高铁血红蛋白还原试验
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的检查项目有哪些?检查项目:血常规、骨髓象、胆红素、高铁血红蛋白还原试验、红细胞G-6-PD活性测定【实验室检查】:G-6-PD缺乏症的一般实验室检查与其他溶血性贫血相比较无特异性,其诊断有赖于红细胞G-6-PD酶活性的测定。
G-6-PD缺乏症的筛选实验和酶活性定量测定方法有如下几种。
1.高铁血红蛋白还原试验(methemoglobinreductiontest)速度比正常人显著减慢。
该法是目前国内常用于筛查G-6-PD活性试验之一。
微量组织化学洗脱法适合于杂合子的检测,其可信度为75%。
此法的缺点是如果存在HbH、不稳定血红蛋白、高脂血症、巨球蛋白血症等均造成假阳性结果。
2.抗坏血酸(维生素C)氰化物试验(ascorbate-cyanidetest)如果G-6-PD缺乏,H202破坏血红蛋白,形成一个棕色斑点。
3.硝基四氮唑蓝试验该试验可用来检测NADPH生成量。
4.荧光点试验(fluorescentspottest)该试验是最简单、最可信和最敏感的过筛试验。
5.G-6-PD活性测定通过单位时间生成NADPH的量来反映红细胞G-6-PD活性。
其常用方法有世界卫生组织(WHO)推荐的ZinkJam法和国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Glock与Mclean法。
在检测红细胞G-6-PD活性时,应注意试验时患者的临床状况。
在溶血发作期,老化的、酶缺乏红细胞在外周血中被选择性地清除掉,年轻红细胞因酶水平较高得以保护,用这些细胞来进行试验分析不能真实地反映红细胞的G-6-PD活性。
为了解决这一问题,可以于急性溶血2~4个月后复查外,或用离心沉淀技术剔除年轻红细胞后再检测红细胞G-6-PD活性,但试验系统中用沉淀红细胞是不标准的。
如果在溶血发作期间接受了红细胞输注亦会影响G-6-PD活性测定结果。
慢性非球形红细胞溶血性贫血,无特异性血液学改变。
血红蛋白一般为80~100g/L,网织红细胞计数增高至4%~35%,由于网织红细胞数比例增高,因而平均红细胞体积增高。
高铁血红蛋白还原试验比色法1.实验原理有足量的NADPH存在下,反应液中的高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶(即细胞色素b”亦称黄酶素)还原成(亚铁)血红蛋白。
在体外,这一还原过程还需要递氢体亚甲基蓝的参与。
当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(GJD)含量正常时,由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH的数量足以完成上述还原反应。
当红细胞内GPD含量不足或缺乏时,高铁血红蛋白还原速度减慢,甚至不6能还原。
高铁血红蛋白呈褐色,在波长635nm处有吸收峰,可用分光光度计加以测定。
2.标本:2.1病人准备:无特殊。
2.2类型:枸檄酸钠抗凝血(葡萄糖20mg)。
2.3标本采集:在试管中加入葡萄糖20mg,109mmol∕L枸椽酸钠溶液0.2ml,静脉血1.8ml,混匀。
3.标本存放标本不宜存放。
4.标本运输常温条件下运输。
5.标本拒收标准抗凝剂不符合的、细菌污染的标本。
6.实验材料6.1.0.18mol∕L亚硝酸钠和0.28mol∕L葡萄糖混合溶液亚硝酸钠1.25g+葡萄糖5.Og+蒸储水加至100ml;贮存于棕色瓶中,放4℃冰箱,可保存1个月o6.20.4mmol∕L亚甲基蓝溶液亚甲基蓝(含3个结晶水)0.15g+蒸储水加至100ml;先将亚甲基蓝放入乳钵中,加蒸储水少量研磨,待溶解后移到100ml容量瓶中,再加蒸储水至IoOnII 混匀过滤,此液可贮存3个月。
6.1.30.02mol∕L磷酸盐缓冲液(pH7.4)磷酸氢二钠229.5mg+磷酸二氢钾52.2mg+蒸储水加至100nlI(或用0.0667mol∕LpH7.4磷酸盐缓冲液稀释3倍。
6. 1.4109Imnol/L枸檬酸钠溶液(32g∕L).7.仪器722分光光度计,使用方法见其操作与维护规程.SOP文件。
