放射抗拒性鼻咽癌细胞系的建立及差异表达基因

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分子生物标记对常见肿瘤放射治疗的意义

分子生物标记对常见肿瘤放射治疗的意义【摘要】放射治疗是治疗恶心肿瘤的主要手段之一，它和外科肿瘤学，内科肿瘤学组成了恶性肿瘤治疗的主要手段。

肿瘤疾病严重威胁着患者的生命，因此在肿瘤治疗上，必须在询证医学的指导下规范治疗。

然而病人的差异，肿瘤的异型性现实存在，即使是同一种病理类型的肿瘤对同一种治疗的反应也不同，这又要求我们采取个体化治疗。

在放射治疗中，根据分子标记预测肿瘤的放疗敏感性和抵抗性，以肿瘤放射生物学为基础制定个体化放射治疗方案也是必须的。

【关键词】放射治疗；放疗敏感性和抵抗性；分子预测；个体化放射治疗【中图分类号】R 734.2 【文献标识码】A 【文章编号】1004- 7484（20__）05- 0436- 02The importance of Molecular biomarkers in the Radiation OncologyCui Wen- zhen,Zhang Dong- dong(Shangqiu Medical College,Shangqiu 476000,China) 【Abstract】Radiation therapy is one of the primary the treatments of malignant tumors, beside ofsurgery and internal medicine. Tumor disease is a serious threat to the lives of the patients, so the cancer treatment must be under the guidance of evidence-based-medicine. However, patients are different; tumor atypia exists in reality, even tumor with the same pathological type responds differently to the same treatment, which in turn requires us to take individual treatment. Because molecular markers predict tumors ensitivity and resistance to radiation, in the radiation therapy, it is necessary to develop individual-based radiation treatment according to the Radiation Biology 。

放疗总论及生物试题3

放疗试题(总论及放射生物)一、选择1. 对放射治疗正确的说法是 :A. 优于手术治疗B. 仅仅是治疗恶性肿瘤C. 单独放射治疗适应症很广泛D. 可治疗部分恶性肿瘤和良性肿瘤E. 只用于外科手术的辅助治疗2. 下列哪类恶性肿瘤对放射抗拒：A．鼻咽癌 B．淋巴瘤C．乳腺癌 D．胶质瘤E．前列腺癌3. 临床放疗中允许出现的放射反应是：A．放射性脊髓炎 B．放射性脱发C．肠穿孔 D．骨坏死E．脑坏死4. 术前放射治疗的缺点：A．损伤血管 B．降低放射敏感性C．可能增加手术困难 D．延迟手术E．增加正常组织损伤5. 术后放疗不能够：A．提高无瘤生存率 B．提高远期生存率C．提高生存质量 D．提高肿瘤的局控率E．减少肿瘤细胞播散6 ．放化综合治疗对下列哪类肿瘤疗效不确定：A．鼻咽癌(中、晚期) B．乳腺癌C．早期喉癌 D．非小细胞癌E．淋巴瘤7.姑息治疗的照射剂量为：A．根治剂量 B．亚临床病灶剂量C．根治剂量的 1/2 D．根治剂量的 4/5E．根据病情决定8.近距离治疗可分为：A．大剂量率、中剂量率、小剂量率 B．超低剂量率、低剂量率、中剂量率C．超高剂量率、高剂量率、低剂量率 D．低剂量率、中剂量率、高剂量率E．超高剂量率、中剂量率、超低剂量率9.近距离治疗中，模照射技术是指：A．体模内照射 B．水模内照射C．模具照射 D．蜡模照射E．敷贴10.高剂量率近距离治疗适合于：A．永久性植入治疗 B．后装治疗C．体积大的肿瘤 D．治疗时间长的肿瘤E．碘-125 植入治疗11.早反应组织有 :A. 粘膜B. 心脏C. 肾D. 神经系统12.肿瘤细胞放射敏感性差一般说来肿瘤有下列特征：A 一般增殖快B 分化程度低C 放疗剂量偏高D 可治愈13.下列哪项不是近距离治疗的特点 :A．局部剂量高，达到边缘后剂量陡然下降。

