狂犬病疫苗的发展现状
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【关键词】狂犬病；病毒活疫苗；灭活疫苗
狂犬病（rabies），即疯狗病，又称恐水症（hydrophobia），是由狂犬病毒感染所致的损害中枢神经系统为主的急性传染病，属人兽共患的自然疫源性疾病。该病极为凶险，一旦发病，病死率100%［1～2］。全世界每年约有3.5～5万人死于狂犬病［3］，其中99%的病例发生在发展中国家，亚洲约占发病总数的56%，而非洲约占44%［1］。2009年7月16日据参考消息报道，中国2007年由狂犬病引发的死亡人数上升至3300人。当前控制狂犬病是当务之急，应采取“管、免、灭”为主的综合性防治措施。目前应用狂犬病疫苗接种是预防狂犬病的有效方法。本文就狂犬病疫苗的发展、国内外主要疫苗使用情况及新型疫苗的进展作一综述。
疫苗的研制与改进创新
100多年来，全世界应用固定毒种发展了多种人用狂犬病疫苗，由最初的神经组织疫苗到现代的细胞培养疫苗。神经组织疫苗接种反应大，免疫原性低。现代疫苗接种剂量及针次少，接种反应低，
免疫效果不断提高。纵观疫苗的发展，1882年巴斯德（Pasteur）从牛脑分离到一株狂犬病病毒，将其在家兔脑内连续传90代。该病毒传代至50代时的潜伏期已由原来的15天缩短为固定的7天，并且毒力也减弱，称为固定毒［4］。将感染后7天发病的兔脊髓取出，在室温空气中干燥，后发现病毒的毒力很快降低，一般干燥15天后可完全减弱。1885年，巴斯德首次对一名被疯狗严重咬伤60小时后的9岁男孩腹部皮下注射神经组织疫苗，连续注射13针，结果该小孩获得了免疫保护。巴斯德这一成功的预防和治疗狂犬病的方法开创了人用狂犬病疫苗的新纪元，引起了医学界的极大重视。此后许多国家对狂犬病疫苗的研制方法进行了许多次改进和创新，主要有：①减毒活疫苗：1887年由匈牙利Hoegyes研制，即将固定毒以稀释法降低毒力。一般开始免疫时，病毒以1/10000稀释，最后以1/100稀释，持续免疫2～3周。这一方法曾在一些国家广泛使用，并证明效果良好。
②灭活疫苗：1911年由在印度的英国人Semple首创，即将感染的固定毒的羊脑组织研制疫苗。该疫苗主要在非洲和亚洲使用，并一直沿用到20世纪50年代。由于用羊脑研制的疫苗接种反应严重，一般注射14～21针，到20世纪70年代末逐渐被细胞培养疫苗所替代。我国自1949年起，一直使用羊脑研制有的Semple疫苗，1980年停止使用，由原代地鼠肾细胞疫苗取代［5］。国外主要疫苗使用概况为提高疫苗的有效性，减少注射针次、剂量和简化免疫程序，降低不良反应，各国开始研究细胞培养疫苗，目前研制成功各种细胞培养疫苗，并不断改进和提高，得到广泛应用的有如下几种：①人二倍体细胞疫
苗（HDCV）：该疫苗于20世纪60年代早期由美国Wistar研制所Wiktor等人研制成功［6］，用人二倍体细胞WI38株适应和培养病毒研制疫苗。目前主要由法国、德国生产，仅在美国、欧洲等发达国家使用。该疫苗安全有效，注射针次少，被认为是一种好的疫苗［7］。但该疫苗制备较困难，价格昂贵，难以推广。②原代地鼠肾细胞疫苗（PHKCV）：加拿大最早于1958年进行该疫苗研制［8］，前苏联用适应于原代地鼠肾细胞上的Vnukovo32株制备冻干疫苗，并已广泛用于前苏联和东欧的许多国家。经大量试验研究和人群观察，证明其安全有效［9］。我国也于1980年研制成功并开始大量生产和应用，取代了脑组织疫苗［5］。③精制鸡胚细胞疫苗（PCECV）：1965年日本Kondo将Flury HEP株病毒适应在鸡胚细胞培养，用鸡胚细胞培养病毒,经β丙内脂灭活后而制成灭活疫苗。该疫苗免疫后获得良好的中和抗体应答，效果达到或超过人二倍体细胞疫苗［10～11］。但该疫苗在世界上其他国家用量较少。④提纯的Vero细胞疫苗（PVRV）由法国Mrieux研究所研究成功，用微载体悬浮培养的Vero 细胞生产狂犬病疫苗，其优点为短期内可繁殖大量细胞并可进行工业化的大罐培养，所用的毒种为与生产HDCV毒种相同的PM 15033M 株。该疫苗具有安全和高免疫原性，用于暴露后免疫接种的保护效果显著。由于该疫苗可进行工业化大规模生产，产量大，便于浓缩精制，生产方便，价格便宜，仅为HDCV的38.7%［12］，已在世界许多国家广泛应用。⑤提纯的鸭胚疫苗（PDEV）由瑞士血清疫苗研究所研究成功的一种纯化鸭胚疫苗，系将狂犬病毒PM株在鸭胚内连续传代的
适应株作为毒种，用鸭胚培养病毒制备疫苗。该疫苗经人群试验，效果与HDCV相似［6］，1980年获准生产，到1991年生产200万剂量，其中10%在欧洲国家使用，90%出口到其他国家［1］。⑥原代牛肾细胞疫苗（FBKCV）：由法国巴斯德研究所研究成功，系将狂犬病毒PV11株适应在胎牛肾原代细胞培养31代作为毒种，用胎牛肾原代细胞培养病毒制备疫苗。该疫苗在法国已获准用于暴露后人群的免疫接种，试验观察免疫后14天中和抗体阳转率达89.4%［1］，认为具有较高保护力，但尚未大量生产和使用。
国内疫苗研制与免疫效果
我国于1980年以前均生产羊脑制备的疫苗，生产用的毒种为北京株固定毒。为解决人用脑组织疫苗接种后的神经系统合并症和效价低的问题，我国于1980年研制成功原代地鼠肾细胞培养疫苗，近年来又研制成功Vero细胞培养疫苗［13］。
1.原代地鼠肾细胞培养疫苗（PHKCV）
我国的地鼠肾细胞疫苗于1965年由卫生部武汉生物制品研究所牵头，卫生部长春、兰州生物制品研究所和中国药品生物制品检定所等单位合作开始研制，经过多年的研究培育出aG株，至1979年研制成功并获准生产。该疫苗所用毒种为北京株兔脑固定毒在原代地鼠肾细胞中连续传至50～60代适应所得。再经豚鼠脑和原代地鼠肾细胞交替传代3代的毒株，用豚鼠脑作为生产毒种。病毒在原代地鼠肾细胞上生长稳定后称之为“aG”株。该疫苗的安全性和免疫性高，可用于狂犬病的预防和治疗。广西1981年开始全面使用地鼠肾细胞疫苗，
