下载文档原格式
北京阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法引言北京阴沟肠杆菌科是一类常见的细菌科，广泛存在于自然界中。
对于这类细菌的鉴定和分类，是微生物学研究中的重要内容之一。
本文将详细介绍北京阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法。
1. 样品采集与处理为了进行北京阴沟肠杆菌科的鉴定，首先需要采集样品，并进行适当的处理。
样品可以来自于土壤、水体、食品、动植物组织等。
采集样品时要注意避免污染和交叉感染。
2. 细菌培养将采集到的样品进行培养是鉴定北京阴沟肠杆菌科的关键步骤之一。
常用的培养基包括营养琼脂、大肠杆菌选择性琼脂等。
在适当条件下，如温度、pH值等控制良好后，将样品接种于培养基上。
3. 形态学观察经过一段时间的培养后，可以对细菌的形态进行观察。
北京阴沟肠杆菌科的细菌多为革兰氏阴性菌，具有一定的特征形态。
通过显微镜观察，可以观察到细菌的形状、大小、染色性质等信息。
4. 生理生化特性检测北京阴沟肠杆菌科中的细菌在生理和生化方面具有一定的特点。
通过对培养后的细菌进行一系列生理生化检测，可以进一步鉴定其属于北京阴沟肠杆菌科。
常用的生理生化特性检测包括： - 氧气需求：北京阴沟肠杆菌科中有些细菌是厌氧菌，而有些是好氧菌。
- 温度适应性：不同种类的细菌对温度有不同的适应能力。
- pH值适应性：不同种类的细菌对pH值有不同的适应能力。
- 酶活性：通过检测细菌产生的酶活性来判断其属于哪个科。
5. 分子生物学方法分子生物学方法在现代微生物学研究中得到了广泛应用，对于鉴定北京阴沟肠杆菌科也起到了重要作用。
常用的分子生物学方法包括PCR、DNA测序等。
通过PCR技术，可以选择合适的引物扩增特定基因片段，如16S rRNA基因。
然后将扩增产物进行测序，通过与数据库中已知序列进行比对，可以进一步确认细菌属于北京阴沟肠杆菌科。
6. 鉴定与分类通过以上步骤的观察和检测，可以得到一系列数据，并结合已有的分类系统，对细菌进行鉴定和分类。
根据形态学、生理生化特性、分子生物学等方面的信息，可以将细菌归类到相应的属、种中。
长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法肠杆菌科（Enterobacteriaceae）是一类革兰氏阴性菌，广泛存在于土壤、水体和动植物体内，包括一些重要的致病菌。
长春阴沟是一个具有特殊环境的地方，肠杆菌科的检测和鉴定成为了评估环境污染和食品安全的重要手段。
以下是长春阴沟肠杆菌科鉴定的基本方法。
1. 样品采集与处理：从长春阴沟中采集水样、土壤样或者其他可能存在肠杆菌科的样品。
样品应当采集之后立即送往实验室进行处理，以避免结果的误差。
2. 培养基选择：选择适合肠杆菌科生长的培养基，例如大肠杆菌选择性琼脂培养基（MacConkey Agar）、肠球菌选择性琼脂培养基（Xylose Lysine Deoxycholate Agar）等。
3. 接种与培养：取样品进行接种，可以通过涂布法、点刺法或浸渍法进行。
接种后，将培养基置于适宜温度（通常为37摄氏度）下培养一定时间（通常为24-48小时）。
4. 形态观察：观察培养物的形态特征，肠杆菌科菌落常常呈现出光滑且圆形的形态。
5. 肽聚糖酶试验：常用的肠杆菌科鉴定方法之一是进行肽聚糖酶试验。
该试验通过检测菌落中的特定酶活性来判断是否属于肠杆菌科。
如甲基红-VP试验、氧化/发酵糖试验等。
6. 生化特性鉴定：可以通过测定菌株的生化特性，如产气性、产酸性、利用特定碳源等来鉴定肠杆菌科细菌。
常用方法包括三糖铁琼脂（TSI）培养基试验、尿素氨酶试验、甲基红-VP试验等。
7. 分子生物学方法：近年来，利用PCR、基因测序等分子生物学技术也被广泛应用于肠杆菌科的鉴定。
通过检测菌株的DNA序列可以更加准确地确认肠杆菌科的种类。