B．照射范围内剂量分布均匀，近源处剂量高。

C．照射时间短。

D．一次连续照射或数次照射。

14．一个放疗方案为70Gy/35次／ 7周，每天1次，一周5次，临床上称为 A．常规分割方案B．超分割方案C．加速超分割方案D．分段方案E．加速分割方案15．放射敏感性A．等于治愈性B. 与肿瘤局部控制相关C．等于生存率D．与生存率无关E．与局部控制率无关16．总疗程延长可以A．减轻正常组织反应及提高肿瘤局部控制率B．减轻正常组织反应，但降低了局部控制率C．增加了正常组织反应也提高了肿瘤局部控制率D．不影响正常组织反应E．不影响局部控制率17． 45％可治愈的恶胜肿瘤中，放射治疗所占份额为A． 5%B． 10％C． 18％D． 22%E． 27%18．放射抗拒的恶性肿瘤如软组织肉瘤A．单一放射治疗可以根治B．因为是放射抗拒的所以放射治疗无用C．放射治疗只能用于手术后D．放射治疗只能用于手术以前E．放射治疗是综合治疗的主要手段之一19．高LET射线的特点是A． RBE高， OER高B． RBE高， OER低C． RBE低， OER高D． RBE低， OER低E．与RBE和OER无关20．放射线对细胞的杀灭作用主要通过损伤A．蛋白质B．mRNAC．细膜膜D．DNAE．细胞质21．绘制细胞存活曲线时A．横轴是剂量，对数坐标；纵轴是细胞存活率，线性坐标B．横轴是细胞存活率，对数坐标；纵轴是剂量，线性坐标C．横轴是剂量，线性坐标：纵轴是细胞存活率，对数坐标D．横轴是细胞存活率，线性坐标；纵轴是剂量，对数坐标E．横轴是剂量，线性坐标；纵轴是细胞存活率．线性22 ．关于巴黎剂量学系统中基准剂量点的描述，错误的是A．在正三角形各边垂直平分线交叉点B．正方形对角线的交叉点C．是源之间剂量最低的位置D．是长方形对角线的交叉点23．关于125I粒子植入治疗的叙述，错误的是A．是一种永久植入技术B．是一种最新的先进放疗技术，正确的称呼应为体内γ 刀C．是一项传统的近距离组织间插植治疗，但技术上有改进和更新 D．剂量分布可由计算机软件计算显示E．在前列腺肿瘤的治疗方面颇为成功二、填空：1. 肿瘤放射治疗学是建立在( ) 、( ) 、( ) 和( )基础上的一门学科。

