HA标签抗体,抗HA单抗,HA小鼠源单克隆抗体

标签抗体标签抗体（Tag Antibody）可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列，籍以分析检目的蛋白的表达含量及其功能。

其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。

亲和性标签亲和标签大都有特异性的配基，利用这些配基可以方便的用亲和层析的方法对融合蛋白进行分离和纯化。

共同特点：●纯化方便，一般通过一步纯化就可以获得纯度和质量比较好的融合蛋白；●标签对目的蛋白的三维结构或是生物学活性影响很小；●标签易于切除；●纯化过程中可以对目的蛋白进行简单而精确的测量；●适用于大量不同蛋白质的表达。

Flag标签Flag标签是由八个亲水氨基酸构成的一段寡肽，序列为Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可用于蛋白纯化及检测。

★推荐南京铭研生物Flag标签抗体（MY1906），可申领免费试用免疫宿主：小鼠应用范围：WB，IP应用说明：WB: 1:500 ~ 1:10000, IP: 1:200 ~ 1:2000Lane 1: Flag Tagged Protein (0.80 μg)Lane 2: Flag Tagged Protein (0.50 μg)Lane 3: Flag Tagged Protein (0.10 μg)M: Western Blot MarkerUsing Anti- Flag antibodyHis标签His-tag由人工合成的组氨酸首尾相连构成，通常由6个氨基酸（HHHHHH）组成，也有3个和8个的情况。

另外，也存在一种由19个组氨酸构成的天然多聚组氨酸标签（HAT-tag)。

★可推荐南京铭研生物的his抗体（MY1901）,可申领免费试用，试用反馈后下单立减50！Lane 1: C-His融合蛋白Lane 2：N-His融合蛋白Lane 3：Internal-His融合蛋白稀释比例：1:3000HA标签HA融合蛋白也是一种小肽，由9个氨基酸组成( YPYDVPDYA)，其来源于流感病毒的红细胞凝集素表面抗原决定簇。

内源性 干扰物质
最常见的内源性干扰物质
类风湿因子（rheumatoid factor, RF） 异嗜性抗体（Heterophil antibody, HA） 人抗动物抗体（Human anti Animal Antibody, HAAA）
最易受到干扰的检测系统
双抗体夹心法 免疫抑制竞争法 免疫比浊
……
YGB系列
免疫阻断剂
武汉原谷生物科技有限责任公司
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2018
免疫检测中的内源性干扰
任何免疫检测方法都有可能受到外源或内源性干扰出现假阳或假阴性 的结果，其中内源性干扰往往是由于试剂中使用的抗体与样本中的内源性 物质发生反应所致，消除干扰是免疫检测产品研发中的重要任务。
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人抗动物抗体
● 抗动物蛋白抗体，由医源性 与非医源性引起。最常见的 是人抗小鼠抗体（HAMA）
● 不同物种的HAAA相互之间 有交叉
● 针对抗原明确，较强亲和力
2
内源性干扰的原理
双抗体夹心法
当靶抗原和捕获抗体及检测抗体结合 时，产生信号。信号强度与样本中靶抗原的 浓度成正比。
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检测前去除人血样本中 RF因子和IgG，可以显著提 高IgM检测的灵敏度和特异 性。
通过化学交联的方法将 单体分子变为多聚物，利用 空间位阻效应，有效提升阻 断效果。
4
YGB系列阻断剂的特点
不
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系 统
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更配

ha tag分子量摘要：1.HA tag 简介2.HA tag 分子量3.HA tag 的应用4.结论正文：1.HA tag 简介HA tag，即His-tag，是一种用于蛋白质表达和纯化的标签。

它通常由6 个组氨酸（His）残基组成，并在蛋白质的C 末端。

这种标签可以使蛋白质在表达宿主细胞中更容易被检测和纯化。

HA tag 在不同表达系统中的分子量可能会有所不同，但通常分子量约为10kDa。

2.HA tag 分子量HA tag 的分子量主要取决于其组成的氨基酸残基数量和类型。

如前所述，标准的HA tag 由6 个组氨酸残基组成，因此其分子量相对较小。

在常见的表达系统中，HA tag 的分子量大约为10kDa（即10,000 道尔顿）。

需要注意的是，这个值可能会因为表达宿主细胞、表达载体以及其他表达条件等因素而有所变化。

3.HA tag 的应用HA tag 广泛应用于蛋白质表达和纯化过程中，具有以下优点：（1）HA tag 可以提高蛋白质的表达水平，使得目标蛋白质在细胞内更容易被检测和纯化。

