第五章酶的分离和提纯•第一节纯化方案设计•第二节纯化方法•第三节酶的纯度和产量•第四节酶的剂型与保存第一节纯化方案设计一.分离纯化酶的原则：第一，要注意防止酶变性失活，这一点在纯化的后期更为突出。
第二，从理论上说，凡是用于蛋白质分离纯化的一切方法都同样适用于酶。
第三，酶具有催化活性，检测酶活性可以为酶的抽提、纯化以及制备过程中选择适当的方法与条件提供直接的依据。
二.防止酶变性失活的方法:(1)除了少数例外，所有操作都应在低温条件下进行，尤其是在有机溶剂存在的情况下更应特别小心。
(2)必须控制整个系统不要过酸过碱；同时要避免在调整p H时产生局部酸碱过量的现象。
(3)酶和其它蛋白一样，常易在溶液表面或界面处形成薄膜而变性，故操作中应尽量减少泡沫形成。
(4)重金属等能引起酶失活，微生物污染以及蛋白水解酶的存在能使酶分解破坏。
一.酶的抽提二.浓缩三.酶的纯化四.结晶•一.酶的抽提•抽提的要求是将尽可能多的酶、尽量少的杂质从原料引入溶液。
1.预处理过去多用动物或植物的器官组织作为酶的来源，近年来则主要采用微生物作材料。
例如，动物材料要剔除结缔组织、脂肪组织；油质种子最好先用乙醚等脱脂；种子研磨前应去壳，以免丹宁等物质着色污染；微生物材料则应将菌体和发酵介质分离。
经过这些处理后，材料须尽可能以非常新鲜的状态直接应用，否则就应将完整材料立即冰冻起来。
2. 破细胞酶根据它的分布可分为胞内酶和胞外酶，根据它的存在状态，即是否与细胞内的颗粒体或膜结合，细胞内酶又可分为结酶与溶酶。
2.1 丙酮干粉法：◆往组织匀浆中加入－15～－20℃的冷丙酮，抽滤，再加几次丙酮并抽滤，沉淀部分在室温下放臵1小时左右至无丙酮味，然后转移到盛有五氧化二磷的真空干燥器中干燥，干燥后的丙酮粉臵于低温冰箱中保存备用。
从丙酮粉中提取酶可往丙酮粉中加抽提液搅拌，过滤或离心即可。
优点：丙酮处理一方面能有效地破坏细胞壁(膜);另一方面由于丙酮是脂溶剂，这种处理有利于除去大量脂类物质，有时这种处理还能使某些结酶易于溶解；此外，丙酮干粉含水量低，易于保存.缺点：丙酮可能引起某些酶变性失效，有些酶则根本不能采用此法。
