鼠源性抗体

Rb Gene Protein抗体试剂说明书APA111【产品名称】通用名称：Rb Gene Protein抗体试剂英文名称：Anti Human Rb Gene Protein MonoclonalAntibody【检测原理】本抗体试剂基于抗原抗体特异性结合原理，样品组织经过抗原修复后，暴露抗原决定簇的目标靶蛋白与一抗结合，形成抗原与一抗的复合物。

然后加入HRP酶标多聚物二抗与一抗结合，最后二抗上的HRP催化DAB显色液中的H2O2分解，使联苯胺氧化变成联苯亚胺，使组织切片中抗原位点上出现棕色或棕褐色沉积物。

借助光学显微镜，通过观察颜色的变化以此判定目标抗原的表达情况。

【主要组成成分】Rb Gene Protein鼠源性单克隆抗体；缓冲液。

【储存条件及有效期】本产品2~8℃储存，有效期为12个月。

采用泡沫箱加冰袋密封的运输方式，时间不大于7天，开箱温度不超过30℃，产品性能无影响。

（使用时应即拿即用，使用后立即放回冰箱。

）【适用范围】适用于人工手动操作或全自动免疫组化染色机自动操作。

【样本要求】新鲜活检或10%中性福尔马林固定的病人组织，参照病理技术规范要求取材、固定（8-24小时为宜）、脱水、石蜡包埋并制成蜡块。

建议组织切片厚度为3~5μm，室温下保存并于10天内完成实验检测以确保组织中抗原分布情况的良好重现。

【使用方法】1.准备工作：1)仪器设备：电磁炉，不锈钢高压锅，孵育盒，计时器，免疫组化笔，移液器，全自动免疫组化染色机，光学显微镜等；2)溶液配制：PBS溶液（7.2-7.6）、抗原修复液、DAB显色液等，各溶液的配制可参见相关说明书；3)反应温度：室温（18℃~37℃）；4)抗体工作液：浓缩型抗体建议稀释比例1：100-1：400（注：该稀释比例为建议参数，实际使用时会由于实验室差异而有所不同，建议客户在使用前对该浓缩抗体进行检测，以确定最佳稀释度。

）；2.操作步骤：2.1.用于全自动免疫组化染色机：1)在软件上按照推荐的染色方案设制相应的染色程序；2)将抗体工作液（浓缩液按推荐稀释比例稀释后）放至相应的机用一抗开放容器中；3)打印切片信息标签，并将贴好标签信息的载玻片载入染色机；4)准备好相关实验耗材，将实验所需试剂放至仪器对应位置，并确认所有试剂余量充足；5)点击开始，运行染色程序；详细实验操作步骤及要求请参照全自动免疫组化染色机操作手册。

张明刚3090101659简介鼠源单克隆抗体众所周知，抗体是于二十世纪三十年代才在世界上通用的词，本质是与相应抗原特异结合的具有免疫功能的球蛋白！而能与抗体特异结合的物质叫做抗原！一、鼠源单克隆抗体的产生历史1、需要证明每种B细胞只能产生单一的抗体2、提取并体外培养骨髓瘤细胞3、解决B细胞与骨髓瘤细胞融合的问题4、如何筛选融合成功的骨髓杂交瘤细胞5、骨髓杂交瘤细胞的体外或体内培养早在1847年，Bence Jones在骨髓瘤患者尿中发现了本周氏蛋白，后被证明是均一的抗体轻链，而生物体产生抗体的基本特点是多样性及不均质性,因而在20世纪50年代之前对这一现象一直没有很合理的解释。

1957年Burnet 提出了抗体产生的细胞系选择学说，认为每个B细胞只能产生一种抗体，且它以独特的受体形式在细胞表面，只与特定的抗原决定簇结合。

后被证明是对的。

后来1965年Sachs等人成功的诱导出骨髓瘤细胞，并且在体外培养成功。

1957年冈田等人用高浓度的仙台病毒是小鼠细胞发生融合。

1975年Kao和Chayluk 提出用聚乙二醇作为融合剂，80年代发现啦电融合技术，解决啦细胞融合问题。

因为细胞融合存在存在A-A、B-B、A-B三中融合方式。

因而如何筛选A-B方式便极为重要。

1964年Littlefiled 创建了融合细胞的筛选方法。

利用两种不同生化缺陷的双亲进行杂交，借助于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤、胸腺嘧啶核苷的HAT选择性培养基选择出了所需杂交细胞。

