流感病毒裂解疫苗生产工艺流程相关参数

流感病毒裂解疫苗（一）流感病毒裂解疫苗产品说明书（成人）核准日期：2013年06月25日修改日期：2014年03月25日，2015年03月19日，2016年03月25日，2017年03月16日，2017年04月13日，2018年04月10日，2019年04月12日，2019年04月18日【药品名称】通用名称：流感病毒裂解疫苗英文名称：Influenza Vaccine （Split Virion），Inactivated汉语拼音：Liugan Bingdu Liejie Yimiao【成分和性状】本品在轻摇后为乳白色液体。

本品系采用WHO推荐的A1型、A3型和B型流感病毒当年流行株或相似株，在健康鸡群产生的受精鸡蛋中培养，用Triton X-100裂解，甲醛灭活，并经纯化后制成。

-主要成分：每0.5ml含以下毒株（2019/2020株）的抗原：A/布里斯班/02/2018 (H1N1)pdm09 -类似株(A/布里斯班/02/2018, IVR-190)…………………………15µg血凝素A/堪萨斯/14/2017 (H3N2) - 类似株(A/堪萨斯/14/2017, NYMC X-327)……………………………….15µg血凝素B/科罗拉多/06/2017-类似株（B/马里兰/15/2016，NYMC BX-69A）……………………………….15µg血凝素本疫苗生产用毒株符合世界卫生组织和欧盟对2019/2020流感季节的推荐（北半球）。

