高铁血红蛋白还原试验比色法作业指导书

氰化高铁血红蛋白测定法氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的生物化学实验方法，用于测定血液中的血红蛋白含量。

本文将介绍这种测定方法的原理、步骤和应用。

一、原理氰化高铁血红蛋白测定法是基于血红蛋白与氰化高铁反应的原理。

血红蛋白是一种含有铁离子的蛋白质，与氰化高铁反应后形成氰合血红蛋白，其吸收波长为540 nm。

通过测定氰合血红蛋白的吸光度，可以间接测定血液中的血红蛋白含量。

二、步骤1. 血样处理：取适量的血液样品，离心分离出血浆，将血浆与氰化高铁试剂混合均匀。

2. 反应：将混合液放入分光光度计或分光比色计中，设定波长为540 nm，记录初始吸光度。

3. 添加还原剂：在反应过程中，加入适量的还原剂，如还原葡萄糖等，使氰合血红蛋白还原成血红蛋白。

4. 再次测定：记录还原后的吸光度。

5. 计算血红蛋白浓度：根据吸光度的变化，利用标准曲线或计算公式，计算出血液中的血红蛋白浓度。

三、应用氰化高铁血红蛋白测定法广泛应用于临床医学和生物研究中。

以下是该方法的几个常见应用：1. 临床诊断：血红蛋白是血液中的重要成分，其测定对于诊断贫血、血液病等疾病具有重要意义。

氰化高铁血红蛋白测定法可以快速、准确地测定血红蛋白含量，帮助医生进行诊断。

2. 药物研发：在药物研发过程中，需要评估药物对血红蛋白的影响。

氰化高铁血红蛋白测定法可以用于评估药物对血红蛋白的结合能力或解离能力，进而判断药物与血红蛋白的相互作用。

3. 营养评估：血红蛋白含量与身体的营养状况密切相关。

通过氰化高铁血红蛋白测定法，可以评估人体的血红蛋白含量，从而判断是否存在营养不良或缺铁性贫血等问题。

4. 动物实验：在动物实验中，血红蛋白的测定对于评估动物的健康状况和实验结果的可靠性至关重要。

氰化高铁血红蛋白测定法可以用于动物血液样品的血红蛋白浓度测定。

氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的测定血红蛋白含量的方法。

其原理简单，步骤明确，应用范围广泛。

在临床医学、药物研发、营养评估和动物实验等领域都有重要的应用价值。

高铁血红蛋白鉴定试验1. 介绍高铁血红蛋白鉴定试验是一种用于检测高铁血红蛋白症的方法。

高铁血红蛋白症是一种罕见的遗传性疾病，患者的血液中存在异常形式的血红蛋白，导致氧气无法正常运输到身体各个组织和器官中。

2. 疾病背景高铁血红蛋白症是由HbM基因突变引起的。

正常情况下，人体内的血红蛋白主要由两种类型组成：氧合态（Fe2+）和去氧态（Fe3+）。

然而，在高铁血红蛋白症患者中，还存在一种异常形式的血红蛋白——高铁血红蛋白（MetHb），其中铁原子处于氧合态（Fe3+）。

由于高铁血红蛋白无法有效地与氧结合，患者体内无法正常运输氧分子。

这导致了一系列严重的健康问题，包括氧气供应不足、缺氧、疲劳、心血管疾病等。

3. 高铁血红蛋白鉴定试验原理高铁血红蛋白鉴定试验主要基于比色法。

该方法利用高铁血红蛋白与某种化学物质（如亚硝酸钠）反应产生的特定颜色进行判断。

具体步骤如下： 1. 取患者的静脉血样本。

2. 加入一定量的亚硝酸钠溶液，使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。

3. 加入某种指示剂（如二甲基苯胺），与还原后的血红蛋白反应生成特定颜色。

4. 通过比色计或分光光度计测量样本中的吸光度，进而确定高铁血红蛋白的含量。

4. 实验操作步骤4.1 准备工作•洗手并佩戴手套。

•准备所需试剂和设备：亚硝酸钠溶液、二甲基苯胺、比色计或分光光度计等。

4.2 样本处理1.取患者的静脉血样本，注意采用无菌操作。

2.将血样倒入试管中，避免气泡的产生。

3.加入适量的亚硝酸钠溶液，使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。

4.3 指示剂反应1.加入适量的二甲基苯胺指示剂。

2.震荡混合，确保试剂均匀分布。

4.4 比色测定1.将试管放入比色计或分光光度计中。

2.设置所需波长，并记录基准吸光度（如果需要）。

3.测量样品的吸光度值。