8操作步骤8.1将标本离心15min取出,调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。
8.2取上述抗凝血1ml,加亚硝酸钠葡萄糖混合溶液和亚甲基蓝溶液各0.05ml,颠倒混合15次,使与氧气充分接触,加塞后放37。
血液内科葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者诊治规范葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)缺乏症指因G-6-PD缺乏所致的溶血性贫血。
临床上可分为无诱因的溶血性贫血、蚕豆病、药物诱发和感染诱发的溶血性贫血以及新生儿黄疸5种类型。
(一)诊断要点1.高铁血红蛋白还原试验由于G-6-PD缺乏,红细胞不能生成足够的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAD-PH),试管中加入亚甲蓝时,高铁血红蛋白还原少于正常值(75%以上)。
本法简便,适用于过筛试验或群体普查,缺点是有假阳性。
2.荧光斑点试验NADPH在长波紫外线照射下能显示荧光。
G-6-PD缺乏的红细胞内NADPH少,所以荧光出现延迟。
G-6-PD正常者10min 内出现荧光。
可依此推测G-6-PD活性,试验操作方便,采血少,特异性也高。
3.硝基四氮唑蓝纸片法红色滤纸片被G-6-PD正常红细胞还原成紫蓝色,严重G-6-PD缺乏者滤纸仍为红色。
4.红细胞海因小体计数在所采血中先加入乙酰苯肼,37℃温育后做甲基紫活体染色。
G-6-PD缺乏的红细胞内可见海因小体,计数>5%有诊断意义。
5.G-6-PD活性测定最为可靠,是主要诊断依据。
但在溶血高峰期及恢复期,酶活性可以正常或接近正常。
Zinkham法的正常值为(12.1±2.09)U/gHb(37℃)。
(二)临床类型及治疗1.无诱因的溶血性贫血属于先天性非球形细胞性溶血性贫血的一种,G-6-PD可低至0,温育后红细胞渗透性脆性正常,温育后自体溶血试验阳性,无血红蛋白病,抗人球蛋白试验阴性。
输血及使用糖皮质激素可改善病情,切脾效果不理想,需慎重。
2.蚕豆病由于食蚕豆后引起的溶血性贫血,是广东、广西、湖南、江西等地农村常见的血液病。
系蚕豆中何种物质引起尚无定论。
患者并非每年食蚕豆均发病,发病程度与食蚕豆量并不成比例。
患者绝大多数为儿童,3岁以上发病者占70%左右。
男性显著多于女性。
起病急骤,均在食新鲜蚕豆数小时突然发病。
高铁血红蛋白还原试验的临床意义
高铁血红蛋白还原试验是一种用于评估机体铁代谢状况的实验室检查,其临床意义主要包括以下几个方面:
1. 诊断铁缺乏性贫血和铁过多症:高铁血红蛋白还原试验可以通过检测患者的红细胞中铁的还原状态来评估机体的铁储备情况,从而确定是否存在铁缺乏或铁过多情况。
2. 监测铁治疗疗效:高铁血红蛋白还原试验可以用于监测铁治疗的疗效,包括口服铁剂和静脉注射铁剂。
通过定期检测患者的还原铁水平,可以立即调整治疗方案,以达到最佳疗效。
3. 指导临床用药:高铁血红蛋白还原试验可以作为临床用药的指导和监测工具。
例如,对于一些具有消化系统疾病的患者,可以根据高铁血红蛋白还原试验的结果来确定口服铁剂的剂量和治疗方案。
总之,高铁血红蛋白还原试验在临床上具有重要的意义,可以帮助医生准确地诊断和治疗各种铁代谢紊乱疾病,提高患者的治疗效果和生活质量。
高铁血红蛋白鉴定试验1. 介绍高铁血红蛋白鉴定试验是一种用于检测高铁血红蛋白症的方法。
高铁血红蛋白症是一种罕见的遗传性疾病,患者的血液中存在异常形式的血红蛋白,导致氧气无法正常运输到身体各个组织和器官中。
2. 疾病背景高铁血红蛋白症是由HbM基因突变引起的。
正常情况下,人体内的血红蛋白主要由两种类型组成:氧合态(Fe2+)和去氧态(Fe3+)。
然而,在高铁血红蛋白症患者中,还存在一种异常形式的血红蛋白——高铁血红蛋白(MetHb),其中铁原子处于氧合态(Fe3+)。
由于高铁血红蛋白无法有效地与氧结合,患者体内无法正常运输氧分子。
这导致了一系列严重的健康问题,包括氧气供应不足、缺氧、疲劳、心血管疾病等。
3. 高铁血红蛋白鉴定试验原理高铁血红蛋白鉴定试验主要基于比色法。
该方法利用高铁血红蛋白与某种化学物质(如亚硝酸钠)反应产生的特定颜色进行判断。
具体步骤如下: 1. 取患者的静脉血样本。