因每年WHO均推荐当年的疫苗生产毒株，因此每年的生产毒株不同。

-其它成分：含氯化钠、二水合磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾和注射用水的缓冲液。

【接种对象】本疫苗用于成年人和36月龄以上儿童，尤其推荐用于易发生流感相关并发症的人群。

【作用与用途】本品用于流行性感冒的预防。

接种本疫苗后，可刺激机体产生抗流行性感冒病毒的免疫力。

本品所含的疫苗成分并不会导致流感。

流感病毒灭活疫苗的开发流程你们有没有打过流感疫苗呀？流感疫苗可以保护我们不被流感病毒欺负呢。

那你们知道流感病毒灭活疫苗是怎么开发出来的吗？今天呀，就来给大家讲讲这个有趣的过程。

有一群特别聪明的科学家叔叔阿姨，他们就像侦探一样。

他们发现每年都有很多人因为流感生病，很难受。

于是就想要做出一种东西来预防流感。

他们要先找到流感病毒。

这就好比在一个大大的森林里找一只特别小的小动物。

流感病毒特别小，小到我们的眼睛根本看不到。

科学家们只能通过一些很厉害的仪器才能发现它们。

比如说，有一种仪器就像一个超级放大镜，可以把病毒放大好多好多倍，这样就能看到它们的样子啦。

找到流感病毒之后呢，就要把它们养起来。

这可不像我们养小猫小狗那么简单哦。

科学家们要给病毒创造一个特别合适的家。

这个家呀，有它们需要的各种营养，就像我们吃饭一样，病毒也得吃东西才能长大呢。

科学家们要很小心地照顾这些病毒，就像妈妈照顾小宝宝一样细心。

等病毒长得足够多了，就像家里的小动物生了好多小宝宝一样。

这时候就要把病毒杀死，让它们不能再去让人生病。

杀死病毒就像给调皮的小怪兽施了魔法，让它们不能再捣蛋了。

但是杀死病毒也不容易呢，得用特殊的方法，既不能让病毒跑掉，又要保证彻底把它们消灭。

杀死病毒之后呀，还要把这些死掉的病毒变得很纯净。

就像我们吃的糖果，要把外面不干净的东西都去掉。

科学家们会用一些办法把病毒里面多余的东西去掉，只留下对我们身体有用的部分。

接下来就是很重要的一步啦，要测试这个疫苗是不是安全的。

科学家们会找一些小动物来做实验，比如说小老鼠。

就像我们在玩游戏之前，要先看看这个游戏是不是安全的一样。

给小老鼠注射一点疫苗，然后观察小老鼠会不会不舒服。

如果小老鼠都很健康，那就说明这个疫苗可能是安全的。

如果小老鼠实验通过了，科学家们还不能马上就给我们用这个疫苗呢。

他们还要找一些勇敢的大人来做试验。

这些大人就像超级英雄一样，愿意为了我们小朋友的健康去尝试新的东西。

甲型流感疫苗的制备工艺与质量控制研究甲型流感是一种由甲型流感病毒引起的呼吸道传染病，对人类健康造成了严重威胁。

为了控制和预防甲型流感的传播，疫苗的制备工艺和质量控制显得尤为重要。

本文将对甲型流感疫苗的制备工艺与质量控制进行研究。

一、疫苗制备工艺甲型流感疫苗的制备过程主要包括以下几个步骤：病毒培养、病毒灭活、抗原提取、配方制备、灌装以及疫苗接种。

1.病毒培养甲型流感病毒的培养是疫苗制备的第一步。

病毒通常在鸡胚中培养，也可以在细胞培养基中进行培养。

在培养过程中，需要注意保持适宜的温度、湿度和营养物质浓度，以促进病毒的生长和复制。

2.病毒灭活病毒灭活是为了降低疫苗的病原性，确保疫苗的安全性。

常用的灭活方法包括物理方法和化学方法。

物理方法如热灭活和紫外线灭活，而化学方法如甲醛灭活和β-普鲁酮灭活等。

3.抗原提取病毒灭活后，需要进行抗原提取，以获得病毒的抗原成分。

抗原提取方法主要包括生理盐水溶解法、低渗透压法和离子交换法等。

这些方法可以有效提取出病毒抗原，为后续的配方制备提供基础。

4.配方制备配方制备是将提取的抗原与辅助成分进行混合，制成疫苗的关键步骤。

辅助成分包括佐剂、稳定剂和防腐剂等，它们能够提高疫苗的免疫原性、稳定性和保存期限。

合理的配方制备可以确保疫苗的质量和疫苗接种后的效果。

5.灌装制备完成的疫苗需要进行灌装，以便进行后续的包装和运输。

灌装主要是将制备好的疫苗注入到疫苗瓶中，并进行密封。

在灌装的过程中，要保持无菌条件，避免细菌和其他污染物的进入。

6.疫苗接种最后一步是将灌装完成的疫苗进行接种，以预防甲型流感病毒的感染。

接种的方法可以是注射或者鼻喷雾等。

接种后，疫苗会诱导人体免疫系统产生抗体，从而提高对甲型流感的免疫能力。

二、疫苗质量控制甲型流感疫苗的质量控制对于确保疫苗的安全性和有效性至关重要。

疫苗质量控制主要包括以下方面：病毒灭活效果检验、抗原含量检测、佐剂稳定性检验、无菌性检验和疫苗接种后免疫效果检测等。

四价流感病毒裂解疫苗制备流程
一。

咱们来说说这四价流感病毒裂解疫苗的原材料准备。

这可真是个关键的开头，就像建房子得先有好砖头一样。

1.1 得先把流感病毒株给选好。

这就好比挑种子，得选那优良的、能抗事儿的，才能长出好庄稼。

1.2 然后就是培养这些病毒株，给它们提供合适的“土壤”和“环境”，让它们茁壮成长。

二。

接下来，就是裂解这关键的一步啦。

