细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒

Western实验步骤Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。

Western 可以参考如下步骤进行操作。

1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。

对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0028)。

收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。

根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。

因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。

如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)。

2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。

该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。

(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。

例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。

使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。

5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)(P0015)。

核蛋白提取试剂盒说明书货号：R0050规格：50T/100T 产品内容：保存：核/浆蛋白抽提试剂2-8℃保存，PMSF 于-20℃保存。

产品简介：本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。

整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。

得到的蛋白可以用于Western blot 等实验。

本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。

然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela 细胞或40mg 组织）。

操作方法（仅供参考）：*裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

一、对于体外培养细胞：1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。

PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM 。

2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。

500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。

3．对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

4．每20μL 细胞沉淀加入200μL 浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL 或40mg ）。

5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。

细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。

6．冰浴10分钟。

7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。

8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE 、Western 等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。

膜-胞浆蛋白提取方法膜-胞浆蛋白提取方法膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格试剂 A 试剂 B 试剂 C蛋白酶抑制剂混合物蛋白稳定剂BB-3111-150T 10ml 20ml 10ml 250μl 100ulBB-3111-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 200ul储存条件：蛋白酶抑制剂、蛋白稳定剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。

有效期：一年。

产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承当各种生物功能，在疾病的发生、开展过程中扮演重要角色。

膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析^p 及质谱分析^p 等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。

传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和外表活性剂增溶。

去污剂处理睬使膜蛋白丧失其天然构造，因此阻碍了膜蛋白的功能研究。

贝博膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。

本试剂盒提供配套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白和胞浆蛋白。

提取过程简单方便，可在1小时内完成。

提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少穿插污染。

提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析^p 、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

应用实例：1 4 4图片说明：用膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提取细胞样本的'SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。

图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。

图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。

使用方法：A．细胞蛋白提取①1. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心汲取培养基，尽可能吸干，搜集细胞。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3. 细胞样品中参加200μl冷的试剂 A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，2ul蛋白稳定剂，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。

胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒产品编号产品名称包装SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。

本试剂盒主要原理是在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉淀。

最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒是本公司非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白浓度约为 2.5ug/ul或更高。

抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

本试剂盒可足够您进行50次抽提操作！包装清单：试剂包装总量5X Buffer A 1瓶35ml/瓶2X Buffer B1支 1.5ml/支Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支PMSF Solution 1支0.85ml/支User Manual (说明书)1份1份/Kit保存温度： 4℃保存。

Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：试剂体积5X Buffer A0.6mlSolution I（溶液I）30ulSolution II（溶液II）30ulPMSF Solution 15uldd-H2O 2.325ml总体积 3.0ml注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。

2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：试剂体积Solution III（溶液III）20ul胞浆蛋白裂解液I 1.0ml总体积 1.02ml3.制备1ml核裂解液：试剂体积2X Buffer B25ulSolution I（溶液I）0.5ulSolution II（溶液II）0.5ulPMSF Solution0.25uldd-H2O23.75ul总体积 50ul注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。

W e s t e r n b l o t步骤实验蛋白提取及定量、相关试剂配制、电泳转膜及显色过程(全)(1)Western blot实验蛋白提取及定量、相关试剂配制、电泳、转膜及显色过程步骤高征2014年6月第一部分细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提过程 (碧云天试剂盒)一、原理在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的两个细胞组份就是细胞核和细胞浆。

分离细胞核蛋白和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的核蛋白可以用于转录调控方面的研究，例如EMSA(也称gel shift)，footprinting等。

细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提细胞核蛋白与细胞浆蛋白的方法。

约90分钟就可以完成培养细胞的细胞核蛋白与细胞浆蛋白的分离。

抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。

本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。

最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约30-50毫克组织。

二、注意事项1.需自备PMSF。

PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。

2.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3.本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。