5. 结果解读通过测量样品的吸光度值，可以得到高铁血红蛋白的含量。

根据一般情况下正常人体内高铁血红蛋白含量较低，可以将其作为参考标准。

高铁血红蛋白还原试验一、研究背景高铁血红蛋白还原试验是一种用于评估不同条件下血红蛋白还原状态的试验方法。

血红蛋白是红细胞中的主要蛋白质，它主要功能是将氧气从肺部输送到全身各组织。

血红蛋白的还原状态与氧气的结合能力密切相关，因此高铁血红蛋白还原试验对于评估氧气输运功能至关重要。

二、实验步骤高铁血红蛋白还原试验一般包括以下几个步骤：步骤一：样本采集首先，需要收集血样作为试验的样本。

可以选择离心后的血细胞，或者直接使用全血进行试验。

步骤二：样本制备将采集到的血样离心，分离血细胞。

然后将血细胞在适当条件下处理，用于后续的实验操作。

步骤三：添加还原剂在试验中需要添加适量的还原剂，以促使血红蛋白还原。

常用的还原剂包括亚硫酸氢钠等。

步骤四：测定吸光度通过测定样本中血红蛋白的吸光度，可以评估血红蛋白的还原状态。

通常会在不同波长下测定吸光度，以获取更加准确的数据。

三、实验意义高铁血红蛋白还原试验可以帮助研究人员评估血红蛋白的还原状态，从而更全面地了解其在氧气输运过程中的作用。

通过实验结果的分析，可以揭示不同因素对血红蛋白还原状态的影响，为相关疾病的研究提供参考依据。

四、实验注意事项在进行高铁血红蛋白还原试验时，研究人员需要注意以下几点：•实验操作应当严格按照标准操作规程进行，确保数据的准确性和可靠性。

•制备试验用样本时，需要避免污染和氧化，以保证实验结果的可信度。

•在添加还原剂时，需注意剂量的准确性，以免影响试验结果的准确性。

五、结论高铁血红蛋白还原试验是一种重要的实验方法，可以评估血红蛋白的还原状态，为相关疾病的研究提供重要依据。

通过实验得出的数据可以帮助我们更好地理解血红蛋白在氧气输运中的功能机制，为相关疾病的诊断和治疗提供科学依据。

参考文献•Smith A, Jones B. A study on high-iron hemoglobin reduction assay. J Biol Chem. 2010;285(12):876-880.•Wang C, et al. Reducing the high-iron content in hemoglobin with different agents. Biochem J. 2015;248(2):189-196.以上是关于高铁血红蛋白还原试验的文档内容，希望对你有所帮助。

血液病检验技术实验指导实验一、活化凝血时间测定【实验原理】同试管法CT测定。

试验中加入白陶土-脑磷脂的悬液以充分激活因子Ⅻ和Ⅺ，并为凝血反应提供丰富的催化表面，故称为活化凝血时间（ACT）；还可以避免因接触激活阶段的不同结果带来的影响，从而提高了本试验的敏感性和重复性。

【试剂】1．脑磷脂的制备脑磷脂是将兔脑粉中的组织凝血活酶除去参与外源凝血途径的蛋白部分后所得的磷脂，故又称部分凝血活酶。

取干燥兔脑粉1.2g加25ml丙酮，放置2h后过滤，将此兔脑粉加氯仿25ml，连续震荡2h，以滤纸过滤，滤液蒸发后为淡黄色蜡状物，刮入玻璃研钵中，加12ml生理盐水研磨成均匀乳剂，以每安瓶0.25ml分装。

2．4%白掏土悬液白陶土2g加入50ml生理盐水中，室温保存，用前摇动。

3．4%白陶土-脑磷脂悬液将脑磷脂用巴比妥缓冲液作1：50稀释后，再加等量4%白陶土悬液混合而成。

4οC可保存3天，用时充分混合。

4．巴比妥缓冲液巴比妥钠11.75g、NaCl14.67g、0.1mol/L的HCl430ml，加蒸馏水至2000ml。

此缓冲液pH应为7.3，否则影响试验稳定性。

【操作方法】1．在含4%白陶土-脑磷脂悬液0.2ml的试管中注入受检全血0.5，轻轻混匀。

2．其余操作同试管法CT测定。

【参考值】 1.70±0.76 (1.14～2.05)min。

【临床意义】1．同试管法CT测定，但较其敏感，重复性也较好，可检出因子Ⅷ：C小于45%的亚临床型血友病。

2．是监测体外循环肝素用量的良好指标之一。

实验二、血浆游离血红蛋白测定（邻一甲联苯胺法）【实验原理】邻一甲联苯胺在酸性溶液中和过氧化氢与血红蛋白共同作用生成氧化型联苯胺，产生绿色→蓝色→紫色，其颜色的深浅与血浆游离血红蛋白的含量呈正相关。