（2）HA tag 可以用于蛋白质的纯化。

由于组氨酸残基具有较高的负电荷，可以通过离子交换或凝胶过滤等方法进行纯化。

（3）HA tag 可以用于蛋白质的定量。

通过测量含有HA tag 的蛋白质的分子量，可以推算出目标蛋白质的表达量。

（4）HA tag 可以方便地进行蛋白质的检测。

由于组氨酸残基在蛋白质中具有较高的亲和力，可以通过Western blot 等方法检测蛋白质的表达。

4.结论HA tag 作为一种广泛应用于蛋白质表达和纯化的标签，具有分子量适中、易于检测和纯化等优点。

这些优点使得HA tag 成为分子生物学、生物化学和生物技术研究领域的重要工具。

一、IP前的准备工作：coIP：分为内源性蛋白的相互作用和非内源性蛋白相互作用（后者包括外源蛋白之间以及外源拖内源蛋白）。

非内源性蛋白的相互作用，主要是通过过表达来实现，通常为简化实验、提高IP 效率会让外源蛋白带上标签（tagged；这也是没有相应的可用于IP的内源蛋白抗体之前唯一可行的方案），因此就tag的使用而言存在很多小技巧。

1. His-tagged主要用于纯化蛋白。

有些人喜欢用His-tagged蛋白然后进行coIP，实际上它存在潜在的隐患。

当初鄙人用Sigma a-His（鼠单抗；免费广告）WB外源蛋白发现CE里面一塌糊涂（带型漂亮就是非常多的带），那时候还抱怨这个抗体特异性不好。

后来，当了解到很多蛋白会有富含histidine的domain 以后，恍然大悟，恰恰是因为效价非常好，所以很多内源性的蛋白都被该抗体识别。

同理，如果用Ni-NTA beads去PD His-tagged的蛋白，完全有可能PD那些内源性的富含histidine domain的蛋白，造成coIP的假象，而这样的蛋白还非常多。

2. tandem-tagged不能用于分析钙调信号通路。

tandem tag实际上从成本角度和His tag差不多，洗脱试剂价格低廉，因此可用于大规模PD之后的质谱分析，能获取最全面的相互作用的信息。

然后由于其中包含钙调蛋白相互作用domain，天然会结合钙信号相关蛋白，从而干扰或掩盖靶蛋白与钙信号蛋白之间的相互作用，有一定的应用局限。

当然，笔者不太清楚近年来该方法有无改进，但正是由于引入钙调domain才实现了降低成本的目的，因此猜测可能性不大。

3. Myc、HA、Flag-tagged：Myc仍然会有天然的干扰，应用略有局限；相较后两者是人工合成专门用于tagged蛋白（有相应的专利，因此目前无论抗体或交联好的beads价格都非常昂贵），因此干扰最小、最常用。

如需进一步细致区分，a-Flag效价比a-HA略高，因此更适合IP。

β-Actin抗体推荐—高效价的Beta-Actin内参抗体Actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。

Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括β-actin和γ-non-muscle actin。

β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。

但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少。

β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42-43kDa左右。

如何选择合适的β-Actin抗体？内参抗体虽然选择较多，但是也需要遵循一定的原则，并契合实际的应用要求。

首先，我们需要考虑目的蛋白的大小，我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上，因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参，由于β-Actin的检测分子量大约在42kD，因此该内参抗体不是很适合用于检测38kD-48kD大小目标蛋白的WB实验中。

另外，虽然β-Actin是最合适的内参抗体之一，但是在某些条件下，一些因素也会导致样品间β-Actin含量的变化。

特别需要注意的是，在脂肪组织里，β-Actin的表达量非常低，不适合作为内参。

很耐用，质量也很稳定，购买后放了一年了，拿出来用效价还是很高，后来买了他们大包装的，直接定制的5ml，很推荐。

——北京工业大学生命科学与生物工程学院一客户另外，我们还需要考虑自己的需要，特别是实验应用上的需要。

一般来说，应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大，而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。

另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。

一个效价高的100μl β-Actin抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5000，最终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的β-Actin抗体（假如WB检测的稀释比率是1:200，最终使用液相当于2ml）性价比更高。

