杜仲中几种活性成分的提取、分离、纯化及测定

中南大学硕士学位论文杜仲中几种活性成分的提取、分离、纯化及测定姓名：贺前锋申请学位级别：硕士专业：分析化学指导教师：陈晓青20040101硕‘ｆ：学位论文摘婴摘要本文研究了中药杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅ０１ｉｖｅｒ）中环烯醚萜类活性成分中的升血压成分（桃叶珊瑚甙，简称ＡＵ）和降血压成分（京尼平甙酸等）的提取、分离、纯化及测定方法：（１）确定了以乙醇水溶液为ＡＵ提取剂的工艺条件。

既用７２％（ｖ／ｖ）乙醇，固液比为１：１２，在６５℃提取三次，每次６０ｍｉｎ，Ａｕ的提取率可达到８５．４８％；（２）研究了利用大孔吸附树脂分离纯化杜仲提取液制备Ａｕ的工艺条件。

常温下，ｓ一８树脂对Ａｕ的吸附性能良好，用５０～６０％的乙醇可以将Ａｕ从ｓ一８树脂上洗脱；（３）确定了改进的对二甲氨基苯甲醛分光光度法测定桃叶珊瑚甙实验条件。

在１ｌＩＩＬ桃叶珊瑚甙溶液中加乙醇溶液２．２ｍＬ，Ｅ一试剂１．６ｍＬ，冰醋酸０．５ｍＬ在６６℃下显色１２ｍｉｎ，常温冷却１０ｍｉｎ，用分光光度法于５９４ｎｍ处检测桃叶珊瑚甙的含量；（４）确定了高效液相色谱法同时测定杜仲中京尼平甙酸、绿原酸、京尼平甙的色谱工作条件。

试验采用反相高效液相色谱柱，考察了流动相中甲醇体积分数、酸性添加剂及ｐＨ值对色谱分离效果的影响，试验发现以甲醇一水一磷酸（１２：８７．９６：Ｏ．０４）为流动相，流速为１．ＯｍＬ／ｍｉｎ时，三种物质的分离最好，在试验条件下，三种成分的的容量因子ｋ７在３—１３之间，样品很好分离，分析时间在３０ｍｉｎ之内，京尼平甙酸、绿原酸、京尼平甙的保留时间分别为６．７ｍｉｎ，１０．５ｍｉｎ，２１ｍｉｎ。