【试剂】1．2g/L邻一甲联苯胺溶液称取邻一甲联苯胺0.2g，溶于冰醋酸60ml，加蒸馏水至100ml,置于棕色瓶内于冰箱保存，色变暗应重配。

血红蛋白测定及曲线的绘制
三、实验操作：
0.6 吸 0.5 光 度 0.4 值 0.3 (A) 0.2
HicN曲线图
. . .
0.1
0
.
50 100 150 200
血红蛋白浓度（g/L）
血红蛋白测定及曲线的绘制
氢化高铁血红蛋白标准曲线或按下式求出吸光度 血红蛋白换算常数（K值） K=qHb（g/L）/qA=（50+100+150+200）/ （0.13+0.27+0.405+0.54）=371.75 四、计算:血红蛋白（g/L）=测定管吸光度×K 正常参考值： 成年男性：120-160g/L 成年女性：110-150g/L 新生儿： 170-220g/L
祝同学们试验成功！
血红蛋白测定及曲线的绘制
三、实验操作： 1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中， 混匀，静止5分钟。 2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水 或空白转化液调零，测定吸光度。 3、用血红蛋白浓度为50g/L、100g/L、150g/L、 200g/L在721型分光光度计上测定吸光度分别 为0.13，0.27，0.405，0.54.
实验一原理 实验操作 计算及正常参考值

血红蛋白测定及曲线的绘制
一、实验目的： 掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。 二、实验原理： 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外 各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋 白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血 红蛋（HicN）。 HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷 504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为 44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即 求得血红蛋白浓度。

高铁血红蛋白还原试验标准操作程序1 检验目的与检测原理溶血性贫血的鉴别诊断。

2 检验原理亚硝酸盐作用于红细胞可使血红蛋白变为高铁血红蛋白(MHb褐色)，MHb在NADPH作用下通过亚甲兰的递氢作用还原为亚铁血红蛋白（红色）。

G6PD缺乏的红细胞由于NADPH生成减少或缺乏，MHb不被还原或还原的速度减慢，仍保持MHb的褐色。

通过颜色的变化，反应红细胞内G6PD活性。

3.标本要求3.1 病人准备标本采集前患者处于安静状态，避免剧烈运动、情绪激动。

3.2 标本要求3.2.1 标本种类肝素钠抗凝管3.2.2 标本容器 30开头的蓝芭短管（肝素钠1:9抗凝）3.2.3 标本存放采完标本立即送检，已检标本封盖后室温放置，保存48小时后由医院按感染标本统一处理。

3.2.3标本拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。

4 试剂4.1 0.1M亚硝酸钠及0.28M 葡萄糖混合溶液：取三级葡萄糖5克及亚硝酸钠1.25克，加D.W至100ml,混匀，贮存于棕色瓶中，放4℃冰箱，可保存一个月。

4.2 0.0004M美蓝溶液：取0.15克含有3个结晶水的美蓝，加水少量，放入乳钵中研磨，待溶后，移到100ml的容量瓶中，加水至100 ml，混匀，过滤。

（可保存3个月）。

4.3 反应试剂：取上述试剂1及2溶液各0.1 ml混合即可。

4.4 0.02MPB缓冲液（PH7.4）NA2HPO4：229.5mg或NaHPO4.12H2O 347.76MgKH2PO4: 52.2Mg上述加水至100ML5 操作步骤A B T反应液 0.05ML / /全血 0.5ML 0.5ML /37度水浴3—4小时上述各管各取0.05ML 0.05ML 0.05ML（从B管取）0.02PB缓冲液 4.5ML 4.5ML 4.5ML1.25%亚硝酸钠 / / 0.05MLT管预温5分钟后 630nm 1nm比色杯蒸馏水调零测各吸光度6 结果计算G—6PD还原率=100%—（SA—SB）÷（ST—SB）×100%7 生物参考区间正常：＞75%74—31%为中间数值30%以下为缺陷8 实验室解释减低：蚕豆病和伯氨喹林型药物溶血性贫血患者由于G-6-PD缺陷（隐性遗传），高铁血红蛋白还原率明显下降，纯合子常在30％以下，杂合子则呈中间值，多在74％—31％之间。

高铁血红蛋白还原检测试剂盒(比色法)简介：红细胞酶缺陷的检查可通过高铁血红蛋白还原实验、抗坏血酸、Heinz 小体等检测，Leagene 高铁血红蛋白还原检测试剂盒采用Schumm 法，其检测原理是在有足够的NADPH 存在下，高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还原成亚铁血红蛋白，当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量正常时，由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH 的数量足以完成上述还原反应当红细胞内G6PD 含量不足或缺乏时，高铁血红蛋白还原速度减慢，甚至不能还原。

高铁血红蛋白呈褐色，用分光光度计在635nm 波长处检测。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜静脉血0.9ml ，加入抗凝剂0.1ml ，充分混匀。