鼻咽癌放疗后复发的分子机理研究进展

ｓｈｏｃｋ
鼻咽癌是我国南方地区常见恶性肿瘤之一，以放射治疗为主，但疗效尚不理想，约５５％的ＮＰＣ在放疗后５年出现复发转移。其原因主要与ＮＰＣ发病部位隐蔽、鼻咽部组织构成复杂，治疗方式较单一，且不同的ＮＰＣ患者在病理类型、肿瘤分化程度、就诊时病变严重程度、临床表现、体质状况、对放化疗敏感性方面都存在着不同程度的差异有关。本文对影响ＮＰＣ放疗敏感性的机制综述如下。
２瘤细胞凋亡调节与ＮＰＣ放疗后复发
２．１
等ｍ１研究表明，不同辐射抗拒鼻咽癌细胞株ＣＮＥ一２和ＣＮＥ一２Ｒ细胞的ＳＴＲ基因座表达存在量和质的差异，变异的ＳＴＲ基因座可能参与鼻咽癌细胞ＣＮＥ一２辐射抗拒的诱导。至于这些串联重复序列如何影响ＮＰＣ细胞辐射抗拒的确切机制有待进一步探讨。２．４放疗群集耐受性（ｍｕａｔｉｃｅｌｌｕｌａｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）研究表明，实
・
基金项目：国家自然科学基金（ＮＯ：３０６７０８０６） △通讯作者：胡新荣。教授．博士生导师
作者简介：邸小青（１９８４一），女（汉族）在读硕士・９３６・
万方数据
西南军医２００９年９月第１１卷第５期
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＳｕｒｇｅｏｎｉｎＳｏｕｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａＳｅｐｔ．，２００９：１１（５）
ｐｒｏｔｅｉｎｈｅａｔｓｈｏｃｋ７０ｋＤａ
交联，最终导致细胞死亡。ＤＮＡ的修复能力是影响细胞存活和死亡的原因之一。ｈＭＳＨ２是被研究最多的错配修复系统基因之一。ｈＭＳＨ２蛋白参与组成ｈＭｕｔＳａ和ｈＭｕｔＳｌ３二聚体，识别ＤＮＡ复制中的错配碱基及插入缺失环，并与之结合，是完成ＤＮＡ修复必需的组件之一【１０】。范凯Ｈ３等报道放射可以诱导鼻咽癌细胞ｈＭ・
・９３７・
ｂｃｌ－２基因ｂｃｌ－２基因是目前发现的抗凋亡作用最强的

EGFR与鼻咽癌放射敏感性及相关性的研究进展

广州市救助管理站，广东广州５１００５０）
【摘要】鼻咽癌局部失败（包括局部残留和局部复发）仍是当前治疗失败的主要原因，而局部失败的主要原因之一是不同个
体肿瘤对放射线的敏感性不同。因此，研究和探索在放疗前即对其放射敏感性做出预测性分析的癌基因是目前放射生物学研究的
ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｆＥＧＦＲａｎｄＲａｄｉａｔｉｏｎＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＮａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌＣａｒｃｉｎｏｍａＷＡＮＧＬｉＰＡＮＹａｎｄｏｎｇｅ，ＤＥＮＧＨｕｉ
制，并指出以ＥＧＦＲ为靶点实施药物干预的靶向治疗与肿瘤放疗相结合将是一项具有Ｒ；鼻咽癌；放射敏｝生
中图分类号：Ｒ７３９．６文献标识码： ’ Ｂｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４ — ４６５９．２０１７．０２．０２８７
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｙｔｔｏｍａｋｅａｐｒｅｄｉｃｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｃａｎｃｅｒｇｅｎｅｉｓｔｈｅｒａｄｉａｔｉｏｎｂｉｏｌｏｇｙｒｅｓｅａｒｃｈｈｏｔｓｐｏｔ．ＥＧＦＲｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｏｆ

