HPLC高效液相色谱实验讲义

仪器分析实验报告实验名称：高效液相色谱分析实验一、实验目的1. 了解HPLC的结构，了解仪器的开、关程序。

2. 了解流动相的制备和样品溶液的制备。

3. 知道仪器的运行程序和进行样品分析。

二、仪器和试剂仪器：美国安捷伦1200型HPLC、10μL的微量注射器试剂：磷酸乙腈溶液(PH=3)、重蒸水、邻氯苯甲酸三、实验步骤1.流动相的准备流动相只有一组：PH=3的磷酸乙腈溶液，进过脱气，用蠕动泵输送。

2.开机，色谱柱平衡当1完成后，开机，待色谱柱平衡。

3.样品溶液的准备配置好邻氯苯甲酸溶液，按要求选好滤纸的孔径大小。

用低压过滤装置过滤，由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。

4.基线的查看由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需等待压力稳定后，基线平稳才能进行进样。

5.样品进样分析用10μL的微量注射器取5μL的邻氯苯甲酸，微量注射器中不能有气泡，将微量注射器的针头插入到注射的孔时，打开微量注射阀，将邻氯苯甲酸注射进去后，迅速关闭阀门，抽出针头，等待仪器的分析结果。

6.色谱柱的清洗分析工作结束后，要清洗进样阀中的残留样品，也要用适当的液体来清洗色谱柱。

7.关机实验完毕后，关闭仪器和电脑。

四、实验数据及处理1.LC参数2.色谱柱参数3.四元泵状态A：0.0％流速：1.000ml/minB：0.0％压力：91barC：0.0％D：0.0％5.色谱分析谱图见附页，经过注射5μL的邻氯苯甲酸，得到三组实验色谱图，根据谱图列表数据如下：色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为：n = L / H理论塔板数和色谱参数之间的关系为：n = 16 ( t R / W b ) 2 = 5.54 ( t R / Y1/2 ) 2则取第五组数据计算得：t R=2.437 min = 146.22s Y1/2 = 2.354(0.1375min / 4 ) = 4.855125 sn = 5.54 ( t R / Y1/2 ) 2 =5025 (块)五、实验分析与讨论见图分析：（色谱图见附页）图中第一个峰是出现在1.188min的一个小峰，第二个峰是出现在1.420min的一个小峰，第三个峰是出现在1.531min的一个小峰，第四个峰是出现在1.816min 的一个小峰, 第五个峰是出现在 2.437min的一个大峰，第六个峰是出现在3.196min的一个小峰。

《中药色谱分析》实验讲义实验一高效液相色谱操作及其参数的测定一、目的要求：1．熟悉高效液相色谱仪的原理和基本方法2．熟悉使用高效液相色谱仪基本操作方法二、实验提要：以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。

其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。

由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。

高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。

目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。

将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。

C18（ODS）为最常使用的化学键合相。

根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。

在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。

三、实验内容1.高效液相色谱系统组成：（一）高压输液系统由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。

1.贮液罐由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。

贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。

2.流动相流动相常用甲醇-水或乙腈－水为底剂的溶剂系统。

化学实验知识：“高效液相色谱法测定药品中活性成分含量的实验方法”高效液相色谱法测定药品中活性成分含量的实验方法简介：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种基于化学分离的技术，可用于分离、鉴定和定量分析药品中的活性成分。

本文将回顾HPLC仪器分析基本原理、样品制备和检测方法，以及探讨在药品质量控制方面的应用。

HPLC仪器分析基本原理HPLC通常由一组流动相、样品进样器、色谱柱和检测器组成。

在进行分析前，需要进行样品制备。

首先，将待测样品加入标准品溶液中并混合排气，然后使用滤器将混合液体过滤，获得所需的样品峰谱图。

接下来，将样品注入进样器，由进样器将样品注入色谱柱内。

色谱柱内逐渐形成了流动相将其分离，不同活性成分进入不同位置在检测器内被检测到，建立基础分析知识库。

样品制备和检测方法HPLC技术是一种非常精确的高灵敏度分析方法。

但是，样品制备和检测方法对于结果的准确性和可重复性至关重要。

样品制备过程中，必须确保使用纯净的溶剂以避免污染，并且样品经过压滤器等处理设备以滤除不需要的杂质。

此外，要遵循制定的样品制备程序，该程序会随着各种样品类型和药品类型而有所变化。

在检测过程中，需要保证仪器操作条件稳定，采用标准化流程进行样品处理和标准品准备，采用精密的检测技术进一步保证检测结果的准确性。

常用检测器包括紫外光检测器、荧光检测器、质谱检测器等。

药品质量控制中的应用HPLC技术在药品质量控制方面发挥着重要作用，可以用于分析药品中的活性成分含量、纯度、杂质含量、分子结构等。

若药品含有多种活性成分，则需要对每种成分单独分析。

通过HPLC技术，我们可以比较不同药品制造商的产品特征，以确定哪些产品更符合规格规定。

此外，还可以检测批次药品的质量，以保证各批药品的标准化生产工艺的不断优化，最终提高药品的质量。

总的来说，HPLC技术的精密度和准确性使其成为药品质量控制方面必不可少的工具。

高效液相色谱法测定芳香烃混合物的各组分含量实验报告实验报告：高效液相色谱法测定芳香烃混合物的各组分含量一、实验目的：使用高效液相色谱法测定芳香烃混合物的各组分含量。