在这些理论基础上Kohler和Milstein 发表了《分泌特异性抗体融合细胞的持续培养》这篇文章，提出用仙台病毒使小鼠骨髓瘤细胞和经羊红细胞免疫的小鼠脾细胞融合产生的杂交瘤细胞，既具有骨髓瘤细胞永生的特性和脾细胞产生抗羊红细胞抗体的能力。

这一工作为后来制备单抗提供了依据，也标志着单克隆抗体的产生！二、鼠源单克隆抗体的制备1、融合前的准备工作2、融合3、融合后的管理（一）融合前的准备工作（1）准备工作包括组织培养材料的制备、组织培养用水（去离子水）、培养基（高糖DEME、RPMI-1640两种培养基）、血清（常用胎牛血清）、抗生素（2）小鼠免疫用特定的抗原来刺激小鼠，第一次免疫往往产生多价的低亲和力的IgM,随着多次免疫产生了主要为二价的IgG.。

从鼠源到全人源单克隆抗体制备技术及改造策略的研究进展摘要：近年来，单克隆抗体是生物制药领域研究和发展最快的领域之一，单克隆抗体具有地耐药性、高效性、专一性等多种优越特性而受到各界关注，随着单克隆抗体制备技术的不断出现，对其稳定性和亲和力提出了更高的要求，本项目从全人源单克隆技术出发，探讨其改造策略以及未来发展方向关键字：鼠源，全人源，单克隆抗体单克隆抗体是一种由人类通过采用各种化学技术或者人工方式制备，由单一b 受体细胞的单克隆抗体细胞产生的一种抗体。

其高度均一，且仅针对某一特定受体抗原上的表位。

单克隆免疫抗体的制备方法主要具有产物纯度高、交叉免疫反应少、制备时间和成本低、结构均一、特异性强等特点，其主要生物学机理功能主要特点是与抗原分子结合后不能产生间接免疫受体分子或直接阻断配体。

当前已有40多种单抗体克隆免疫抗体被广泛用于自身自体免疫功能性疾病、肿瘤和器官移植等各个方面，效果显著。

1全人源单克隆抗体制备技术自从1975年，KOHLER等人通过杂交瘤技术成功获得了具有抗原特异性的鼠源性单克隆抗体，从而开启了单克隆抗体开发的新纪元。

随着多年发展，单克隆抗体已经成为人们疾病诊治的重要工具。

而鼠源性抗体来源于小鼠，在对人体使用时，存在着诸多缺陷，为解决此类问题，全人源单克隆抗体被提出，是未来单克隆抗体的主要研究方向之一，目前使用较为广泛的全人源单克隆抗体制备技术有以下几种：1.1噬菌体抗体库技术噬菌体抗体库技术至1990年成功实施以来，经过30年的发展，已经成为该领域应用最广的制备技术之一。

噬菌体抗体库技术的应用原理是使用PCR技术（聚合酶链式反应技术），将人体抗体编码的基因序列通过技术进行扩增，然后将抗体的基因序列插入到噬菌体中的适当位置，并通过建立一个噬菌体抗体库，让人体抗体和另一个噬菌体外壳上的蛋白进行相融，将两者互相融合的蛋白质形式展示在噬菌体的表面。

噬菌体抗体库技术将通过构建好的抗体库与抗原进行结合，并通过抗原与抗体的差异性相互结合的基因组原理，通过筛选，挑出一种能与目的抗原进行结合的噬菌体，在通过噬菌体基因测序，得到一种新的基因序列,并将其通过基因组技术应用于全人源抗体中。

自1975年单克隆抗体杂交技术问世以来，鼠源单克隆抗体（mAb）被誉为神奇的子弹，广泛用于肿瘤检测与治疗。

然而，鼠源单抗作为异源性蛋白在人体内可诱鼠单抗人源化成为最早出现的基因工程抗体。

发抗鼠抗体的生成（HAMA），可产生毒性反应，并使mAb在体内消除加快，这严重影响了鼠单抗的治疗效果。

为解决这一难题，从80年代初期发展到现在，鼠单抗人源化经历了如下历程：恒定区人源化→可变区人源化→利用抗体库技术获得完全人源序列（如图）。

1．恒定区人源化--鼠/人嵌合抗体（chimeric antibody）由于异源性Ab的免疫反应约有90%是针对恒定区（C区），要降低mAb的抗原性，必须对Ab的恒定区进行人源化[1]。