可以抽提的组织样品数通常不足100个。

4.使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。

蛋白提取试剂盒选择指南蛋白提取试剂盒选择指南样本动物细菌植物真菌酵母昆虫应用I II I II I II I II I II I II蛋白部位应用I：WB、1D电泳、活性检测、纯化；应用II：等点聚焦、2D电泳、质谱总蛋白3101 3181 3123/8 3182 3124 3183 3127 3189 3125 3185 3126 3193膜蛋白3103/16 3188 3151 3187 3152 3184 3156 3190 3157 3192 3153核蛋白3102 3154 3159 3168胞浆蛋白3113 3180磷酸化蛋白3105/8 G+菌3129 核/质3169 藻类-总3131 核/质31681 液体-总3133糖蛋白3107 G-菌3130 叶绿体3179 藻类-膜3170 土壤-总3132膜/胞浆/核分步提取3104 细菌外膜31512 叶绿体膜3175 血浆3137膜/胞浆3111 线粒体3172 血清3138核/胞浆3112 线粒体膜3173线粒体3176/7线粒体膜3158核膜3174石蜡包埋3164甲醛固定3165冻存样品31211 脑组织31227骨组织总蛋白3161 脂肪组织31226蛋白提取试剂盒选择指南相关产品：蛋白提取BB-3101 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒BB-3102 BestBio贝博生物核蛋白提取试剂盒BB-3103 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒BB-3104 BestBio贝博生物膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒BB-31042 BestBio贝博生物细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒BB-3105 BestBio贝博生物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-31051 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-3106 BestBio贝博生物活性蛋白提取试剂盒BB-3108 BestBio贝博生物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-31081 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-3109 BestBio贝博生物糖蛋白富集试剂盒BB-3111 BestBio贝博生物膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒BB-3112 BestBio贝博生物核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒BB-3113 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒BB-3114 BestBio贝博生物细胞跨膜蛋白提取试剂盒BB-3115 BestBio贝博生物细胞核蛋白提取试剂盒BB-31152 BestBio贝博生物组织核蛋白提取试剂盒BB-3116 BestBio贝博生物细胞膜蛋白提取试剂盒BB-31161 BestBio贝博生物细胞质膜蛋白提取试剂盒BB-3117 BestBio贝博生物组蛋白提取试剂盒BB-31171 BestBio贝博生物植物组蛋白提取试剂盒BB-31172 BestBio贝博生物昆虫组蛋白提取试剂盒BB-31173 BestBio贝博生物酵母组蛋白提取试剂盒BB-3118 BestBio贝博生物胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒BB-3121 BestBio贝博生物细胞蛋白提取试剂盒BB-31211 BestBio贝博生物冻存细胞蛋白提取试剂盒BB-3122 BestBio贝博生物组织蛋白提取试剂盒BB-31226 BestBio贝博生物脂肪组织蛋白提取试剂盒BB-31227 BestBio贝博生物脑组织蛋白提取试剂盒BB-3123 BestBio贝博生物细菌蛋白提取试剂盒BB-3124 BestBio贝博生物植物蛋白提取试剂盒BB-31241 BestBio贝博生物植物根茎蛋白提取试剂盒BB-3125 BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒BB-3126 BestBio贝博生物昆虫蛋白提取试剂盒BB-31262 BestBio贝博生物昆虫胞浆蛋白提取试剂盒BB-3127 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒BB-31272 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒BB-3128 BestBio贝博生物大肠杆菌蛋白提取试剂盒BB-3129 BestBio贝博生物革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒BB-3130 BestBio贝博生物革兰氏阴性菌蛋白提取试剂盒BB-3131 BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒BB-3132 BestBio贝博生物土壤蛋白提取试剂盒BB-3133 BestBio贝博生物液体样本蛋白提取试剂盒BB-31332 BestBio贝博生物乳清蛋白提取试剂盒BB-3134 BestBio贝博生物白细胞蛋白提取试剂盒BB-3135 BestBio贝博生物血液单核细胞蛋白提取试剂盒蛋白提取试剂盒选择指南BB-3136 BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒BB-3137 BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒BB-3138 BestBio贝博生物血清蛋白提取试剂盒BB-3139 BestBio贝博生物血细胞蛋白提取试剂盒BB-3140 BestBio贝博生物全血蛋白提取试剂盒BB-31401 BestBio贝博生物血小板蛋白提取试剂盒BB-31452 BestBio贝博生物溶酶体蛋白提取试剂盒BB-31453 BestBio贝博生物高尔基体蛋白提取试剂盒BB-31454 BestBio贝博生物内质网蛋白提取试剂盒BB-3141 BestBio贝博生物厚壁微生物蛋白提取试剂盒BB-3151 BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒BB-31511 BestBio贝博生物细菌跨膜蛋白提取试剂盒BB-31512 BestBio贝博生物细菌外膜蛋白提取试剂盒BB-31515 BestBio贝博生物支原体膜蛋白提取试剂盒BB-3152 BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒BB-31521 BestBio贝博生物植物跨膜蛋白提取试剂盒BB-3153 BestBio贝博生物昆虫膜蛋白提取试剂盒BB-31531 BestBio贝博生物昆虫跨膜蛋白提取试剂盒BB-3154 BestBio贝博生物植物核蛋白提取试剂盒BB-3155 BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒BB-3156 BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒BB-3157 BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒BB-31572 BestBio贝博生物酵母膜蛋白/细胞质蛋白提取试剂盒BB-3158 BestBio贝博生物线粒体膜蛋白提取试剂盒BB-3159 BestBio贝博生物真菌核蛋白提取试剂盒BB-3160 BestBio贝博生物大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒BB-3161 BestBio贝博生物骨组织蛋白提取试剂盒BB-3162 BestBio贝博生物高脂肪样本蛋白提取试剂盒BB-3163 BestBio贝博生物神经元蛋白提取试剂盒BB-3164 BestBio贝博生物石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒BB-3165 BestBio贝博生物甲醛固定组织蛋白提取试剂盒BB-31651 BestBio贝博生物固定细胞蛋白提取试剂盒BB-3166 BestBio贝博生物冻存样本核蛋白提取试剂盒BB-3167 BestBio贝博生物植物核蛋白/细胞器蛋白提取试剂盒BB-3168 BestBio贝博生物酵母核蛋白提取试剂盒BB-31681 BestBio贝博生物酵母核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒BB-3169 BestBio贝博生物植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒BB-3170 BestBio贝博生物藻类膜蛋白提取试剂盒BB-3171 BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒BB-31711 BestBio贝博生物组织线粒体蛋白提取试剂盒BB-3172 BestBio贝博生物植物线粒体蛋白提取试剂盒BB-31721 BestBio贝博生物丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒BB-3173 BestBio贝博生物植物线粒体膜蛋白提取试剂盒BB-3174 BestBio贝博生物细胞核膜蛋白提取试剂盒BB-3175 BestBio贝博生物植物叶绿体膜蛋白提取试剂盒BB-3176 BestBio贝博生物线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3177 BestBio贝博生物组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3178 BestBio贝博生物线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3179 BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒BB-31791 BestBio贝博生物植物膜蛋白/叶绿体蛋白提取试剂盒BB-3180 BestBio贝博生物植物胞质蛋白提取试剂盒BB-3181 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）蛋白提取试剂盒选择指南BB-31812 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31813 BestBio贝博生物植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3182 BestBio贝博生物细菌总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3183 BestBio贝博生物植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31836 BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3184 BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31841 BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3185 BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3186 BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3187 BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3188 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3189 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3190 BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3191 BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3192 BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3193 BestBio贝博生物昆虫总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3194 BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31951 BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31961 BestBio贝博生物细胞蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31962 BestBio贝博生物组织蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31963 BestBio贝博生物植物蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31964 BestBio贝博生物细菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31965 BestBio贝博生物昆虫蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31966 BestBio贝博生物酵母蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31967 BestBio贝博生物血液蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31968 BestBio贝博生物真菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31981 BestBio贝博生物细胞蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31982 BestBio贝博生物组织蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31983 BestBio贝博生物植物蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31984 BestBio贝博生物细菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31985 BestBio贝博生物昆虫蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31986 BestBio贝博生物酵母蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31987 BestBio贝博生物血液蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31988 BestBio贝博生物真菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）。