总之，通过样品的采集、培养、形态观察、生化特性鉴定和分子生物学方法，可以对长春阴沟中的肠杆菌科进行鉴定。
这些基本方法在评估环境污染和食品安全方面起到了重要作用。
一、实验目的1. 掌握肠道条件致病菌与肠道致病菌的菌落特点。
2. 掌握肠道杆菌的主要生化反应。
3. 掌握肠道杆菌的分离鉴定方法。
4. 掌握粪便标本细菌学检测流程。
二、实验原理肠道杆菌科细菌为革兰氏阴性菌，大多数有鞭毛，能运动。
少数无鞭毛不能运动，不产生芽孢，需氧或兼性厌氧，在普通培养基上，一般都生长良好，均能发酵葡萄糖产酸或产气，触酶试验阳性，氧化酶试验阴性，还原硝酸盐。
这类细菌是人类和动物肠道中的细菌，有的引起腹泻、肠炎、肠热症和痢疾等。
有的为条件致病菌，有时也可引起身体各个部位的感染。
三、实验材料与仪器材料：1. 粪便标本2. CB培养基3. SS培养基4. 基础培养基5. 双糖铁发酵培养管6. 鉴别培养基7. 血清学反应试剂8. 药敏试剂仪器：1. 高压灭菌锅2. 试管3. 锥形瓶4. 接种环5. 酒精灯6. 无菌玻片7. 显微镜、载玻片8. 镊子四、实验步骤1. 粪便标本的处理- 将粪便标本用无菌生理盐水进行稀释，制成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4四个浓度的悬液。
- 取各浓度悬液适量，分别接种于CB培养基、SS培养基、基础培养基和双糖铁发酵培养管。
2. 培养与观察- 将接种后的培养基放入37℃恒温培养箱中培养24小时。
- 观察并记录各培养基上的菌落特征，包括菌落大小、形状、颜色、边缘、表面等。
3. 生化反应- 取纯培养的菌落，进行糖发酵试验、氧化酶试验、触酶试验、硝酸盐还原试验等。
- 根据试验结果，初步鉴定菌种。
4. 血清学反应- 取纯培养的菌落，进行血清学反应，进一步鉴定菌种。
5. 药敏试验- 取纯培养的菌落，进行药敏试验，了解菌株的耐药性。
五、实验结果与分析1. 菌落特征- 在CB培养基上，观察到典型的肠道杆菌菌落，菌落呈圆形、光滑、湿润、乳白色。
- 在SS培养基上，观察到菌落呈红色，并有金属光泽。
- 在基础培养基上，观察到菌落呈黄色。
- 在双糖铁发酵培养管中，观察到斜面和底层均呈红色，并产生气泡。
肠杆菌科细菌的鉴定小结
●肠杆菌科细菌的生化反应及结果分析●玻片凝集的操作及注意事项
●G染色法操作方法及注意点
观察记录生化反应
●IMViC、KIA、U，所有菌种已接种37℃培养24h以上。
●观察生化反应、作出记录及分析
血清学鉴定－直接玻片凝集
●沙门菌：
用A～F多价O抗确定沙门菌属 用O因子血清分群
用H因子I相血清型定型
伤寒沙门菌：O9Hd
乙型副伤寒沙门菌：O4Hb
●福氏志贺菌：
A、B、C、D多价血清定志贺菌属
按流程分型
不同肠道菌在SS与CB的菌落特征
SS CB
大肠红色中心混浊S型菌落大而混浊蓝色S型菌落产气红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落肺炎红色中心混浊M型菌落大而混浊蓝色M型菌落伤寒透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
副乙透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
福氏透明微黄S型菌落透明红色S型菌落
变形透明微黄中心黑色S型菌落透明红色S型菌落
不同肠道菌的生化特征
I M V C动力U产气乳糖硫化氢
大肠杆菌++--+-++-产气肠杆菌--+++-++-肺炎克雷伯菌--++-+++-伤寒沙门菌-+--+---+乙型副伤寒-+-++-+-+福氏志贺菌-+-------变形杆菌
+/-+-/V-/++++-+（普通/奇异）。
肠杆菌科【器材】一、SS平板培养基：选择性培养基，有促进目的菌生长的物质和鉴别用指示剂.1、煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等能抑制G+菌及大多数大肠生长，胆盐促进伤寒生长。