2. 加入一定量的亚硝酸钠溶液,使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。
3. 加入某种指示剂(如二甲基苯胺),与还原后的血红蛋白反应生成特定颜色。
4. 通过比色计或分光光度计测量样本中的吸光度,进而确定高铁血红蛋白的含量。
4. 实验操作步骤4.1 准备工作•洗手并佩戴手套。
•准备所需试剂和设备:亚硝酸钠溶液、二甲基苯胺、比色计或分光光度计等。
4.2 样本处理1.取患者的静脉血样本,注意采用无菌操作。
2.将血样倒入试管中,避免气泡的产生。
3.加入适量的亚硝酸钠溶液,使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。
4.3 指示剂反应1.加入适量的二甲基苯胺指示剂。
2.震荡混合,确保试剂均匀分布。
4.4 比色测定1.将试管放入比色计或分光光度计中。
2.设置所需波长,并记录基准吸光度(如果需要)。
3.测量样品的吸光度值。
5. 结果解读通过测量样品的吸光度值,可以得到高铁血红蛋白的含量。
根据一般情况下正常人体内高铁血红蛋白含量较低,可以将其作为参考标准。
高铁血红蛋白还原试验一、研究背景高铁血红蛋白还原试验是一种用于评估不同条件下血红蛋白还原状态的试验方法。
血红蛋白是红细胞中的主要蛋白质,它主要功能是将氧气从肺部输送到全身各组织。
血红蛋白的还原状态与氧气的结合能力密切相关,因此高铁血红蛋白还原试验对于评估氧气输运功能至关重要。
二、实验步骤高铁血红蛋白还原试验一般包括以下几个步骤:步骤一:样本采集首先,需要收集血样作为试验的样本。
可以选择离心后的血细胞,或者直接使用全血进行试验。
步骤二:样本制备将采集到的血样离心,分离血细胞。
然后将血细胞在适当条件下处理,用于后续的实验操作。
步骤三:添加还原剂在试验中需要添加适量的还原剂,以促使血红蛋白还原。
常用的还原剂包括亚硫酸氢钠等。
步骤四:测定吸光度通过测定样本中血红蛋白的吸光度,可以评估血红蛋白的还原状态。
通常会在不同波长下测定吸光度,以获取更加准确的数据。
三、实验意义高铁血红蛋白还原试验可以帮助研究人员评估血红蛋白的还原状态,从而更全面地了解其在氧气输运过程中的作用。
通过实验结果的分析,可以揭示不同因素对血红蛋白还原状态的影响,为相关疾病的研究提供参考依据。
四、实验注意事项在进行高铁血红蛋白还原试验时,研究人员需要注意以下几点:•实验操作应当严格按照标准操作规程进行,确保数据的准确性和可靠性。
•制备试验用样本时,需要避免污染和氧化,以保证实验结果的可信度。
•在添加还原剂时,需注意剂量的准确性,以免影响试验结果的准确性。
五、结论高铁血红蛋白还原试验是一种重要的实验方法,可以评估血红蛋白的还原状态,为相关疾病的研究提供重要依据。
通过实验得出的数据可以帮助我们更好地理解血红蛋白在氧气输运中的功能机制,为相关疾病的诊断和治疗提供科学依据。
参考文献•Smith A, Jones B. A study on high-iron hemoglobin reduction assay. J Biol Chem. 2010;285(12):876-880.•Wang C, et al. Reducing the high-iron content in hemoglobin with different agents. Biochem J. 2015;248(2):189-196.以上是关于高铁血红蛋白还原试验的文档内容,希望对你有所帮助。
高铁血红蛋白还原试验标准操作程序1 检验目的与检测原理溶血性贫血的鉴别诊断。
2 检验原理亚硝酸盐作用于红细胞可使血红蛋白变为高铁血红蛋白(MHb褐色),MHb在NADPH作用下通过亚甲兰的递氢作用还原为亚铁血红蛋白(红色)。
G6PD缺乏的红细胞由于NADPH生成减少或缺乏,MHb不被还原或还原的速度减慢,仍保持MHb的褐色。
通过颜色的变化,反应红细胞内G6PD活性。
3.标本要求3.1 病人准备标本采集前患者处于安静状态,避免剧烈运动、情绪激动。
3.2 标本要求3.2.1 标本种类肝素钠抗凝管3.2.2 标本容器 30开头的蓝芭短管(肝素钠1:9抗凝)3.2.3 标本存放采完标本立即送检,已检标本封盖后室温放置,保存48小时后由医院按感染标本统一处理。