鼻咽癌放射后诱发肉瘤的研究进展

ｕａｎｇｚｈｏｕＣｈｉｎａ，５１０３１７
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｒａｄｉａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙｉｓｔｈｅｐｒｅｆｅｒｒｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｕｔｒａｄｉａｔｉｏｎ－ｒａｙｓａｒｅｔｈｅｎｏｎ－ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ，ｔｈｅｒａｙｓｃａｎｋｉｌｌｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ｉｎｊｕｒｅｄｎｏｒｍａｌｃｅｌｌｓ，ａｎｄｅｖｅｎｉｎｄｕｃｅｄｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒ．Ｃａｎｃｅｒａｃｃｏｕｎｔｓｆｏｒｔｈｅｍａｉｎｐａｒｔｏｆｔｈｅｍ；ｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｒａｔｅｏｆｓａｒｃｏｍａｉｓｌｅｓｓ．Ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｒａｄｉａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄｓａｒｃｏｍａｓｈａｖｅａｒｏｕｓｅｄｅｘｔｅｎｓｉｖｅｃｏｎｃｅｒｎａｎｄｆｕｒｔｈｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ．
横纹肌肉瘤起源于向横纹肌分化的原始间叶细胞，分化发育形态类似横纹肌细胞，肿瘤并非横纹肌发生。按形态学特点分为胚胎型、葡萄簇型、腺泡型和多形性型等４型。胚胎型多见于儿童，葡萄簇型常见于婴幼儿，腺泡型多见于青年，多形型易发生于成年人。采用特异性肌动蛋白（ＨＨＦ－３５）、结蛋白（Ｄｅｓｍｉ）、肌红蛋白（Ｍｙｏｌｏｂｉｎ）等免疫组化标记明确其组织来源［９］。胚胎型，镜下大部分以梭形、星形及圆形细胞为主，疏松排列或呈网状结构；腺泡型，镜下以大圆细胞为主，腺泡状较明显。
２００８年０７月第３卷第１３期
中国医疗前沿ＣｈｉｎａＨｅａｌｔｈｃａｒｅＩｎｎｏｖａｔｉｏｎ

辐射致鼻咽癌细胞株cdkl和survivin表达与细胞增殖时相转换的关系

ＡｂｓｔｒａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴＯｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄｃｅｌｌｕｌａｒｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ（ＡＣＳ）ａｎｄｒａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｎ
多，ｅｄｋｌ和ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达明显上调，此期即再增殖期，结论：细胞衰老可能是人鼻咽癌细胞放射后的反应，衰老细胞中ｃｄｋｌ
和ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达上调可能是鼻咽癌衰老细胞再增殖机制，也可能是鼻咽癌局部复发和进展的根源。
Ｌ：ＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＮＡＴＯＭＹＶｏ１．３７Ｎｏ．１２０１４
解剖学杂志
２０１４年第３７卷第１期
辐射致鼻咽癌细胞株ｃｄｋｌ和ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达与细胞增殖时相转换的关系
阳性细胞达５５以上，Ｈ— Ｅ染色可见四倍体细胞，ｃｄｋｌ和ｓｕｒｖｉｖｉｎ表达明显下降，ＰＣＮＡ下调不明显，此期即细胞增殖阻滞期；照射细胞后第２６天以后，细胞ＢｒｄＵ标记率恢复大于９０，ｓＡ＿ｇａ１阳性细胞小于３，流式检测Ｇ２／Ｍ期细胞比例增
ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＣＮＥ２ｔｒｅａｔｅｄ－ｒａｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｂｙｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）ｓｔａｉｎｉｎｇ，ＢｒｄＵｓｔａｉｎｉｎｇ，ＳＡｇａｌ，ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄｃｅｌｌｃｏｕｎｔｉｎｇｄｅｔｅｃｔｅｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

DNA高甲基化介导FOXO1转录表达下调促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力

DNA高甲基化介导FOXO1转录表达下调促进鼻咽癌细胞增殖和侵袭能力于鹏;金金欣;冀火金;黄兰川;刘进;蔡永林【期刊名称】《广西医科大学学报》【年(卷),期】2024(41)3【摘要】目的:探索叉头盒O1(FOXO1)在鼻咽癌(NPC)中异常表达的分子机制,及其对NPC细胞恶性生物学行为的影响。

方法:采用GEO数据集分析NPC中FOXO1表达水平,采用R4.2.1软件进行基因集富集分析。

构建FOXO1过表达的NPC细胞系5-8F、HONE1(FOXO1-5-8F、Ctrl-5-8F、FOXO1-HONE1、Ctrl-HONE1)。

分别通过CCK-8法、划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术分析细胞周期。

通过重亚硫酸氢盐基因测序技术进行DNA甲基化测序。

结果:FOXO1 mRNA在NPC细胞和组织中表达下调。

FOXO1过表达组的细胞增殖能力和细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.05),相同时间内,空白对照组的细胞侵袭数量高于FOXO1过表达组(P<0.05),FOXO1过表达抑制细胞周期(P<0.05)。