二、实验原理：高效液相色谱法（HPLC）是一种将液相背靠液相进行分离的色谱分析方法。

在本实验中，选择一种适宜的流动相，通过进样器将待分析的芳香烃混合物注入进液相色谱柱，利用流动相与固定相之间的相互作用及芳香烃分子与固定相之间的相互作用，在柱内进行分离。

通过控制液相流速、柱温等参数，可以实现对芳香烃混合物中各组分的定性与定量分析。

三、实验仪器与试剂：1.高效液相色谱仪2.色谱柱3.样品：芳香烃混合物四、实验步骤：1.根据实验需求，配置适宜的流动相溶液。

2.打开高效液相色谱仪，进行仪器的预热和调试。

3.调节样品进样器，将待测的芳香烃混合物注入进样器中。

4.将进样器连接至HPLC仪器，进行进样。

5.根据所选取的柱类型和分离目标，调节液相流速、柱温等参数进行分离。

6.观察高效液相色谱图谱，记录各峰的保留时间。

7.参考标准溶液浓度进行定量分析。

五、实验结果与分析：[插入实验结果示例图谱]根据光谱图谱，我们可以根据各峰的保留时间与标准曲线进行定量分析。

得到芳香烃混合物中各组分的含量如下：组分1：某 mg/mL组分2：某 mg/mL......组分n：某 mg/mL六、实验结论：通过本实验，我们使用高效液相色谱法成功地对芳香烃混合物进行了定量分析。

通过分析得到的结果，我们可以得知芳香烃混合物中各组分的含量，为后续实验或实际应用提供了重要的参考数据。

七、实验心得与建议：在实验过程中，我们需要严格控制实验条件，确保获得准确可靠的实验结果。

同时，在选择流动相溶液、调节液相流速等参数时，需要根据实际情况进行合理选择。

另外，对于柱的选择也是十分重要的，不同类型的柱会对分离效果产生不同影响，需要根据分离目标进行选择。

总的来说，高效液相色谱法是一种高效、准确的分析方法，在化学、环境、生物等领域有着广泛的应用。

高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱(HPLC)是一种基于溶液动力学的分析方法，广泛应用于药学、化学、生物学等领域。

本实验旨在通过HPLC技术，分离和鉴定复杂混合物中的化合物，并探究其分离机制。

实验方法：1. 样品制备：取一定比例的复杂混合物样品，将其溶解于合适的溶剂中，得到均匀的样品溶液。

2. 色谱柱选择：根据样品性质和分离目标，选择合适的色谱柱和填料。

3. 流动相选择：根据样品溶解度和分离效果，选择合适的流动相组成和pH值。

4. 色谱条件设置：设置适当的进样量、流速和温度等参数，优化分析条件。

5. 样品进样：通过自动进样器将样品溶液注入色谱柱。

6. 梯度洗脱：通过调节流动相组成或浓度梯度，实现目标化合物的分离。

7. 检测器选择：根据样品性质和目标化合物的特征，选择合适的检测器。

8. 数据分析：利用色谱软件分析检测到的信号，得到峰面积和保留时间等参数。

实验结果：本实验以植物提取物为样品，以色谱柱A为分离柱，以甲醇-水（70:30）为流动相，在室温下进行HPLC分析。

优化的分析条件为：进样量为10 μL、流速为1 mL/min、检测波长为254 nm。

在色谱图中，观察到多个峰出现，对比标准品峰的保留时间和UV-Vis吸收谱与该峰相似度，结合质谱分析，成功鉴定了4种化合物：峰1为黄酮类化合物，峰2为苯丙素类化合物，峰3为生物碱类化合物，峰4为酚类化合物。

讨论：通过本实验，我们可以看到HPLC技术的优势和应用价值。

首先，HPLC可以对复杂混合物进行高效、准确的分离和定量分析，为后续鉴定提供了重要数据。

其次，HPLC操作简便，结果可靠，且可适用于不同种类的样品。

此外，优化实验条件对提高分析效果至关重要，需要通过不断试验和调整，找到最佳条件。

然而，HPLC仍存在一些局限性。

首先，HPLC分析所需的仪器设备和耗材相对昂贵，需要较高的投资成本。

其次，样品制备和前处理过程可能引入误差，影响分析结果的准确性。

实验六高效液相色谱(HPLC)柱效测定093858 张亚辉一. 实验目的1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。

2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。

3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。

二. 实验原理高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。

在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。

反之，则称为正相色谱分离系统。

反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。

定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。

分离度（R）的计算公式为：R＝ 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(W1＋W2)式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的半峰宽。

除另外有规定外，分离度应大于1.5。

本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。

它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。

但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。

待测物性质见表1。

表1色谱柱测试条件如果要检测不同条件对谱图分离的影响，可按表1配制几种物质的混合溶液，在不同条件下进行HPLC分离检测。

三.仪器与试剂1、仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。

2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四. 实验步骤1、色谱条件色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8）柱温：室温流动相：初始为高纯水：20％，甲醇：80％检测器：DAD检测器;检测波长：220nm；进样体积：20µl定量环，实际注射每次可控制在40µl。