Western Blotting及免疫共沉淀操作步骤1 材料、试剂1.1 材料人胚胎肾细胞HEK 293T购自上海生科院细胞资源中心，带Myc标签的真核表达载体pCMV-Myc 和带HA(hemagglutinin) 标签的真核表达载体pCMV-HA、抗Myc小鼠单抗、抗HA兔多抗购自Clontech。

辣根过氧化物酶（HRP）偶联的羊抗兔、羊抗小鼠二抗为武汉博士得公司产品。

ECL超级发光液购自北京普利莱基因技术公司，脂质体转染试剂Lipofect Transfection (RM201-1)、Bradford蛋白质定量试剂盒购自天根生化科技北京有限公司，预染蛋白Marker 购自New England BioLabs（分子量范围6.5-175Kda），DMEM培养基及无血清培养基OPTI-MEM购自Invitrogen。

其它常规试剂为进口分装或国产分析纯。

胎牛血清为杭州四季青产品。

1.2 试剂1）30%Acr(丙烯酰胺)-Bis（甲叉双丙烯酰胺）Acr 29.2gBis 0.8g37℃,溶于60ml去离子水中，定容至100ml，确定pH<7，4℃棕色瓶保存（保质期30天）。

注意：戴手套操作2）10%（W/V）SDSSDS（电泳级）10g双蒸水90ml68℃溶解，浓HCl调pH 至7.2，定容至100ml，室温保存。

3）1.5M Tris, pH8.8Tris base(三羟甲基氨基甲烷) 18.15g双蒸水80ml溶解后，浓HCl调pH 至8.8，定容至100ml，灭菌、4℃保存。

4）0.5M Tris, pH6.8Tris base(三羟甲基氨基甲烷) 6g双蒸水60ml溶解后，浓HCl调pH 至6.8，定容至100ml，灭菌、4℃保存。

5）10% AP(过硫酸铵)AP 0.100g双蒸水1ml溶解后，50μl分装后，-20℃保存。

6）0.5%(W/V) 溴酚蓝溴酚蓝0.0050g双蒸水1ml溶解后，室温保存。

关键词 ： 人肿 瘤坏死 因子一 ； Ｏ 单克隆抗体 ；细胞凋亡 ； ｒ 细胞毒性 ； 拮抗剂
中图 分 类 号 ： ３ ２ １ Ｒ９ ．１ 文 献 标 志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ２２ ６ ２ １ ）３０ １ － １０ －６ Ｘ（ ００ ２ －０ ３０ ４
Ｓｃ ｅ ｎｎ ｎ ｄ ｎｉｃ ｔ ｎ ｏ ｎａ ｏ ｉｔ ｎ ｃｏ ａ ｎｉｏ ｉｓａ ａｎ ｔｈ ｒｅ ｉｇ ａ ｄ ｉｅ ｔｉａ ｉ ｆ ｔ ｇ ｎｓｉ ｍｏ ｏ ｌｎ ｌ ｔ ｄｅ ｇ ｉｓ ＴＮＦ ａ ｆ ｏ ａ ｃ ａ ｂ —
（ｎｔｕｅ ｆＨ ｍ ｔ ｏｙ ｈｎｓ ｃｄｍｉ ｏ Ｍｅ ｉ ｌ ｃ ｎｅ Ｐ ｋ ｇ Ｕ ｉ ｄ ａ ｏｌ ｅ Ｉｓ ｔｔ ｏ ｅ ａｏ ｇ ，Ｃ ｉ ｅ ａ ｅ ｃ ｆ ｄｃ ｉ ｃｓ＆ ｅｉ ｎ ｎＭｅ ｉ ｌ ｌｇ ， ｉ ｌ ｅ Ａ ａ Ｓｅ ｎ ｏ ｃ Ｃ ｅ
Ｓａ ｅ ａ ｏａ ｒ Ｅ ｐｒ ｅ ｔｌ ｅ ａｏ ｇ ， ｉｎ ｎ３ ０ ２ ， ． ． ｈｎ ） ｔｔ Ｋ ｙＬ ｂｒｔ ｙｏ ｘｅ ｍ ｎａ Ｈ ｍ ｔｌ ｙ Ｔａｆ ０ ０ ０ Ｐ Ｒ Ｃ ｉａ ｅ ｏ ｆ ｉ ｏ ｉ
治疗提供理论依据 。方法
淀和蛋 白 Ｇ亲和层析法纯化得到纯 度 ＞９ ％ 的抗 ｈ Ｎ 一 ５ Ｔ Ｆ Ｍｅ ｂ 采用 Ｅ ＩＡ方法测 定效 价 、 体 亚型 和亲和 力 ， Ａ， ＬＳ 抗
ＭＴ ｒ法测定抗 体阻断 ｈ Ｎ — Ｔ Ｆ 对 Ｌ ２ ９ ９细胞的细胞毒作用和筛选拮抗型抗 ｈ Ｎ 一 Ｔ Ｆ仅Ｍｃ ｂ 流式细胞仪法测定抗体 阻 Ａ，
实验 室 ， 津 ３ ０ ２ ） 天 ０ ０ ０
摘要 ： 目的
制备和筛选拮抗 型人肿瘤 坏死 因子一 ｈ Ｎ — ） （ Ｔ ＦＣ 单克 隆抗体 （ Ａ ） ｔ Ｍｃ ｂ 并检 测其 活性 ， 为临床 靶 向 用经典免疫方 法获得抗 ｈ Ｎ —【 Ａ ， Ｔ Ｆｏ Ｍｃ ｂ 经接 种于小 鼠腹 腔后 获得腹水 ， 采用硫 酸铵沉

