降钙素原测定操作流程

降钙素测定操作规程2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。

或采用含分离胶的真空采血管。

也可采集血浆标本，用肝或EDTA抗凝。

2 检验申请单独检验项目申请：降钙素测定（缩写CT）；组合项目申请：肿瘤标志物检查。

临床医生根据需要提出检验申请。

2.1..1 标本采集与处理2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。

2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。

2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。

专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。

2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。

2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。

2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。

2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。

2.2标本保存2.2.1接收标本后在60min内将标本离心分离出血浆, 避免溶血。

离心必须达到4000rpm×15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。

2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定2d，在-20℃最多可保存4周。

避免反复冻融。

2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7d。

2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。

3 方法原理降钙素测定采用双位点加心化学发光免疫分析法，其检测原理来如下：第一步：将标本与包被着抗降钙素的超顺磁性磁珠以及降钙素-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵化，标本中的降钙素和包被在磁珠上的降钙素抗体结合，同时抗降钙素体与样本中同一另降钙素一位点结合。

在反应管内孵化完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质。

第二步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD）被碱性磷酸酶所分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量。

降钙素原SOP降钙素原( PCT )SOP（荧光免疫层析法）一、目的规范实验室人员的操作，以保证临床检验结果的准确性。

二、预期用途适用于体外定量检测人全血、血浆、血清中降钙素原(PCT )的浓度。

三、检验原理本试剂采用免疫荧光双抗体夹心法定量检测人全血、血浆、血清中的降钙素原(PCT );浓度。

将待测样本加入缓冲液中混匀，样本中的降钙素原抗原和缓冲液中的荧光标记降钙素原单克隆抗体结合形成反应复合物。

将混合样本滴加至测试卡的加样孔中，在层析作用下，反应复合物沿着确酸纤维膜向前移动，被固定在硝酸纤维膜检测线上包被的降钙素原单克隆抗体所铺获。

样本中的降钙素原越多，检测线上积聚的复合物越多，荧光抗体信号强度反应了被捕获的降钙素原数量。

经广州万乎生物技术股份有限公司生产的适用仪器，可检测出样本中降钙素原的浓度。

检测仪默认的降钙素原检测结果以ng/mL 为单位。

四、主要组成成分试剂由测试卡、缓冲液、ID芯片和使用说明书组成。

其中：1、测试卡由试纸条、塑料盒组成。

试纸条上的主要成分有：硝酸纤维素膜、吸水纸，PVC板及其他试纸条支持物；硝酸纤维素膜包被有降钙素原单克隆抗体和兔lgG.2、缓冲液含有荧光标记降钙素原单克隆抗体和荧光标记抗免IgG五、储存条件及有效期测试卡和缓冲液4℃~30℃保存，有效期24个月。

测试卡铝箔袋开封后，应在1小时内尽快使用。

生产日期、失效日期：见标签。

六、适用仪器广州万孚生物技术股份有限公司生产的免疫荧光检测仪( FS-112, FS-113)、干式荧光免疫分析仪( FS-205, FS-301).七、样本要求1、全血、血浆、血清样本均可用于测试。

2、全血的收集：采用抗凝管(建议使用EDTA-Na, EDIA-K,商品化真空抗凝管)采血，采血后提匀备用。

样本采集后应尽快进行测试，若采血后不能在2 个小时内测试的，应放在2℃---8℃保存，不得超过2天。

3、血清、血浆的收集：取血后应尽快以200opm的离心速度离心10分钟后分离血清、血浆，以免溶血。

降钙素原(电化学发光法)
降钙素原（Procalcitonin，PCT）是一种蛋白质前体，它的水平在体内受到炎症和感染等因素的刺激时会显著增加。

降钙素原常用于临床上作为感染和炎症的生物标志物，用于帮助医生评估感染的严重程度、预测感染的病情发展、指导抗生素治疗以及监测治疗效果等。

电化学发光法（Electrochemiluminescence，ECL）是一种灵敏度高、特异性好、操作简便的生化分析技术，常用于检测血清中的生物标志物。

在临床实验室中，常用的降钙素原检测方法之一就是采用电化学发光法。

具体而言，电化学发光法通过利用电化学反应产生的化学能转化为光能的过程，检测样品中的降钙素原水平。

这种方法具有灵敏度高、检测范围广、操作简便等优点，因此在临床诊断中得到了广泛应用，特别是在感染性疾病的早期诊断和监测中具有重要意义。

降钙素（PCT）定量检测标准操作规程降钙素原(PCT)定量测定(量子点免疫荧光层析法) 【检验原理】采用双抗夹心法原理,以两株高特异性、高敏感性PCT 单克隆抗体,其中PCT单克隆抗体固定在结合垫上,为量子点标记抗体,用于检测抗原:PCT单克隆抗体I包被在层析膜上形成检测线(T线),用于捕获抗体。