关键词：杜仲，桃叶珊瑚甙，高效液相色谱，提取，测定坝十学位论文ＡＢＳＴＲＡＣＴＡＢＳＴＲＡＣＴＩｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｅｘｔｌ７ａｃｔｉｏｎ，ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｏｆＢｉｏ—ａｃｔｉＶｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎＡｕｃｕｂｉｎ（ＡＵ）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｔ１１ｅＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｏｌｉＶｅＬＴｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｉｓｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆｆｏｕｒｍａｉｎｐａｒｔｓ：（１）ＥｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｃｃｅｓｓｏｆＡＵｗｉｎｌｏｒｇａｎｉｃｓｏｌｕｔｉｏｎ、ｖａｓｓｔｕｄｉｅｄｏｎｄｅｔａｉｌ．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐａｒａｍｅｔｅｒＳｏｆｅＸｔｒａｃｔｉｏｎｉｓｇａｉｎｅｄ：Ｗｈｉｃｈｉｓ７２％Ｅｔ０Ｈ＿Ｈ２０，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｅ船ａｃｔｉｏｎｉｓ６５℃，ｔｉｍｅｏｆｅｘｔｍｃｔｉｏｎｉｓ６０ｍｉｎ，ｔｈｅｒａｔｉｏｏｆｓｏｌｉｄｔｏｌｉｑｕｉｄｉｓ１：１２ａｎｄｔｈｅｅＸｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｉｏｏｆＡＵｃａｎｏｖｅ巾ａｓｓ８５％，ｗｈｅｎｔｌｌｅｔｉｍｅｓｏｆｅ）（ｔｒａｃｔｉｏｎｉｓｍｏｒｅｔ１１ａｎｔｈｒｅｅ．（２）Ｔｈｅｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｗａｓｃｏｍｐｌｅｔｅｄｂｙｍａｃｒｏｔｅｔｉｃｕｌａｒｒｅｓｉｎ．ＡＵｗａｓａｂｓｏｒｂｅｄｗｅｌｌｂｙＳ－８ｒｅｓｉｎａ１１ｄｅｌｕｔｅｄｂｙ５０—６０％ＥｔＯＨ．（３）Ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｓｐｅｃ订叩ｈｏｔｉｃｔｒｉｃｄｅｔｅｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｕｉｓｃ删ｅｄｏｕｔ．Ｎｅｗａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｔｌｌａｔ：Ｉｎ廿ｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎｏｆ１．０ｍＬＡＵ．２．２ｍＬＥｔ０Ｈ，１．６血ＬＥ－ｒｅａｇｅｎｔａｎｄＯ．５ｍＬａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｒｅａｄｄｅｄ，ｔｈｅｎｈｅａｔｅｄｕｐｆ．ｏｒ１２ｍｉｎａｔ６６℃ａｎｄｃｏｏｌｅｄ蠡）ｒ１０ｍｉｌｌａｎｄｔｌｌｅａｂｓｏ巾ｔｉｏｎｉｓｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｍｅ５９４岫ｗａｖｅｌｅｎ啦．（４）ＡＲｐ．瑚ＰＬＣｍｅｔｈｏｄｉｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｆ．ｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅ蛐ｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｉｐｏｓｉｄｉｃａｃｉｄ，ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄａＩｌｄｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅｉｎＥｕｃｏｍｍｉａ，Ｔｈｅｅ虢ｃｔｏｆＭｅｏｈｃｏｎｃｅｎｔ，ｔｈｅａｃｉｄｉｃａｄｄｉｔｉＶｅａｎｄｐＨｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄＩＩ硕十学位论文ＡＢＳＴＲＡＣＴｔｈｅｓｅｐａｒａｂｉｌｉｔｙｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｆｏｎｃｈｍｍａｔｏｇｒ印ｈｙｉｓｏｂｔａｊｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎｏｗｐｈｍｓｅＭｅ０Ｈ—Ｈ２０—Ｈ３Ｐ０４●（１２：８７．９６：０．０４）ａｎｄｔｇｅｎｏｗｓｐｅｅｄｉｓ１．ＯｍＬ／ｍｉｎ．ＴｈｅｃａｐａｃｉｔｙｆａｃｔｏｒｓｏｆｔｈｒｅｅｃｏｍｐｏｕＩｌｄｓｒａＩｌｇｅ矗ｏｍ３ｔｏ１３，ｔ１１ｅｐｅａｋｓｏｆｔ１１ｒｅｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｃａＩｌｂｅｓ印ａｒａｔｅｄｉｎｔｈｅｂａｓｅ１ｉ１１ｅａＩｌｄａｎａｌｙｓｉｓｔｉｍｅｗａｓｉｎ３０ｍｉｎ，ａｎｄｔｈｅｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅｓｏｆｇｅｎｉｐｏｓｉｄｉｃａｃｉｄ，ｃｈｌｏｒｏｇｅｎｉｃａｃｉｄａｎｇｅｎｉｐｏｓｉｄｅｗｅｒｅ６．７ｍｉｎ，１０．５ｍｉｎ，２１ｍｉｎｒｅｓｐｅｃｔｉＶｅｌｙ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ：Ｅｕｃｏｍｍｉａ，Ａｕｃｕｂｉｎ，ＨＰＬＣ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｄｅｔｅ珈ｄｉｎａｔｉｏｎＵ原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究Ｔ作及所取得的研究成果。

尽我所知，除ｒ论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。

与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。

作者签名日期：——年——月——日关于学位论文使用授权说明本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校町以公布学位论文的全部或部分内容，可以复印、缩印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。

作者签名：——导师签名：——日期：——年——月——第一章文献综述１．１前言杜仲（Ｅｕｃｏ唧ｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖ），又名木棉（木草图经），为杜仲科杜仲属多年生落叶乔木，我国特有药用植物。

栽培历史悠久，分布地区广泛，主要分布于滇、黔、川、桂、豫、甘、陕及长江中下游等…。

我国对杜仲的认识及利用至少有２０００多年历史，《神农本草经》。

３将杜仲列为上品，中药杜仲传统以干燥树皮入药，是名贵滋补药材”，。

我国杜仲资源丰富，栽培面积１９９５年初步统计已达４００万亩，每年落叶可达３０万吨，但杜仲资源利用率不到三十分之一，多是进行杜仲茶、酒、冲剂、可乐、饲料添加剂等初加工产品开发。

１。

日本栽培面积仅０．１万亩，原材料９０％从我国进口，而其杜仲产品销售是全球最大的国家，１９９４年销售额已达５００～７００亿日元川。

因此深入开展杜仲中活性成分的精深加工，不仅能够剥用我国特有的宝贵杜仲资源开发出防治肿瘤、心血管疾病等一系列具有医疗和保健作用的药品、饮料、食品，而且可以推进杜仲由资源优势向产业和经济优势的转化，创造出巨大的社会和经济效益。

下面就近几十年来对杜仲化学成分、药理药效、分析测定等方面进行的研究探索做一个总结。

１．２杜仲的化学成分对杜仲化学成分的研究始于二十世纪五十年代，为了确定杜仲的活性物质，各国学者对杜仲进行了大量研究，发现杜仲主要化学成分有木脂素类（１ｉｇｎａｎｓ）““…、环烯醚萜类（ｉｒｉｄｏｉｄｓ）０１““”、苯丙素类（ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｓ）。

