伴侣进行性病筛查。
4. 如出现上述危害的症状，及时就医并告知医生病史，接受相关检查和治疗。
白色念珠菌污染革兰氏染色阳性中间长梭型的是正在分裂的念珠菌生命经纬网友布兰卡的观点为：我个人感觉，操作之前酒精擦手消毒非常重要，因为环境再差，无菌台里一般是没问题的，但是，污染往往在这里操作时发生，因此，个人手的卫生非常重要，白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类（尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着），我认为绝大多数污染是我们自己带进去的，因此，如果环境不是太差，那就找找自身的原因。
生命经纬网友dsh1205的观点为：灭菌水,是否有必要我也不太肯定。
其实这一点是很容易办到的，有总比没有好。
多注意一些可能的因素，对细胞总是有力的。
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我们操作前、后都要紫外杀菌30min，而且保持操作台通风设施正常。
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我们开温相时，先清洁剂洗手，在酒精擦手，范围与手术洗手差不多，时间一般在几秒内。
另外，我自己将瓶放回相中时，还对瓶体进行酒精擦洗。
当然还有给细胞换液也要注意了，吸管尽量不要深入瓶内，要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。
HepG2细胞，荧光染色检测支原体支原体污染检测在上面的支原体检测图片里没大片的针状点，但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体，可是要有也不应该就这么几个啊？（细胞一共培养了40小时）生命经纬网友bianmin8024认为：这么大面积的污染，你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。
其实我觉得在每次试验前，最好简略写一下操作步骤做到心中有数。
这样可以避免实验中的忙乱。
既然现在已经污染了，就全部更换你的器皿。
培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。
以上图片细胞系念珠菌污染处理办法：扔掉，善后办法，养成良好的无菌操作的习惯，拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。
细胞常见污染图片与鉴别
赛默飞世尔科技（中国）有限公司
ThermoFisher Scientific
图1. 洋葱佰克霍尔德菌污染洋葱佰克霍
尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，
广泛存在于土壤及水中，因引起洋葱患病而得
名，是医院感染病原菌之一。
图2. 白色念珠菌污染常见的细胞污染之一，左侧为倒置显微镜下视图，右侧为革兰氏染色图片，其中，长梭型的是处于分裂期的链珠菌
图3.链球菌革兰氏染色
图4. 真菌感染
图5. 支原体污染煎蛋状和其他形状，左侧：电镜照片(×30k)；右侧：电镜照片（×12k）
图6. 霉菌（丝霉）污染培养基呈淡紫色，或不变色，但会变得粘稠，一般是来自实验服，并且具有季节性，像现在这种长蘑菇的季节很容易污染这种菌类。
图7. 细菌污染倒置显微镜下无法看到细菌的结构（需油镜），污染晚期培养基呈黄色。
当快，源自小鼠毛发中。
源自小鼠的皮肤。
整理总结：细胞培养中的第一大害——————————污染★★★lwf991229(金币+3,VIP+0):不错,很详细,不过有的图片打不开~~污染是细胞培养第一大害！预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
小木虫还没有相关帖子，故而整理和虫子们分享，让我们一起来繁荣小木虫，虫子们觉得好请顺手回个贴！本页图片太多，个别打不开请刷新一下就好了。
细胞污染的类型一、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染。
一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。
即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。
最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。
培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变而呈现黄色。
也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。
所以，每天应仔细观察。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
一般细菌污染进程很快，大约污染一两天后肉眼就能显著观察到。
二、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节进行细胞培养更易污染。
最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。
培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。
念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间（发生卵圆形物体污染的几率很大）。
个体细小，有增多趋势。
镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
三、支原体污染支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。
细胞支原体污染的图片、危害、表现和怎么办（2016年10月16日）一、细胞支原体污染的图片我们首先来认识一下，细胞支原体污染与非污染的图片有什么区别。
如上图所示，左侧为未经支原体清除试剂处理的人Hela细胞,经DAPI染色后，除了细胞核为蓝色外，细胞质也有大量的絮状核酸物质被染成蓝色，这些处于细胞质的核酸物质就是支原体DNA，说明细胞支原体污染非常严重。
而右侧为经过本公司的支原体清除试剂2处理7天的Hela细胞，经DAPI 染色后，除了细胞核为蓝色外，细胞质没有任何絮状核酸物质被染成蓝色，说明支原体已经被清除。
（版权声明：上图来自上海易色医疗科技有限公司网站。
）二、细胞支原体污染的危害和表现细胞支原体污染的危害（1）培养的细胞被支原体污染后，几乎可以改变细胞的所有功能，其可以导致细胞染色体的异常和损伤，改变细胞的代谢、生长、形状、附着，影响病毒的扩增能力和产量等等。
例如，Miller CJ等人通过Microarray的研究表明：支原体污染严重改变被污染细胞的基因表达谱 [1, 2]，支原体污染后与无污染的同一细胞系相比，表达差异达2倍以上的基因就有200多个！！！（详细数据请见参考文献1）。
Edward Burnett 和 Liz Penn认为：被支原体污染的细胞系已经不是原来的细胞系，而是另外一个细胞系了 [3]！此外，严重的支原体污染将彻底摧毁一株细胞系。
从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。
相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
总之，在细胞系上进行生物医学方面的科学研究，如果不能保证所用的细胞系无支原体污染（Mycoplasma-free），则所得出的结论是极端不可靠甚至是完全错误的！可以想象：全球范围内，每年因支原体污染导致白白浪费的科研经费的数量是多么的巨大，有人估计至少高达数十亿美金！细胞支原体污染的危害（2）1. 细胞生物学：支原体污染将直接导致最常用的MTT细胞毒性实验结果的严重错误！●结果：由于支原体对MTT的额外还原作用，对阿霉素（Doxorubicin, 一种抗肿瘤药物）的抗性，支原体污染和非污染的细胞二者相差15倍！（Due to an additional reduction of tetrazolium by mycoplasmas, contaminated cells appeared up to 15 fold resistant to doxorubicin.）●参考文献：Falsification of tetrazolium dye (MTT) based cytotoxicity assayresults due to mycoplasma contamination of cell cultures. Anticancer Res. 1999 Mar-Apr; 19(2A):1245-8.2. 免疫学：支原体污染本身将可以直接诱导树突状细胞的成熟！这对于目前国内外普遍开展的人体免疫细胞的肿瘤治疗将是灾难性的。