其原理使从分泌某mAb的杂交瘤细胞基因组中分离和鉴别出重排的功能性可变区（V区）基因，经基因重组与Ig恒定区基因相拼接，插入到适宜的表达载体中，构成鼠/人嵌合的轻重链基因表达质粒，经转染骨髓瘤细胞，通过筛选即可制备出鼠/人嵌合抗体。

这种嵌合抗体同鼠源抗体比较至少有以下两个优点：首先，它可以按需要对抗体的效应基因进行选择或剪切。

例如人Ig的同种型IgG1和IgG3对介导补体依赖及细胞介导的溶解作用具备优势，因而利用该技术可以拼接不同亚类的人C区基因，来改变抗体的效应功能，使原细胞毒性较低的IgG2a和IgG2b变成细胞毒性较高的IgG1和IgG3，增强抗体的免疫治疗功能，可用来杀死肿瘤细胞。

其次，在治疗中使用人而不是鼠mAb的同种型，大大减小了鼠源mAb作为异种蛋白对人体的免疫原性，它通过避免抗同种型抗体的产生，减少了HAMA的生成。

例如，当鼠对鼠Ig互补决定区（CDR）产生免疫耐受时，用鼠抗-淋巴细胞Ab可以激发抗独特型反应，但相对那些对可变区不耐受的动物来说，该鼠的抗独特型反应被推迟并很微弱[2]。

Lobulio 对鼠/人嵌合抗体在人体内的动力学和免疫反应的研究表明，鼠/人嵌合抗体在人体内的半衰期比mAb长6倍以上。

鼠源抗体的人源化设计前言 (1)方法 (2)结果与讨论 (3)鼠源抗体筛选人源框架 (3)人源化抗体CDR的改造 (4)结论 (6)附录 (6)参考文献 (7)前言第一个人用抗体药物来自鼠源抗体，直到现在鼠源抗体仍然是抗体药物的一大来源[Pogson et al.,2016]。

由于鼠源抗体的免疫原性，一般会对其作人源化处理。

目前最通用的方法是将鼠抗的CDR序列移植到人源框架上[Hwang et al., 2005]。

通常CDR移植后的人源化抗体与抗原的亲和力会减弱，如何保持人源化抗体的亲和力是目前最大的技术瓶颈。

通过高通量的筛选方法可以得到适合CDR移植的人源框架，但是这种实验方法周期长，价格昂贵[Townsend et al.,2015]。

为了快速筛选出适合的人源框架，研究者利用序列比对和结构模拟的方法筛选出适合的人源框架，然后通过实验验证抗体与抗原的亲和力，减少了实验工作量，节约了成本和时间，未来会成为具有潜力的抗体人源化设计方法[Kurella et al., 2014;Choi et al.,2015;Choi et al.,2016]。

本文采用自主开发的抗体人源化设计程序，对已知的鼠源抗体进行人源化设计，结果表明计算的方法可以筛选出序列同源性靠后但是亲和力更高的人源化框架。

方法抗体阻断蛋白-蛋白相互作用的受体和配体结构已知（图1）。

配体与抗体结合的区域重叠在受体和配体结合的区域（图2），所以鼠源的抗体可以有效阻断受体和配体的相互作用[Apgar et al.,2016]。

通过鼠源抗体的人源化设计可以最大限度减少抗体的免疫原性。

首先使用鼠源抗体（PDBID为5F3B）的序列在人源框架库中搜索排名靠前的序列作为候选序列，然后将人源序列同源建模到鼠源抗体的骨架上，保留鼠源CDR的序列，然后计算同源模型的能量，判断人源化抗体的稳定性。