、““”’“１”、黄酮“”、多糖“”、氨基酸汹。

２１及杜仲胶。

”矧等有机化合物及钙、铁等无机微量元素汹１。

近代研究证实了杜仲叶的主要化学成分脚”１与杜仲皮。

”…的化学成分基本一致，有一定的互补性。

目前经过分离和鉴定的有机化合物约有７０种以上，无机矿物元素不少于１５种，归纳如下：（１）木脂素类：木脂素是一类在生物体内由双分子苯丙素衍生物聚合而成的化合物。

迄今为止，从杜仲皮分离出的此类化合物已有２８种㈨，多数为甙类化合物，其糖基为Ｂ—Ｄ一葡萄糖。

结构类型多为双环氧木脂素ｔｂｉｓｅｐｏｘｙ“ｇｎａｎｓ），如松脂醇二葡萄糖甙、丁香脂二葡萄糖甙，其中丁香脂香兰素醚双糖甙是新发现的一种木脂素类物质”“。

木脂素类在杜仲皮中含量较叶中高。

（２）环丙素类（ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｐａｎｏｉｄｓ）：环丙素是形成水脂素的前体，在杜仲中广泛存在，在杜仲中常见的环丙素类较多。

其中松柏醇在含由氯化过氧化酶的卡尔黑霉菌作用下。

…，１６ｈ内可合成松脂素双糖甙，降压活性与天然纯品无差别。

（３）环烯醚萜类：环烯醚萜及其甙在植物界中分布较广，是植物中臭蚁二酸（ｉｒｉｄｏｄｉａｌ）转变而来的单萜类化合物，分子中含有环烯醚键，杜仲醇类无环烯醚键，可看成环烯醚萜丌环后的产物。

从杜仲皮、叶中可分离到１０多中环烯醚萜类成分，多数为已知化合物，有一定药理活性，如京尼平甙、桃叶珊瑚甙、筋骨草甙、哈帕甙乙酸酯等ｍ，。

研究发现，环烯醚甙在杜仲皮和叶中含量有较大区别，环烯醚双键性质活泼，羟基呋喃环极不稳定。

甙易被酶和酸水解，故甙在鲜品和干品含量比较，差别较大。

杜仲中环烯醚甙成分的结构除杜仲外，其甙元均以甙Ｂ甙键联接吡喃葡萄糖。

杜仲肝糖部分为异麦芽糖（１ｓｏｍａｌｔｏｓｅ，６一葡萄糖一ａ一葡萄糖）。

杜仲醇，杜仲醇甙一Ｉ和杜仲醇甙一ＩＩ“３１…均为无色浆状物。

（４）苯丙素类：苯丙素是形成木脂素的前提物质，在杜仲中广泛存在，从杜仲中分离得到绿原酸、咖啡酸等十几种简单酚类及苯丙素类物质“…。

（５）黄酮类黄酮类化和物是泛指两个芳环通过三碳链相互联结而成的一系列化合物。

ＮａＫａｍｕｒａ，Ｔ．“”已从杜仲叶中提取出五种黄酮，即槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ），槲皮素一３一Ｏ—Ｂ—Ｄ一毗喃葡萄糖、槲皮素一３—０一Ｂ＿Ｄ一吡喃木糖一（１２）毗哺葡萄糖、山奈酚一３一ａ—Ｏ—Ｌ－鼠李糖一（１—６）一Ｂ—Ｄ一毗喃葡萄糖及山奈酚一３一Ｏ一６一已酰一Ｄ一吡喃葡萄糖。

“。

Ｐａｒｋ，Ｊｏｎｇｃｈｅｏｌ等利用Ｎ—ＢｏｒｄａｐａｋＣＣ０１ｕｍｎ从杜仲叶中分离到三种黄酮：ｉｓｏｕｅｒｃｅｔｉｎ（异槲皮索），ａｓｔｒｏｇａｌｉｎ及槲皮素３—０一Ｂ—Ｄ一木糖（１—２）一Ｄ一葡萄糖，并对其含量进行了测定”１。

成军等人“８１从杜仲叶中分离得到了７种黄酮类物质，包括山萘酚、槲皮素、紫云英甙、陆地锦甙，芦丁、一个简单的酚类物质、３，４一二羟基苯甲酸和一个葡萄糖乙甙。

（６）甾醇类：从杜仲中分离的甾类化合物有胡萝ｈ甙（ｄａｕｃｏｓｔｅｒ０１）“”、Ｂ一谷甾醇、白桦脂醇（ｂｅｔａｌｉｎ）、白桦脂酸（ｂｅｔｕｌｉｃａｃｉｄ）和熊果酸（ｕｒｓｏｌｉｃａｃｉｄ）口朝（７）多糖类：Ｇｏｎｄａ０７３等从杜仲皮中分离出一种酸性多糖一杜仲多糖Ａ（Ｅｕｃｏ姗ａｎＡ），分子量约为６．Ｏ×１０４，组成为Ｌ一阿拉伯糖：Ｄ一半乳糖：Ｄ一葡萄糖：Ｌ一鼠李糖：Ｄ一半乳耱醛陵，其摩尔比为８：６：４：５：８，并证明此多糖均对网状内皮系统有活化作用，可增强机体非特异性免疫功能。