专利名称：HA标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用专利类型：发明专利
发明人：朱晓林
申请号：CN200910031202.1
申请日：20090429
公开号：CN101532009A
公开日：
20090916
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：HA标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用，属于生物医药技术领域。

本发明用碳化二亚胺法合成HA－tag完全抗原，免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术进行细胞融合，通过有限稀释法和间接ELISA法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株。

常规制备腹水，用辛酸－硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。

结果显示：HA－tag完全抗原偶联成功，经细胞融合、筛选及克隆化，成功获得1株分泌HA标签mAb的杂交瘤细胞株。

制备腹水测得腹水效价高于1∶10，且此株mAb与其他融合蛋白标签无交叉反应，单抗用于融合蛋白的Western－blotting和免疫组化检测，建立了可用于HA融合蛋白纯化和检测的方法。

申请人：朱晓林
地址：214023 江苏省无锡市南长区沁园新邨577号201室
国籍：CN
代理机构：无锡市大为专利商标事务所
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蛋白his和ha标签
蛋白质是生物体内非常重要的一种大分子有机化合物，它在细
胞结构和功能的维持中起着至关重要的作用。

在生物学研究中，为
了对蛋白质进行研究和分析，科学家们通常会使用一些特定的标签
来标记蛋白质，其中包括His标签和HA标签。

首先，让我们来谈谈His标签。

His标签是一种常用的蛋白质
标记方法，它是由六个连续的组氨酸残基（His-Tag）组成的多肽序列，通常被加到目标蛋白的N或C端。

His标签通常与镍或钴离子
结合，使得目标蛋白能够与金属离子亲和层析树脂发生特异性结合，从而实现对目标蛋白的纯化和富集。

His标签的优点在于结构简单，不影响蛋白质的生物学功能，且易于纯化。

其次，让我们来谈谈HA标签。

HA标签是来自人类流感病毒血
凝素（hemagglutinin）蛋白的短肽序列，通常为YPYDVPDYA。

HA标
签通常被用于蛋白质的免疫印迹、免疫共沉淀和免疫荧光染色等实
验中。

与His标签类似，HA标签也能够帮助科学家们对蛋白质进行
定位、纯化和检测。

总的来说，His标签和HA标签都是常用的蛋白质标记方法，它
们在生物学研究中发挥着重要作用，帮助科学家们更好地理解和研究蛋白质的结构和功能。

通过对这些标签的合理应用，科学家们能够更深入地探索蛋白质在生命活动中的作用，为生命科学领域的发展做出贡献。

Anti-HA标签（YPYDVPDYA）亲和凝胶Cat#：IP0063（本品仅用于科学研究，不可用于诊断及治疗）一．背景信息Anti- HA标签（YPYDVPDYA）亲和凝胶，由高品质的HA小鼠单抗与琼脂糖凝胶共价偶联制成，具有高载量（至少为1.2mg protein/ml凝胶悬液），高特异性，性质稳定，可反复使用的特点，可用于FLAG标签融合蛋白的亲和纯化及免疫（共）沉淀。