蛋白提取制备相关产品蛋白抽提试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提, 100 extractions)S1250 100 次提取 700 元概述：实体组织如大脑富含磷脂、神经纤维或血管壁含大量结缔组织、而脂肪则有大量油脂，常规方法难以有效从这些组织提取蛋白。

蛋白抽提试剂盒-I用于从各种实体软组织或细胞快速提取总蛋白。

用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，或用裂解结合缓冲液振荡重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分，离心分离即可得到总蛋白；简便高效，30-60分钟内完成提取。

试剂盒可进行100次提取，可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备。

每次可提取1～100 mg实体组织或1 x 107细胞。

一次从10-100mg实体组织提取的总蛋白的量通常足以进行数十次Western Blot或免疫沉淀。

适用：(1) 各种实体软组织。

如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等。

(2) 各种原代和传代细胞。

组成：(1) 裂解-结合缓冲液100 ml；(2) 抽提试剂100 ml。

每毫升裂解缓冲液和抽提试剂可提取100 mg组织或1 x 107细胞。

储存：室温2年。

蛋白抽提试剂盒-II (液体样品蛋白抽提和回收，100 extraction)S1255 100 次提取 480 元200 次提取 780 元概述：蛋白抽提试剂盒-II 用于液体样品中蛋白浓缩、提取、或脱盐、脱去垢剂、脱还原剂等。