2、大肠分解乳糖产酸：中性红（6.8红－8.0黄）变红，与胆盐结合合成胆酸，因而形成中心混浊的深红色菌落，病原菌不分解乳糖，故菌落呈透明微黄色。
3、枸橼酸铁能指示硫化氢产生，硫化铁呈黑色4、硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺、沙门菌的毒害作用，并中和煌绿、中性红染料的毒性，使大肠红色鲜明二、KIA斜面培养基：用酚红作指示剂（6.8黄－8.4红）。
上层为固体琼脂斜面，含乳糖。
下层为半固体琼脂，含葡萄糖，含硫酸亚铁。
1、细菌如能发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则斜面及底层均呈黄色，且有气泡。
非致病菌（如大肠埃希菌）一般既可利用乳糖也可利用葡萄糖，但肺克也是如此。
2、如细菌只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡:乳为1:10，斜面所产生的少量的酸可因接触空气而氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层则是在相对缺氧的状态下，所生成的酸不被氧化挥发而保持黄色。
致病菌一般不能利用乳糖，可用于区别致病/非致病菌。
3、如细菌分解蛋白质产生硫化氢，则与硫酸亚铁反应生成硫化亚铁（黑色沉淀物），使培养基变黑。
左：不发酵乳糖，强产硫化氢。
中：不发酵乳糖，不产硫化氢。
右：发酵乳糖，不产硫化氢4、接种方法：先穿刺到底，再在斜面划线。
【实验内容】一、氧化酶试验原理：见奈瑟菌属部分操作：取氧化酶纸片，刮去KIA或普通平板或普通平板上的较大菌落，观察纸片颜色的变化，呈蓝紫色为阳性，不变为阴性（如试剂为盐酸二甲基对苯二胺，阳性者则为红色）。
肠杆菌科多为阳性（但变形杆菌为阴性）。
注意事项：因SS培养基中的化学成分和生化反应复杂，其菌落可使滤纸变为紫红色，故对肠道杆菌进行触酶和氧化酶试验时，宜从普通平板或KIA斜面上取菌，以保证试验结果正确。
二、动力试验：原理：有动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线扩散生长。
临床感染性疾病实验常用诊断流程完成一个细菌的鉴定要做多项试验，将结果与已知的细菌特性进行比较，才能最后确定。
在选择试验项目以及分析试验结果时应遵循一个合理且思路清晰完整的思维模式，避免不必要的重复，少走弯路。
因此，在临床细菌鉴定中常借用一些简便的流程和方法。
1．双歧索引在细菌的鉴定中经常选用的方法。
主要针对那些相互区别比较容易，有较特殊特征的细菌。
双歧索引是表明鉴定思路的一种流程，使用起来非常方便。
如革兰阴性杆菌初步分群的鉴定流程（图58 －1）。
对于相互区别较难的细菌，鉴定项目较多，双歧法会很繁琐，用起来不太方便。
2．表解法将各种细菌及其多种特性列成矩阵表格，使相互的区别点十分明显，便于分析比较。
此法对于相互区别比较复杂的细菌，如肠杆菌科的初步分属（表58 －1）。
表58 －1 肠杆菌科初步分属3．数字编码鉴定法编码是即将所得生化反应模式转化成数学模式，可以把某一细菌的全部生化反应结果转化成数字，经查阅检索手册又可将该数字转化成细菌名称。
编码的原则是：鉴定细菌的各种微量生化反应管组成系列试剂，将生化项目排序并依次进行分组，每组中的每个试验都有其一个数值代码。
试验阳性时结果用其数值代码表示，试验阴性时结果则用0 表示，将每组中各试验结果加起来得一总值，这样按顺序各组总值组成的数码组合，即为检索编码。
查编码手册，该编码所对应的细菌名称即为鉴定结果。
如表58 －2 所示肠杆菌科细菌生化编码鉴定。
表58 －2 肠杆菌科细菌生化编码鉴定表根据试验结果判定数码组合为13766 ，查编码手册，即可找到对应的细菌。
数字编码鉴定已有商品成套供应，由于操作简单，鉴定方法易于掌握，被临床实验室广泛采用；而且这种数码分析与电脑分析软件配套，形成了半自动或全自动细菌分析系统。
