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漆酶的分离纯化及其应用研究漆酶是一种生物催化剂，被广泛应用于漆木器、皮革、纺织品、造纸、食品等领域。
漆酶的分离纯化及其应用已经成为当前生物技术领域研究的热点之一。
一、漆酶的分离纯化方法漆酶在微生物中的合成量较少，因此，为了进行漆酶的高效生产和利用，需要对漆酶进行分离纯化。
常见的漆酶分离纯化方法有：超滤法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法等。
超滤法是通过超滤膜将酶与其他杂质分离，可以得到相对较为纯净的漆酶。
离子交换层析法是利用离子交换树脂将需要分离的物质分离出来。
凝胶过滤层析法则是利用化学性质不同的凝胶将需要分离的物质分离出来。
二、漆酶的应用研究漆酶的应用研究主要集中在以下几个领域：1.漆木器颜色、光泽度的成型漆木器的颜色和光泽度可以通过打磨、上光等方式达到，但这种方法比较费时费力，而且不够持久。
采用漆酶涂料，可以使漆木器的颜色和光泽度更加饱满，而且能够更持久地保持。
2.制作皮革中的保护剂对皮革进行漆酶处理，可以使皮革更加柔软、舒适，同时具有保护作用，可以延长皮革的使用寿命。
3.纺织品整理在染色后，使用漆酶整理纺织品，可以提高纺织品的匀染性和光泽度，使其更加柔软舒适。
4.造纸生产漆酶在造纸生产中也起着重要的作用。
已经有不少研究表明，使用漆酶可以比传统方法更加高效地从纸浆中分离木质素，使得纸张更加柔韧、实心、白度高。
5.食品加工漆酶被广泛应用于味精、酱油等食品加工领域。
将其添加到食品中可以改善食品口感和口感质量。
结语漆酶具有一定的生物技术优势，不仅能够提高生产效率和质量，而且还能够在生态保护方面发挥重要的作用。
不过，需要在其分离纯化和应用研究方面进一步深入探索，以更好地推动其应用。
真菌漆酶的研究进展宋瑞（安徽大学生命科学学院合肥230039）【摘要】漆酶是一种蓝色多铜氧化酶，和植物中的抗坏血酸氧化酶，哺乳动物的血浆铜蓝蛋白属同族，能够催化多种有机底物和无机底物的氧化[1,2]，同时伴随分子氧还原成水。
漆酶广泛分布于真菌、高等植物、少量细菌和昆虫中，尤其在白腐真菌中普遍存在。
漆酶特有的结构性质和作用机理使其具有巨大的应用价值。
本文就真菌漆酶结构，功能的研究进展作一综述，并对其应用作简单介绍。
【关键词】真菌漆酶三维结构功能应用1真菌漆酶结构特征1.1 漆酶的组成漆酶是一种糖蛋白，肽链一般约由500个氨基酸组成[3]，糖基含量差异较大，占整个分子质量的10%—80%[4]，据相关报道，漆酶的热稳定性可能与其糖基化有关。
糖组成包括半乳糖、葡萄糖、甘露糖、岩藻糖、氨基己糖和阿拉伯糖等。
Mayer[5]认为漆酶并不均一，它由多条5000~7000分子量的糖肽链基本结构单元组成。
由于结构单元之间的缔合度不同，造成了各种漆酶分子量的不同。
另外，分子中的糖基的差异，也会引起漆酶的分子量随来源不同会有很大的差异，从59—390ku不等。
真菌漆酶约含19种氨基酸，绝大部分为单体酶，但也有例外，如双孢蘑菇和长绒毛栓菌漆酶由两个亚基组成[6]，而柄孢壳漆酶I由四个亚基组成。
漆酶种类繁多，不同种类的真菌产生的漆酶种类不同，即使同一种真菌在不同环境下也产生不同种漆酶。
1.2漆酶的晶体结构由于漆酶是含糖蛋白质，且糖质量分数较高，一直以来很难获得X-衍射分析所用的单晶体，因此阻碍了关于漆酶结构的研究进展。
1998年第一个漆酶晶体是Ducros V[7]制备的来自灰盖鬼伞(Coprinus cinereusv)T1Cu缺失型漆酶晶体，并分析了其结构。