3.2.3标本拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。
4 试剂4.1 0.1M亚硝酸钠及0.28M 葡萄糖混合溶液:取三级葡萄糖5克及亚硝酸钠1.25克,加D.W至100ml,混匀,贮存于棕色瓶中,放4℃冰箱,可保存一个月。
4.2 0.0004M美蓝溶液:取0.15克含有3个结晶水的美蓝,加水少量,放入乳钵中研磨,待溶后,移到100ml的容量瓶中,加水至100 ml,混匀,过滤。
(可保存3个月)。
4.3 反应试剂:取上述试剂1及2溶液各0.1 ml混合即可。
4.4 0.02MPB缓冲液(PH7.4)NA2HPO4:229.5mg或NaHPO4.12H2O 347.76MgKH2PO4: 52.2Mg上述加水至100ML5 操作步骤A B T反应液 0.05ML / /全血 0.5ML 0.5ML /37度水浴3—4小时上述各管各取0.05ML 0.05ML 0.05ML(从B管取)0.02PB缓冲液 4.5ML 4.5ML 4.5ML1.25%亚硝酸钠 / / 0.05MLT管预温5分钟后 630nm 1nm比色杯蒸馏水调零测各吸光度6 结果计算G—6PD还原率=100%—(SA—SB)÷(ST—SB)×100%7 生物参考区间正常:>75%74—31%为中间数值30%以下为缺陷8 实验室解释减低:蚕豆病和伯氨喹林型药物溶血性贫血患者由于G-6-PD缺陷(隐性遗传),高铁血红蛋白还原率明显下降,纯合子常在30%以下,杂合子则呈中间值,多在74%—31%之间。
2022-2023年检验类《临床医学检验技术(中级)》预测试题(答案解析)全文为Word可编辑,若为PDF皆为盗版,请谨慎购买!第壹卷一.综合考点题库(共50题)1.酶桥染色法中的桥抗体是指()。
A.特异性抗体B.抗酶抗体C.第一抗体D.第二抗体E.第三抗体正确答案:D本题解析:酶桥法是非标记抗体酶免组化技术的一种类型。
该技术先用酶免疫动物,制备抗酶抗体,然后利用第二抗体作为偶联抗酶抗体、组织抗原特异性抗体FC段的桥梁。
经酶显色检测抗原。
其形成的复合物为组织抗原-组织特异性抗体-桥抗体-抗酶抗体-酶,因此桥抗体是联系2种特异性抗体的第二抗体。
2.关于代谢性碱中毒的特点,以下正确的是A.B.C.D.E.pH值一定增高正确答案:D本题解析:正常时,代谢性碱中毒是原发性,使,如果完全代偿,pH值可正常。
3.测得血糖20天室内质量控制数据,计算出均值为5.0mmol/L,标准差为0.25mmol/L,其变异系数为()。
A.5%B.4%C.3%D.2%E.1%正确答案:A本题解析:CV变异系数的公式:(标准偏差S、平均值MN)标准差与平均数的比值称为变异系数,记为CV。
用公式表示为:CV=S/MN=0.25/5=5%。
4.支原体初代分离培养时,在固体培养基上形成的典型菌落呈A.卷曲发状B.颗粒状C.细条状D.丝状E.油煎蛋状正确答案:E本题解析:暂无解析5.患者女性,20岁,多毛、肥胖,24小时尿游离皮质醇浓度增高,小剂量地塞米松不能抑制,而大剂量地塞米松能抑制,最可能的诊断是()。
A.肾上腺皮质结节性增生B.肾上腺皮质腺瘤C.肾上腺皮质增生D.异位ACTH综合征E.单纯性肥胖正确答案:C本题解析:多毛、肥胖表明糖皮质激素分泌增多。
24小时尿游离皮质醇浓度增高,小剂量地塞米松不能抑制,而大剂量地塞米松能抑制说明可能是Cushing综合症,综合考虑最可能是肾上腺皮质增生。
6.关于白蛋白,下列错误的是()。
A.是血浆中主要蛋白质B.参考值为35~50g/LC.半衰期为15~19dD.分子量为30000E.是机体的营养指标正确答案:D本题解析:白蛋白的分子量约为66000。
高铁血红蛋白还原检测试剂盒(比色法)简介:红细胞酶缺陷的检查可通过高铁血红蛋白还原实验、抗坏血酸、Heinz 小体等检测,Leagene 高铁血红蛋白还原检测试剂盒采用Schumm 法,其检测原理是在有足够的NADPH 存在下,高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还原成亚铁血红蛋白,当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量正常时,由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH 的数量足以完成上述还原反应当红细胞内G6PD 含量不足或缺乏时,高铁血红蛋白还原速度减慢,甚至不能还原。