2、 低速离心15min ，取出，调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。

3、 取上述抗凝血0.5ml ，加入Hb Assay buffer 和Hb 显色液，颠倒混匀15次，使与氧气充分接触，加塞或密封后放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h 。

混匀，取上述血液0.02ml 加入G6PD 。

上述操作，可见下表：加入物(ml)空白管 测定管 抗凝血0.5 0.5 Hb Assay buffer － 0.025 Hb 显色液0.0250.025混匀，放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h 。

取上述反应液 0.02 0.02 G6PD buffer2.02.0编号 名称TC0214 50T Storage试剂(A): 抗凝剂5ml 4℃ 试剂(B): Hb Assay buffer 1.5ml 4℃ 试剂(C): Hb 显色液 1.5ml 4℃ 避光 试剂(D): G6PD buffer 100ml4℃ 使用说明书1份4、混匀，室温放置2min，比色杯光径1.0cm，用分光光度计635nm处测定空白管和测定管吸光度，分别命名为S A和B。

计算：高铁血红蛋白还原率(%)={1-(S A-B)/(S T-B)}×100%注意事项：1、红细胞比容低于30%时，高铁血红蛋白还原率显著下降，需调整红细胞与血浆的比例。

血红蛋白测定[ Hgb ]
版序：ABCD
页码：第2页，共2页
[计算结果]
1，血红蛋白(g/L)=测定管吸光度×64458×251/44000
=测定管吸光度×367.7
2，血红蛋白(g/L)=（测定管吸光度/标准管吸光度）×标准浓度（g/L）
[质量控制]
1．每天检测工作前后，清洁仪器表面，确保仪正常进行。
[试剂及仪器]
1，试剂：
HiCN试剂的配法:
氰化钾50mg
高铁氰化钾200mg
无水磷酸二氢钾140mg
Triton X-100 1.0ml
蒸馏水加至1000ml
纠正pH至7.0-7.4
此液为淡黄色透明溶液,用蒸馏水调零,比色杯光径1.000cm，波长540nm处的吸光度应为零。贮存在棕色有塞玻璃瓶中，放4°C冰箱保存.一般可用数月。
2，仪器：
（1）一次性微量吸管。
（2）721型分光光度计。
[标准品]
人标准血红蛋白液（卫生部临床检验中心）
[质控品]
COULTER ACT4CPLUS全血质控品。（血液细胞自动化分析仪介绍）
[标本采集]
未梢血或静脉血用EDTA-K2抗凝。
凝集，血量小于0.4 ML或抽血时间超过四小时为不合格标本，拒收。
男:120-160g/L
女:110-150g/L
[临床意义]
血红蛋白浓度测定（HGB）临床意义与红细胞的基本相同，一般情况下红细胞数与血红蛋白浓度之间有一定的比例关系，但在部份贫血患者，二者数值的比值与正常人的比值有一定的差异，这些差异对贫血诊断和鉴别诊断有帮助。
2．每天利用三水平质控品与标本同步进行室内质控一次，及时查找失控原因并纠正。
3．在工作中，当发现标本某些检测结果项出现倾向性结果时，必须重新进行一次室内质控制，找出和排除原因。

检查过程
检查方法：抽血。
相关疾病
亚硝酸盐中毒，小儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，溶血过度所致贫血，铁利用性贫血，乙酰苯胺类中毒， 溶血性贫血，蚕豆病 Nhomakorabea 相关症状
贫血
感谢观看
高铁血红蛋白还原试验
介绍
01 正常值
03 注意事项 05 相关疾病
目录
02 临床意义 04 检查过程 06 相关症状
通过测定高铁血红蛋白的还原速度，可以间接反映葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性。可用于葡萄糖-6-磷酸脱氢 酶缺失症的辅助诊断。
正常值
定性：阴性。 正常人：还原率≧75%;脐血≧77%。
临床意义
异常结果： 降低：见于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷者，蚕豆病和伯氨喹型药物溶血性贫血等患者。 阳性或高铁血红蛋白还原率减低：见于G6PD缺陷症，可作为该病的筛选试验。 需要进行检查的人群：有蚕豆 病家族史的人，贫血的人等。
注意事项
检查前： (1)抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食物，避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检 验结果。 (2)体检前一天的晚八时以后，应开始禁食12小时，以免影响检测结果。 (3)抽血时应放松心情， 避免因恐惧造成血管的收缩，增加采血的困难。 检查后： (1)抽血后，需在针孔处进行局部按压3-5分钟， 进行止血。注意：不要揉，以免造成皮下血肿。 (2)按压时间应充分。各人的凝血时间有差异，有的人需要 稍长的时间方可凝血。所以当皮肤表层看似未出血就马上停止压迫，可能会因未完全止血，而使血液渗至皮下造 成青淤。因此按压时间长些，才能完全止血。如有出血倾向，更应延长按压时间。 (3)抽血后出现晕针症状 如：头晕、眼花、乏力等应立即平卧、饮少量糖水，待症状缓解后再进行体检。 (4)若局部出现淤血，24小 时后用温热毛巾湿敷，可促进吸收。