至今为止，Bacillus subtilis(CoA)[8]；Melanocarpus albomyces(MaL)[9]；Rigidoporus lignosus(RiL)[10]；Pycnoporus cinnabaricus(PcL)[11]；Coprinus cinereus(CcL)[12]和Trametes versicolor(TvL)[13]漆酶的三维结构已相继被报道。
探析漆酶来源及绿色化学应用摘要：漆酶又称其为酚酶、漆酚氧化酶等，属于一种多铜氧化酶。
尽管漆酶的研究历史可以追溯至一百年前，但是在研究过程中一些新功能不断被挖掘出来。
本文就针对漆酶的来源其及在绿色化学中的应用进行综述。
关键词：漆酶；绿色化池；应用一、漆酶的来源（一）植物漆酶生物界中漆酶的存在十分广泛，除了漆树科植物外，漆酶在拟南芥、水稻、松树、黄漆酶、棉花等物种中也存在，可以确定的是，在高等植物中漆酶的存在十分普遍。
在拟南芥基因组中，分别有3条染色体分布了17个漆酶基因，其中2号染色体上5个，3号染色体上2个，5号梁色体上10个；而水稻基因中同样包含漆酶基因，目前为止共发现6个漆酶基因片断，26条表达序列标签。
所以无论是单子叶或者双子叶植物，都有可能存在复杂的漆酶基因家族。
此外，漆酶同工酶也是漆酶研究领域的一个重要内容，其促进了漆酶研究的深入发展。
研究同工酶可以发现新类型的酶，比如白漆酶以及黄漆酶，并且研究同工酶还可以对比、考察漆酶底物专一性，进而实现对整个系统发育树的研究。
植物来源不同，即使是同种植物之间的漆酶序列同源性均会存在较大差异，其所体现的是系统发育植物树的分散性。
涉及到漆酶同工酶的研究比较多，特别是真菌漆酶，几乎每种产漆酶的真菌中均会包含几种同工酶。
同工酶要以存在于同一个细胞、同一个组织或者同一个体不同组织或者同一种属之中。
区别各种同工酶的差异主要对其糖链部分加以区分。
（二）微生物漆酶微生物漆酶可以分为两大类，即真菌漆酶与细菌漆酶，特别是对真菌漆酶的研究更加广泛，迄今为止已经报道过的产漆酶真菌至少超过一千种，这类研究成为该领域的热门话题，其对漆树漆酶的研究有着重要的借鉴作用。
相比之下细菌漆酶来源的研究就相对较少，但是有专家推断，细菌中漆酶的存在同样普遍，只是需要人们更深入的研究、发掘。
（三）动物漆酶相对而言，目前动物体中发现的漆酶还比较少，已有的报道涉及到的相关动物体包括烟草天蛾、绿头苍蝇、麻蝇、猪肾以及蚊子与双翅目迁移类蝗虫等。
漆酶可行性研究报告一、研究背景漆酶是一种具有较强氧化性的酶，能够将多酚类物质氧化成酚醛类产物。
由于其在生物体内广泛存在，并且对环境友好，因此漆酶在多个领域有着广泛的应用前景，包括环境保护、食品工业和医药领域等。
随着对漆酶应用研究的深入，漆酶可行性研究也成为了研究热点之一。
二、研究目的本研究旨在探索漆酶在不同领域中的应用可行性，包括漆酶在环境保护、食品工业和医药领域的应用潜力，以期为漆酶的进一步应用提供理论基础和技术支持。
三、研究内容1. 漆酶在环境保护中的应用探索漆酶在废水处理、土壤修复和大气污染治理等方面的应用潜力，分析其对环境保护的贡献和可行性。
2. 漆酶在食品工业中的应用研究漆酶在食品防腐、色素稳定和酶促反应等方面的应用潜力，评估其在食品工业中的可行性和安全性。
3. 漆酶在医药领域中的应用探索漆酶在药物合成、肿瘤治疗和医疗废物处理等方面的应用潜力，分析其对医药领域的贡献和可行性。
四、研究方法1. 文献综述对漆酶及其应用领域的相关文献进行综合梳理和分析，获取漆酶应用的现状和研究进展。
2. 实验研究通过实验手段，对漆酶在环境保护、食品工业和医药领域中的具体应用进行验证和评估，获取实验数据支持。
五、研究进展1. 漆酶在环境保护中的应用通过文献综述和实验研究，初步确认了漆酶在废水处理中的氧化还原作用和对重金属的去除效果，验证了其在土壤修复中的降解有机污染物能力，展示了在大气污染治理中的潜在应用前景。