适用于各种液体样品(10 µl～1000 ml)，如蛋白溶液、胞浆胞核蛋白提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等各种体液。

蛋白回收率95%，远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除样品中的脂质，不影响后续SDS-PAGE和Western Blot实验。

可用1.5ml离心管微量提取也可大规模制备，15分钟完成提取，简便高效。

该试剂盒也适于从细胞悬液提取总蛋白。

Western实验步骤Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。

Western 可以参考如下步骤进行操作。

1. 收集蛋白样品(Protein sample preparation)可以使用适当的裂解液，例如碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)、RIPA裂解液等，裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品。

对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白、细胞浆蛋白、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组份蛋白，也可以使用试剂盒进行抽提，例如碧云天生产的细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(P0028)。

收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。

根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。

因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。

如果使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液或RIPA裂解液，可以使用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0011/P0012)。

2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制SDS-PAGE凝胶可以参考一些文献资料进行配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒(P0012A)。

该试剂盒提供了除水和配胶器具外的所有试剂以及配制各种浓度SDS-PAGE的配方。

(2) 样品处理在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。

例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。

使用5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以减小上样体积，在相同体积的上样孔内可以上样更多的蛋白样品。

5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液可以参考相关文献资料配制，也可以使用碧云天生产的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)(P0015)。

100℃或沸水浴加热3-5分钟，以充分变性蛋白。

4、实验委托者之需要提供样品，即可完成整个实验。

Fig 1：Lanes:Lane 1Lane 2Lane 3Lane 4Lane 5Lane 6 Rows(IOD)(IOD)(IOD)(IOD)(IOD)(IOD) Rock1242.39337.97229.78233.16151.48205.53 Rock2233.48219.11238.76191.61151.18203.66 GAPDH160.18130.47141.06156.13147.77151.07样本编号253828232624WB操作规程一．设备和试剂1．设备① 电泳电源Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell,Mini Teans-Blot Module,and PowerPac Basic Power Supply (BIO-RAD,Catalog#165-3323)② 电泳仪及附件Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell (BIO-RAD,Catalog#165-3301)③ 电转仪及附件Mini Teans-Blot Elecreophoresis Transfer Cell (BIO-RAD,Catalog#170- 3930) ④ NC膜PIERCE，Catalog#88018⑤ 滤纸Whatman,3MM CHRC．电泳缓冲液，1L3g Tris-Base、14.4g 甘氨酸、1g SDS，加蒸馏水至IL，pH应该在8.3左右。

也可以制成10×的储存液，在室温下长期保存。

D．电泳转移缓冲液,1L3g Tris-Base、14.4g 甘氨酸、甲醇200ml, 加蒸馏水至1L, 也可以制成10×的储存液，在湿温下长期保存。

E．5×样品缓冲液,10ml0.6ml 1mol/L的Tris-HCl（Ph6.8）、5ml 50%的甘油、2ml 10%的SDS、0.5ml 2-巯基乙醇、1ml 1%溴酚蓝，0.9ml的蒸馏水，可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。

WB干货丨返校后你必须要知道的WB样本前处理产品组合方案在五一黄金旅游季后，天气回暖。

在全国军民同心的共同努力下，疫情日渐好转，而在家隔离多日的小伙伴们对科研事业孜孜以求的精神“断崖式”增长。

在复工复学的大潮中，小伙伴们怀着激动的心情回到了心心念念的实验室，开启自己热爱的实验生涯。

有了成熟的蛋白样本前处理方法，WB实验就成功了一大半。

蛋白提取根据研究对象的不同，我们需要对细胞不同区域的相关蛋白进行深入研究，此时Abbkine的ExKine系列胞浆/胞膜/胞核等区域蛋白提取的试剂盒在科学家精益求精的科研态度下应运而生。

比如：ExKine™细胞核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒（KTP3001）；ExKine™总膜蛋白提取试剂盒（KTP3004）；ExKine™总蛋白提取试剂盒（KTP3006）；除了对细胞不同区域显微结构进行研究，我们的研究水平也会更深入地进入到细胞的亚显微结构。