为监控试纸是否有效,设置控制线(C线),为包被有兔抗IgG抗体。

应用抗原抗体反应和荧光量子点免疫层析技术,检测人血中PCT的含量。

测试时,若样本中含有PCT,PCT首先与结合垫中标记有量子点的PCT单克隆抗体合,然后与硝酸纤维素膜T线处包被的PCT单克隆抗体I结合形成夹心”结构,T线处荧光显色强度与PCT含量呈正比,根据荧光强度定量测定PCT浓度。

原理:PCT与检测板上的捕获抗体和量子点标记抗体的结合产生颜色变化,显色的强度变化与PCT浓度有相关性,测量系统运用光电扫描标记物和P口结合区,获得光电信号,然后对光电信号的强弱进行测量处理,定量地分析出PC浓度。

【样本要求】1.用于人血清、血浆、静脉全血或末梢血样本,其他体波和样本可能得不到准确结果。

2.应在无菌情况下采集静脉血。

检测时,未经枸橼酸钠或肝素抗凝的血样须析出血清,经拘櫞酸钠或肝素抗凝的血样,可选用血浆、静脉全血或末梢血。

建议优先选用人血清检测,不建议使用EDTA作为抗凝剂3.临床血液样本采集后,在室温条件下,须在2小时内完成检测，血清样本于2-8℃保存,可保存2h;静脉全血样本和末梢血样本2-8℃保存,可保存2h;避免反复冻融样本、加热灭活样本; 溶血样本应弃用【拉验方法】在使用此试剂前必须仔细阅读试剂的说明书,需严格按照试剂说明书执行有关操作,否则无法保证可靠的结果。

1、准备检测前将检测卡、样本恢复至室温(15-30℃),并编号,建议将铝箔袋在恢复室温后再拆封,并在一小时内尽量使用,防止检测卡受潮2、质控确认质控二维码卡质控SD芯片与检测卡的批号相匹配,进行质控操作(详见仪器使用说明书)3、加样样本为血清、血浆,吸取100μ血清或血浆样本,垂直滴加至检测卡加样处,开始计时。

降钙素原的检测方法是什么降钙素原是蛋白质的一种，当人体受到细菌、病毒的感染的时候会引起降钙素原的升高，这也代表着人体的免疫力下降了以及肾脏功能也会产生衰竭的现象。

当降钙素原过高时可能会使人体有休克的现象，也会使得人体中的器官功能紊乱，产生一些全身性的疾病反应，面对降钙素原，检测是很重要的一个方面，下面就来介绍一下其检测方法。

★检测方法:★1.放射免疫学分析法利用人工合成的多克隆抗体特异地识别和连接合成氨基酸降钙素原。

该方法能检测正常人的血清PCT，可靠敏感度为4pm/mL，检测的是游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体的混合物，而不能区分上述三种物质。

该法检测耗时长(19～22h)，而且有放射性元素的污染使用受到限制。

★2.双抗夹心免疫化学发光法(ILMA)运用双单克隆抗体，其中一个抗体为降钙素抗体，另一个为抗钙素抗体，分别结合到PCT分子的降钙素和抗钙素部位，可排除交叉反应。

其中一个抗体是光标记的，另一个未标记的抗体固定在试管的内壁，反应过程中两个抗体与PCT分子结合而形成三明治复合体，发光部位于反应管的表面。

该法操作简便，特异性强，敏感性高，测定的低限值为0.1ng/mL，2h可以出结果。

★3.胶体金比色法（B.R.A.H.M.SPCT-Q-半定量快速实验）采用胶体金技术，包括胶体金标记的抗抗钙素的单克隆抗体和用作包被的抗降钙素多克隆抗体，当标本(血清或血浆)加人标本孔，金标单克隆抗体与标本中的PCT结合，形成金标记的抗原抗体复合物。