2. 漆酶在食品工业中的应用研究表明，漆酶能够对抗氧化物质，延缓食品氧化变质，同时在食品颜色稳定和饱和脂肪醇催化合成等方面也具有潜力。
3. 漆酶在医药领域中的应用初步验证了漆酶在药物合成和生物医药中的应用潜力，特别是在药物合成过程中的催化反应和对肿瘤细胞的抑制作用。
六、研究展望漆酶在环境保护、食品工业和医药领域中的应用潜力巨大，经过初步研究已经展现出较好的可行性和效果，但还需要更多的深入研究和实际应用验证。
漆酶高产菌研究进展及应用
漆酶高产菌研究进展及应用
综述了漆酶高产菌的研究现状,提出了今后漆酶高产菌的研究方向,同时也对漆酶在环境保护、生物检测和电化学分析、造纸工业、食品工业和智能包装等方面的应用价值进行了概述.
作者：秦鹏吴振强 QIN Peng WU Zhen-qiang 作者单位：华南理工大学生物科学与工程学院,广东,广州,510640;华南理工大学纸浆造纸工程国家重点实验室,广东,广州,510640 刊名：河北农业科学英文刊名：JOURNAL OF HEBEI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)：2008 12(10) 分类号：Q55 关键词：漆酶高产菌研究进展应用。
真菌漆酶的研究进展及其应用前景摘要：漆酶生产菌株多为白腐真菌，常用的漆酶活性测定方法有分光光度法、abts法、微量热法等，其降解工业“三废”中的有毒有害物质被认为是一种效率较高，成本较低的且最有前途的方法，其对环境保护的研究以逐渐成为国内外研究的热点，本文阐述漆酶的性质、活性中心、结构特点以及其在环境治理方面的应用。
关键词：漆酶；结构；活性中心；环境修复中图分类号：x592文献标识码：ａ基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目资助（项目编号：12521573）为本文通讯作者漆酶最早由yoshi从日本紫胶漆树（rhus vernicifera）漆液中发现。
19世纪末，g.betranel首次将能够使生漆固化的活性物质进行分离，命名为“laccuse”，即漆酶。
漆酶属蓝色多铜氧化酶家族［1，2］，与抗坏血酸氧化酶和哺乳动物血浆中铜蛋白同源。
人们将自然界中得到的漆酶分为漆树漆酶和真菌漆酶，其中真菌漆酶极具研究价值。
漆酶在生物制浆、污水处理、防腐剂、杀虫剂等化工产品的降解效果显著，用于环境保护、环境监测等领域，在食品工业等方面也有应用［3］，已逐渐成为自然科学的研究热点之一。
漆酶催化氧化不同种类型的底物已达200余种，广泛用于食品、废水处理、造纸等领域。
国内外真菌漆酶研究主要是以担子菌、子囊菌、脉孢霉、柄孢壳菌和曲霉等真菌来研究漆酶的生物学活性，细菌和放线菌的研究较少，现已在细菌生脂固氮螺菌（azospirillum lipoferum）中发现了漆酶的存在。
而高等担子菌中的研究对象包括白腐真菌、杂色云芝、平菇、变色栓菌，其中白腐真菌所产的漆酶为胞外酶，可作为主要的产酶者和研究对象。
１漆酶的性质1.1理化性质漆酶是一种含铜的多酚氧化酶，不同来源的漆酶铜含量也有所不同，多含有4个铜原子［4］。
漆酶多为1条多肽链组成的单聚体，由500～550个氨基酸分子所组成，相对分子质量主要集中在50～80kd，其碳水化合物约占15％～20％，等电点pi为3～6，反应温度为30～60℃，ph低的环境，漆酶的生物活性较高［5-7］。