在NPC组织中,FOXO1 DNA启动子区域存在甲基化位点,其甲基化水平明显高于非癌组织(P<0.05)。

结论:NPC中FOXO1基因DNA高甲基化导致其转录下调,由此促进肿瘤细胞的增殖和侵袭。

FOXO1可能是NPC的肿瘤抑制基因。

【总页数】9页(P364-372)【作者】于鹏;金金欣;冀火金;黄兰川;刘进;蔡永林【作者单位】桂林医学院临床医学院;梧州市红十字会医院医学检验科;右江民族医学院公共卫生与管理学院;广西卫生健康委员会鼻咽癌分子流行病学重点实验室〔梧州市红十字会医院〕【正文语种】中文【中图分类】R739.6【相关文献】1.SATB1高表达通过促进上皮-间充质转化而介导鼻咽癌细胞侵袭和转移2.miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖3.慢病毒介导shRNA靶向下调Cx26表达对人高侵袭性肝癌细胞上皮间质转化及侵袭的影响4.下调HOX转录反义RNA对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、周期及侵袭能力的影响5.miR-493-5p下调METTL3表达影响鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2(R743)的建立及其差异表达蛋白的初步分析

１１主要试剂和仪１ｙ照射。传代培养至而０Ｇ
细胞形态、殖状态稳定，增即筛选得到诱导的ＮＰＣ细胞放射抗拒株Ｃ一（４）整个过程约为１ＮＥ２Ｒ７３，Ｏ月。Ｃ一（４）ＮＥ２Ｒ７３细胞常规传代培养约２Ｏ代后用
牛血清的ＲＭＩ１４Ｐ６０完全培养液，３置７℃ 、和湿饱
异，许多患者治疗一段时间后出现局部复发，且这可能与肿瘤中存在或放疗过程中出现对射线抗拒的细胞成分有关［。本研究应用ｘ射线反复照射１］ＮＰＣ细胞株Ｃ－，导并建立ＮＣ放射抗拒细ＮＥ２诱Ｐ
线反复照射ＮＰＮＥ２胞，剂量为５，选出放射抗拒的细胞株ＣＥ２Ｒ４）ＣＣ－细总１Ｇｙ筛Ｎ－（７３。采用克隆形成实验测定细胞的放射敏感性，式细胞术检测细胞周期特征；用双向凝胶电泳结合质谱分析法鉴定差异表达蛋白。流采果结
与Ｃ一ＮＥ２细胞相比，ＮＥ２Ｒ４）胞显示出更强的放射抗性，Ｎ－（７３细胞的放射抗性（活分数Ｃ一（７３细ＣＥ２Ｒ４）存
ｓｚ是其亲本细胞Ｃ一Ｆ）ＮＥ２的１４倍（＜Ｏ０）ＮＥ２Ｒ４）胞周期分布中，．９Ｐ．５。Ｃ－（７３细ｓ期比例较其亲本Ｃ－胞ＮＥ２细明显增高（＜０Ｏ）而Ｇ／和Ｇ／期比例则下降（＜ＯＯ）Ｐ．１，。ＧＭＰ．１。与Ｃ一ＮＥ２相比，ＮＥ２Ｒ７３细胞存在２ｃ一（４）４个