二．性能指标应用范围：可用于Met修饰的N端HA融合蛋白（Met-HA–Protein），N端HA融合蛋白（HA–Protein）和C端HA融合蛋白（Protein-HA）的亲和纯化及免疫（共）沉淀。

抗体属性：Anti-HA（DYKDDDDK）小鼠单克隆抗体。

载量：1ml琼脂糖颗粒，共价偶联6mg Anti-HA小鼠单克隆抗体，可纯化或沉淀至少1.2mg HA融合蛋白。

强度：可反复使用3次以上。

成分：1ml共价偶联Anti-HA单克隆抗体的琼脂糖颗粒, 溶于2ml PBS中。

保存方法：在加入了50%甘油和0.2‰叠氮钠的PBS保存液中，-20℃可保存1年。

三．说明书阅读指南四．用前必读1.以下试剂及设备，需要客户自备，试剂推荐配方见说明书附件1, 推荐蛋白质制备方案见附件2。

离心机，1.5mL 离心管若干，重力纯化柱（大量纯化需要）细胞裂解液，酸性洗脱液，中和液，PBS，2x蛋白上样缓冲液, HA多肽(货号Q7008)待测抗原样品及检测抗体2.注意事项（开箱前必读）1)本产品在含50%甘油和0.2‰叠氮钠的PBS保存液中，-20℃可保存1年，冷藏条件下运输。

2)勿干燥凝胶，勿使用超声处理凝胶，勿使酸处理凝胶时间超过10min。

3)以下使用方法中的凝胶用量，均为少量制备的示范用量，具体用量请根据实际情况调整。

五．使用方法应用一. 免疫（共）沉淀法检测HA标签蛋白质1)重悬Anti-HA亲和凝胶至均一，转移20μL混合液(约含10μL凝胶)至离心管中，加入10倍凝胶体积（约100μL）PBS，5000rpm x 30sec，弃上清，重复该步骤清洗凝胶三次。

GST标签抗体，抗GST单抗，GST小鼠源单克隆抗体Anti-GST Tag Mouse Monoclonal Antibody （ 2A8）GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。

GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到，也可以直接被位点特异性蛋白酶裂解去除。

正是由于以上的优点，商品化的GST 融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛应用。

用GST融合表达系统表达外源基因时，需要对融合表达的产物进行检测和纯化，这里面就包括了GST标签抗体的应用，如果选择一个最具性价比的GST抗体显得尤为重要。

应用类型：WB（1:1000-1:10,000）Fig.Western blot analysis of GST fusion protein with Anti-GST mouse monoclonal antibody (2A8) in 1:5,000 dilutions (lane A) and 1:10,000 dilutions (lane A) with 0.5ug GST fusion protein, separately.免疫原：KLH偶联的GST全长蛋白来源宿主：小鼠反应性：该GST标签抗体可识别在细胞内表达的GST标记重组蛋白，包括GST位于氨基末端、中段以及羧基末端的重组蛋白。

：保存建议：能在-20℃保存1年。

为最大限度的避免损失，请在打开管盖之前融化抗体并离心。

建议使用前分装以避免反复冻融，分装后可在4℃保存1个月。

背景资料：近年来在原核表达体系中，谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍。

GST标签体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点。

GST 融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到。

GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解，从而除去GST蛋白。

标签抗体汇总综述自20世纪70年代中期融合标签技术出现以来，亲和标签已成为一种重组蛋白纯化十分有效的工具，具有结合特性高、纯化条件温和、纯化步骤简单、适用性广泛等显著优势。