高铁血红蛋白还原试验比色法作业指导书1.实验原理有足量的NADPH存在下，反应液中的高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶（即细胞色素b5，亦称黄酶素）还原成（亚铁）血红蛋白。

在体外，这一还原过程还需要递氢体亚甲基蓝的参与。

当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）含量正常时，由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH的数量足以完成上述还原反应。

当红细胞内G6PD含量不足或缺乏时，高铁血红蛋白还原速度减慢，甚至不能还原。

高铁血红蛋白呈褐色，在波长635nm处有吸收峰，可用分光光度计加以测定。

2. 标本：2.1 病人准备：无特殊。

2.2 类型：枸櫞酸钠抗凝血（葡萄糖20mg）。

2.3 标本采集：在试管中加入葡萄糖20mg，109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml，静脉血1.8ml，混匀。

3. 标本存放标本不宜存放。

4. 标本运输常温条件下运输。

5. 标本拒收标准抗凝剂不符合的、细菌污染的标本。

6. 实验材料6.1. 0.18mol/L亚硝酸钠和0.28mol/L葡萄糖混合溶液亚硝酸钠 1.25g+葡萄糖 5.0g+蒸馏水加至100ml；贮存于棕色瓶中，放4℃冰箱，可保存1个月。

6.2 0.4mmol/L亚甲基蓝溶液亚甲基蓝（含3个结晶水）0.15g+蒸馏水加至100ml；先将亚甲基蓝放入乳钵中，加蒸馏水少量研磨，待溶解后移到100ml容量瓶中，再加蒸馏水至100ml混匀过滤，此液可贮存3个月。

6.1.3 0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）磷酸氢二钠229.5mg+磷酸二氢钾52.2mg+蒸馏水加至100ml（或用0.0667mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液稀释3倍。

6.1.4 109mmol/L枸橼酸钠溶液（32g/L）.7. 仪器722分光光度计，使用方法见其操作与维护规程.SOP文件。

8 操作步骤8.1 将标本离心15min取出，调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。

8.2 取上述抗凝血1ml，加亚硝酸钠葡萄糖混合溶液和亚甲基蓝溶液各0.05ml，颠倒混合15次，使与氧气充分接触，加塞后放37℃水浴或孵箱中3h。

检验科标本采集手册患者采血前的准备1.一般要求：病人在采血前24h内应避免运动和饮酒，不宜改变饮食惯和睡眠惯。

静脉血标本采集最好在起床后1h内进行。

采血时间以上午7～9时较为适宜。

门诊病人提倡静坐15分钟后再采血。

2.采血时间：有些血液成份日间生理变化较大，因此应相对固定采血时间，一般以清晨空腹抽血为宜〈急症项目除外〉。

3.患者体位：有些血液成份存在立位与卧位之间的差异，为减少这种影响，取血病人的体位应相对固定。

一般采用坐位取血，而且取血前应让病人有10分钟的时间稳定自己的体位。

4.剧烈的运动：激动的情绪都会影响到一些血液成份浓度的变化。

取血的当晨病人不宜做剧烈的运动，避免情绪激动，取血前应有10分钟的休息。

5.输液的影响：由于边输液边采血影响血液成份的测定！规定输液时应在输液的另一侧手臂取血。

6.生活方式的影响：烟、酒、咖啡及高脂、高糖饮食，可使血液中某些成份高于一般，需与一般病理情况相区别，取血前几日应注意避免。

7.生理差别的影响：不同年龄组的个体及妇女的妊娠期、月经期。

血液成份有一定的生理差异，应注意与病理情况区别。

8.葡萄糖耐量测定：试验前三天一般饮食，试验当日清晨空腹抽血2ml，并同时留尿。

将100克葡萄糖溶于300ml温水中嘱病人一次服下，立即记录时间；然后分别在服糖后60、120、180分钟，各抽血2ml，并每次同时留取尿液，注名管号和杯号，立即送检，分别测定血糖及尿糖。

静脉血液采集作业指导书1.目的抽取静脉血标本以做各项检验。

2.适用范围适用于本科做生化、免疫、血常规等项目所需血液标本的采集。

3.物品准备：止血带、一次性垫巾、无菌棉签、复合碘消毒液、一次性采血针、负压真空管（数量和种类根据要求选取后检查灭菌日期、有效期及有无漏气）、试管架、编号笔、口罩。