漆酶的研究进展及其应用刘岩;刘锐;苏新国;赵冠里;杨昭【摘要】Laccase is a kind of polyphenol oxidase. Because of its wide distribution in nature,laccase has broad ap⁃plication prospects in environmental protection,textile,printing and dyeing,food and chemical synthesis,etc. It has received extensive attention and research in recent years.This paper introduces the research progress and outstand⁃ing application of laccase,providing the new prospects and direction for bacterial laccase.%漆酶是一种多酚氧化酶，由于其在自然界分布广泛，并且在环保、纺织、印染、食品、化学合成等方面都具有广泛的应用前景，近年来得到了广泛的关注和研究。
该文主要综述了国内外漆酶的研究进展及其应用，为细菌漆酶提供新的应用前景和方向。
【期刊名称】《安徽农学通报》【年(卷),期】2016(022)013【总页数】4页(P25-27,159)【关键词】漆酶;研究进展;应用【作者】刘岩;刘锐;苏新国;赵冠里;杨昭【作者单位】广东食品药品职业学院，广东广州 510520;仲恺农业工程学院，广东广州 510225;广东食品药品职业学院，广东广州 510520;广东食品药品职业学院，广东广州 510520;广东食品药品职业学院，广东广州 510520【正文语种】中文【中图分类】Q814漆酶（EC 1.10.3.2）又名蓝色多铜氧化酶，可以氧化包括酚类物质、多酚类物质、苯胺、木质素、多环芳香烃甚至无机物等一系列物质，以分子氧气为电子受体，生成反应过程中唯一的副产物水。
漆酶的研究进展及其应用作者：刘岩刘锐苏新国赵冠里杨昭来源：《安徽农学通报》2016年第13期摘要：漆酶是一种多酚氧化酶，由于其在自然界分布广泛，并且在环保、纺织、印染、食品、化学合成等方面都具有广泛的应用前景，近年来得到了广泛的关注和研究。
该文主要综述了国内外漆酶的研究进展及其应用，为细菌漆酶提供新的应用前景和方向。
关键词：漆酶；研究进展；应用中图分类号 Q814 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）13-0025-041 引言漆酶（EC 1.10.3.2）又名蓝色多铜氧化酶，可以氧化包括酚类物质、多酚类物质、苯胺、木质素、多环芳香烃甚至无机物等一系列物质，以分子氧气为电子受体，生成反应过程中唯一的副产物水。
因此，其在有毒废水处理、染料脱色、纺织、造纸、酒及饮料、生物传感器、抗癌药物及化妆品合成等方面都具有广泛的应用前景，从而受到了科学界的重视。
当前应用最多的是真菌漆酶，但由于真菌漆酶不耐高温，在碱性条件下迅速失活，存在多种抑制剂，严重限制了其工业化应用。
真菌漆酶一般为含有糖基的糖蛋白，形成了基因工程改造及异源表达上的障碍。
细菌漆酶一般为单体蛋白，且具有耐高温，在碱性条件下稳定，抑制剂少等优点，可以克服真菌漆酶应用的缺点，具有巨大的应用潜力。
2 国内外研究现状及进展漆酶为蓝色多铜氧化酶中最大的一类，具有通过铜粒子将多酚物质氧化，同时将氧气还原成水的催化特性[1]。
早在1883年，Yoshida第一次在日本漆树中发现了漆酶，成为世界上最早的被发现的酶类之一[2]。
植物漆酶由于缺少工业应用价值，而长期被忽视。
在现代工业废水中去除多酚类有毒物质，在纺织印染中去除木质素、色素等生物技术的不断研发中，由于漆酶具有利用氧气作为电子受体，能够氧化多酚类、木质素等多种化学物质，同时生成唯一的副产物水，这些自身具备的优质条件使得漆酶的催化性质在环保、纺织、印染、食品、化学合成方面具有广泛的应用前景，成为最近10年科学界最关注的焦点之一[3]。