2.1 这就像是把一个大西瓜切开，得切得恰到好处。

通过特定的方法把病毒裂解，让它们内部的有效成分暴露出来。

2.2 裂解完了还得提纯，把杂质啥的都去掉，留下精华。

这可不能马虎，得像淘米一样，把沙子都筛出去。

2.3 之后就是配比各种成分，要做到精准无误，就跟做饭放盐一样，多了少了都不行。

三。

就是疫苗的成型和检验啦。

3.1 把调配好的疫苗装进合适的容器里，密封好，这一步得小心翼翼，不能出岔子。

3.2 然后就是严格的检验，要经过一道道关卡，确保这疫苗质量过硬，能真正给大家的健康保驾护航。

这检验就像是给学生考试，合格了才能“毕业”。

这四价流感病毒裂解疫苗的制备那可是个精细活儿，每一步都得认认真真，不能有丝毫懈怠。

就盼着这疫苗能让大家都健健康康，远离流感的侵扰，过上舒心的日子！。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911313812.0(22)申请日 2019.12.19(71)申请人 江苏金迪克生物技术有限公司地址 225300 江苏省泰州市郁金路12号(72)发明人 蒋正东　吴建华　陈科　李振辉　李岳勇　赵越　帅旗　赵静　夏建国　余军　(74)专利代理机构 南京正联知识产权代理有限公司 32243代理人 卢霞(51)Int.Cl.A61K 39/145(2006.01)A61K 39/295(2006.01)A61P 31/16(2006.01)C12N 7/06(2006.01)C12R 1/93(2006.01)(54)发明名称一种四价流感病毒裂解疫苗的制备方法(57)摘要本发明提供了一种四价流感病毒裂解疫苗的制备方法，包括如下步骤：1）收获液制备；2）病毒灭活；3）超滤浓缩；4）浓缩后纯化一；5）纯化二；6）病毒裂解；7）裂解后纯化三；8）半成品制备；9）成品制备。

本发明具有如下技术效果：本发明利用经过优化的三步纯化工艺制备的四价流感病毒裂解疫苗样品中具有更低的卵清蛋白含量，更低的杂蛋白含量以及高纯度的血凝素抗原，保证了四价流感病毒裂解疫苗的不良反应更低，疫苗的免疫效果更好，疫苗的安全性更高。

权利要求书1页 说明书8页 附图14页CN 111068048 A 2020.04.28C N 111068048A1.一种四价流感病毒裂解疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)收获液制备：采用世界卫生组织推荐的并经国务院药品监督管理部门批准的H1N1、H3N2、B1(B/Victoria系)和B2(B/Yamagata系)四种流行性感冒病毒株分别接种9-11日龄健康鸡胚，经小时培养，冷胚后收获病毒液；2)病毒灭活：单价病毒合并液中加入终浓度200μg/ml的甲醛进行病毒灭活；3)超滤浓缩：灭活后的收获液采用1000KD超滤膜包进行超滤浓缩，得到病毒浓缩液；4)浓缩后纯化一：先采用蔗糖密度梯度离心法35000rpm离心纯化，在静止时以100±20ml/min的流速从连续流区带离心机转子底部泵入55％的蔗糖溶液1600ml，确认真空度小于40Pa，设置转速为35000rpm；当达到35000rpm时以300±50ml/min，由下向上连续泵入浓缩液，每台离心机一次连续上样量不超过100L浓缩液；进样完毕，以100±20ml/min的速度泵入pH7.2 PBS缓冲液，35000rpm离心45min后，设定转速至0rpm；待离心机转子静止，开启蠕动泵，控制泵速在100±50ml/min，从底部收样；5)纯化二：采用300KD超滤膜包超滤除糖后，再采用柱层析法纯化，介质为Sepharose -4FF凝胶，每批等分成两个部分分次上样进行层析纯化，每次上样量不超过柱体积的8％，上样速度80～350ml/min，进样后泵入pH7.2PBS溶液进行洗脱，洗脱速度353～424ml/min，用280nm紫外检测仪收集病毒峰，层析纯化后收集的纯化液取样进行蛋白质含量检测，控制蛋白质含量不高于1200μg/ml；6)病毒裂解：病毒纯化液加入裂解剂Triton X -100进行病毒裂解，添加终浓度为0.5％Triton X -100，置于恒温摇床中进行裂解16～18小时，得到病毒裂解液；7)裂解后纯化三：病毒裂解液再次经过蔗糖密度梯度离心纯化，CP70区带离心机进入3000rpm区带模式后，从离心机加样器边孔依次进样泵入：pH7.2PBS溶液、裂解后病毒液、30％蔗糖溶液、55％蔗糖溶液，上样速度不超过300ml/min；进样完毕，设置离心机转速30000rpm、离心温度15℃、离心时间3小时，区带离心后收集蔗糖浓度为1％～42％范围内的液段；然后用超滤法去除蔗糖，纯化后的病毒裂解液经除菌过滤，即为单价原液；8)半成品制备：根据各单价原液的血凝素含量，将各型流感病毒按同一血凝素含量进行半成品配制，血凝素配制量在范围内，加入0.01mol/L磷酸盐缓冲液稀释，即为半成品；9)成品制备：半成品经过滤分装、包装、检定合格即为成品，用于预防四种流行性感冒病毒引起的流行性感冒。