人源化CDR突变体采用相同的策略，不同之处在于替换鼠源CDR 序列为突变体序列，并且保留抗原的结构。

鼠源抗体人源化基本流程1.引言抗体是一类免疫球蛋白，具有识别和结合抗原的能力，广泛应用于医学和生命科学研究中。

然而，鼠源抗体在临床应用中存在一些问题，例如免疫原性反应和免疫复合物形成。

为了解决这些问题，人源化抗体的研究和开发成为热门领域之一。

本文将介绍鼠源抗体人源化的基本流程。

2.鼠源抗体人源化流程概述鼠源抗体人源化的基本流程主要包括以下步骤：2.1鼠源抗体选择首先，选择具有特定结合特异性的鼠源抗体作为起点抗体。

这些鼠源抗体通常是通过对抗原免疫小鼠，然后采集小鼠的脾细胞，通过杂交瘤技术获得的。

2.2人源抗体基因的构建为了实现鼠源抗体人源化，需要构建包含人源抗体基因的表达载体。

通常，将包含鼠源抗体的变异型重链和轻链基因分别与人源抗体F c区的基因连锁，形成完整的人源抗体基因。

2.3表达载体的转染和表达将构建好的人源抗体基因载体导入哺乳细胞表达系统，例如细胞株C H O或HE K293中。

通过转染技术，将表达载体转入这些细胞中，以实现人源抗体的表达。

2.4筛选和鉴定通过对转染细胞进行筛选，筛选出高表达人源抗体的细胞株。

然后，对所得到的人源抗体进行鉴定，包括抗原结合亲和力的测定和功能验证等。

3.鼠源抗体人源化基本流程详述3.1鼠源抗体选择在鼠源抗体人源化的流程中，首先需要选择适合的鼠源抗体作为起点。

选择的抗体应具有高特异性和亲和力，并且针对所需的靶标抗原。

这可以通过EL IS A、免疫组化等技术进行初步筛选。

3.2人源抗体基因的构建选定鼠源抗体后，需要构建人源抗体基因。

基本流程包括以下步骤：-3.2.1分离鼠源抗体基因：通过提取小鼠脾细胞中的DN A，通过PC R扩增鼠源抗体的变异型重链和轻链基因。

-3.2.2构建人源抗体基因：将鼠源抗体基因与人源抗体F c区的基因进行连接，形成完整的人源抗体基因。

连接可以通过D NA连接酶或重组酶进行。

3.3表达载体的转染和表达构建好的人源抗体基因载体需要通过转染技术导入表达系统中。

人鼠嵌合抗体的实验方案概述人鼠嵌合抗体是一种由人类和小鼠的基因序列构建而成的抗体，具有更好的兼容性和更强的亲和力。

本文将介绍人鼠嵌合抗体的实验方案，帮助研究人员了解如何制备和应用这种抗体。

实验材料和设备1.鼠源性抗体：可以根据实验需要选择目标抗原的鼠源性抗体。

2.人源性抗体：选择与鼠抗体相应的人源性抗体。

3.PC R引物：用于扩增鼠和人源性抗体的基因序列。

4.载体：提供基因组合和表达的载体。

5.细菌：用于负责抗体基因的表达和生产。

实验步骤步骤一：基因扩增1.从鼠源性抗体和人源性抗体中提取基因组DN A。

2.设计合适的P CR引物，用于扩增鼠源性抗体的可变区和人源性抗体的框架区。

3.进行PC R反应，得到鼠源性抗体的可变区和人源性抗体的框架区。

步骤二：基因重组1.将鼠源性抗体的可变区和人源性抗体的框架区进行酶切。

2.使用连接酶将两个片段连接起来，形成人鼠嵌合抗体的基因序列。

步骤三：载体构建1.将人鼠嵌合抗体的基因序列插入选择的载体中。

2.转化合适的细菌菌株，如大肠杆菌，用于基因的表达和生产。

步骤四：抗体表达1.需要选择适当的表达条件，例如温度、培养基、诱导剂等。

2.培养细菌并收集细菌培养液。

3.通过亲和层析等方法纯化抗体。

数据分析和结果通过实验可以获得人鼠嵌合抗体，并进行最终的纯化。

可以通过酶联免疫吸附试验（E LIS A）等技术来评估抗体的兼容性和亲和力。

此外，可以通过细胞实验和动物模型验证人鼠嵌合抗体的生物学活性和疗效。

结论人鼠嵌合抗体的实验方案详细介绍了制备和应用这种抗体的步骤。

这种抗体具有更好的兼容性和亲和力，适用于生物医学研究和治疗。

通过严谨的实验设计和操作，我们可以成功制备和应用人鼠嵌合抗体来解决相关的科学问题。

鼠源性单克隆抗体的应用原理一、简介鼠源性单克隆抗体是一种能够特异性识别和结合抗原的蛋白质分子。

它由一种特殊的细胞线通过克隆技术生产出来，具有高度的结构稳定性和亲和性。

鼠源性单克隆抗体在医学研究和临床实践中具有广泛的应用。

二、原理鼠源性单克隆抗体的应用基于其结构和功能上的特点：1.特异性结合：鼠源性单克隆抗体可以与特定的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。