新型漆酶的研发，漆酶空间结构及其催化机理，酶学性质与应用等成为科学研究的热点。
我国的研究人员也逐渐认识到漆酶在工业领域的应用优势，近些年研究势头迅猛[4-10]。
2.1 漆酶在自然界的分布漆酶在自然界中广泛分布。
第一种漆酶是由日本人Yoshida在1883年在植物漆树（Rhus vernicifera）树脂中发现的，随后在多种植物如杨树[11]、烟草[12]等中均有发现。
在多种真菌中均检测到真菌漆酶的活性，到2008年经学者统计已经超过百种真菌漆酶被分离提纯[13]，而这个数字还在快速的增加[14-16]。
长期以来，人们一直以为漆酶仅仅存在于真核生物，直到1993年Givaudan首先在水稻根围土壤中分离得到一株产漆酶的脂固氮螺菌[17]，这是第一次在原核生物中发现了产漆酶菌株。
2000年Alexandre通过生物信息学技术，证实漆酶也普遍存在于原核生物中[18]。
迄今为止，已经分离提纯的细菌漆酶有海洋微生物Marinomonas mediterranea产生的多酚氧化酶PPQ[19]，假单胞菌属的CopA蛋白[20]，链霉菌属的类漆酶EpoA[21]，枯草芽孢杆菌中芽孢外被上面含有CotA蛋白[22]等。
而产漆酶细菌也在不断的被发现，如2009年Telke在印度染织厂废水流经的土壤中筛选出产漆酶的假单胞菌LBC1[23]，2009年在突尼斯城市土壤中筛选得到产漆酶嗜麦芽寡养单胞菌AAP56[24]，2010年Wang等在黑龙江森立的土壤中分离得到产漆酶的枯草芽孢杆菌WD23菌株[25]。
但是相对真菌漆酶，关于细菌漆酶的研究还是非常少的。
2.2 漆酶的性质通过对真菌漆酶X晶体衍射，分析其空间结构与催化机理，可知漆酶每个催化单位结合有四个铜粒子，根据其电子顺磁共振光谱，将四个铜粒子分成三种类型，第一种类型（T1）铜粒子赋予蛋白蓝色，并在610nm处具有吸收峰，第二类型（T2）铜粒子与一对第三类型的（T3）铜粒子形成一个三角环区（trinuclear cluster TNC）[26]。
在催化反应过程中，T1铜粒子在反应底物中依次接受四个电子，通过His–Cys–His三肽将电子传递给TNC，氧气在TNC处被还原成水。
其中T1铜粒子的氧化还原电位决定了漆酶的催化效率[27]。
漆酶利用氧气作为电子受体，将酚式羟基转化成为自由基引发一些反应，进而导致烷基链上C-C和C-O键和芳香环键的断裂[28]。
漆酶的氧化还原电位一般≤0.8V，而非酚化合物的氧化还原电势大约在1.3V左右，所以此类物质不能被漆酶直接氧化[29]。
对于这类氧化还原电势高于漆酶的化合物，或者由于分子空间结构较大不能直接接触漆酶活性中心的大分子物质，可以通过添加化学介导物质作为电子穿梭机（electron shuttles）进而协助漆酶完成催化反应。
真菌漆酶独自或者在添加化学介导物的条件可以利用氧气为电子受体，氧化酚类、多酚类、苯胺、木质素、多环芳香烃甚至无机物等一系列物质，同时将氧气转变成为水。
酶促反应需要空气中的氧气，而唯一的副产物为水。
与需要添加Mn+2木质素过氧化物酶（lignin peroxidase，LiP）和添加藜芦基醇锰过氧化物酶（manganese peroxidase，MnP）相比，具有巨大优势。
2.3 漆酶-介导反应体系（LMS）和化学介导物质 1990年，Bourbonnais首先报道了在添加2，2'-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）的情况下，可以利用漆酶氧化非酚木质素模型分子[30]，这一发现导致LMS体系的建立。
LMS体系极大地扩大了漆酶的作用范围，从此以后，科学界在研究LMS体系反应机理，寻找化学介导物质作了大量的研究工作。
化学介导物质可以分为合成物质和天然物质两种，常用的合成化学介导物质有ABTS、1-羟基苯并三唑（HBT）、N-羟基邻苯二甲酰亚胺（HPI）等[29]。