流感病毒疫苗生产工艺详细流程你们知道流感病毒疫苗是怎么来的吗？今天呀，我就来给大家讲讲这个特别有趣的过程。

疫苗的生产就像是一场神奇的魔法之旅。

最开始呢，科学家们要先找到流感病毒。

这就好比我们要在一个大大的森林里找到特定的小怪兽一样。

科学家们会从生病的人或者动物那里收集含有流感病毒的样本。

比如说，有个小朋友得了流感，医生就会从他的鼻子或者喉咙里取一点黏液，这里面就可能有流感病毒呢。

找到病毒之后，可不是直接就用来做疫苗啦。

这些病毒还得先被送到一个专门的实验室。

这个实验室就像是病毒的“学校”，不过这个“学校”可没有那么好玩。

在这里，科学家们要把病毒变得很“乖”，让它们不能让我们生病，但是又能让我们的身体学会怎么对付真正的流感病毒。

这就像是把小怪兽的牙齿拔掉，让它变得没那么危险。

接下来，就要开始培养这些“变乖”的病毒了。

科学家们会把病毒放到一些特别的小房子里，这些小房子其实就是细胞。

细胞就像是一个个小小的公寓，病毒住在里面就会开始繁殖。

想象一下，细胞就像一个个小小的气球，病毒在里面不断地复制自己，就像在气球里装满了小豆子一样，慢慢地就会有很多很多的病毒啦。

等病毒繁殖得足够多了，就像装满了好多好多小豆子的气球一样，就要把它们收集起来。

这时候就像我们从树上摘果子一样，把病毒从细胞里小心翼翼地取出来。

然后呢，这些收集起来的病毒要被处理一下。

就像我们把摘下来的果子洗干净、去皮一样。

这个处理过程是为了把病毒变成可以做成疫苗的材料。

再之后呀，这些处理好的病毒材料会被加入到一些其他的东西里面，就像把水果做成水果沙拉一样。

这些东西会让疫苗变得更加稳定，也更容易被我们的身体接受。

这些做好的疫苗就会被装进一个个小瓶子里。

这些小瓶子就像一个个小小的魔法瓶，它们会被送到医院、诊所，等着给小朋友们还有大人们注射呢。

这样，我们的身体打了疫苗之后，就像有了一群小小的士兵，当真正的流感病毒这个“大怪兽”来的时候，身体里的小士兵就会勇敢地和它们战斗，这样我们就不容易得流感啦。

核准日期：2023年02月21日修改日期：四价流感病毒裂解疫苗说明书20XX/20XX株（婴幼儿剂量）请仔细阅读说明书并在医师指导下使用【药品名称】通用名称：四价流感病毒裂解疫苗英文名称：Influenza Vaccine (Split Virion), Inactivated, Quadrivalent汉语拼音：Sijia Liugan Bingdu Liejie Yimiao【成份和性状】本品在轻摇后为微乳白色液体。

本品系用世界卫生组织（WHO）推荐的甲型和乙型流行性感冒（简称流感）病毒株分别接种鸡胚，经培养、收获病毒液、纯化、裂解、病毒灭活后制成。

-主要成分：每0.5mL含以下毒株的抗原：A/California/07/2009 X-179A-like virus…………………………15µg血凝素A/Texas/50/2012 X-223A-like virus………………………………15µg血凝素B/Brisbane/60/2008 BX-35-like virus ……………………………15µg血凝素B/Massachusetts/2/2012 BX-51B-like virus ……………………15µg血凝素本疫苗生产用毒株符合WHO对本流感季节的推荐（北半球）。

因WHO 每年均推荐当年的流感疫苗生产株，因此每年的生产毒株可能不同。

-其他成分：含氯化钠、磷酸氢二钠二水合物、磷酸二氢钾、氯化钾和注射用水的缓冲液。

-已知残留物：本品可能会含有痕量的鸡蛋成分如卵清蛋白，以及制造过程中使用的新霉素、甲醛和Triton X-100。

【接种对象】本品用于6～35月龄儿童的主动免疫，尤其推荐易发生相关并发症的人群。

【作用与用途】接种本疫苗后，可刺激机体产生抗流行性感冒病毒的免疫力。

用于预防疫苗相关型别流感病毒引起的流行性感冒。

本品所含的疫苗成分并不会导致流感。

流感疫苗裂解亚单位流感疫苗裂解亚单位引言：近年来，流感疫情愈发频繁，给人们的生活和健康带来了严重威胁。

为了应对流感的传播，科学家们努力寻找有效的防治方法，其中流感疫苗作为一种重要的手段备受关注。

而裂解亚单位疫苗作为流感疫苗的一种形式，引起了科学界和公众的广泛关注。

本文将深入探讨流感疫苗中的裂解亚单位，以及其对预防流感的作用和意义。

一、流感疫苗简介1.1 流感的危害和影响流感，又称季节性流行性感冒，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。