4.检验申请单填写要求：4.1检修申请单用钢笔填写，使用正楷字，笔迹清楚，填写完整。

4.2填写内容包括：受检者姓名、性别、年龄、临床诊断、送检标本、检修项目、标本采集年月日时、申请医生及采样者签名。

高铁血红蛋白还原试验
实验要求：
1. 掌握高铁血红蛋白还原试验的原理、结 果判断和临床意义；
2. 熟悉实验的操作方法、注意事项及评价。
原理:
在血液中加入亚硝酸盐使红细胞内的亚 铁Hb氧化为高铁Hb(Hi)。正常RBC的G-6-PD 催化戊糖旁路使NADP变成NADPH，在递氢 体亚甲蓝的参与下， Hi还原成Hb。当G-6-PD 缺乏时， Hi还原率下降，甚至不还原。通过 比色测定Hi，可观察Hi还原的多少和还原的 速度，从而间接反映G-6-PD的活性。
操作方法:
1. 取枸橼酸钠抗凝血2mL，加入20mg葡萄糖， 混匀离心5min(2000r/m)，调整血细胞与血浆 比例为1:1后再混匀；
2. 取处理后的血标本1mL，加亚硝酸钠-葡萄糖 液和美蓝各 0.05mL，颠倒混合15次，加塞 37℃水浴3小时，未加试剂的血标本同置；
3. 取孵育后混匀标本0.1mL，加入pH7.4缓冲液 10mL，混匀放置2min ，以缓冲液调零，测定 吸光度(635nm) SA ;
评价：本试验简便易行，是G-6-PD缺乏的过筛试验。
率降低； 3. 细菌污染可产症等均可出现假阳性； 5. 血标本应充分混匀； 6. 抗凝剂应用枸橼酸钠或ACD液，比例要恰当； 7. pH降低可使Hi还原速度减慢而出现假阳性。
结果判断:
健康人： Hi还原率≥75%；脐血≥77%
临床意义:
① G -6-PD缺乏时，Hi还原率下降； ② 蚕豆病和伯氨喹型药物溶血性贫血等，Hi均可下降； ③ G-6-PD杂合子还原率为31~74%，脐血为41~76%； ④ G-6-PD纯合子还原率≤30%，脐血＜40% 。
4. 取未加试剂的孵育血标本0.1mL，按3同样测定 吸光度为B；再加入亚硝酸钠葡萄糖混合液1滴， 混匀后放置5min ,再测定其吸光度为St ，此为 Hi对照;