高铁血红蛋白呈褐色,用分光光度计在635nm 波长处检测。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:操作步骤(仅供参考):1、 取新鲜静脉血0.9ml ,加入抗凝剂0.1ml ,充分混匀。
2、 低速离心15min ,取出,调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。
3、 取上述抗凝血0.5ml ,加入Hb Assay buffer 和Hb 显色液,颠倒混匀15次,使与氧气充分接触,加塞或密封后放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h 。
混匀,取上述血液0.02ml 加入G6PD 。
上述操作,可见下表:加入物(ml)空白管 测定管 抗凝血0.5 0.5 Hb Assay buffer - 0.025 Hb 显色液0.0250.025混匀,放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h 。
取上述反应液 0.02 0.02 G6PD buffer2.02.0编号 名称TC0214 50T Storage试剂(A): 抗凝剂5ml 4℃ 试剂(B): Hb Assay buffer 1.5ml 4℃ 试剂(C): Hb 显色液 1.5ml 4℃ 避光 试剂(D): G6PD buffer 100ml4℃ 使用说明书1份4、混匀,室温放置2min,比色杯光径1.0cm,用分光光度计635nm处测定空白管和测定管吸光度,分别命名为S A和B。
计算:高铁血红蛋白还原率(%)={1-(S A-B)/(S T-B)}×100%注意事项:1、红细胞比容低于30%时,高铁血红蛋白还原率显著下降,需调整红细胞与血浆的比例。
「参考值」
高铁血红蛋白还原75%以上。
「临床意义」
红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酸酶(G-6PD)在磷酸戊糖旁路糖代谢中能使6-磷酸葡萄糖变为6-磷酸葡萄糖酸,同时使三磷酸吡啶核苷(TPN)变成还原型三磷酸吡啶核苷(TPNH),TPNH 可使氧化型谷胱甘肽(GSSG)变成还原型谷胱甘肽(GSH)并使高铁血红蛋白(HbFe+++)还原成低铁血红蛋白(HbFe++)。
本试验用亚硝酸钠使HbFe++氧化为HbFe+++(暗棕色)以美蓝的递氢作用加强磷酸戊糖旁路的糖代谢。
如果红细胞内G-6PD含量正常,则有足量TPNH产生,它作为高铁血红蛋白还原酶的辅酶,在美蓝(递氢体)参与下使HbFe+++很快还原成HbFe++.GSSG还原成GSH:如果红细胞缺乏G-6PD则TPNH生成减少,HbFe+++还原成HbFe++也减少,本试验即以高铁血红蛋白还原率来反映TPNH生成状况而间接测知G-6PD是否缺乏。
G-6-PD缺乏患者高铁血红蛋白还原减低31%~74%为中间数值(杂合子),30%以下为显著缺陷(纯合子)。
高铁血红蛋白鉴定试验高铁血红蛋白鉴定试验是一种现代化的检测方法,通过对血红蛋白的分析,能够有效地判断人体健康状况和患病风险。
本文将为大家介绍高铁血红蛋白鉴定试验的原理、流程以及其在临床应用中的指导意义。
高铁血红蛋白鉴定试验的原理是基于血液中的血红素含量与人体健康之间的关系。
血红蛋白是红细胞中的重要成分,它能够将氧气从肺部运输到身体各个组织,维持身体正常的代谢活动。
然而,如果血液中的血红素含量过高,就可能导致高铁血红蛋白的形成,进而影响氧气的正常运输,对身体健康造成不利影响。
高铁血红蛋白鉴定试验的流程主要包括血样采集、样本处理、检测仪器分析和结果解读等环节。
首先,医务人员会在患者的手臂上采集一小管血液样本,这个过程通常是无痛的,但需要注意消毒和采集技巧。
采集的血样经过处理,将血红蛋白与其他成分分离,然后放入专门的高铁血红蛋白分析仪器中进行检测。
检测仪器会根据血液中的血红蛋白含量,判断是否出现高铁血红蛋白的情况。
最后,医务人员会根据检测结果进行解读,并向患者提供相应的指导和建议。
高铁血红蛋白鉴定试验在临床应用中起到了重要的指导意义。
