人教版高中生物选修一专题五课题1《DNA的粗提取与鉴定》课件(共17张PPT)[优秀课件资料]

8.提取含有杂质较少的DNA 9.DNA 的鉴定
冷却的95％的酒精50 mL
A:(1)向试管中加入0.015 mol／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)加入 DNA (3)4 mL二苯胺试剂
B:(1)向试管中加入0.015mol／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂
目的 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧
2、DNA的鉴定： 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的 NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻 璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加 入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水 中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜 色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。
专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定
鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的 红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中 培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选 用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大
1、在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧 杯中加入蒸馏水的作用是( )。
A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
答：B
2、实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和 0.14 mol／L对DNA有何影响?
（三）去除滤液中的杂质
方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度 为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl 溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶 液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。
方案二：直接在滤液中加入嫩肉 粉，反应10-15min，嫩肉粉中木 瓜蛋白酶能够分解蛋白质。
答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出
3、DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色
答：D
4、提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液?
答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于 上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以 要除去上清液(含有蛋白质)。
⑨
① 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固
② 加速血细胞破裂 ③ 溶解DNA ④ 使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA 最大限度地释出
⑤ 使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥ 使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦ 除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧ 提取DNA ⑨ A出现蓝色 B无变化
方案三：将滤液放在60-75℃的恒温水浴中 保温10-15℃，注意严格控制温度范围。
基础知识
一、DNA的溶解性
溶解 度
0
0.14mol /L
2mol/L Nl度浓aC
-2--m---o--l-/--L--浓度可使
DNA溶解；
0.1-4-m---o--l-/-L-浓度可使
DNA析出。
二、酒精是一种常用有机溶剂，但--D-N--A-却不能溶
六、DNA的鉴定 ①DNA与-二--苯--胺-（沸水浴加 热）会被染成--蓝--色-，因此， 二苯胺可以作为鉴定DNA的 试剂。 ②---甲---基--绿--（--绿--色--）-
操作提示
1.以血液为实验材料，每100ml加入3g柠檬酸钠， 作为抗凝剂。 2.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以 免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮 状沉淀。 3.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。
于酒精；
三、蛋白酶能水解蛋白质，但是对--D-N-A--没有影响
四、大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而--
-D--N-A--在80℃以上才会变性
五、洗涤剂可以溶解 细胞的细胞膜，去除 脂质和蛋白质,但对 DNA没有影响
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出： 将处理后的溶液过滤，加入 与滤液体积相等的、冷却的 酒精溶液（体积分数为95%）， 静置2～3min，溶液中会出现 白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个 方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。
方法步骤
加入物质
1.制备鸡血细胞液
柠檬酸钠溶液
2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水
3.溶解细胞核内的DNA
2 m1／L 的 NaCI 溶液 40mL
4.析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
5.滤取含DNA 的黏稠物
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
7.过滤含DNA 的 NaCl 溶液
当你的才华还撑不起你的野心时，你就该努力。心有猛虎，细嗅蔷薇。我TM竟然以为我竭尽全力了。能力是练出来的，潜能是逼出来的，习惯是养成的，我的 成功是一步步走出来的。不要因为希望去坚持，要坚持的看到希望。最怕自己平庸碌碌还安慰自己平凡可贵。
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（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液
1、动物细胞的破碎：
以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏 水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。
2、植物细胞的破碎：
提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤 剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨 液。
旁栏思考
• 加入洗涤剂和食盐的作用分别是？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利 于DNA释放；食盐有利于DNA溶解 • 如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？ 会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少， 影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯 胺鉴定不显示蓝色等