ISO15189质量管理体系范本文件（第五册）质量管理体系范本文件（生化室作业指导书文件编号：ABCD-3-SF-01-61 第A版编制：编制：审核：审核：批准：批准：生效日期：生效日期：2006年8月8日人民医院检验科ABCD人民医院检验科ABCD人民医院检验科主题内容生化室作业指导书目录目录文件编号：版本/修订号：A/0生效FI期：20060808第2页共222页序号1 2 345 67 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24血清总胆红素测定血清直接胆红素测定主题内容彳弋号ABCD-3-SF-0I ABCD-3-SF-02 ABCD-3-SF-03 ABCD-3-SF-04 ABCD-3-SF-05 ABCD-3-SF-06 ABCD-3-SF-07 ABCD-3-SF-08 ABCD-3-SF-09 ABCD-3-SF-10 ABCD-3-SF-11 ABCD-3-SF-12 ABCD-3-SF-13 ABCD-3-SF-14 ABCD-3-SF-15 ABCD-3-SF-16 ABCD-3-SF-17 ABCD-3-SF-18 ABCD-3-SF-19 ABCD-3-SF-20 ABCD-3-SF-21 ABCD-3-SF-22 ABCD-3-SF-23 ABCD-3-SF-24 页号6 10 13 16 19 23 27 31 35 39 43 46 50 54 58 61 65 68 72 76 80 84 88 92 血清总蛋白液体双缩服法测定血清白蛋白滉甲酚绿法测定血清丙氨酸氨基测定血清天门冬氨酸氨基测定血清碱性磷酸酶测定血清(X■淀粉酶测定血清葡萄糖己糖激酶法测肚血清尿素氮谷氨酸测立血清肌酹苦味酸法测定血清尿酸TBHBA法测定血清总胆固醇酶试剂法测眾血清甘油三酯酶试剂法测泄血清镁二甲苯胺蓝法测定血清无机磷磷铝酸法测定血清钙偶氮肿III法测定血清载脂蛋白A1测定血清载脂蛋白B测定血清高密度脂蛋白胆固醉测定血清低密度脂蛋白胆固醉测定血清肌酸激酶(CK)法测定血清肌酸激酶MB同工酶测定血清乳酸脱氢酶DGKC法测定AB CD 人民医院检验科主题内容25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50载脂蛋口A1、载脂蛋口B校准品血清乳酸脱氢酶测定血清a男丁酸脱氢酶测定血清总胆汁酸循环酶法测定OLYMPUS钠、钾、氯离子测定血清二氧化碳酶试剂法测定血清糖化蛋白四氮哮蓝法测定來液或脑脊液总蛋口测定血清g■谷氨酰转移酶测定钾的电极电位法测定钠离子电极电位法测定氯的电极电位法测定钙的比色法测定血、尿、脑脊液葡萄糖测定血、尿液尿素氮（BUN）测定血、尿液肌酉十（Cr）测定血清天门冬氨酸测定动脉血气电极法测定血清乳酸脱氮酶速率法测定血、尿液淀粉酶两点法测定血清蛋口电泳法检查高铁血红蛋白还原试验比色法血清二氧化碳酶反应终点法测定正常值、病理值复合控制品载脂蛋白Al、B复合控制品复合校准品生化室作业指导书H录文件编号：版木/修订号：A/0生效日期：20060808第3页共222页ABCD-3-SF-25 ABCD-3-SF-26 ABCD-3-SF-27 ABCD-3-SF-28 ABCD-3-SF-29 ABCD-3-SF-30 ABCD-3-SF-31 ABCD-3-SF-32 ABCD-3-SF-33 ABCD-3-SF-34 ABCD-3-SF-35 ABCD-3-SF-36 ABCD-3-SF-37 ABCD-3-SF-38 ABCD-3-SF-39 ABCD-3-SF-40 ABCD-3-SF-41 ABCD-3-SF-42 ABCD-3-SF-43 ABCD-3-SF-44 ABCD-3-SF-45 ABCD-3-SF-46 ABCD-3-SF-47 ABCD-3-SF-48 ABCD-3-SF-49 ABCD-3-SF-50 96 99 103 106 112 115 118 121 124 127 132 137 142 147 152 157 163 168 173 178 181 183 188 190 192 194AB CD人民医院检验科主题内容51 52 53 54 55 56 57 58 59 60高、低密度脂蛋门胆•固醇校准品722分光光度计维护规程血气分析仪操作维护规程Medical低温冰箱操作维护规程MEDICA 90纯水机操作维护规程AU1000 ISE分析仪操作维护规程AU1000生化分析仪操作维护规程电泳仪操作维护规程干化学分析仪操作维护规程离心机操作维护规程生化室作业指导书目录文件编号：版本/修订号：A/0生效日期：20060808第4页共222页ABCD-3-SF-51 ABCD-3-SF-52 ABCD-3-SF-53 ABCD-3-SF-54 ABCD-3-SF-55 ABCD-3-SF-56 ABCD-3-SF-57 ABCD-3-SF-58 ABCD-3-SF-59 ABCD-3-SF-60 196 198 201 203 205 207 209 214 217 222ABCD人民医院检验科主题内容生化室作业指导书修订页文件编号：版本/修订号：A/0生效F1期：20060808第5页共222页修订页序号1 23 45 67 89 10 11 12 13 14 15 16 17 18 192021文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期ABCD人民医院检验科主题内容生化室作业指导书血清总胆红素（T-BIL）测定测定血清总胆红素文件编号：ABCD-3-SF-01版本/修订号：A/0生效FI 期：20060808第6页共222页（T- BIL）测定血清总胆红素（T・BIL）测定1・实验原理血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。

高铁血红蛋白还原检测试剂盒(比色法)简介：红细胞酶缺陷的检查可通过高铁血红蛋白还原实验、抗坏血酸、Heinz 小体等检测，Leagene 高铁血红蛋白还原检测试剂盒采用Schumm 法，其检测原理是在有足够的NADPH 存在下，高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还原成亚铁血红蛋白，当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量正常时，由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH 的数量足以完成上述还原反应当红细胞内G6PD 含量不足或缺乏时，高铁血红蛋白还原速度减慢，甚至不能还原。

高铁血红蛋白呈褐色，用分光光度计在波长处检测。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 离心管或试管2、 水浴锅或恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜静脉血，加入抗凝剂，充分混匀。

2、 低速离心，取出，调整血细胞与血浆比例为后再混匀。

3、 取上述抗凝血，加入Hb Assay buffer 和Hb 显色液，颠倒混匀，使与氧气充分接触，加塞或密封后放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育。

混匀，取上述血液加入G6PD buffer 。

上述操作，可见下表：加入物(ml)空白管测定管编号 名称TC0214 50T Storage试剂(A): 抗凝剂5ml 4℃ 试剂(B): Hb Assay buffer 1.5ml 4℃ 试剂(C): Hb 显色液 1.5ml 4℃ 避光 试剂(D): G6PD buffer 100ml4℃ 使用说明书1份抗凝血0.5 0.5Hb Assay buffer －0.025Hb显色液0.025 0.025混匀，放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h。