一方面,它可以帮助医生及时发现患者中高铁血红蛋白的存在,有利于早期干预和治疗。
高铁血红蛋白可能与多种疾病的形成有关,如心脑血管疾病、代谢性疾病等,因此及早发现问题并进行治疗,对于预防患病具有重要意义。
另一方面,高铁血红蛋白鉴定试验也可以作为健康人群的常规体检项目之一,通过定期检测,了解自身健康状况,及时采取合理的预防措施,有助于保持身体的健康状态。
总之,高铁血红蛋白鉴定试验是一种生动、全面、有指导意义的现代化检测方法。
凭借其简便、快速和准确的优势,可以帮助人们及时发现潜在的健康问题,提供指导意义的检测结果,并为临床治疗和健康管理提供科学依据。
我们鼓励大家认识高铁血红蛋白鉴定试验的重要性,并积极参与相关检测,保障自身健康。
高铁血红蛋白还原检测试剂盒(比色法)简介:红细胞酶缺陷的检查可通过高铁血红蛋白还原实验、抗坏血酸、Heinz 小体等检测,Leagene 高铁血红蛋白还原检测试剂盒采用Schumm 法,其检测原理是在有足够的NADPH 存在下,高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还原成亚铁血红蛋白,当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量正常时,由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH 的数量足以完成上述还原反应当红细胞内G6PD 含量不足或缺乏时,高铁血红蛋白还原速度减慢,甚至不能还原。
高铁血红蛋白呈褐色,用分光光度计在波长处检测。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、 离心管或试管2、 水浴锅或恒温箱3、 比色杯4、 分光光度计操作步骤(仅供参考):1、 取新鲜静脉血,加入抗凝剂,充分混匀。
2、 低速离心,取出,调整血细胞与血浆比例为后再混匀。
3、 取上述抗凝血,加入Hb Assay buffer 和Hb 显色液,颠倒混匀,使与氧气充分接触,加塞或密封后放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育。
混匀,取上述血液加入G6PD buffer 。
上述操作,可见下表:加入物(ml)空白管测定管编号 名称TC0214 50T Storage试剂(A): 抗凝剂5ml 4℃ 试剂(B): Hb Assay buffer 1.5ml 4℃ 试剂(C): Hb 显色液 1.5ml 4℃ 避光 试剂(D): G6PD buffer 100ml4℃ 使用说明书1份抗凝血0.5 0.5Hb Assay buffer -0.025Hb显色液0.025 0.025混匀,放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h。
取上述反应液0.02 0.02G6PD buffer 2.0 2.04、混匀,室温放置,比色杯光径,用分光光度计测定空白管和测定管吸光度,分别命名为S A和B。
5、向空白管加入Hb Assay buffer ,混匀,室温放置,再次用分光光度计处测定空白管吸光度命名为S T。
「参考值」高铁血红蛋白还原75%以上。
「临床意义」红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酸酶(G-6PD)在磷酸戊糖旁路糖代谢中能使6-磷酸葡萄糖变为6-磷酸葡萄糖酸,同时使三磷酸吡啶核苷(TPN)变成还原型三磷酸吡啶核苷(TPNH),TPNH可使氧化型谷胱甘肽(GSSG)变成还原型谷胱甘肽(GSH)并使高铁血红蛋白(HbFe+++)还原成低铁血红蛋白(HbFe++)。
本试验用亚硝酸钠使HbFe++氧化为HbFe+++(暗棕色)以美蓝的递氢作用加强磷酸戊糖旁路的糖代谢。
如果红细胞内G-6PD含量正常,则有足量TPNH产生,它作为高铁血红蛋白还原酶的辅酶,在美蓝(递氢体)参与下使HbFe+++很快还原成HbFe++.GSSG还原成GSH:如果红细胞缺乏G-6PD则TPNH生成减少,HbFe+++还原成HbFe++也减少,本试验即以高铁血红蛋白还原率来反映TPNH生成状况而间接测知G-6PD是否缺乏。
G-6-PD缺乏患者高铁血红蛋白还原减低31%~74%为中间数值(杂合子),30%以下为显著缺陷(纯合子)。