以放疗为主的鼻咽癌个体化治疗

・
６・
广东医学
２０１４年１月第３５卷第１期
ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＪａｎ．２０１４，Ｖｏ１．３５，Ｎｏ．１
３结语
ＩＭＲＴ是目前治疗鼻咽癌的主流放疗技术，精确的靶区和正常组织勾画是计划成功的前提。然而，观察者间勾画差
咽癌细胞株，提出了Ｐ５３一Ｐ２１信号途径和ＤＮＡ —ＰＫ／
２Ｐ５３一Ｐ２１信号途径和ＤＮＡ—ＰＫ／ＡＴＭ基因参与鼻咽癌辐射抗拒性调节
我们在建立了不同放射敏感性的细胞模型的基础上，对鼻咽癌的辐射抗拒性的分子机制进行了探索。实验研究表明抑制Ｐ２１的功能可以提高放射抗拒鼻咽癌细胞株的放
图１鼻咽癌放射敏感性调节机制图
３开展鼻咽癌个体化放射治疗是提高患者生存率和
改善生活质量的途径之一
我们在上述关于鼻咽癌放射抗拒性分子机制的研究，于
２００７年以“ 以生物学行为和分子特征为基础的鼻咽癌个性
化治疗新方案的研究”申请获得科技部８６３项目的资助（２００６ＡＡ０２ＺＡＢ４），在临床上开展以放疗为主的鼻咽癌个体
ＡＴＭ基因参与鼻咽癌辐射抗拒性调节的分子机制。Ｊ，通过临床实验和临床治疗筛选出与鼻咽癌放射敏感性和预后相关的标志物，进一步开展基于临床生物学行为和分

微小RNA-125a-5p_对人鼻咽癌细胞增殖的影响及机制

微小RNA -125a -5p 对人鼻咽癌细胞增殖的影响及机制万芳竹1，2，3，张浩炯1，2，3，张宗璞41 上海市质子重离子医院放疗科复旦大学附属肿瘤医院放疗科，上海 201321；2 上海市放射肿瘤学重点实验室；3 上海质子重离子放射治疗工程技术研究中心；4 复旦大学附属华山医院神经外科摘要：目的　探究微小RNA -125a -5p （miR -125a ）对人鼻咽癌细胞（HK -1细胞）增殖的影响及机制。

方法　常规培养HK -1细胞及人胚肾细胞永生化细胞系（293T 细胞），将HK -1细胞随机分为对照1组、过表达miR -125a 组（转染miR -125a mimics ）、沉默miR -125a 组（转染miR -125a inhibitor ）；另取部分HK -1细胞随机分为对照2组、miR -125a 过表达组（转染miR -125a mimics ）及回补组［转染miR -125a mimics 同时过表达含PDZ 结合基序的转录共激活因子（TAZ ）］。

转染48 h 后检测miR -125a 表达验证转染效率。

用RT -qPCR 法检测miR -125a -5p 、TAZ mRNA ；用Western blotting 法检测TAZ 蛋白；CCK -8实验、集落形成实验检测细胞增殖能力；通过预测网站TargetScan （http ：//www.tar⁃ /）和miRDB （http ：// /）预测miR -125a 与TAZ 的结合位点。

将293T 细胞随机分为4组，WT+miR -ctrl 组共转染TAZ 野生型（TAZ -WT ）和miR -125a 空载对照（miR -ctrl ）、Mut+miR -ctrl 组共转染TAZ 突变型（TAZ -MUT ）和miR -ctrl 、WT+miR -125a 组共转染TAZ -WT 和miR -125a 模仿物（miR -125a ）、Mut+miR -125a 组共转染TAZ -MUT 和miR -125a ，用双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR -125a 的下游靶点。