●结果：（1）The capacity of these cell lines to induce DC maturation was due totheir contamination by mycoplasma. Our results reveal that DC are able to sense mycoplasma infection and mature as they do in response to most viruses and bacteria.（2）Further investigation demonstrated that the changes in DC phenotype and functions were due to the presence of mycoplasmas in these two cell lines;eradication of mycoplasmas completely abolished the observed effects, and importantly, pure mycoplasmas in the absence of tumor cell supernatants were able to produce the same effects.●参考文献：（1）Dendritic cell maturation is induced by mycoplasma infection butnot by necrotic cells. Eur. J. Immunol. 2000.30: 705–708。
（2）Mycoplasma-mediated alterations of in vitro generation and functions of human dendritic cells. J Biomed Sci. 2005;12(1):31-46.3. 神经生物学：支原体污染本身可以直接降解淀粉样多肽Amyloid-beta (Abeta)！●结果：These data show that mycoplasmas degrade Abeta and thus may represent asignificant source of variability when comparing extracellular Abeta levels in different cell lines.●参考文献：（1）Amyloid-beta peptide degradation in cell cultures by mycoplasmacontaminants. BMC Res Notes. 2008 Jun 30;1:38.（2）Neuroprotective effects of Mycoplasma hyorhinis against amyloid-β-peptide toxicity in SH-SY5Y human neuroblastoma cells are mediated by calpastatinupregulation in the mycoplasma-infected cells. Neurochem Int. 2011 Mar;58(4):497-503.4. 生物化学：支原体污染可以直接影响L-arginine的代谢！●结果：This demonstrates that infection with M. hyorhinis leads to different effectson gene regulation of the murine and human iNOS gene. Our study underlines the importance of routine checking of cell cultures for mycoplasma contamination, particularly in studies on NO-mediated effects or inflammatory processes.●参考文献: Impact of Mycoplasma hyorhinis infection on L-arginine metabolism:differential regulation of the human and murine iNOS gene. Biol Chem. 2005 Oct;386(10):1055-63.5. 病理学：支原体污染可以直接刺激前列腺素E2（Prostaglandin E2）的产生！●结果：Mycoplasma fermentans (MF) also stimulated PGE(2) production. Theco-infection of mycoplasma and Chlamydia resulted in an additive effect in the production of PGE(2). Thus it is important to use host cells and Chlamydia free of mycoplasma contamination for the analysis of Chlamydia-induced prostaglandin production.●参考文献:Production of prostaglandin E2 in monocytes stimulated in vitro byChlamydia trachomatis, Chlamydophilapneumoniae, and Mycoplasma fermentans. MicrobPathog. 2004 Sep;37(3):155-61.三、细胞支原体污染的比例据Corning公司报道，世界各国的细胞系都有不同程度的支原体污染,可以说支原体污染是细胞培养领域的一个世界性问题 [4]。
表1是美国ATCC、FDA、以及其他两家细胞检测机构的支原体污染统计数据。
表2是世界各国的细胞系污染比例。
目前，世界各国细胞系支原体污染的平均比例为30-60%。
表1，细胞支原体污染统计结果，数据来自参考文献 [4]参考文献：1. Miller CJ, Kassem HS, Pepper SD, Hey Y, Ward TH, Margison GP.Mycoplasma infection significantly alters microarray gene expression profiles.Biotechniques. 2003 Oct;35(4):812-4.2. Aldecoa-Otalora E, Langdon W, Cunningham P, Arno MJ. Unexpected presenceof mycoplasma probes on human microarrays. Biotechniques. 2009 Dec;47(6):1013-5.3. Edward Burnett and Liz Penn, European Collection of Cell Culture(ECACC®). Mycoplasma Detection and Elimination. Don Finley, Market Segment Manager, Sigma® Life Science. Biofiles, Vol. 8, No. 184. John Ryan (2008). "Understanding and Managing Cell Culture Contamination".Corning Incorporated. p. 24.四、细胞支原体污染怎么处理发现培养的细胞被支原体污染，将污染的细胞高压蒸汽灭菌，然后丢弃是最好的选择，这样可以避免细胞的交叉污染。