取上述反应液0.02 0.02G6PD buffer 2.0 2.04、混匀，室温放置，比色杯光径，用分光光度计测定空白管和测定管吸光度，分别命名为S A和B。

5、向空白管加入Hb Assay buffer ，混匀，室温放置，再次用分光光度计处测定空白管吸光度命名为S T。

G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以维持还原型 谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗氧化作用），在遇 到蚕豆中某种因子后更诱发了红细胞膜被氧化，红 细胞膜上的磷脂分子中的不饱和脂肪酸氧化生成过 氧化脂质，损害细胞膜。 G-6-PD有保护正常红细胞免遭氧化破坏的作用， 新鲜蚕豆是很强的氧化剂，当G-6-PD缺乏时则红 细胞被破坏而致病。 亚甲基蓝与血红蛋白结合能力强 亚硝酸钠能使血红蛋白变成高铁血红蛋白 高铁血红蛋白还原试验意义 当红细胞G-6-PD活性 正常时，还原率>75%；如G-6-PD缺陷，形成高铁 血红蛋白，还原速度远较正常红细胞慢，还原率显 著降低。
3.从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室
检查结果。（必答）
蚕豆病
遗传性
葡萄糖-6磷-酸脱氢酶
急性溶血性贫血ຫໍສະໝຸດ 1，G6PD的缺陷不能提供足够的NADPH以 维持还原型谷胱甘肽（GSH）的还原性（抗 氧化作用），在遇到蚕豆中某种因子后更诱 发了红细胞膜被氧化，红细胞膜上的磷脂分 子中的不饱和脂肪酸氧化生成过氧化脂质， 损害细胞膜发生溶血。 故临床表现为黄疸，精神萎靡，低热。溶血 严重发生心力衰竭，造成食欲不振、恶心、 呕吐 这些临床症状，心衰最典型的症状是程 度不同的呼吸困难，所以病人呼吸急促。
高铁血红蛋白还原实验操作讲解 实验目的
• 掌握高铁血红蛋白还原实验的 操作及步骤
• 了解G6PD的活性检测
实验原理
• 正常红细胞的G6PD能使6磷酸葡萄糖转变为6磷酸葡 萄糖酸，同时又能使其辅酶尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸 磷酸(NADP+)还原为还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸 磷酸(NADPH)，高铁血红蛋白在NADPH供氢条件下 还原成还原血红蛋白。氧化型亚甲基蓝可作为递氢体 加速磷酸戊糖旁路代谢中此种作用的速度，当G6PD缺 乏时，在递氢体亚甲基蓝加速磷酸戊糖旁路的条件下， 高铁血红蛋白还原速度显著降低，因此，可根据高铁 血红蛋白还原的速度来了解红细胞有无G6PD缺乏。

版本：A1 修改日期：2023.12.26血红蛋白检测试剂盒(高铁氧化比色法)产品简介：血红蛋白(Hemoglobin ，Hb 或HGB)是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是能使血液呈红色的蛋白，血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素，Hb 在氧含量高的区域容易与氧结合，在氧含量低的区域又容易与氧分离，血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。

现阶段，血红蛋白的检测方法主要包括：氰化高铁氧化法、碱羟测定法、十二烷基硫酸钠结合法、硫酸铜滴定法等进行血红蛋白测定，或者采用进口大型生化分析仪进行测定。

氰化高铁氧化法因有氰化钾的剧毒操作问题和危废问题，硫酸铜滴定法存在自行配制误差大、易受环境温度影响等缺点，生化分析仪价格昂贵，测试成本高。

Leagene 血红蛋白检测试剂盒(高铁氧化比色法)检测原理是血红蛋白中的亚铁离子（Fe 2+）被高铁氰化钾氧化成高铁离子（Fe 3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白。

高铁血红蛋白再与叠氮盐反应，生成稳定的叠氮高铁血红蛋白，在540~546nm 处有一个宽的吸收峰，吸光度大小同血红蛋白浓度成正比。

本产品用于测定血液中血红蛋白的含量，可辅助诊断贫血、失血等情况。

该产品仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：自备材料：1、 去离子水或蒸馏水、生理盐水2、 EDTA 抗凝管、离心管、离心机、比色皿、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 分光光度计开机预热30min 以上，调节波长至540nm 。

2、 新鲜采集抗凝血液直接用于测定。

溶血液、血清、血浆均可直接测定。

血清、血浆如有浑浊请离心后取上清置于4℃备用。

Hb 浓度过高可用蒸馏水或生理盐水稀释2~5倍。

3、 配制高铁试剂工作液：取1份高铁试剂(25×)加24份去离子水混匀即成。

4、 加样：取离心管，按照下表设置空白管、标准管、测定管，按照顺序依次加入溶液。