这种特异性结合是由抗体的可变区域决定的，可变区域能够识别和结合抗原的特定表位。

这使得鼠源性单克隆抗体能够用于特定抗原的检测和分离。

2.亲和力：鼠源性单克隆抗体通常具有较高的亲和力，即与抗原的结合强度。

这种亲和力可以通过克隆和筛选的过程中进行优化，以选择出具有最佳结合能力的抗体。

高亲和力的鼠源性单克隆抗体能够在低浓度的抗原中快速、稳定地结合，从而提高检测和治疗的灵敏度和效果。

3.多功能性：鼠源性单克隆抗体不仅可以结合抗原，还可以激活免疫细胞，介导细胞毒性，促进细胞凋亡等。

这使得鼠源性单克隆抗体在抗体治疗、免疫研究和癌症治疗等领域具有广泛的应用。

三、应用领域鼠源性单克隆抗体在以下领域有重要的应用：1.诊断和治疗：鼠源性单克隆抗体可以用于特定抗原的检测和诊断。

例如，通过检测特定抗原的单克隆抗体，可以快速、准确地确定疾病的诊断结果。

此外，鼠源性单克隆抗体还可以用于治疗。

它们可以与抗原结合并介导免疫细胞的激活，从而抑制疾病的进展。

2.药物研发：鼠源性单克隆抗体在药物研发中具有重要的作用。

通过使用鼠源性单克隆抗体，可以快速筛选和识别潜在的药物靶点，并评估药物的疗效和安全性。

此外，鼠源性单克隆抗体还可以用作药物的载体，将药物靶向到特定的组织和细胞。

3.生物学研究：鼠源性单克隆抗体在生物学研究中广泛应用。

它们可以用于抗原的定位、蛋白质的表达与鉴定、细胞分型和分离等。

鼠源性单克隆抗体还可以用于免疫组织化学、免疫印迹和免疫沉淀等实验技术。

4.癌症治疗：鼠源性单克隆抗体在癌症治疗中具有重要的应用。

抗体药物山东大学药学院韩秋菊张建第一部分概述随着免疫学和基因工程技术的发展，抗体药物经历了鼠源单抗、嵌合单抗、人源化抗体到全人源化抗体的发展阶段，成为生物技术医药发展的重要领域。

目前，抗体药物以其高特异性、有效性和安全性成为全球药品市场上炙手可热的药品。

据报道，目前全球销售额居前10位的药品中，抗体药物占6种，其在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥反应、感染性疾病以及心血管疾病的预防、诊断和治疗中显示出巨大的潜力和应用前景。

第二部分基本概念、基本知识一、抗体的基本概念（一）抗体（Antibody, Ab）在人和动物体内，由于抗原或半抗原入侵刺激机体而在B细胞中产生的免疫球蛋白，能可逆的、以非共价特异性地与相应抗原结合，形成抗原-抗体复合体，具有免疫功能。

抗体主要存在于血清中，也存在于呼吸道粘膜液、肠粘膜液、唾液以及乳汁等体液中。

抗体与不同的抗原结合往往出现不同的反应，因而常给抗体以不同的名称，如凝集素、沉淀素、抗毒素、溶血素、溶菌素等。

（二）抗原（antigen，Ag）指能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，引起抗体生成，并能与抗体在体内外特异性结合的物质。

（三）免疫球蛋白（Immunoglobulin, Ig）指具有抗体（Ab）活性或化学结构，与抗体分子相似的球蛋白。

抗体与免疫球蛋白既有区别，又有联系。

免疫球蛋白是结构与化学的概念，包括的内容更广泛，而抗体是生物学功能的概念，与抗原是相对的。

图1 免疫球蛋白与抗体的关系二、抗体的组成和结构（一）抗体的组成抗体组成较为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）组成，这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸组成和排列上，既相似又有差别，具有与抗原决定簇相对应的结合部位。

抗体的本质是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。

抗体由四条多肽链组成，包括两条相同的长链叫重链（H），两条相同的短链叫轻链(L)，其形状似“Y”，链间由二硫键和非共价键链接，每条重链和轻链分为氨基端（N）和羧基端（C）。