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放射抗拒性鼻咽癌细胞系的建立及差异表达基因
（作者:___________单位:_____ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ_____邮编:___________）
作者：王亚利，王西京，王中卫，金迎迎，李毅
【摘要】目的筛选同一来源放射敏感性不同鼻咽癌细胞基因差异表达，探讨鼻咽癌放射抗拒机理。方法用X射线间歇多次照射鼻咽癌细胞株CNE2建立放射抗拒性细胞CNE2R，采用BioStarH141s型基因芯片检测CNE2与CNE2R差异表达基因。结果CNE2和CNE2R细胞有差异表达的基因308条，上调176个，下调132个。在差异表达的基因中，有76个位点出现6倍以上的差异，其中36个下调、40个上调，包括与DNA修复相关、细胞周期、凋亡、细胞骨架相关蛋白、细胞增殖、代谢、蛋白质合成、信号转导、免疫相关等方面相关的基因，基因分布变化较明显的主要是DNA修复相关基因、细胞骨架、细胞周期和凋亡相关基因。结论CNE2细胞反复照射后产生放射抗拒性细胞，在基因水平上发生了某些突变，通过调控其中相关基因，就有可能调控细胞的放射敏感性。
【关键词】鼻咽癌；基因芯片；放射抗拒性
ABSTRACT: Objective To observe the differential gene expression in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cell line with different radiosensitivity by cDNA microarray analysis. Methods A radioresistant cell line, CNE2R, was established from a human nasopharyngeal carcinoma cells line CNE2 by repeated Xray irradiation. The differential gene expression of CNE2 and CNE2R was screened with cDNA microarray by BioStarH141s profile gene chip. Results There were expressed 308 genes to be screened out between CNE2R cell line with different radiosensitivity and its parental CNE2 cell line, while 176 upregulated genes in CNE2R cells and 132 downregulated genes were found. In them, there were 40 upregulated ones and 36 downregulated ones whose ratios were higher than 6.0 or lower than 0.1. The different genes included DNA damageand repairrelated genes; cell cyclerelated and cytoskeletonrelated proteins; and apoptosisrelated genes. Conclusion The radioresistant CNE2R cells were isolated from the CNE2 cell line by repeated Xray irradiation. The stable radioresistance is the result of coeffect by polygene and multiple factors, which provide several gene targets to sensitize the radioresistant cells for improving the radiocurability of NPC.
KEY WORDS: nasopharyngeal carcinoma; cDNA microarray; radioresistance
放射治疗是鼻咽癌治疗最主要的手段，射线杀死了相对敏感的鼻咽癌细胞，而相对抵抗的亚细胞系则存活并增殖，成为复发的根源。近几年来,鼻咽癌的放射治疗的技术如调强放疗(intensity modulated radiation therapy, IMRT)，图像引导的调强放疗(image guided radiation therapy, IGRT)等取得了巨大的进展，但是如何克服放射抵抗性尚无理想途径。我们前期利用射线反复照射鼻咽鳞癌细胞株CNE2筛选出在形态学及放射生物学参数稳定的放射抗拒鼻咽癌细胞系CNE2R[1]。在此基础上对两株细胞进行2Gy照射后利用基因芯片分析二者差异表达的基因，以期发现与放射敏感性的相关基因，进一步建立鼻咽癌辐射相关基因芯片，为探讨鼻咽癌放射抗拒机理提供理论基础。
1材料与方法
1.1细胞培养
CNE2及CNE2R置于含100mL/L小牛血清、30g/L谷氨酰胺的RPMI 1640培养液内，在37℃饱和湿度的培养箱内培养。
1.2集落形成实验
指数生长期细胞用2.5g/L胰蛋白酶+0.2g/L EDTA消化计数后制备单细胞悬液，接种于6孔板(2mL/孔)，每种细胞设6个复孔。根据不同细胞数目给予不同的照射剂量，细胞数2.0×102、2.0×102、1.0×103、1.0×104、1.0×105、1.0×106贴壁12h后分别接受6MVX射线单次剂量照射0、2、4、6、8、10Gy，将培养皿移入培养箱内，静止培养至6孔板出现肉眼可见的克隆(14～20d)。甲醇固定、Giemsa染色、低倍镜下计数所形成的集落数(≥50个细胞数的集落为有效的集落)。按照下述公式计算克隆形成率(plating efficiency, PE)=形成克隆数/种植细胞数×100%；存活分数(survival fraction, SF)=实验组克隆形成率/对照组克隆形成率×PE。绘制剂量-存活曲线，计算照射2Gy后细胞存活分数(SF2)。