目前为止已出现了种类众多，功能各异、用途多样的亲和标签，极大的促进了重组蛋白的有效纯化。

常用亲和标签列表一、亲和标签分类根据自身分子量大小的不同可分为两类：①一类为大的蛋白质分子如GST-tag、SPA-tag、GFP-tag等。

使用时会增加目标蛋白的溶解性，但在蛋白结晶和抗体生产的过程中，标签必须去除。

②另一类为小的多肽标签如6*His-tag、HA-tag、c-myc tag等。

多数情况下由于多肽标签相对较小，对融合蛋白质结构影响小，不需要从融合蛋白质中切除，因而多肽标签较蛋白质标签更为常用。

二、常用亲和标签Flag-tagFlag标签是由八个亲水氨基酸（DYKDDDDK）组成的一个短肽，分子量很小，因此不会遮盖融合蛋白中其他蛋白表位与结构域。

该标签具有天然的亲水特性，可位于蛋白质的C端或N端，利于抗体检测，同时含有一个肠激酶切割位点，可通过肠激酶切除标签。

His-tagHis-tag由人工合成的组氨酸首尾相连构成，通常由6个氨基酸（HHHHHH）组成，也有3个和8个的情况。

His融合标签与其他标签相比有很多明显优势，是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。

His标签融合蛋白一般采用固定化金属离子亲和层析进行分离纯化，操作较为简便。

StrepⅡ-tagStrepⅡ即链霉亲和素结合肽，是一个小分子的短肽标签，由8个氨基酸（WSHPQFEK）组成，可位于融合蛋白的任一位置。

广泛应用于多种目标蛋白在原核表达系统、哺乳动物表达系统等的纯化。

GST-tagGST即谷胱甘肽-S-转移酶，具有解毒作用，可将谷胱甘肽中的硫基转移至含硝基或卤化物的复合物中。

其天然大小为26KD。

近年来，商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛应用。

ha蛋白标签的作用
"HA蛋白标签"通常指的是与蛋白质共价结合的一种标签，这个标签的名字来源于Hemagglutinin（血凝素）蛋白，它是一种存在于流感病毒中的膜蛋白。

HA蛋白标签被广泛用于生物学研究和蛋白质工程中。

以下是HA蛋白标签的一些常见作用：
1. 蛋白质表达和纯化：HA标签通常被用作蛋白质表达系统中的一种标记，以便在细胞或微生物中追踪蛋白质的表达。

它使研究人员能够利用HA标签来纯化目标蛋白质，通过对HA 标签的特异性结合来实现蛋白质的简便高效的纯化。

2. 免疫共沉淀：HA标签的抗体常用于免疫共沉淀实验，用于鉴定与HA标记的蛋白质相互作用的其他蛋白质。

这有助于研究蛋白质在细胞内的相互作用网络。

3. 流式细胞术：HA标签也常用于流式细胞术，通过流式细胞仪检测带有HA标签的蛋白质的表达水平，从而进行细胞表面标记和分析。

4. 免疫荧光染色：HA标签可以用作在细胞或组织中检测蛋白质的位置和表达水平的免疫染色的标记。

总的来说，HA蛋白标签在分子生物学和细胞生物学研究中发挥着重要的作用，为科研人员提供了一种方便而高效的方法来标记、纯化和研究目标蛋白质。

HA标签抗体，抗HA单抗，HA小鼠源单克隆抗体Anti-HA Tag Mouse Monoclonal Antibody （ 4F6）HA标签系统利用一个HA (流感病毒血凝素，influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目标蛋白。

HA标签可位于蛋白质的C端或N端，该系统已广泛应用于多种细胞类型，相应的HA标签抗体也被广泛应用。

HA 标签抗体能特异识别C末端或N末端带有HA标签(HA-tagged)的融合蛋白，也可以用于检测和HA tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测HA tag融合表达蛋白等。

应用类型：WB（1:1,000-1:10,000）,IF（1:500-1:2,000）,IP（1:200-1:500）。

Fig.1.Immunofluorescence staining (1:2,000) of HA fusion protein in 293 cells with red and counterstained with DAPI.Fig.2.IP (1:200) - WB (1:5,000) analysis of HA fusion protein expression in 293 cells. Untransfected 293 cell lysate (lane A), transfected 293 cell lysate with HA-tag protein (lane B); IP untransfected 293 cell lysate with Anti HA tag mAb (lane C); IP transfected 293 cell lysate with normal Mouse IgG (lane D), or with Anti HA tag mAb (lane E), and IP transfected 293 without both normal Mouse IgG and HA tag mAb (lane F).免疫原：KLH偶联的HA标签YPYDVPDYA多肽序列来源宿主：小鼠反应性：该HA标签抗体可识别在细胞内表达的HA标记重组蛋白，包括HA位于氨基末端、中段以及羧基末端的重组蛋白。

在蛋白质功能及结构研究过程中，研究的首要任务就是利用多种方法获得纯化的具有完整结构及生物学功能并能够正确折叠的高度纯化蛋白质。

除了蛋白质的研究，具有特定生物活性的高价值蛋白质的生产也需要对蛋白质产品进行纯化。

因此，科研人员和工业生产往往大量采用多种多样的表达系统来获得高表达的蛋白质，对其纯化后进行研究或加工，这些表达系统包括原核表达系统、酵母菌表达系统、昆虫动物细胞表达系统、真核细胞表达系统等。