其病程短暂却病情严重，不仅给患者本身带来极大的痛苦，还会导致医疗资源的极度紧张和社会经济的巨大损失。

每年的流感季节，都成为了人们关注的焦点。

1.2 流感疫苗的意义和作用为了预防流感的传播和控制流感疫情的蔓延，科学家们研发了流感疫苗。

流感疫苗通过引入流感病毒的抗原，激发人体的免疫系统产生免疫反应，以提高人体抵抗流感病毒的能力。

通过接种流感疫苗，不仅可以有效预防流感的感染，还可以减轻疾病的病程和症状。

二、裂解亚单位疫苗的原理和特点2.1 裂解亚单位的定义和作用裂解亚单位是指将流感病毒的外膜裂解开，并选择其中的特定蛋白质作为疫苗的主要成分。

裂解亚单位疫苗与整活灭活疫苗相比，在保留免疫原性的削弱了病毒的致病能力，从而提高了疫苗的安全性和有效性。

2.2 裂解亚单位疫苗的制备和组成裂解亚单位疫苗的制备过程中，首先需要获得流感病毒，并将其进行裂解，获得需要的蛋白质成分。

科学家们会通过一系列的工艺和技术步骤，将这些蛋白质成分纯化并进行组装，最终制备成疫苗。

三、裂解亚单位疫苗的优势和挑战3.1 优势：- 安全性高：裂解亚单位疫苗在制备过程中，能够削弱病毒的致病能力，减少潜在的不良反应。

- 免疫原性强：裂解亚单位疫苗所包含的抗原能够激发人体免疫系统的充分反应，提高人体对流感病毒的免疫能力。

- 稳定性高：裂解亚单位疫苗对存储条件要求相对较低，不易受到外界环境的影响。

3.2 挑战：- 制备过程复杂：裂解亚单位疫苗的制备需要经过一系列的技术步骤和工艺条件控制，增加了制备的复杂性和成本。

流感病毒裂解疫苗Liugan Bingdu Liejie YimiaoInfluenza Vaccine （Split Virion）, Inactivated本品系用世界卫生组织（WHO）推荐的并经国家药品管理部门批准的流感病毒株分别接种鸡胚，经培养、收获病毒液，病毒灭活、纯化、裂解后制成。

用于预防本型病毒引起的流行性感冒。

1 基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”有关要求。

2 制造2.1生产用鸡胚毒种传代和制备用鸡胚应来源于SPF鸡群。

疫苗生产用鸡胚应来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群，并选用9~11日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。

2.2 毒种2.2.1 名称和来源生产用毒种为WHO推荐的甲型和乙型流行性感冒病毒株，经检定证明为WHO 当年推荐的病毒株或相似株。

2.2.2种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。

以WHO 推荐并提供的流感毒株代次为基础，传代建立主种子批和工作种子批，至成品疫苗病毒总传代不得超过5代。

2.2.3种子批检定主种子批应做以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.5项检定。

2.2.3.1 鉴别试验血凝素型别鉴定：应用相应（亚）型流感病毒特异性免疫血清进行血凝抑制试验，结果应证明其抗原性与推荐的病毒株相一致。

2.2.3.2 病毒滴度应用鸡胚半数感染剂量法（EID50）检查，病毒滴度应不低于6.5LgEID50/ml。

2.2.3.3 血凝滴度采用血凝法检测，血凝滴度应不低于1：160。

2.2.3.4无菌检查依法检查（附录XII A），应符合规定。

2.2.3.5支原体检查依法检查（附录XII B），应符合规定。

2.2.3.6 外源性禽白血病病毒检测用相应（亚）型的流感病毒特异性性免疫血清中和病毒后，接种SPF鸡胚细胞，经培养，用酶联免疫法检测培养物，结果应为阴性。

2.2.3.7 外源性禽腺病毒检测用相应（亚）型的流感病毒特异性性免疫血清中和病毒后，接种SPF鸡胚肝细胞，经培养，分别用适宜的血清学方法检测其培养物中的I型和III型禽腺病毒，结果均应阴性。