为了克服合成的化学介导物质价格昂贵、具有毒性等缺点，学者同时致力开发天然的化学介导物质。
朱红密孔菌（Pycnoporus cinnabarinus）的一种次级代谢产物3-Hydroxyanthranilic acid是报道的第一种天然介导物质[31]。
2005年Camarero创建了活性黑5为漆酶作用底物，检测吸光度变化筛选天然化学介导物质的筛选方法，并得了到10种天然酚类介导物质[32]。
到2008年，已有将近100多中化学介导物质[12]。
但是上述LMS体系建立往往都是针对真菌漆酶，关于细菌漆酶的LMS体系的研究还鲜有报道。
2.4 漆酶的应用2.4.1 在处理顽固污染方面的应用石油精炼、造纸厂、化工厂、农药厂、铸造厂和印染厂中产生的废水经常含有大量的酚类、多环芳香等有毒有色难降解物质，去除这些难降解有毒大分子物质一直是污水处理工程中的一个难题。
漆酶单独或者建立LMS体系，可以将此类生物难降解物质氧化，转变成无色，无毒可生物降解物质。
2002年，Tsioulpas利用多种可产漆酶菌株降解橄榄油厂中含有酚类化合物废水，其中酚类物质可以去除69%～76%，同时废水颜色有黑色转变成透明的浅黄色。
2005年，Ryan报道了利用白腐霉（CBS 696.94）去除废水中酚类物质，可以达到每1d每1g生物量降解0.033g酚类物质。
2010年Wang利用自己筛选的产细菌漆酶WD23将雷马素艳蓝R、茜素红、干果红、甲基橙、甲基紫等染料降解50%～90%。
2.4.2 在其它方面的应用在造纸工业中，可采用漆酶LMS系统对纸浆进行漂白并去除木质素[33-34]，来取代传统的对环境会造成重大污染的氯化物漂白工艺。
在纺织工业中，除去利用漆酶降解其中含染料废水外，还可以利用漆酶进行布料漂白[35]。
1996年Novozyme公司开发了第一款在用于牛仔裤仿旧处理的漆酶产品DeniLit。
2001年Zytex公司开发了降解靛蓝的漆酶商品Zylite。
在食品方面，漆酶可以通过选择性去除食品多酚类物质，进而提高其产品风味口感，降低成本等[36]。
漆酶在化学合成，木质素降解生产生物能源，生物传感器等方面也具有广泛的应用[37]。
3 前景与展望利用微生物酶大规模工业化生产被称之为生物技术或者绿色化学，是欧洲倡导的生物经济的主要领域之一。
而能在工业化生产中应用的酶类，必须具备一定的抗高温，耐强碱，抵抗剪切力，在一定的储存期间不会失活等优良性质[38]。
真菌漆酶的使用范围为pH4～6，温度30～50℃[38]，且多种物质敏感，氯化物、叠氮化合物、氢氧化物等均可以抑制真菌漆酶的活性[39]。
为了改善漆酶性质，降低生产成本，利用基因工程进行异源表达是行之有效的方法。
但是由于真菌漆酶为糖蛋白，且其糖基对漆酶的特性及其活性具有重要影响，因此真菌漆酶在异源表达上困难重重[40]，直到现在还没有真菌漆酶在大肠杆菌中表达成功的报道[39，40]。
细菌漆酶能弥补真菌漆酶所具有的缺点，其一般不具有糖蛋白，易于进行异源表达，进行基因改造和大规模发酵生产。
细菌漆酶一般最适作用pH为碱性环境，耐高温，对抑制剂不敏感。
如Wang报道的枯草芽孢杆菌WD23产生的漆酶在80℃下半衰期为2.5h，pH为9的条件下半衰期为15d[25]。
芽孢杆菌C-125得到一种漆酶，其最适作用pH为7.5～8，氯化物对其不但没有抑制作用反而可以刺激提高酶活[41]。
细菌漆酶展现出了巨大的应用潜力。
但是现在关于细菌漆酶的研究太少，严重阻碍了细菌漆酶的应用[26，38，40]。
因此，开展对细菌漆酶的广泛研究具有重要的意义。
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