如何将系统中表达的目标蛋白质与其他蛋白分离，一直是表达纯化中的一个重点。

为了克服从复杂样品中纯化单一蛋白质这种困难，科学家利用生物物质，特别是酶和抗体等蛋白质，具有识别某种特定物质并与该物质分子特异性结合的能力，利用生物分子间的这种特异性结合能力而形成的亲和纯化技术。

亲和标签纯化技术已广泛应用于蛋白质，特别是重组蛋白的分离纯化中。

在重组蛋白的亲和纯化中，利用基因工程技术，将经过改造优化的亲和标签与目标蛋白融合表达，通过一步简单快速的亲和层析，直接获得纯度较高的重组融合蛋白，已成为重组蛋白纯化的一个通用方法，具有结合特异性高、纯化步骤简便、纯化条件温和、适用性广泛等优点，为蛋白质的有效纯化提供了一条解决的途径，广泛应用于蛋白质结构与功能的研究及重组蛋白纯化工艺的开发中。

自从20世纪70年代中期融合标签技术出现以来，亲和标签已成为一种重组蛋白纯化十分有效的工具，具有结合特异性高、纯化条件温和、纯化步骤简便、适用性广泛等显著优势。

通常，亲和标签定义为对特定的生物或化学配基具有高度亲和力的一段氨基酸序列。

到目前为止，已经出现了种类众多、功能各异、用途多样的亲和标签，极大地促进了对重组蛋白的有效纯化。

根据自身分子量大小的不同，亲和标签可以分为两大类：一类是结合固定化配基的短肽标签，如His-tag、FLAG-tag、Strep-tagⅡ等；另一类是识别小分子配基的蛋白标签，如GST、MBP等。

短肽标签：His-tag：His标签是目前高通量蛋白纯化最普遍使用的亲和标签，广泛用于多种重组蛋白在各种表达系统的表达与纯化中。

标签抗体标签抗体（T ag Antibody）可用于检测和纯化各种商品化表达载体上的标签序列，籍以分析检目的蛋白的表达含量及其功能。

其原理是抗原—抗体反应，这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签融合蛋白。

亲和性标签亲和标签大都有特异性的配基，利用这些配基可以方便的用亲和层析的方法对融合蛋白进行分离和纯化。

共同特点：●纯化方便，一般通过一步纯化就可以获得纯度和质量比较好的融合蛋白；●标签对目的蛋白的三维结构或是生物学活性影响很小；●标签易于切除；●纯化过程中可以对目的蛋白进行简单而精确的测量；●适用于大量不同蛋白质的表达。

Flag标签Flag标签是由八个亲水氨基酸构成的一段寡肽，序列为Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可用于蛋白纯化及检测。

★可推荐sigma的flag抗体（F1804），用的效果一直很稳定，值得推荐！作用机理●Flag序列的第二个氨基酸是酪氨酸(Tyr)，属于芳香族氨基酸，是抗原-抗体特异性反应的主要因素；●位于N端带负电的天冬氨酸(Asp)可辅助酪氨酸的抗原性；●靠近C端的六个氨基酸( Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)组成一个亲水序列，可能形成高度暴露的三位蛋白质构型在理论上可使序列达到最大的亲水性，大大增强了Flag融合标签的抗原性。

优点●序列短小，只用条人工合成的寡核苷酸链就可以编码；●结晶条件时Flag融合蛋白的构象与单纯目的蛋白的构象几乎完全相同，通常不会与目的蛋白相互作用并且通常不会影响目的蛋白的性质和功能，这样就有利用研究人员对融合蛋白进行下游研究；●融合有Flag标签的目的蛋白，可以直接通过Flag进行亲和层析，此层析为非变性纯化，可以纯化有活性的融合蛋白，并且纯化效率高；●抗Flag的抗体可有效识别Flag标签，这样就方便通过Western blot、ELSA等方法对含有Flag的融合蛋白进行检测、鉴定；●Flag融合标签含有一个肠激酶切割位点，肠激酶可以识别该短肽C端的五个氨基酸( Asp-Asp- Asp-Asp-Lys)，通过肠激酶处理除去标签后即可获得天然的非融合蛋白质。