要研究亚显微结构，首先我们的落脚点就在不同细胞器中的蛋白研究，科学家们将会把细胞质内结构相对独立的细胞器进行提取，再用温和的细胞裂解液（如：RIPA细胞裂解液）对提取的细胞器进行裂解，便可提取到纯净的不同细胞器蛋白。

再对该类蛋白进行定性定量的深入研究。

蛋白纯化随着基因重组技术的发展，越来越多的融合蛋白成为人们研究靶蛋白的一个重要手段。

而其中一个重要运用就是标签蛋白。

运用标签蛋白的抗原特异性强且对靶蛋白的结构功能几乎不存在影响这个特征，人们可以用标签蛋白纯化填料将带有相应标签的重组蛋白进行识别并分离出来。

由此，Purkine系列蛋白纯化工具应运而生。

比如：PurKine™组氨酸标签Ni【镍】-IDA树脂温馨提示：如果是不带标签的普通蛋白，则不需要以上操作，为避免蛋白降解，在细胞/组织裂解之后，直接进入第三步。

蛋白定量比如：蛋白质定量试剂盒（BCA法）K TD3001好了，关于WB实验的介绍就先到这里啦，下期我们再接着介绍哦。

胞核胞浆胞膜制备试剂盒Nucl-Cyto-MemPreparationKit货号：P060004描述：从哺乳动物新鲜或冻存的组织块、贴壁或悬浮培养细胞中，制备细胞核、细胞膜与胞内质膜、细胞浆等三种主要亚细胞组分。

独特的试剂成分与优化的制备方案相结合，使胞核-胞膜-胞浆制备过程简单易行，无需特殊设备和超速离心，制备过程可在1小时内完成。

制备的细胞核、细胞浆组分纯度甚高，而且较少交叉污染。

单一的细胞膜的纯化是一个特殊问题，本试剂盒制备的胞膜是细胞膜和细胞器如线粒体、内质网、高尔基体及其质膜的混合物。

制备的细胞核是完整的未裂解的细胞核，但胞浆组分为可溶性胞浆蛋白。

制备的亚细胞组分的纯度可胜任后续免疫共沉淀、SDS-PAGE、2-Dgel电泳、WesternBlotting、酶活性测定、受体分析等。

组成：(50extractions,8x106cellsperextraction)CER,CytosolExtractionReagent，25ml;MER,MembraneExtractionReagent，2.5mlNER,NuclearExtractionReagent，50ml;SuspensionBuffer，10ml储存：4ºC避光保存1年。

收集细胞：准确计数，每一制备使用等量的细胞数，将明显改善后续检测结果的一致性。

每一制备约需要8x106~1x107个细胞。

贴壁细胞：PBS冲洗细胞皿，胰蛋白酶消化细胞。

800xg离心5-10min。

弃上清，用PBS重悬洗涤细胞并再次离心收集细胞。

注意：为避免胰蛋白酶在后续制备过程中降解蛋白质，可用无酶细胞消化液(Non-enzymeCellDisassociationSolution)使贴壁培养的细胞与瓶皿分离。

悬浮细胞：800xg离心5-10min。

弃上清。

用PBS重悬洗涤细胞并再次离心收集细胞。

估计细胞沉淀压积PCV(packedcellvolume)：通常1x106个细胞离心后的PCV约为10-20μl，1x107个细胞的PCV约为100μl。

蛋⽩提取系列最后⼀节：核蛋⽩提取不知不觉年算是过完了，这次离开家不知下次归期⼜是何时，每每羡慕本地⼈家，可以随时随地回家，可以不⽤太长时间的奔波，可以在⽗母⾝边。

回家，⼀说起来就让⼈很开⼼，虽然回家这星期特别忙碌，但是⼼情却是⽆⽐放松，挨家挨户的串亲戚，哥哥，婶婶，姐姐，姐夫，东奔西跑的认长辈，舅舅，舅妈，⼤爷，⼤娘，觥筹交错的瞎聊天，来来往往，热热闹闹，甚是开⼼。