该复合物在反应膜上移动，与固定在膜上的抗降钙素抗体结合形成更大的复合物。

当PCT浓度超过0.5ng/mL，该复合物显示红色，红色的深浅与PCT的浓度成正比，与标准比色板比较即可得出PCT的浓度范围。

结果分为四级:正常<0.5ng/mL；轻度升高>0.5ng/mL；明显升高>2ng/mL；显著升高>10ng/mL。

降钙素原( PCT )SOP（荧光免疫层析法）一、目的规范实验室人员的操作，以保证临床检验结果的准确性。

二、预期用途适用于体外定量检测人全血、血浆、血清中降钙素原(PCT )的浓度。

三、检验原理本试剂采用免疫荧光双抗体夹心法定量检测人全血、血浆、血清中的降钙素原(PCT );浓度。

将待测样本加入缓冲液中混匀，样本中的降钙素原抗原和缓冲液中的荧光标记降钙素原单克隆抗体结合形成反应复合物。

将混合样本滴加至测试卡的加样孔中，在层析作用下，反应复合物沿着确酸纤维膜向前移动，被固定在硝酸纤维膜检测线上包被的降钙素原单克隆抗体所铺获。

样本中的降钙素原越多，检测线上积聚的复合物越多，荧光抗体信号强度反应了被捕获的降钙素原数量。

经广州万乎生物技术股份有限公司生产的适用仪器，可检测出样本中降钙素原的浓度。

检测仪默认的降钙素原检测结果以ng/mL 为单位。

四、主要组成成分试剂由测试卡、缓冲液、ID芯片和使用说明书组成。

其中：1、测试卡由试纸条、塑料盒组成。

试纸条上的主要成分有：硝酸纤维素膜、吸水纸，PVC板及其他试纸条支持物；硝酸纤维素膜包被有降钙素原单克隆抗体和兔lgG.2、缓冲液含有荧光标记降钙素原单克隆抗体和荧光标记抗免IgG五、储存条件及有效期测试卡和缓冲液4℃~30℃保存，有效期24个月。

测试卡铝箔袋开封后，应在1小时内尽快使用。

生产日期、失效日期：见标签。

六、适用仪器广州万孚生物技术股份有限公司生产的免疫荧光检测仪( FS-112, FS-113)、干式荧光免疫分析仪( FS-205, FS-301).七、样本要求1、全血、血浆、血清样本均可用于测试。

2、全血的收集：采用抗凝管(建议使用EDTA-Na, EDIA-K,商品化真空抗凝管)采血，采血后提匀备用。

样本采集后应尽快进行测试，若采血后不能在2个小时内测试的，应放在2℃---8℃保存，不得超过2天。

3、血清、血浆的收集：取血后应尽快以200opm的离心速度离心10分钟后分离血清、血浆，以免溶血。

检验科免疫室
分析项目作业指导书降钙素原（PCT）第页，共页
版本：A/0
生效日期：2008-02-01 46
<2 ng/mL 88 18 106
≥2 ng/mL 7 99 106
共计95 117 212
根据以上数据，临床敏感性为85%，临床特异性为93%，阳性预期值为93%，阴性预期值为82%。

临床分类
Elecsy
BRAHMS PCT
SIRS 脓毒血症共计
<2 ng/mL 88 55 143
≥2 ng/mL 7 16 23
共计95 71 166
根据以上数据，临床敏感性为23%，临床特异性为93%，阳性预期值为70%，阴性预期值为62%。

9.分析性能
检测范围：0.02-100 ng/mL
精密度
根据NCCLS（全国临床实验室规范化操作委员会）制订的改良试验计划(EP5-A)，应用Elecsys试剂盒、人血液标本和质控液验证ElecsysTOTAL P1NP试剂盒检测重复性。

每日测6 次共10 日（n＝60）；在E170 分析仪上的组间精密度（n＝21），得结果如下：
10.干扰因素
检测结果不受黄疸（胆红素<428μmol/L或<25 mg/dl）, 溶血（血红蛋白<0.559mmol/L或< .900g/dl）, 脂血(脂肪乳剂< 1500mg/dl）和生物素<123nmol/L或<30ng/ml的影响。

回收率标准：回收率在初始值的±15％之内。

对于接受高剂量生物素治疗的患者（> 5mg/天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样本。

浓度达150IU/ml的类风湿。

降钙素的测定原理
降钙素（calcitonin）是一种由甲状腺C细胞分泌的多肽激素，它对骨骼中的钙和磷代谢有调节作用。

降钙素的测定原理主要是通过测量降钙素的浓度来评估体内降钙素的水平。

测定降钙素的常用方法是免疫测定法，主要有放射免疫分析法（RIA）、酶联免疫分析法（ELISA）等。

典型的测定原理如下：
1. 免疫反应：首先，一定量的抗降钙素抗体被固定在试验板上。

然后，待测样品与标记有酶的降钙素结合，形成抗原-抗体复合物。

2. 清洗：通过多次洗涤，去除未结合的物质。

3. 反应：加入底物（一种可以被酶催化反应的物质），使其与标记物酶结合。

4. 反应停止：加入停止液停止底物的反应，使其转化为可测量的产物。

5. 检测：测量底物的反应产物的光学密度或荧光强度。

根据标准曲线，可以计算出待测样品中降钙素的浓度。

测定降钙素的原理基于特异性抗体与降钙素的结合，从而检测降钙素的含量。

此外，测定中的清洗步骤可以去除未结合的物质，提高测定的准确性和灵敏度。

需要注意的是，降钙素的浓度受很多因素的影响，包括甲状腺C细胞的分泌能力、甲状腺疾病、营养状态、药物使用等。

因此，降钙素的测定结果需要结合具体的临床情况进行综合解读。