药品生产技术《第五单元 种子扩大培养》
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简述种子扩大培养的一般步骤种子扩大培养是一种常用的细胞培养技术,用于从少量的起始细胞种子扩大培养大量的细胞。
一般情况下,种子扩大培养的步骤包括以下几个方面:1. 选择合适的培养基,根据所培养细胞的特性和需求,选择适合的培养基。
常见的培养基有DMEM、RPMI-1640等,可以根据需要添加适当的补充物如血清、生长因子等。
2. 准备种子细胞,从原始培养物中取出一定数量的细胞作为起始种子。
细胞可以通过离心、洗涤等方法获得。
3. 细胞计数和调整,使用细胞计数仪对种子细胞进行计数,以确定种子细胞的浓度。
根据需要,可以通过离心和重新悬浮的方式调整种子细胞的浓度。
4. 接种种子细胞,将调整后的种子细胞悬浮液加入到培养皿或培养瓶中。
种子细胞的密度应根据所需的扩大倍数和培养容器的大小进行合理调整。
5. 细胞培养条件的控制,将接种的培养皿或培养瓶放入细胞培养箱中,控制培养箱的温度、湿度和二氧化碳浓度等环境参数,以提供适宜的生长条件。
6. 细胞生长监测,定期观察和记录细胞的生长情况,包括细胞形态的变化、细胞数量的增加等。
可以使用显微镜观察细胞形态,也可以通过细胞计数仪等设备对细胞数量进行监测。
7. 细胞传代,当种子细胞达到一定的生长程度时,可以进行细胞传代,即将细胞分离并重新接种到新的培养皿或培养瓶中。
传代的目的是避免细胞过度密集和资源耗竭,以保证细胞的健康生长。
8. 细胞收获,根据需要,可以在细胞达到预期生长程度后,将细胞收获下来进行后续的实验或应用。
收获细胞时,可以使用适当的方法如离心、洗涤等将细胞从培养皿或培养瓶中分离出来。
以上是种子扩大培养的一般步骤。
具体的操作细节可能会因细胞类型、培养条件和实验目的的不同而有所差异。
在进行种子扩大培养时,需要严格控制培养条件,遵循无菌操作规范,以确保细胞的健康生长和培养的成功。
种子扩大培养的一般步骤
种子扩大培养是指通过培养一定数量的种子,生产大量的细胞或微生物的过程。
它是微生物或细胞生产工艺中的重要步骤,能够保证生产规模的扩大和产品的稳
定性。
种子扩大培养的一般步骤如下。
第一步是种子的制备。
在种子扩大培养之前,需要从已有的种子中选取优良的种子,将其经过预处理后进行制备。
预处理的方法可以包括冷冻保存、干燥保存等。
制备好的种子需要进行质量检测,以确保种子的质量符合要求。
第二步是种子的扩增。
在种子扩大培养过程中,需要将制备好的种子接种到适当的培养基中,并进行适当的处理,以促进种子的生长和繁殖。
常见的处理方法
包括控制培养基的pH值、添加适量的营养物质等。
扩增过程需要进行一定时间的
培养,以便种子充分生长繁殖。
第三步是种子的收获。
种子扩大培养完成后,需要进行收获。
在收获的过程中,需要进行分离、过滤、浓缩等操作,以获取目标产物。
此外,还需要对产物进行纯化和检测,以确保产物的质量符合要求。
总之,种子扩大培养是微生物和细胞生产工艺中不可或缺的步骤,对于产品的质量和产量都有着重要的影响。
在实际应用中,需要根据具体情况进行调整,以
确保最终的产物能够满足要求。
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第3-4节二、种子扩大培养的任务和培养类型
1、任务:
获得大量的活力强的种子,以便在发酵罐的发酵培养过程中尽可能地缩短迟滞期。
扩大培养的级数:放线菌〔生产抗生素〕三级放大,〔其中链霉素须四级扩大〕;细菌生长较快,用二级放大培养〔斜面菌种→一级种子摇床培养→二级种子罐培养→发酵罐〕
2培养类型
实验室种子扩大培养的方法:
①液体培养法〔三角瓶摇床振荡或转式培养〕;
②固体培养法:试管、三角瓶、茄子瓶
生产车间种子扩大培养的方法:
A、固体培养〔曲法培养〕
B、液体培养
液体深层培养:
目前几乎所有的好气发酵均采用此法;
任务二影响种子质量的因素
影响种子质量的主要因素
1、培养基:
选用原那么:组分简单,种子培养基是培养菌体的〔以菌体增殖为主要目的〕,应该是糖份少而氮源多些。
但种子罐与发酵罐培养基成分趋于一致时,可缩短发酵生产的周期,但在各成分的数量〔原料配比上〕,应根据培养目的而定。