⼀年不见，⼩侄⼦竟会跑了，去年见还是抱在怀⾥，不顺⼼就哇哇地哭，⼩侄⼥要上⼀年级了，还会背英语了，⼤侄⼥都要上初中了，好像会打扮⾃⼰了。

现在⼩孩⼦都坐满⼀桌了，正如我们⼩时候，四五个哥哥姐姐在前⾯跑着玩，五六岁的我在后⾯开⼼的跟着，刚会跑的妹妹在后⾯喊着，姐，等等我，啪唧，⼜摔了⼀跤。

正如我们⼩时候，⼀⼤院⼦的⼈打牌，2定主，升级，拱猪，争上游，你应该先出3，xx拿错牌了，还是xx打的好。

正如我们⼩时候，初中以后学习压⼒还是来了。

正如我们⼩时候，那时候所有的家⼈都还在。

仿佛看到了当时的⽗母，是不是也像我们现在⼀样年轻，是不是也在努⼒拼搏，为我们撑起⼀⽚天，是不是也曾想过多陪陪⾃⼰的⽗母。

以后的⾃⼰不知道能不能做到像⽗母⼀样那么优秀，但是⼀定会多回家陪陪⽗母，⽗母在，⼈⽣尚有来处。

提蛋⽩的系列到现在就差不多结束了核蛋⽩的提取也如之前⼀样，⾃⼰配制和试剂盒提取都有提及。

A液：5mM PIPES pH 8.0， 85mM KCL， 0.5%NP40，1%cocktailB液：50mM Tris-Cl pH 8.1， 10mM EDTA，1% SDS，1% cocktail细胞样品1.如提取总蛋⽩⼀样，弃去培养基，在培养⽫中加⼊1ml冷的PBS，洗三次，再加⼊PBS。

2.⽤细胞刮尽可能刮下细胞，收集到1.5mlEP管中。

预冷离⼼机，4℃，1,000g，离⼼4分钟（为尽可能多的获得细胞，可将离⼼后的上清再重复刮细胞⼀次）。

3.弃掉上清，将细胞重悬于A液中（加⼊的体积按10^6/200ul，10cm dish加1ml）。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：EMSA/Gel-Shift 试剂盒产品编号产品名称包装GS002 EMSA/Gel-Shift 试剂盒100次产品简介：EMSA/Gel-Shift试剂盒(EMSA/Gel-Shift Kit)是用于EMSA(也称gel shift)研究的一个试剂盒。

通过EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。

本试剂盒提供了进行EMSA实验的探针标记、蛋白和DNA结合以及EMSA上样等的主要试剂，使EMSA实验变得简单方便。

EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)等有效成分。

其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。

每个EMSA/Gel-Shift试剂盒足够标记10-20次探针，足够进行100个蛋白和探针的结合反应。

包装清单：产品编号产品名称包装GS002-1 T4 Polynucleotide Kinase 100UGS002-2 T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 100µlGS002-3 Nuclease-Free Water 1mlGS002-4 探针标记终止液100µlGS002-5 5M 醋酸铵600µlGS002-6 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 200µlGS002-7 EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色，10X) 200µlGS002-8 EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X) 200µlGS002-9 TE 1ml/管，共2管—说明书1份保存条件：-20ºC保存，一年有效。

免疫印迹法免疫印迹法（immunobiotting test，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（enzyme linked immunoelectrotransfer blot，EITB），因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法 Southern blot 相类似，亦被称为Western-blot。

免疫印迹法分三个阶段进行。

第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）：抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯酰胺凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。

此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。

第二阶段为电转移：将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（100V）和大电流（1～2A），通电45min 转移即可完成。

此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见。

第三阶段为酶免疫定位：将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜（相当于包被了抗原的固相载体）依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色。

常用的HRP底物为3，3’-二氨基联苯胺（呈棕色）和4-氯-1-萘酚（呈蓝紫色）。

阳性反应的条带清晰可辨，并可根据SDS-PAGE时加入的分子量标准，确定各组分的分子量。

本法综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，是一个有效的分析手段，不仅广泛应用于分析抗原组分及其免疫活性，并可用于疾病的诊断。

在艾滋病病毒感染中此法作为确诊试验。

抗原经电泳转移在硝酸纤维素膜上后，将膜切成小条，配合酶标抗体及显色底物制成的试剂盒，可方便地在实验室中供检测用。

根据出现显色线条的位置可判断有无针对病毒的特异性抗体。

一． SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）基本原理是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体acr聚合成长链并通过双功能化合物甲叉双丙烯酰胺Bis交联而成的三维网状结构凝胶。

聚丙烯酰胺凝胶的机械性、弹性、透明度、粘着度取决于凝胶的总浓度，总浓度越大，平均孔径越小，机械强度越强。